烟曲霉菌感染的实验室检查方法
周艳(综述)
烟曲霉菌为空气中常见的腐生菌，为一种机会致病真菌，其孢子直径很小，可被动吸入呼吸道，在一般的环境下，人们每天都能吸入上百个烟曲霉菌孢子，但是通常情况下都不致病。近20年来随着广谱抗生素的滥用、肿瘤放疗和化疗，造血干细胞移植术、实体器官移植术后应用免疫抑制剂及糖皮质激素等药物以及肠外营养人数的增加以及艾滋病的流行等免疫抑制人群逐年增长[1]，临床上越来越多的免疫力低下的人群感染烟曲霉菌导致侵袭性肺曲霉病（invasive pulmonary aspergillosis, IPA）。侵袭性曲霉菌感染的发病率日益增长，其发病率已经超过了最常见的真菌感染—侵袭性念珠菌病。免疫力低下的老年病人发生侵袭性曲霉菌感染后的死亡率也一直居高不下。IPA以肺部感染为主，主要为急性坏死性出血性肺炎，并可波及骨骼、脑、肝、肾、心脏等全身多个重要器官，其预后极差，死亡率高达80％－90％[2]。由于IPA的发病机制尚未阐明，从而导致IPA的诊断极为困难，治疗成功率很低。为此，发展有效的烟曲霉菌感染实验室检查方法对于该病的诊断与治愈显得尤为重要，目前常见的实验室检测方法有：显微镜检查、病原生物学培养方法、血清免疫学检测法、分子生物学检测法等。本文就这些方法的研究作一综述。
关键词：烟曲霉菌；聚合酶链反应；血清学诊断
1、显微镜检查
显微镜检查主要包括直接显微镜检查和组织病理学检查，都是以形态学特点为基础来对病原微生物进行诊断。曲霉菌直接镜检呈现玻璃样透明的菌丝，但是其菌丝结构特点的特异性并不突出，其他种类相似的真菌如青霉菌亦可呈现类似的镜下特点。另一方面，组织病理学检查虽也是侵袭性曲霉菌感染确诊的“金标准”，病理表现为真菌菌丝侵入和定植于组织或者血管造成炎症改变。但是其报告总中经常会出现曲霉样形态学特点等描述性的诊断结果，这对在镜下类似曲霉菌类的其他病原微生物的鉴别诊断带来一定的困难，误诊的出现几乎不可避免。若是发生误诊的两种病原微生物的治疗方案相差较大，就会严重影响治疗效果，从而进一步导致预后不良。此外，检查者的主观因素也有可能对诊断结论产生影响。
2、病原微生物的培养
病原微生物的培养是诊断细菌与真菌感染的常规方法，特异性高，同时还可以用于细菌与真菌感染的药敏试验，为临床合理使用抗生素提供可靠的依据。标本病原微生物的培养结果是侵袭性曲霉菌感染确诊的“金标准”，这是曲霉菌感染的诊断基础[3]。
烟曲霉菌培养是通过取病人血液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液（BAL）、尿液及感染病理组织等标本，接种于真菌培养基培养，其中血液、BAL及感染组织为常用的取材标本。各实验室采用的培养基及培养温度时间各有不同，如蔡氏培养基适用26℃培养3-4天，沙保培养基适用35℃培养1-2天，但因为培养时间长且敏感性不高，因而可能延误病人的诊断和治疗。与白色念珠菌、新型隐球菌等单细胞真菌比较，烟曲霉菌为丝状型真菌，组织的机械破碎对丝状真菌成活力及培养有很大影响[4]。此外，由于曲霉菌是机会致病菌，从有菌区获取的阳性培养结果并不能明确是由于定植的正常菌群或是侵袭性感染所致。
3、血清免疫学检测法
血清免疫学检测法是一种诊断病原因子感染的经典方法，原理是根据抗原抗体反应特异性的免疫学原理，检查患者血清、脑脊液、BAL、尿液等体液标本中病原因子特异的抗原或抗体。在烟曲霉菌感染血清学检测法的研究报道中，众多实验室研究的检测法都是围绕半乳甘露聚糖（GM）抗原而展开的。有研究[5]结果提示：采用酶免疫测定法（EIA）检测BAL标本中烟曲霉GM抗原有利于早期诊断并且指导治疗；阈值的设立对于EIA法的检测结果敏感性和特异性会有影响。从49名确诊为侵袭性肺曲霉病（IPA）的个体和50名疑为IPA 的个体采集的BAL标本，进行GM EIA的检测，当阈值设为1.0时，敏感性为61%；检测阈值为0.5时，敏感性为76%；相应的特异性分别为98%和94%。另外，从22名BAL标本烟曲霉培养阴性病人获取标本做GM EIA测定，当检测阈值为1.0时，敏感性为41%；检测阈值为0.5时，敏感性为59%[6]。还有实验室采用实验诱导建立兔IPA模型，然后用GM EIA方法检测分析。当最佳阈值为0.75时，未处理对照组的敏感性和特异性都达到100%；而抗真菌治疗组敏感性下降到92%[7]。另外，该实验存在一定的假阳性，也无法区别定植还是感染。还有实验室发展了一种基于检测抗-Afmp1p抗原的抗体的酶联免疫吸附测定
（ELISA）法用于检测烟曲霉感染。这种Afmp1p抗原是一种纯化重组的烟曲霉细胞壁抗原GM蛋白。目前这种基于检测抗-Afmp1p抗原的抗体的ELISA法的敏感性和特异性都比以前报导的基于检测其他抗原的ELISA法高[8-9]。此外，有实验室发展生物芯片技术检测GM效力用于评估前瞻性调查研究807例病人的3327例血清，特异性为99.6%，但对证明是或可能是曲霉病病人人群，敏感性却只有50%，可能是本实验出现的少量的假阳性病例限制了实验的敏感性[10]。其中引起假阳性的主要因素: (1)定植的曲霉释放的GM进入到血液循环系统；
(2) 与其他许多真菌抗原出现交叉反应；(3) 使用环磷酰胺的潜在影响；(4) 交叉感染；(4) cut-off 值的影响等等。
血清免疫学检测实验方法及检测目标的多样化，加快了烟曲霉感染诊断的步伐，检测阈值也急需各实验室之间规范化。除了上述几个实验室涉及的血清学诊断检测目标及检测实验方法，还有其他的检测目标如：galf抗原、BG[11]等等。
4、分子生物学诊断
聚合酶链反应（PCR）分子生物学技术是一种新型的烟曲霉感染诊断方法，诊断的灵敏性高，越来越被人们所关注。目前成了国内外研究的热点，其技术的关键部分有聚合酶链反应( PCR) 扩增、DNA 分子探针、限制性酶切片段长度多态性分析( RFLP) 、随机扩增DNA 多态性(RAPD) 等方法，其中PCR法具有特异性强、重复性好、全封闭反应、灵敏、快速等优点，因此，欧洲和美国FDA 推荐其用来诊断IPA，也被称为目前最理想的分子生物学方法。PCR诊断的检测标本有血清、脑脊液、BAL、尿液等，检测靶基因各实验室各有不同，检测方法也在不断改进，由开始的普通PCR、半定量PCR、定量PCR到实时PCR到定量实时PCR、巢式PCR等等[12]。PCR检测体系的靶基因主要包括烟曲霉菌一些基因位点的保守序列或是线粒体 DNA 片段。首先将标本中可能存在的烟曲霉菌DNA 提取出来，利用实时荧光定量 PCR 将其扩增得出初始标本中的曲霉菌 DNA 拷贝数或是利用传统PCR将其扩增后，利用其他分析方法对扩增后产物进行分析，从而得到初始标本中的曲霉菌的量和种类等相关信息。PCR诊断技术类似于烟曲霉DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。有实验研究表明：从49名已证明为侵袭性肺曲霉病（IPA）病人和50名可能为IPA病人获取BAL标本，靶基因为烟曲霉真菌219 bp片段长度18s rRNA基因，采用定量PCR检测方法检测的
敏感性和特异性分别为67%和100%。另外，从22名BAL标本烟曲霉培养阴性病人获取标本做定量PCR检测，敏感性为36%[13]。还有实验室采用实验诱导建立兔IPA 模型，然后用定量实时PCR方法进行分析，未处理对照组敏感性和特异性分别为80%和100%，而抗真菌治疗组的敏感性降低到50%[14]。M. Hummel和 B. Spiess等采用一种巢式PCR方法测定病人脑脊液曲霉DNA，靶基因为烟曲霉真菌138 bp片段长度18s rRNA基因，敏感性和特异性很高。他们尝试用巢式PCR检测曲霉病病人的脑脊液标本来确定是否有曲霉DNA，这种方法曾经在临床和实验上检测血液和BAL很有效。虽然脑脊液曲霉病诊断很困难，让人振奋的是使用巢式PCR检测6个脑脊液曲霉病病人标本都为阳性，敏感性100%[15]。Cathal E. OSullivan和 Miki Kasai等发展了一种基于荧光共振能量转移技术（FRET）的烟曲霉特异性定量实时PCR法，检测标本为实验兔IPA模型BAL和肺组织，靶基因为5.8s区域基因。FRET 定量实时PCR法检测烟曲霉DNA有很高的敏感性和特异性，在不久的将来将用人类标本进一步评估测定该方法[16]。Catriona Halliday和 Qi Xuan Wu等发展了一种巢式定性实时PCR方法用于探测临床标本中曲霉物种的DNA，这种检验方法比实时PCR法敏感性高，并且应用了低循环控制PCR系统，从而又进一步节省了检测时间[17]。Cornelia Lass-Florl Eberhard Gunsilius和Jason P. Trama等研究表明：抗真菌治疗开始后，全血标本用于做PCR诊断的优点被限制，敏感性降低[18，19]，因此，组织标本被推荐做曲霉PCR检测。Cornelia Lass-Florl和Eberhard Gunsilius等实验室检测靶基因是一个高度保守序列多拷贝18s rRNA。抗真菌治疗后，病人血标本用来证明病人感染曲霉的PCR敏感性阈值只需40%，而肺组织仍需100%[19]。Kaisu Rantakokko-Jalava和 Sanna Laaksonen等发展了一种探测BAL 和组织病理标本中烟曲霉线粒体DNA的实时PCR方法。伴随定性检测，该方法诊断敏感性为73%，特异性为93%，阳性预测值为73%，阴性预测值为95%[20]。除了上面简单介绍的几种PCR方法，还有自动化重复序列PCR（rep-PCR）[21],酶免疫测定PCR[22]，快速高通量多路径实时PCR[23]等等.各实验室采用各种改良PCR技术，通过获取临床病例或者实验动物模型，分析不同检测标本如血清、脑脊液、BAL、尿液等等，检测各个靶基因，检测阈值不同，检测敏感性和特异性也各有不同。值得注意的是，由于PCR易受呼吸道曲霉定植和空气中存在的曲霉孢子的污染、不能判断是活菌还是死菌、某些抗凝血药、DNA 释放的非连续性以及实验室存在的
实验误差，这些问题往往限制了PCR方法在IPA 诊断中的使用[24]。总之，PCR诊断技术是一项快速、敏感、特异性好的诊断技术，对烟曲霉感染的辅助诊断很有意义。但是因为各实验室采用的检测方法不一，检测标本来源及靶基因也各有不同，以及采集标本来自抗真菌治疗病人等等影响了烟曲霉感染PCR诊断的重现性和可靠性。为此，我们迫切需要烟曲霉感染PCR诊断技术的实验规范化。PCR法的检测结果与真菌感染之间的关系、临床诊断价值以及指导临床抗真菌治疗作用方面，有待进一步研究。
5、其他的诊断方法
除了上述四种烟曲霉感染诊断的常用方法，还有其他的一些诊断方法用于烟曲霉感染的诊断，如：活检组织菌丝显影法，扩增片段长度多态现象分析法（AFLP[25]，BG试验法[3]等。伴随烟曲霉感染诊断技术的不断改良，快速、敏感、特异地诊断烟曲霉感染越来越被人们所关注。各实验室在改良实验技术的同时，通过各种实验技术的结合用于烟曲霉感染的诊断，互补各实验技术的优缺点。如：Andrea Francesconi和 Miki Kasai等研究表明应用GM EIA和定量实时PCR合并诊断BAL标本中烟曲霉菌特异性抗原和DNA能提高检测的敏感性和特异性，减少诊断时间，从而早期正确使用抗真菌药物，改善烟曲霉菌感染，并且可以防止诊断阴性结果病人的滥用抗真菌药物[7]。Birgit Spiess和Dieter Buchheidt 等建立了一种低循环控制实时PCR，其测定方法快速、敏感、特异，能定量化检测高危病人BAL标本和血标本中烟曲霉DNA。这是一种结合了实时PCR和低循环控制PCR的新型检测方法。实时PCR的敏感性比低循环控制PCR好，但后者用于检测真菌荷载比前者好，两种PCR方法相结合而成的低循环控制实时PCR法值得我们关注[6]。Catriona Halliday和 Qi Xuan Wu等结合实时PCR和巢式PCR并应用低循环控制PCR系统发展了一种巢式定量实时PCR检测技术。这种新型检测烟曲霉感染的PCR技术因为结合了巢式PCR技术比普通实时PCR技术敏感性高，并且比传统的巢式PCR技术快速[17]。Svetlana Challier和Stephanie Boyer等发展了一种检测血清烟曲霉菌DNA的特异性实时PCR技术结合酶联免疫吸附测定技术能提高侵袭性曲霉病的诊断率[26]。Cornelia Lass-Florl和 Eberhard Gunsilius等评价抗真菌药物治疗期间全血标本的PCR阈值时发现：一旦标本来源于抗真菌药物治疗后病人，PCR诊断的优点被限制，因此推荐结合使用真菌培
养法和显微镜检查法提高真菌检测的敏感性[19]。
结语
随着临床上烟曲霉感染发病率的增多，并且预后极差，死亡率高达80％－90％，迫切需要发展一种快速、敏感、特异、规范化的诊断技术致力于早期发现烟曲霉菌感染，早期治疗烟曲霉感染，以及防止阴性感染结果病人的抗真菌药物滥用。随着对曲霉菌菌体抗原结构的不断研究，不排除在未来能够发现更具有特异性的曲霉菌抗原成分，并在此基础上开发新型的血清学与分子生物学检测方法， IPA 的诊诊断技术的会得到不断提高和规范化。
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中药抗烟曲霉菌的研究 发表时间：2014-11-24T10:20:09.233Z 来源：《世界复合医学》2014年第3期供稿作者：荀彦1 刘金辉[导读] 烟曲霉菌是导致免疫低下患者肺部感染、侵袭性肺曲霉病（IPA）等深部感染的常见真菌，特别是IPA 死亡率高达80%-90%，预后差。 荀彦1 刘金辉21.南昌大学第一临床医学院临床112 班；2.南昌大学医学院微生物学教研室南昌 330000 【摘要】烟曲霉菌是导致免疫低下患者肺部感染、侵袭性肺曲霉病（IPA）等深部感染的常见真菌。近年来随着侵入性治疗的运用、骨髓移植、广谱抗生素的滥用等情况，烟曲霉感染呈上升趋势。中药抗菌的特殊机理，不易产生耐药性，中药用于治疗烟曲霉菌感染，对于临床很有实际意义。本文总结近年资料后，对烟曲霉的致病，中药抗烟曲霉菌的效果，机制及相关影响因素进行探讨。 【关键词】中药抗菌；烟曲霉菌 【中图分类号】R435.72【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2014）03-040-02 烟曲霉菌是导致免疫低下患者肺部感染、侵袭性肺曲霉病（IPA）等深部感染的常见真菌，特别是IPA 死亡率高达80%-90%，预后差。 近年来，由于脏器移植患者增加，艾滋病发病率迅速增长和广谱抗生素、免疫抑制剂及激素的大量应用，IPA 的发病率有明显上升趋势[1]。 因中药抗菌的特殊机理，不易产生耐药性，中药抗曲霉菌研究引起了广泛兴趣。中药用于治疗深部真菌感染的深入探讨研究，特别是棘手的烟曲霉菌，目前还是研究较少的领域，而对临床治疗的进行很有实际意义。本文在总结近年资料后，对烟曲霉的致病，中药抗烟曲霉菌的效果，机制及影响因素进行探讨。 1 烟曲霉菌致病1.1 曲霉致病机制侵袭力是真菌致病因素的重要组成部分[2]，曲霉侵袭机体的过程多数都是机体吸入曲霉的孢子，孢子生长成菌丝进一步侵袭组织引发各种严重临床症状。 烟曲霉菌菌丝片段和孢子被吸入气道后，致少量细胞因子甚至抑制细胞因子产生，不能使足够的炎症细胞向局部趋化，逃避吞噬，长期存活、芽生、释放大量过敏原，引起哮喘发作或过敏性支气管肺曲霉病（ABPA）等[3]。 1.2 曲霉致病因子[4]1. 2.1 胞壁及外膜等相关成分曲霉的细胞壁拥有大量的多糖成分，β（1-3）葡聚糖是其胞壁中最主要的结构，组成基本骨架，它可以被宿主细胞识别，通过激活激活蛋白1（activator protein 1）激活宿主的炎症反应。 曲霉表面一层突起的疏水蛋白，利于曲霉的黏附和定植。 曲霉孢子还表达细胞色素成分，能帮助曲霉抵御紫外线，氧自由基。色素缺乏的孢子易被补体结合、吞噬细胞吞噬且对抗真菌药物敏感。 曲霉的细胞壁至少含有九种糖基磷脂酰肌醇相连的蛋白（GPI-linked protein）连接于多糖形成的骨架上，对曲霉的正常生长甚为重要。其合成相关的重要基因突变后，曲霉菌丝生成速度下降。 1.2.2 曲霉产生的毒素曲霉的基因较原核生物要复杂得多，毒素的种类也非常复杂。主要包括：①胶霉毒素（gliotoxin）；②烟曲霉素（fumagillin）；③其他毒素：烟曲霉文（fumigaclavine C）、可弥漫性物质（diffusiblesubstance）、局限曲霉素（restrictocin）、核糖毒素（ribotoxin）等。 这些毒素可以抑制DNA、蛋白质的合成或抑制免疫反应，或者破坏局部的组织，而利于曲霉的生长繁殖。 曲霉感染的过程相当复杂，单纯抑制其中某个基因的表达常难取得预期效果。基因组学，蛋白组学的研究可能会带来新的进展。 1.3 曲霉耐药性的产生有研究表明随着烟曲霉生物膜的成熟，对普通抗菌药物的敏感性进一步下降。据实验研究，与游离的孢子相比，在烟曲霉生物膜形成的过程中，药物外排泵基因和唑类靶酶基因表达量的逐渐升高可能对其抗药性增加有所影响[5]。 陈剑等的研究发现长期服用伊曲康唑的患者体内烟曲霉对伊曲康唑产生获得性耐药以及停药后回复敏感，可能系其14α脱甲基酶第220位M220I 的替换，即基因发生突变[6]。 对于侵袭性肺曲霉病，现在一般的抗菌药物如伏立康唑、伊曲康唑，也只有50%~70%的有效，多建议几种抗生素联合用药[7]。但多种常用抗生素的临床治疗效果愈发不佳，副作用大，对本就因免疫力低下而患烟曲霉病的病人更不适合。现临床上肺曲霉病大多数就是在原有肺部疾患的基础上或长期使用抗生素和激素后继发感染。故探寻并总结中药治疗方法以资解决这一问题。 2.中药汤剂的抑菌2.1 中药汤剂对烟曲霉体外抑菌实验有报道认为中药方剂四君子汤可以抑制体外培养的烟曲霉菌的生长[8]。以一定剂量的四君子汤和氟康唑处理的1000 个烟曲霉菌孢子涂布在沙氏固体培养基培养源凿，计算并比较烟曲霉菌生长形成的菌落数量、菌落大小、镜下计数孢子柄与孢子的数量。结果显示，与对照组相比，四君子汤和氟康唑可以显著降低烟曲霉菌的菌落数量和菌落大小、抑制孢子柄与孢子的的形成（P<0.05），结果呈现剂量-效应关系。提示四君子汤在治疗烟曲霉菌所致的肺部感染具有潜在的应用价值。 王刚生等应用试管药基法，测定中药提取组合物胶囊对念珠菌（白念、热带、克柔氏）、曲霉（烟曲、黄曲）的最小抑菌浓度（MIC），结果发现中药提取组合物胶囊对致病性念珠菌及曲霉体外均有很强的抗菌活性[9]。 还有研究通过微量液基稀释法分别测定中药活性成分肉桂醛和柠檬醛对常见深部条件致病菌黄曲霉、烟曲霉的抗菌活性。肉桂醛对黄曲霉、烟曲霉MIC 分别为0.01μg/ml，0.050μg/ml，柠檬醛对黄曲霉、烟曲霉的MIC 分别为：2.600μg/ml、0.650μg/ml。证明中药活性成分肉桂醛和柠檬醛具有高效抗曲霉作用[10]。 2.2 中药对烟曲霉体内抑菌试验任金贤等复制粒细胞减少期并发IPA 大鼠模型进行研究，证明黄芪多糖（APS）能够提高该模型大鼠的胸腺免疫功能，可能减轻环磷酰胺免疫抑制和曲霉感染的程度。黄芪多糖联合两性霉素B 注射组半乳甘露聚糖值也明显更低，说明其联合治疗粒细胞减少大鼠并发烟曲霉病有减轻疾病程度的作用[11]。 研究发现四君子汤对侵袭性肺曲霉病（IPA）模型小鼠的作用[12]：将小鼠随机分成8 组，建立 IPA 模型后分别给小鼠灌服高、中、低不同剂量四君子汤及酮康唑 7d，于第 8 天处死，取肺、肝、脾、肾做组织烟曲霉培养及病理切片，观察各脏器烟曲霉菌的培养情况及病理变化，同时另取小鼠做生存实验。结果显示，不同剂量四君子汤治疗组小鼠各脏器烟曲霉的菌落数均比 IPA 模型组少，烟曲霉色素明显减弱，以中剂量组最为明显；病理切片结果显示，IPA 模型组肺组织可见大量菌丝，中剂量和高剂量四君子汤组肺组织未见菌丝，低剂量组可见少量菌丝。生存实验表明，中剂量四君子汤组小鼠的生存时间及质量明显优于 IPA 模型组。结论：四君子汤可缓解 IPA 小鼠的肺组织病理损伤，明显减缓 IPA 的发展，尤以中、高剂量组明显。
综述 联合用药防治曲霉感染研究进展 刘洁一胡小平 (北京大学深圳医院皮肤性病科,深圳５１８０３６) ?摘要?一目前临床上治疗曲霉感染的药物主要有三唑类二多烯类和棘白菌素类,这些药物对控制曲霉感染具有重要作用.然而,随着抗真菌药耐药报道逐年增多,为提高临床疗效和避免曲霉耐药的发生,需要研发新型抗真菌药物或者寻找更为有效的治疗方法.由于研发新药周期长和成本高,越来越多的研究人员着眼于联合用药防治曲霉感染.抗真菌药物之间的联合用药,棘白菌素联合三唑类或多烯类药物可产生协同效应,多烯类联合三唑类药物产生拮抗作用,而抗真菌药物和非抗真菌药之间的联合用药具有较高的临床价值. ?关键词?一真菌感染;曲霉;联合用药 ?中图分类号?一R５１９．８一R９７８．５一一?文献标识码?一A一一?文章编号?一１６７３Ｇ３８２７(２０１９)１４Ｇ０１２４Ｇ０５ 一一近年来,随着骨髓移植和器官移植的广泛开展二A I D S患者人数的增加二广谱抗生素的普遍应用二免疫抑制剂以及侵入性治疗的增多,侵袭性真菌感染发病率和死亡率呈现逐年上升趋势[１],这严重危及到患者的生命健康.曲霉是引起侵袭性真菌感染的主要病原体[２],据报道系统性曲霉感染的病死率超过５０％[３],这为临床上防治曲霉感染带来了重大挑战.缺乏特异的临床表现二诊断手段欠佳使得该类患者难以获得准确的早期诊断,此外,抗真菌药不能获得理想疗效也是一个重要原因[４].目前临床上治疗曲霉感染的药物主要有三唑类二多烯类和棘白菌素类,这３类药物具有不同的作用机制[５](见图１).相较于临床上多达２４种的抗细菌药物和６种抗逆转录病毒药物[６],抗真菌药因特异性细胞靶点少[５]而种类有限.随着曲霉对抗真菌药耐药报道逐年增多,而研发新药科研难度较大和经济负担较重,越来越多的研究人员着眼于联合用药防治曲霉感染. １一现有抗曲霉感染药物 １．１一三唑类抗曲霉感染 在近十多年中,唑类药物在预防和治疗曲霉疾 基金项目:北京大学深圳医院科研项目(J C Y J２０１８０１１);深圳市三名工程项目资助(S Z S M２０１８１２０５９) 作者简介:刘洁,女(汉族),硕士研究生在读,EＧm a i l:l a u２m i n０５１５＠１６３．c o m 通信作者:胡小平．EＧm a i l:x i a o p i n g７７５２＠s o h u．c o m 病方面发挥了重要作用[７].三唑类抗真菌药最早于１９８０年合成,其主要包括氟康唑二伊曲康唑以及第二代抗真菌药伏立康唑和泊沙康唑等.作用机制主要是抑制羊毛甾醇转化为麦角固醇过程中重要的靶酶１４αＧ去甲基化酶,而麦角固醇是真菌细胞膜的主要成分,其合成受阻使三唑类药物发挥抗真菌作用[８].随后,麦角固醇的损耗以及有毒的麦角固醇前体的累积在真菌细胞膜上产生了膜应力,从而抑制其生长.唑类药物包括咪唑类和三唑类衍生物两种类型.咪唑类通常用于治疗皮肤表皮感染,而三唑类药物由于具有良好的药动学效应和安全性,通常用于治疗深部真菌系统性感染.三唑类药物是治疗侵袭性曲霉(i n v a s i v e a s p e r g i l l u s,I A)感染的一线用药. １．２一多烯类抗曲霉感染 多烯类是１９５０年发现的一种广谱天然抗真菌药,在临床上广泛用于真菌感染的治疗,常用的药物有两性霉素B和制霉菌素.多烯类药物抗真菌机制主要与真菌细胞膜上的麦角固醇相结合,干扰代谢和增加细胞膜的通透性,最终导致细胞死亡[９].由于麦角固醇和哺乳动物的类胆固醇结构相似,多烯类药物在临床不当使用会产生严重的全身毒性和肾脏毒性.因此,在新药研发方面,目前主要集中在降低多烯类抗真菌药的毒副作用.尽管该类药物在临床上长期广泛使用,但是关于多烯类药物耐药鲜有报道[１０]. １．３一棘白菌素类抗曲霉感染 ４２１ 一中国真菌学杂志２０１９年４月第１４卷第２期一C h i n JM y c o l,A p r i l２０１９,V o l１４,N o．２一
可在各种禽类中发生，常见于鸡、火鸡及水禽，野鸟、动物园中的鸟以及笼养鸟也偶有发生。胚胎及6周龄以下的雏鸡与雏火鸡比成年鸡易感，4～12日龄最为易感，幼雏常呈急性爆发，发病率很高，死亡率一般在10％～50％之间，成年禽仅为散发，多为慢性。本病可通过过多种途径感染，曲霉菌可穿透蛋壳进入蛋内，引起胚胎死亡或雏鸡感染，此外通过呼吸道吸入、肌肉注射、静脉、眼睛接种、气雾、阉割伤口等感染本病。曲霉菌经常存在于垫料和饲料中，在适宜条件下大量生长繁殖，形成曲霉菌孢子，若严重污染环境与种蛋，可造成曲霉菌病的发生。一临床症状幼禽发病多呈急性经过，病鸡表现呼吸困难，张口呼吸，喘气，有浆液性鼻漏。食欲减退，饮欲增加，精神萎顿，嗜睡。羽毛松乱，缩颈垂翅。后期病禽迅速消瘦，发生下痢。若病原侵害眼睛，可能出现一侧或两侧眼睛发生灰白混浊，也可能引起一侧眼肿胀，结膜囊有干酪样物。若食道沾膜受损时，则吞咽困难。少数禽由于病原侵害脑组织，引起共济失调，角弓反张，麻痹等神经症状。一般发病后2～7天死亡，慢性者可达2周以上，死亡率一般为5％～50％。若曲霉菌污染种蛋及孵化后，常造成孵化率下降，胚胎大批死亡。成年禽多呈慢性经过，引起产蛋下降，病程有拖延数周，死亡率不定。二病理变化病理变化主要在肺和气囊上，肺脏可见散在的粟粒，大至绿豆大小的黄白色或灰白色的结节，质地较硬，有时气囊壁上可见大小不等的干酪样结节或斑块。随着病程的发展，气囊壁明显增厚，干酪样斑块增多，增大，有的融合在一起。后期病例可见在干酪样斑块上以及气囊壁上形成灰绿色霉菌斑。严重病例的腹腔、浆膜、肝或其它部位表面有结节或圆形灰绿色斑块。三诊断根据发病特点饲料、垫草的严重污染发霉，幼禽多发且呈急性经过、、临床特征呼吸困难、、剖检病理变化在肺、气囊等部位可见灰白色结节或霉菌斑块、等，作出初步诊断，确诊必须进行微生物学检查和病原分离鉴定。四防治 1.加强饲养卫生管理应防止饲料和垫料发霉，使用清洁、干燥的垫料和无霉菌污染的饲料，避免禽类接触发霉堆放物，改善禽舍通风和控制湿度，减少空气中霉菌孢子的含量。为了防止种蛋被污染，应及时收蛋，保持蛋库与蛋箱卫生。 2.发生禽曲霉菌病的处理 1、清扫消毒应尽早移走污染霉菌的饲料与垫料，清扫禽舍，喷酒1： 2000的硫酸铜溶液，换上不发霉的垫料。严重病例扑杀淘汰，轻症者可用1： 2000或1： 3000的硫酸铜溶液饮水连用3～4天，可以减少新病例的发生，有效地控制本病的继续蔓延。 2、使用中草药方剂①金银花、连翘、莱菔子炒、各30克，丹皮、黄芩各15克，柴胡18克，桑白皮、枇杷叶、甘草各12克，水煎取汁1000毫升，为500只鸡的一日量，每日分4次拌料喂服，每天1剂，连用4剂，治疗鸡曲霉菌病效果显著。②桔梗250克，蒲公英、鱼腥草、苏叶各500克，水煎取汁，为1000只鸡的用量，用药液拌料喂服，每天2次，连用1周。另在饮水中加0.1％高锰酸钾。对曲霉菌病鸡用药3天后，病鸡群停止死亡，用药1周后痊愈。对于珍贵禽类，可考虑用制霉菌素、两性霉素及其它抗霉菌制剂进行治疗。更多请访问https://www.doczj.com/doc/c0522078.html,/
侵袭性肺曲霉病 侵袭性肺曲霉病(IPA)是曲霉菌直接侵犯肺或支气管引起的肺部感染性疾病，最常见烟曲霉。主要病理改变是呈急性广泛坏死性出血性肺炎或有肉芽肿，曲霉丝侵入血管，导致坏死性血管炎。 【诊断要点】见三级诊断标准。 1.临床表现：急性肺炎症状(咳嗽、咯痰、发热、咯血)，抗生素治疗无效。抗生素治疗无效的持续性发热、干咳、呼吸困难、咯血 2.辅助检查： 影像学表现：（1）急性侵袭性肺曲霉病：CT早期可见晕轮征(磨玻璃样环状阴影环绕病灶周围)，2-3周出现空气新月征(原有病灶中出现新月状的低密度透光区)，后期可形成曲霉球。（2）慢性坏死性肺曲霉病：CT可见上叶和下叶背段肺浸润性病变或结节影，伴有或不伴有空洞，可见曲霉球。（3）气道侵袭性肺曲霉病：影像学提示；①急性气管-支气管炎：X线多数正常；②细支气管炎：HRCT可见小叶中心性结节和“树-芽”征；③支气管肺炎：肺外周细支气管分布区小片实变影；④阻塞性支气管肺曲霉病：曲霉在官腔内呈团块状生长，好发于下叶，可有支气管扩张、大量黏液嵌塞。 微生物检查：GM试验阳性。 微生物检查：合格痰标本、支气管吸取物、BALF或胸腔积液涂片典型形态为45°分枝的有隔菌丝。
【治疗要点】 一线治疗：首选伏立康唑。 备选治疗：卡泊芬净、两性霉素B、两性霉素B脂质体。 缓解期用药：口服伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑，直到临床或影像学表现缓解或者稳定。 大咯血时如有条件可行手术治疗或支气管动脉栓塞。 【药物处方】 一线治疗： 伏立康唑：第一天0.9%氯化钠/5%葡萄糖250ml+伏立康唑400mg(6mg/kg)静点12小时1次；以后0.9%氯化钠/5%葡萄糖250ml+伏立康唑 200mg(3mg/kg)静点12小时1次。 备选治疗： 处方1：卡泊芬净：第一次负荷量：0.9%氯化钠250ml+卡泊芬净70mg 静点(至少1h)。维持量：0.9%氯化钠250ml+卡泊芬净50mg 静点(至少1h) 每日1次。 处方2：两性霉素B：5%葡萄糖7-10ml/kg+两性霉素B 0.7-1mg/kg静点每日1次。
烟曲霉菌感染的实验室检查方法 周艳(综述) 烟曲霉菌为空气中常见的腐生菌，为一种机会致病真菌，其孢子直径很小，可被动吸入呼吸道，在一般的环境下，人们每天都能吸入上百个烟曲霉菌孢子，但是通常情况下都不致病。近20年来随着广谱抗生素的滥用、肿瘤放疗和化疗，造血干细胞移植术、实体器官移植术后应用免疫抑制剂及糖皮质激素等药物以及肠外营养人数的增加以及艾滋病的流行等免疫抑制人群逐年增长[1]，临床上越来越多的免疫力低下的人群感染烟曲霉菌导致侵袭性肺曲霉病（invasive pulmonary aspergillosis,IPA）。侵袭性曲霉菌感染的发病率日益增长，其发病率已经超过了最常见的真菌感染—侵袭性念珠菌病。免疫力低下的老年病人发生侵袭性曲霉菌感染后的死亡率也一直居高不下。IPA以肺部感染为主，主要为急性坏死性出血性肺炎，并可波及骨骼、脑、肝、肾、心脏等全身多个重要器官，其预后极差，死亡率高达80％－90％[2]。由于IPA的发病机制尚未阐明，从而导致IPA的诊断极为困难，治疗成功率很低。为此，发展有效的烟曲霉菌感染实验室检查方法对于该病的诊断与治愈显得尤为重要，目前常见的实验室检测方法有：显微镜检查、病原生物学培养方法、血清免疫学检测法、分子生物学检测法等。本文就这些方法的研究作一综述。 关键词：烟曲霉菌；聚合酶链反应；血清学诊断 1、显微镜检查 显微镜检查主要包括直接显微镜检查和组织病理学检查，都是以形态学特点为基础来对病原微生物进行诊断。曲霉菌直接镜检呈现玻璃样透明的菌丝，但是其菌丝结构特点的特异性并不突出，其他种类相似的真菌如青霉菌亦可呈现类似
的镜下特点。另一方面，组织病理学检查虽也是侵袭性曲霉菌感染确诊的“金标准”，病理表现为真菌菌丝侵入和定植于组织或者血管造成炎症改变。但是其报告总中经常会出现曲霉样形态学特点等描述性的诊断结果，这对在镜下类似曲霉菌类的其他病原微生物的鉴别诊断带来一定的困难，误诊的出现几乎不可避免。若是发生误诊的两种病原微生物的治疗方案相差较大，就会严重影响治疗效果，从而进一步导致预后不良。此外，检查者的主观因素也有可能对诊断结论产生影响。 2、病原微生物的培养 病原微生物的培养是诊断细菌与真菌感染的常规方法，特异性高，同时还可以用于细菌与真菌感染的药敏试验，为临床合理使用抗生素提供可靠的依据。标本病原微生物的培养结果是侵袭性曲霉菌感染确诊的“金标准”，这是曲霉菌感染的诊断基础[3]。 烟曲霉菌培养是通过取病人血液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液（BAL）、尿液及感染病理组织等标本，接种于真菌培养基培养，其中血液、BAL及感染组织为常用的取材标本。各实验室采用的培养基及培养温度时间各有不同，如蔡氏培养基适用26℃培养3-4天，沙保培养基适用35℃培养1-2天，但因为培养时间长且敏感性不高，因而可能延误病人的诊断和治疗。与白色念珠菌、新型隐球菌等单细胞真菌比较，烟曲霉菌为丝状型真菌，组织的机械破碎对丝状真菌成活力及培养有很大影响[4]。此外，由于曲霉菌是机会致病菌，从有菌区获取的阳性培养结果并不能明确是由于定植的正常菌群或是侵袭性感染所致。 3、血清免疫学检测法 血清免疫学检测法是一种诊断病原因子感染的经典方法，原理是根据抗原
肺曲霉菌病的CT表现 目的探讨肺曲霉菌病的CT影像表现特征，提高对本病认识和早期诊断。方法回顾性分析10例经病理活检、痰培养及手术证实的肺曲霉菌病的CT影像表现特征。结果10例CT表现中均不同程度地出现了结节状阴影，伴有晕征或空气半月征。结论晕征、空气半月征是侵袭型肺曲霉菌病的CT特征性表现，对肺曲霉菌病的临床诊断或早期治疗具有重要参考价值。 标签：肺；曲霉病；体层摄影术；MSCT 肺曲霉菌病是由曲霉菌引起的肺部疾病，其影像表现复杂多样，正确认识本病的影像表现对肺部疾病的鉴别诊断具有重要意义。肺曲霉菌病通过原发和继发两种不同的感染方式，主要是继发感染为主，即患者常在原发病变的基础上，如严重感染、慢性消耗性疾病，当人体抵抗力降低时使致病菌发展，引起疾病。另一方面长期大量广谱抗生素、免疫抑制剂、化疗及肾上腺皮质激素的应用，可使不敏感的曲霉菌得以繁殖。肺曲霉菌病影像学表现较复杂，缺乏特征性改变。肺曲菌病临床分为3型：曲霉菌球、侵袭性肺曲菌病（IPA）和变态反应性支气管肺曲菌病（ABPA）。本文收集了我院自2009年1月～2014年1月经临床确诊10例肺曲霉菌病例的CT资料进行总结和探讨，以提高影像对其诊断的准确性。 1资料与方法 1.1一般资料回顾性分析我院自2009年1月～2014年1月经确诊具有完整临床及CT资料的10例肺曲霉菌病中，其中男8例，女2例，年龄在42～84岁，平均年龄65岁。有7例患者有咳嗽，发热症状，3例咳血。 1.2方法CT扫描机为GE Hispeed DX/i型螺旋CT机，每例患者均采用平静呼吸状态下屏气自肺尖至肺底进行层厚10 mm，层距10 mm连续螺旋扫描，对较小病灶局部进行层厚2～5 mm，层距2～5 mm薄层扫描。 2结果 10例肺霉菌病中肺霉菌球型6例，侵袭性肺曲霉菌病4例，变态反应性支气管肺曲霉菌病1例。CT表现为多发球形或片状影4例，均可见”日晕”征；单发或多发空洞6例，且均发现6例空洞内软组织影及新月征，见图1～图4。 图1 左肺小片状阴影图2 同一患者，11 d后出现半月征及菌球 图3 空洞及洞内随体位变化之菌球图4 双肺多发空洞及”日晕征” 2.1多发球形或片状阴影4例，占40%在侵袭性肺曲霉菌病表现，多见。可累及多个肺段或肺叶，境界不清。CT表现为多在肺野中、外带，其边缘可见毛玻璃样改变，呈环或”日晕”征。
鸡霉菌毒素中毒防治 自然环境中，含有许多霉菌，常寄生于含淀粉的饲料上，如果温度（28℃左右）和湿度（80-100%）适宜，就会有大量生长繁殖，常引起猪中毒的霉菌毒素有：黄曲霉毒素、镰刀菌毒素、赤霉菌毒素（F-2）、新月霉素群等。引起鸡中毒的主要是黄曲霉菌和烟曲霉菌。但临床上难以肯定为何种霉菌毒素中毒，往往是几种霉菌毒素协同作用的结果。 一、霉菌对鸡的危害： 霉菌对肉鸡的危害主要是通过污染垫料、饲料及饲喂用具而造成的。霉菌引起的病症主要有肺曲霉菌病、曲霉菌性全身感染、皮炎、霉菌性骨病、眼炎、脑炎等。对雏鸡而言，烟曲霉菌引起的危害要比黄曲霉菌引起的危害大得多。 曲酶菌感染的鸡常见呼吸困难、揣气、呼吸迫促，有的病鸡还表现嗜睡、食欲废绝、消瘦、渴欲增加和发热，有的后期腹泻。如果食道粘膜被霉菌浸染，可见吞咽困难。曲霉菌病还可造成禽类出现斜颈或平衡失调。剖检早期感染的雏鸡可见肺，气囊上有黄白色干酪样坏死小结，病程较长时还可见到钮扣状的霉菌癍。 霉菌的另一个危害是产生霉菌毒素，如黄曲霉毒素、T-2毒素、赭曲霉毒素和玉米赤霉烯酮。霉菌毒素常影响家禽的增重、饲料报酬、色素沉着、产蛋量、繁殖力和免疫抑制等。黄曲霉中毒的鸡对盲肠球虫病、马立克氏病、沙门氏菌病、包含体肝炎和传染性法氏囊病病毒的易感性增加。 二、临诊症状 病雏食欲减少或废绝，精神不振、闭目呆立、羽毛蓬乱、翅膀下垂，体温升高，口渴，饮水增多；呼吸困难，伸颈张口呼吸，呼吸次数增加；肉髯发绀。后期下痢，最后窒息而死。不死的病雏发育不良，消瘦。有的病雏眼球发炎，结膜充血肿胀，眼睑肿胀凸出，眼睑下有球状黄色干酪样渗出物。有的病雏由鼻孔流出浆液性、脓性分泌物。病雏有时发病不明显，不食伴有腹泻，粪便呈黄色或橙黄色。 三、剖检变化 病初气囊壁有点状或圆形的局部混浊肥厚，严重者整个气囊壁肥厚，气囊内含有灰白色或黄白色的炎性渗出物；肺瘀血肿大，肺和胸腹腔浆膜上有散在或密集的粟粒大至豆粒大的黄白色或灰白色结节，柔软有弹性，内容物呈干酪样；气管内有淡黄色渗出物。少数病例，心包积液混浊，肝、肾肿大。 四、实验室检查 采取病雏肺和气囊上的结节病灶少许，置玻片上，加生理盐水1滴，加盖玻片后镜检，见到菌丝呈圆柱状，暗绿 色；孢子呈串珠样，孢子柄不分枝，顶囊膨大。 五、治疗 1 2、全群鸡只饲喂制霉菌素，每只鸡1万单位，混料内服，每天2次，连用3天。 3、全群鸡用0.05%的硫酸铜饮水，连用4天。 4、每天早晚各饮1次5%葡萄糖和0.2%维生素C营养液，以增加能量，缓解中毒影响，全群使用恩诺沙星或阿莫西林饮水5小时。经过以上方案处理，3天后鸡群恢复正常。 采用上述措施后，病情即得到控制，7天左右停止死亡。 六、预防措施： 1 2、预防本病在于不使用发霉的垫料和饲料；垫料要经常检查翻晒，防止霉菌繁殖；加强饲养管理，提高鸡体的抗病能力 3、春夏季节在储存垫料过程中，一定要晒干，最好用0.3%硫酸铜喷洒过。 烟曲霉菌病和黄曲霉菌病区别 烟曲霉菌病:临床症状病鸡精神萎顿，食欲减退或不食，羽毛松乱，嗜睡，口渴，呼吸加深加快，有的病鸡下痢，鼻孔中流出粘液性分泌物等症状。剖检变化 病变主要表现在肺部和气管囊上。可见气管中有淡黄色渗出物，肺部形成针头大到绿豆大的灰黄色结节，突出于表面，质地较坚实，内容物呈干酪样。严重病例在胸腔、气囊、腹腔、肠系膜上都可见到芝麻大的病变结节。防制措施:全面清除地面上的发霉垫料，换上清洁干燥无霉的木屑垫料。对鸡舍彻底清扫1遍，然后用5%石炭酸进行喷洒消毒1次。打开窗户，保持育雏舍干燥、通风、换气。加强饲养管理，供给新鲜的全价饲料和充足的饮水。对病鸡用制霉菌素口服治疗，每只雏鸡日用量4～5mg，拌料饲喂，严重者直接口服6～7mg，连服3天，病情得到控制。 黄曲霉菌病:可引起鸡体发生营养吸收障碍和消化功能受阻；可导致公鸡精液稀薄，受精率下降，母鸡产蛋下降，蛋壳质量变差；可导致鸡体法氏囊、胸腺和脾脏的萎缩而发生免疫抑制；还会引起贫血、痛风等疾病。防治措施：饲料防霉、去毒，应立即更换饲料，及早服用硫酸镁，同时供给复合维生素和葡萄糖
肺部真菌感染 肺部真菌感染是由真菌感染引起的支气管-肺部疾病。 肺部真菌感染可以通过临床表现、微生物学、免疫学检测来辅助诊断。其中免疫学检测血清中细胞壁成分（1,3）-β-D-葡聚糖抗原检测（G试验）、半乳甘露聚糖抗原检测（GM试验）阳性有重要的辅助诊断价值。 诊断： 1.肺念珠菌病 见于粒细胞缺乏、中心静脉留置导管、腹部大手术、激素和抗生素治疗、糖尿病、肾功能不全、器官移植等高危人群。临床症状有不能解释的持续发热、呼吸道症状，但体征轻微。咳嗽，甚至剧咳，咳少量白色黏液痰或浓痰。血型播散型常出现迅速进展的循环和呼吸衰竭。X线呈支气管肺炎改变或片状浸润或融合，可有空洞形成。下呼吸道分泌物、肺组织、胸水、血直接涂片或培养出念珠菌即可确诊。痰液直接涂片或培养出念珠菌并不能诊断为真菌病，因有10%～20%的正常人痰中可找到白色念珠菌，若3%双氧水含漱3次从深部咳出的痰（合格痰）连续≥2次培养出同一菌种的念珠菌则有诊断参考价值。血培养念珠菌阳性是念珠菌菌血症可靠的诊断证据。部分患者G试验阳性（需除外假阳性），可为临床诊断提供重要参考。 2.肺曲霉病 临床表现复杂，常见3种类型：过敏性支气管肺曲霉病（多见过敏体质）、曲霉球（最常见症状是咯血）和侵袭性肺曲霉病（为粒细胞缺乏或接受广谱抗生素、激素、免疫抑制剂治疗过程中出现不能解释的发热、干咳、胸痛，咯血等）。过敏性支气管肺曲霉病诊断标准包括： （1）反复哮喘样发作； （2）外周血嗜酸粒细胞增高≥1X109/L； （3）X线一过性或游走性肺部浸润； （4）血清总IgE浓度≥1000mg/ml； （5）曲霉抗原皮试阳性； （6）血清沉淀素抗体阳性； （7）特异性抗曲霉IgE和IgG滴度升高； （8）中央囊状支气管扩张。 肺曲霉球根据影像学特征可作出临床诊断，但需与其他真菌球、错构瘤、肺癌、棘球蚴囊肿、肺脓肿相鉴别。确诊需病原学和组织病理学。肺曲霉球CT特征为肺空洞或胸膜腔内圆形致密阴影，其边缘有透光晕影。若空腔较大，尚可见球形阴影有蒂与洞壁相连，形如钟摆，球形阴影可随体位变化而改变形态。如果空洞较小，球形病灶填充了大部分空腔，其晕影很小，仅呈一狭长的半月形透亮带。侵袭性肺曲霉病CT特征：早期为炎症阴影，周围呈现薄雾状渗出（“晕轮征”），随后炎症病灶出现气腔实变，可见支气管充气征，再后可见病灶呈现半月形透光区（“空气半月征”），进一步可变为完整的坏死空洞。其诊断采用上述提到的3级诊断标准。GM试验阳性提供重要参考。
第十五章其他病原微生物 引起动物发生传染病的病原除了上述介绍的细菌和病毒以外，还有许多其他病原微生物，在这里主要介绍曲霉菌、分支杆菌、牛放线菌、猪痢疾蛇形螺旋体、钩端螺旋体、猪肺炎支原体、鸡败血支原体等。 第一节曲霉菌 曲霉菌主要存在于稻草、秸秆、谷壳、木屑及发霉的饲料中，菌丝及孢子以空气为媒介污染笼舍、墙壁、地面及用具。致病性曲霉菌有多种，常见的有烟曲霉和黄曲霉。 一、烟曲霉 （一）生物学特性烟曲霉（Aspergillus fumigatus）为需氧真菌，室温下能正常生长，最适温度37～40℃。在马铃薯培养基、糖类培养基和血琼脂培养基上都能生长。烟曲霉的菌丝为有隔菌丝，菌丝纵横交错。在固体培养基上生长时，菌丝初期为无色到灰白色。经24～30h开始形成孢子，成熟时孢子逐渐变为浅黄色、草绿色、灰绿色甚至黑色。气生菌丝末端分化出厚壁的足细胞，在足细胞上生出直立的分生孢子梗，梗的顶部膨大形成顶囊，形似倒置的烧瓶。顶囊上长满辐射状排列的小梗，小梗顶端长出成串的球形分生孢子。孢子呈蓝绿色，2.5～3.0μm，分生孢子梗长250～300μm。菌落呈绒毛状，初期为白色、圆形，后期变为暗绿色或黑绿色，菌落边缘仍呈白色，菌落反面无色或带褐色。 曲霉菌孢子抵抗力强，120℃干热1h或煮沸5min才能被杀死，常用消毒剂为5%甲醛、石炭酸、过氧乙酸和含氯消毒剂，曲霉菌在消毒剂中一般经1～3h 才能死亡。 （二）致病性烟曲霉的孢子广泛存在于空气、水和土壤中，极易在潮湿垫草和饲料中繁殖，同时产生毒素。烟曲霉孢子导致家畜发病较少。孢子和菌丝进入家禽腔性器官并增殖，常造成器官机械性堵塞，加之毒素的作用，常表现为曲霉菌性肺炎，尤其是幼禽敏感性极高。潮湿环境下，曲霉孢子穿过蛋壳进入蛋内，不仅引起蛋品变质，而且在孵化期间造成死胚，或者雏鸡发生急性曲霉菌性肺炎。 （三）微生物学诊断烟曲霉的检查主要根据菌丝及孢子形态而确定。 取病禽肺、气囊或腹腔上肉眼可见的小结节，尽量剪碎，置载玻片上，加10%～20%氢氧化钾溶液1～2滴，加盖玻片镜检，可见短的分支状有隔菌丝，直径4～6μm，长可达300μm。据此可做出初步诊断。经过病原分离才能确诊。分离培养时，取肝脏、肺脏、禽类气囊等组织，接种于马铃薯培养基上，37℃下培养3d，可见菌丝生长，根据繁殖菌丝末端是否膨大，分生孢子的形态大小及排列特征加以确诊。 （四）防治主要措施是加强饲养管理，保持禽舍通风干燥，不让垫草发霉，不用发霉的饲料和垫料。环境及用具保持清洁，发病时可使用制霉菌素。 二、黄曲霉 （一）生物学特性黄曲霉（Aspergillus flavus）的生物学特性和培养特征与烟曲霉相似，菌丝形态和孢子排列特征也与烟曲霉相似，但分生孢子梗壁厚而
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢侵袭性曲霉菌感染检查方法 导语：治疗疾病前身体检查是很关键的，对患者身体检查能够很好的掌握患者病情，这样对疾病治疗有很好帮助，同时也能够避免选择错误的治疗方法，减 治疗疾病前身体检查是很关键的，对患者身体检查能够很好的掌握患者病情，这样对疾病治疗有很好帮助，同时也能够避免选择错误的治疗方法，减少对患者身体损害，侵袭性曲霉菌感染检查方法都有什么呢，这类疾病在检查上，也是有很多方式，下面就详细的介绍下。 侵袭性曲霉菌感染检查方法： 曲霉菌属是一种丝状真菌，通过孢子形式进行繁殖。自然界中分布广泛，如土壤，水，食物，腐烂的植被等，主要经空气传播。大多数健康人群的免疫系统能够抵抗曲霉菌的侵袭，而免疫受损或接受免疫抑制药物治疗的个体则易致病。侵袭性曲霉菌病(InvasiveAspergillosis，简称IA)是致病的最严重的一种形式：曲霉菌孢子通过呼吸道入侵体内，随血液循环侵犯其它器官和部位，如鼻窦，眼睛，皮肤，肾脏和中枢神经系统等。然而IA的早期诊断仍是当前较难攻克的医学难题之一。 近些年的一份研究报告数据显示，IA的发病率和死亡率逐年上升，整体死亡率达到58%.①主要发生于临床化疗，移植后免疫抑制和高剂量激素治疗患者，如：恶性血液病，骨髓移植，实体器官移植和移植物抗宿主疾病等。涉及临床科室有血液科，移植科(中心)，呼吸科，风湿免疫科，ICU，皮肤科等。目前的诊断仍主要是一些传统的方法，即X-射线或CT扫描，组织培养，组织活检等，这些方法或特异性不高或检测周期较长，尤其组织活检时样本的采集无疑使病患雪上加霜，且很难早期诊断侵袭性曲霉病。导致患者长期的抗真菌药物治疗，这样不仅增加了治疗成本，而且增加了药物毒性作用，对患者造成进一步 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
作者：张宇宋文刚高嵩刘攀王丽 【摘要】目的通过筛选出致病力最强和最弱的菌株研究烟曲霉的致病机制。方法 spf级雄性icr小鼠216只，体重(20±0.5)g。随机分9组，每组8只（感染组7组，阴性对照组和正常对照组各1组）。其中感染组和阴性对照组小鼠免疫抑制后，分别接种7株烟曲霉的孢子悬液和生理盐水。正常对照组不注射环磷酰胺和孢子悬液。每日观察小鼠的生存状态。对死亡小鼠和处死小鼠的脏器进行组织匀浆菌落计数和病理学检测。实验重复3次。通过比较生存率、中位生存期、平均体重、组织匀浆菌落计数和组织病理学变化等来比较烟曲霉的致病力差异。结果①感染组小鼠接种孢子悬液后，体重迅速下降。肺组织病理学检测观察到组织坏死，菌丝聚集；肺组织匀浆培养得到的菌株经分子生物学鉴定为烟曲霉。②阴性对照组小鼠体重下降速度较感染组慢，无死亡；肺组织病理学检测未见菌丝侵袭。③通过比较生存率、中位生存期、组织病理学变化等指标，从7株烟曲霉中筛选得到致病力最强和最弱的菌株（烟曲霉jlc 50134和jlc 30566）。结论不同烟曲霉菌株间存在致病力的差异。 【关键词】致病力；动物模型；烟曲霉 烟曲霉（aspergillus fumigatus）感染所致侵袭性肺曲霉病（ipa）是引起高危患者（如中性粒细胞减少症、造血干细胞移植、长期高剂量使用激素和血液恶性肿瘤等免疫力低下患者）致死性感染的主要原因。由于ipa的发病率高、病情进展迅速、死亡率高（60%～90%）及缺乏有效的治疗药物〔1～2〕，其相关研究受到了极大关注。目前，烟曲霉的致病机制尚不明确，已往的研究多集中在通过改造单一或几个与致病性相关的基因来研究菌株的致病机制〔3〕，而通过比较不同烟曲霉菌株间致病力差异进行研究在国内尚未见报道。获得致病力不同的菌株，可以全面、系统地分析和比较与致病力相关的诸多因素，对烟曲霉的致病机制以及治疗药物开发等方面的研究非常必要。本研究将通过评价生存率、中位生存期、组织病理学变化等指标，比较7株不同烟曲霉致病力的差异。 1 材料与方法 1.1 材料 spf级icr小鼠216只，雄性，6周龄，体重(20±0.5)g，由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供，许可证号：scxk吉2007 2003。实验过程中对动物处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》〔4〕。烟曲霉共7株，其中，强毒株jlc 50134由日本国立千叶大学真菌医学研究中心馈赠，编号ifm 40808。jlc 30542、jlc 30890、jlc 30859、jlc 30566、jlc 31106及jlc 31753分离自临床患者和环境样本，经分子生物学鉴定后，由吉林大学真菌研究中心菌种保藏中心(culture collection of jilin university mycology research center)分离并保藏。实验用马铃薯葡萄糖琼脂培养基（pda）购自difco公司，注射用环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公司。 1.2 方法 1.2.1 孢子悬液的制备 将烟曲霉接种于pda斜面培养基上，28℃培养5 d。用含有0.05%吐温 80的生理盐水制备一定浓度的孢子悬液。将孢子悬液进行连续稀释后涂布在pda平板培养基上，28℃培养3 d，进行菌落计数，与涂布的孢子悬液浓度进行比较，计算孢子活力〔（菌落计数×稀释倍数）/孢子悬液浓度〕＞90%可进行接种〔5〕。 1.2.2 接种浓度的确定 配制烟曲霉jlc 50134的孢子悬液（浓度：1.0×103～1.0×109 cfu/ml共7个梯度）感染小鼠，每个浓度10只，预计选用3 d内导致50%小鼠死亡的孢子悬液浓度作为实验接种浓度〔5〕。 1.2.3 动物的免疫抑制和分组 随机挑选小鼠216只，分9组（感染组7组，阴性对照组和正常对照组各1组），每组8只。饲养于ivc鼠笼中，室温（24℃～26℃），保持湿度，日照14 h和黑夜10 h交替进行，
侵袭性肺曲霉菌感染怎么回事 真菌引起的疾病比较多，在对真菌引发疾病治疗上，一定要选择多种治疗方式，这样对缓解病情有很好帮助，而且真菌引发疾病，发展速度很快，患者患有后，需要及时的进行治疗，否则病情严重后，治疗上也是会很复杂，侵袭性肺曲霉菌感染是很多人不了解的，对它是怎么回事呢? 侵袭性肺曲霉菌感染怎么回事： 侵袭性肺部真菌感染，是指真菌引起的支气管肺部真菌感染，即真菌对气管支气管和肺部的侵犯，引起气道粘膜炎症和肺部炎症肉芽肿，严重者引起坏死性肺炎，甚至血行播散到其他部位。但需要注意的是，IPFI不包括真菌寄生和过敏所引起的肺部改变，分为原发性和继发性两种类型。原发性肺部真菌感染是指免疫功能正常、有或无临床症状的肺部真菌病;继发性肺部真菌感 染是指伴有宿主因素和(或)免疫功能受损的真菌感染，后者在临床上常见。IPFI常见的真菌主要是念珠菌属、曲霉属、隐球菌属、接合菌(主要指毛霉)和肺孢子菌等。
肺部真菌感染常继发于严重的原发病，症状、体征常无特征性，可有以下临床表现： (1)流感样症状：表现为发热、畏寒、头痛、流涕、关节痛、肌痛等; (2)隐匿性感染：无明显的症状和体征，可自愈; (3)肺部表现： ①肺炎或支气管炎：最常见，与一般细菌性肺炎难以鉴别。可有发热、咳嗽、咯白色粘稠痰或黄脓痰等症状，肺部可闻及湿性罗音，可伴有少至中量胸液; ②肺结核样表现：组织胞浆菌病、皮炎芽生菌病和奴卡菌病的临床表现有时酷似肺结核，可有干咳、咯血、胸痛等呼吸道症状及午后低热、盗汗等“结核中毒症状”; ③肺脓肿和脓胸：常急性起病，可有寒战、高热(多呈驰张热)、咳嗽、咯粘液脓性痰，有时痰中臭味明显，咯血多为痰中带血。放线菌病和奴卡菌病所致脓胸均易在胸壁上形成窦道;
IDSA：2016 新版曲霉菌病诊治指南 2016-07-07 21:13 来源：丁香园作者：步步非烟 字体大小 -|+ 曲霉菌病是感染曲霉菌引起的一种真菌病，可累及皮肤、黏膜、眼、鼻、支气管、肺、胃肠道、神经系统、骨骼等多器官系统，严重者导致败血症，病例呈世界性分布。病原体曲霉菌属丝状真菌，是一种常见的条件致病性真菌，广泛分布于自然界，其感染者并不少见。 时隔8 年，美国感染病学会（IDSA）就曲霉菌病临床关注的热点问题，总结现有不同类型曲霉菌病相关证据，于近期发布了新版曲霉菌病诊治指南，替代2008 旧版指南，旨在为临床医生诊治管理此病提供参考。该2016 新版指南于近期发表在Clinical Infectious Diseases 杂志上。现将主要内容简述如下。 流行病学与感染风险因素 1. 易感者如何预防曲霉菌病？何为易感人群？ （1）应将住院的异体造血干细胞移植（HSCT）接受者安置在受保护的环境中，以减少霉菌暴露机会（强烈推荐；证据级别低）。 （2）也应给予其他严重免疫功能低下的、易发生侵袭性曲霉菌病（IA）的高危患者相应防护措施，如急性白血病正在接受诱导/ 再诱导化疗方案治疗者（强烈推荐；证据级别低）。 （3）若住院无法提供防护病房的条件，推荐此类患者入住单独病房，且病房远离施工场地，也不允许将绿植或鲜花带入病房（强烈推荐；证据级别低）。 （4）建议对IA 高危门诊患者采取合理防护措施，以减少霉菌暴露机会，包括避免园艺、施肥劳作或密切接触装修或施工场地（强烈推荐；证据级别低）。 （5）白血病诊疗中心与移植中心应当定期监测侵袭性霉菌感染。若发现霉菌感染率超过基线水平，或者非高危人群发生侵袭性霉菌感染，应当立即对医源性感染情况进行评估（强烈推荐；证据级别低）。 曲霉菌病的诊治 2. 如何确立侵袭性曲霉菌病的诊断？ （6）在临床实验室推广使用分子生物学诊断技术以前，推荐采集足量组织和体液样本同时送检组织病理学/ 细胞学检查与真菌培养。如果分离培养得到非典型菌株或考虑存在耐药，可采用分子生物学实验方法进行菌种鉴定（强烈推荐；证据级别低）。 （7）对于采用PCR 法化验血检测IA 尚存争议。 （8）建议临床医生根据个案情况谨慎使用PCR 试剂盒检测感染，根据具体试剂盒方法学与检测特点解读化验结果。使用该方法诊断时，应结合其他诊断性检测结果及临床具体情况（强烈推荐；证据级别中等）。
专题笔谈 肺曲霉病病谱及其诊断策略 张静瞿介明 近年来，随着对肺曲霉病认识的增多和临床资料的积累，其分类也在不断演变。对肺曲霉病病谱的特点及其病理生理基础深入理解对疾病诊治尤为重要[1]。一方面，不同类型的肺曲霉病具有鲜明的特征，有助于早期诊断；另一方面，肺曲霉病的复杂性、多变性又阻碍了准确诊断，例如同为免疫功能低下患者，但因免疫功能抑制类型及程度不同，感染曲霉后的临床表现往往差别很大，多数缺乏典型特征；又如伴随疾病的临床表现往往掩盖了肺曲霉病演变过程中出现的蛛丝马迹。本文介绍肺曲霉病目前的常用分类及其特点，并在此基础上谈谈诊断方面需要注意的几个问题。 一、肺曲霉病病谱及其疾病特点 1.侵袭性肺曲霉病（invasive pulmonary aspergillosis, IPA）：IPA多发生于免疫功能低下患者。经典的免疫功能低下指血液系统恶性肿瘤及异基因骨髓干细胞移植患者的持续粒细胞缺乏，是IPA的高危因素。非粒细胞缺乏患者，如长期应用糖皮质激素治疗、慢阻肺、营养不良、实体器官移植等也是IPA的易发人群[2]。 IPA可分为血管侵袭性曲霉病（angio-invasive aspergillosis, AGIA）和气道侵袭性曲霉病（airway invasive aspergillosis），后者根据累及的部位又可分为气管支气管炎（aspergillus tracheobronchitis, ATB）、支气管肺炎和细支气管炎。 AGIA多见于经典免疫功能低下患者，也可见于其他具有危险因素的患者。“晕征”是AGIA的早期影像学表现，在CT上表现为单个或多个结节或肿块，边缘模糊，有些聚集成簇，其病理基础是出血性肺梗死，中央的结节或肿块为坏死的肺组织，磨玻璃晕环提示肺泡出血[3]。空气新月征（air crescent）多发生于粒细胞缺乏患者AGIA中性粒细胞恢复时，一般在初发浸润的第6～26天（平均15 d）后出现，提示预后较好及免疫功能恢复。在X线胸片和CT检查均可见到环型 DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-0939.2015.01.000 作者单位：200025上海，复旦大学附属中山医院呼吸内科（张静）；上海交通大学医学院附属瑞金医院（瞿介明） 通信作者：瞿介明，Email: jmqu0906@https://www.doczj.com/doc/c0522078.html,