第三章蛋白质
一、名词解释
#1、免疫球蛋白：是一类具有抗体活性的动物糖蛋白。主要存在于血浆中，也见于其它体液及组织分泌物中。一般可分为五种。
2、超二级结构：在蛋白质尤其是球蛋白中，存在着若干相邻的二级结构单位（α－螺旋、
β－折叠片段、β－转角等）组合在一起，彼此相互作用，形成有规则的、在空间能辨认的二级结构组合体，充当三级结构的构件，称为超二级结构
3、纤维状蛋白：纤维状蛋白分子结构比较有规律，分子极不对称，呈极细的纤维状，溶解性能差，在生物体内具保护、支持、结缔的功能，如毛发中的角蛋白，血纤维蛋白等。
4、盐析作用：向蛋白质溶液中加入大量中性盐，可以破坏蛋白质胶体周围的水膜，同时又中和了蛋白质分子的电荷，因此使蛋白质产生沉淀，这种加盐使蛋白质沉淀析出的现象，称盐析作用。
5、球状蛋白：球状蛋白的空间结构远比纤维状蛋白复杂，分子呈球形或椭圆形，溶解性能好，如血红蛋白、清蛋白、激素蛋白等。
#6、疏水相互作用：蛋白质分子某些疏水基团有自然避开水相的趋势而自相黏附，使蛋白质折叠趋於形成球状蛋白质结构时，总是倾向将非极性基团埋在分子内部，这一现象称为疏水相互作用。
7、简单蛋白与结合蛋白
简单蛋白：完全由氨基酸组成的蛋白质称为简单蛋白。
结合蛋白：除了蛋白质部分外，还有非蛋白成分，这种蛋白叫结合蛋白。
8、别构现象：当有些蛋白质表现其生理功能时，其构象发生变化，从而改变了整个分子的性质，这种现
象称别构现象。
9、分子病：指某种蛋白质分子一级结构的氨基酸排列顺序与正常的有所不同的遗传病。
10、多肽链：多个氨基酸以肽键相互连接形成多肽，多肽为链状结构，又叫多肽链。
11、桑格（Sanger）反应：即2，4二硝基氟苯与α—氨基酸中氨基反应生成DNP-氨基酸，是黄色二硝基苯衍生物。用此反应可以N-端氨基酸的种类。是生化学家Sanger创用，故称桑格反应。
12、等电点：当调节氨基酸溶液的pH值，使氨基酸分子上的－NH2和－COOH的解离度完全相等，即氨
基酸所带净电荷为零，在电场中既不向正极移动，也不向负极移动，此时氨基酸所处溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。
13、氨基酸残基：组成多肽链的氨基酸单位已不是完整的氨基酸分子，其中每一个
－NH－CH－CO－
│单位称为氨基酸残基。
R
14、别构现象：当有些蛋白质分子表现其生物功能时，其构象发生改变，从而改变了整个分子的性质，这种现象称为别构现象。
15、肽键平面：组成肽键（酰胺键）的六个原子（C,N,O,H,α-C,α-C）位于同一平面，呈刚性平面结构，其中C-N键具有偏双键性质，C=O, N-H为反式排布，这种平面称肽键平面又称酰胺平面。
16、结构域：在超二级结构基础上，多肽链（40-400个氨基酸范围）再折叠成相对独立的三维实体，称为结构域。一般由100-200个氨基酸残基组成，大蛋白质分子由2-3个结构域形成三级结构，较小蛋白质的三级结构即是单结构域。
17、蛋白质的变性作用：天然蛋白质因受物理的或化学的因素影响，其分子内部原有的高度规律性结构发生变化，致使蛋白质的理化性质和生物学性质都有所改变，但并不导致蛋白质一级结构的破坏，这种现象叫蛋白质的变性作用
18、氨基酸残基：组成多肽链的氨基酸单位已不是完整的氨基酸分子，因此每一个-NH-CH-CO- 残基称为氨基酸残基。
#19、透析：利用胶体对半透膜的不可渗透性，可将蛋白质溶液中低分子量的杂质与蛋白质分离开，因而
得到较为纯净的蛋白质，这种以半透膜提纯蛋白质的方法称透析。
二、选择
1、每个蛋白质分子必定有(三级结构)
A. α-螺旋结构
B. β-片层结构
C. 三级结构
D. 四级结构
E. 辅基
2、关于肽键的下列描述,错误的是(E)
A. 具有部分双键性质
B. 可为蛋白酶所水解
C. 是蛋白质分子中主要的共价键
D. 是一种酰胺键，稳定性高
E. 以上都不对
*3、下列氨基酸中具有亲水侧链的是（苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸）
A 苏氨酸
B 亮氨酸
C 丝氨酸
D 丙氨酸
E 谷氨酸
4、酰胺平面中具有部分双键性质的单键是：（B）
A C-Cα
B C-N
C N-H
D N-Cα
5、与氨基酸相似的蛋白质的性质是(两性性质)
A. 高分子性质
B. 胶体性质
C. 沉淀性质
D. 两性性质
E. 变性性质
6、含有色氨酸的蛋白质所特有的显色反应是：（乙醛酸反应）
A 双缩脲反应
B 黄色反应
C 米伦氏反应
D 乙醛酸反应
E 坂口反应
F 福林试剂反应
7、一种蛋白质的营养价值高低主要决定于（C）
A 是否好吃可口
B 来源是否丰富
C 所含必需氨基酸的种类是否完全和相对数量的多少
D 市场价格的贵贱
*8、肽键平面的结构特点是：（ABD）
A4个原子处于一个平面
B 肽键中的C-N键具有双键的性质
C 肽键中的C-N键可以自由旋转
D 只有α-碳原子形成的单键可以自由旋转
E 肽键平面是蛋白质一级结构的基本单位
*9、分离纯化蛋白质主要根据蛋白质的哪些性质（形状大小、溶解度、电荷）
A 分子的形状和大小
B 粘度不同
C 溶解度不同
D 溶液的pH值
E 电荷不同
*10、可用来鉴定蛋白质肽链N-末端氨基酸的试剂是：（DE）
A 茚三酮
B 亚硝酸
C 甲醛
D 2，4二硝基氟苯
E 异硫氰酸苯酯
11、跨膜蛋白与膜脂在膜内结合部分的氨基酸残基（大部分是疏水性）
A大部分是酸性 B 大部分是碱性
C 大部分疏水性
D 大部分是糖基化
*12、变性蛋白中未被破坏的化学键是：（肽键、二硫键）
A氢键 B 盐键 C 疏水键
D 肽键
E 二硫键
F 范得华力
*13、下列关于蛋白质的三级结构的叙述哪些是正确的（B D）
A．一条多肽链和一个辅基连成的紧密型结构。
B．蛋白质分子中含有α－螺旋、?－片层折叠结构和?－转角。
C．其辅基通过氨基酸残基与分子内部相连。
D．大部分非极性基团位於蛋白质分子内部。
14、含有精氨酸的蛋白质特有的呈色反应是：(坂口反应)
A. 双缩脲反应
B. 黄色反应
C. 米伦氏反应
D. 乙醛酸反应
E. 坂口反应
F. 福林试剂反应
*16、含有酪氨酸的蛋白质能引起的呈色反应是：（双缩尿反应、黄色反应、米伦氏反应、福林试剂反应）
A.双缩脲反应
B.黄色反应
C.米伦氏反应
D.乙醛酸反应
E.坂口反应
F.福林试剂反应
*17.下列关于蛋白质三级结构的叙述，哪些是正确的（B,D）
A.一条多肽链和一个辅基连成的紧密球形结构
B.蛋白质分子中含有α－螺旋，?－片层折叠和?－转角
C.其辅基通过氨基酸残基与分子内部相连
D.大部分非极性基团位於蛋白质分子内部
*18.在pH6-7的溶液中带负电荷的氨基酸有：（asp、glu）
A）. Asp B. Arg C. Glu
D. Gln
E. His
F. Lys
*19、可用来判断蛋白质水解程度的反应是：（B C）
A茚三酮反应
B 亚硝酸反应
C 甲醛反应
D 2，4-二硝基氟苯反应
E 异硫氰酸苯酯反应
20、胰岛素A链与B链的交联靠：(二硫键)
A氢键
B 盐键
C 二硫键
D 酯键
E 范德华力
*21、在pH6-7范围内带正电荷的氨基酸有：（arg、his、lys）
A、Asp
B、Arg
C、Glu
D、Gln
E、His
F、Lys
23、蛋白质一级结构与功能关系的特点是:（B）
A相同氨基酸组成的蛋白质功能一定相同
B 一级结构相近的蛋白质其功能类似性越大
C 一级结构中任何氨基酸的改变,其生物活性就丧失
D 不同生物来源的同种蛋白质.其一级结构完全相同
E 一级结构中氨基酸残基任何改变,都不会影响其功能
24、在下列肽链主干原子排列中,符合肽链结构的是：（E）
A C—N—N—C
B N—C—C—N
C N—C—N—C
D C—C—C—N
E C—C—N—C
F C—O—N—H
25、蛋白质平均含氮量为：（16%）
A10%
B 12%
C 14%
D 16%
*26、蛋白质胶体溶液的稳定因素是：（B D）
A蛋白质颗粒在溶液中进行布朗运动，促使其扩散
B 蛋白质分子表面有水膜
C 蛋白质溶液粒度大
D 蛋白质分子带有同性电荷
27、蛋白质空间构象的特征主要取决于: ( 氨基酸的排列次序)
A. 氨基酸的排列次序
B. 次级键的维持力
C. 温度, pH, 离子强度
D. 肽链内和肽链间的二硫键
28、蛋白质二级结构的主要维系力是( 二硫键)
A、盐键
B、疏水键
C、氢键
D、二硫键
*29、非蛋白质氨基酸是：（A、B ）
Ａ、Orn B、Cit C、Asp D、Arg E、Glu F、Lys
30、具有四级结构的蛋白质是（血红蛋白）
Ａ、α‐角蛋白Ｂ、β‐角蛋白Ｃ、肌红蛋白
Ｄ、细胞色素ＣＥ、血红蛋白
31、在酰胺平面中具有部分双键性质的单键是（B）
Ａ、Ｃα－ＣＢ、Ｃ－ＮＣ、Ｎ－ＨＤ、Ｎ－Ｃα
*32、可用来判断蛋白质水解程度的反应是（ B C ）
A、茚三酮反应
B、亚硝酸反应
C、甲醛反应
D、2，4–二硝基氟苯反应
E、异硫氰酸苯酯反应
#33、α–螺旋表示的通式是（B）
A、3.010
B、3.613
C、2.27
D、4.616
三、判断
1、血红蛋白与肌红蛋白均为氧的载体, 前者是一个典型的变构蛋白, 而后者却不是。(√)
2、蛋白质的变性是蛋白质分子空间结构的破坏, 因此常涉及肽键的断裂。(×)
3、芳香氨基酸均为必需氨基酸。（×）
#4、凝胶过滤法测定蛋白质分子量是根据不同蛋白质带电荷多少进行的。（×）
#5、用透析法可解开蛋白质中的二硫键。(×)
#6、SDS-PAGE测定蛋白质分子量的方法是根据蛋白质分子所带电荷不同。(×)
7、蛋白质分子中的肽键是单键, 因此能够自由旋转.( ×)
8、变性蛋白质溶解度降低是因为蛋白质分子的电荷被中和以及除去了蛋白质外面的水化层所引起的（×）#9、一个蛋白质样品经酸水解后，能用氨基酸自动分析仪准确测定它的所有氨基酸（×）
10、双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，所以二肽也有双缩脲反应。（×）
#11、可用8M尿素拆开蛋白质分子中的二硫键（×）
12、维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键（×）
13、多数蛋白质的主要带电基团是它N-末端的氨基和C－末端的羧基组成。（×）
14、在水溶液中，蛋白质溶解度最小时的pH值通常就是它的等电点。(√)
15、天然氨基酸都具有一个不对称α－碳原子。（×）
16、亮氨酸的疏水性比丙氨酸强。(√)
17、自然界的蛋白质和多肽类物质均由L-型氨基酸组成。（×）
18、蛋白质在pI（等电点）时，其溶解度最小。(√)
19、蛋白质多肽链的骨架是CCNCCNCCN---。(√)
20、一氨基一羧基氨基酸pI为中性，因为－COOH和NH3+ 解离度相同。（×）
21、构型的改变必须有共价键的破坏。(√)
#22、纸电泳分离氨基酸是基于它们的极性性质。（×）
四、填空
1、蛋白质溶液在280nm波长处有吸收峰, 这是由于蛋白质分子中存在着_________, ___________和__________残基。（苯丙氨酸酪氨酸色氨酸）
2、胰蛋白酶是一种____ ____酶, 专一性地水解肽链中_______和_________残基的羧基端形成的肽键。（水解酶赖氨酸精氨酸）
3、一般说来, 球状蛋白分子含有___ __氨基酸残基在其分子内部, 含________氨基酸残基在其分子的表面. （非极性极性）
4、血浆脂蛋白包括、、、、。（乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、极高密度脂蛋白）
5、蛋白质按分子形状分为和；按分子组成分为
和。（纤维状蛋白球状蛋白简单蛋白结合蛋白）
6、蛋白质的变性作用最主要的特征是，变性作用是由于蛋白质分子发生改变所引起的。（生物学性质的改变内部高度规律性结构）
7、β-折叠结构的特点是：（1）肽段伸展呈；（2）在片层中个肽段走向可以是；也可以是；（3）氢键是在之间形成；（4）R伸向锯齿的方。
-C=O与—N—H 前）
8、组成蛋白质的20中氨基酸中，除外，均为α-氨基酸；除外，氨基酸分子中的α-碳原子，都有旋光异构体；天然蛋白质分子中，只存在氨基酸。
（Pro Gly L-）
9、能形成二硫键的氨基酸是___________。（半胱氨酸）
10、蛋白质的二级结构有、、和等类型。
（α-螺旋β-折叠β转角自由回转）
11、根据组成蛋白质20种氨基酸侧链R基的化学结构，，可将蛋白质分为四大类：
（脂肪氨基酸，芳香氨基酸，杂环氨基酸，杂环亚氨基酸）
12、蛋白质多肽链主链形成的局部空间结构称为二级结构. 这些二级结构进一步排列一些有规则的模块称之为___________或叫作____________.（超二级结构，折迭单元）
13、一个氨基酸的α－羧基与另一个氨基酸的α－氨基脱水缩合而成的化合物______
肽。氨基酸脱水后形成的键叫_____键，又称______键。（二肽肽酰胺键）
14、稳定蛋白质胶体系统的因素是________和___________.(水膜，电荷)
15、GSH由_________和____________，___________组成的。（Glu，Cys，Gly，）
16、α-螺旋是蛋白质二级结构的主要形式之一，其结构特点是：（1）螺旋盘绕手性为；（2）上升一圈为nm；（3）一圈中含氨基酸残基数为，每个残基沿轴上升nm；（4）螺旋圈与圈之间靠而稳定；（5）螺旋中R伸向。（右手0.54 3.6 0.15 氢键外侧）
17、α-螺旋是蛋白质级结构的主要形式之一，该模型每隔个氨基酸残基，螺旋上升一圈。α-螺旋稳定的主要因素，是相邻螺圈三种形成。β-折叠结构有以及两种形式，稳定β-折叠的主要因素是。（二 3.6 氢键平行式反平行式氢键）
18、蛋白质具有各种各样的生物功能，例如有，，，，。（催化运动结构基础防御营养）
19、多肽链的正链是由许多_ __平面组成.平面之间以原子相互隔开,并以该原子为顶点作运动。（_酰胺Cα旋转）
#20、常用的拆开蛋白质分子中二硫键的方法有(1). ________法,常用的试剂为_________. (2).___________法,常用的试剂为_________或_________。
（氧化过氧甲酸还原巯基乙醇巯基乙酸）
21、1、蛋白质变性作用最主要的特征是，变性作用是由于蛋白质分子中的被破坏，引起。（生物学性质的改变，次级键，天然构象的解体）22、蛋白质的一级结构是由共价键形成的，如和；而维持蛋白质空间构象的稳定性的是次级键，如、、和等。
（肽键，二硫键；氢键，盐键，疏水键，范德华力）
#23、最早提出蛋白质变性理论的是____________。（吴宪）
24、蛋白质的二级结构有、、和等类型。
(α–螺旋，β–折叠，β–转角,自由回转)
25、破坏蛋白质的和中和了蛋白质的，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象，蛋白质可因加入、、和等类试剂而产生沉淀。（水膜，电荷，高浓度盐类，有机溶剂，重金属盐，某些酸）
26、在下列空格中填入合适的氨基酸名称：
(1)________是带芳香族侧链的极性氨基酸。
(2)________和_________是带芳香族侧链的非极性氨基酸。
(3)________是含硫的极性氨基酸。
(4)在一些酶的活性中心中起重要作用并含羟基的极性较小的氨基酸是__________。
(1) Tyr (2) Trp、Phe (3) Cys (4) Ser
五、计算
1、某一蛋白质的多肽链在一些区段为α螺旋构象,在另一些区段为β构象，该蛋白质的分子量为240000,多肽链外形的长度为5.06x10-5厘米,试计算：α螺旋体占分子的百分比?(假设β构象中重复单位为0.7nm,即0.35nm长/残基。氨基酸残基平均分子量以120为计)
设：α－螺旋体占分子的X％
该蛋白质应含有的氨基酸残基数为：
240,000/120=2,000个
根据多肽链的结构，建立以下方程式：
0.15nm * 2000* X％＋0.35nm * 2,000 *（100-X）％＝5.06*10－5cm
则：3X+700- 7X= 5.06x10-5x107
4X=194
X=48.5
2、测得一个蛋白质中色氨酸的残基占总量的0.29%，计算蛋白质的最低分子量。（色氨酸残基的分子量为
186）（2分）解：M=186*100/0.29=64138
3、肌红蛋白含铁量为0.335%，其最小分子量是多少？血红蛋白含铁量也是0.335%。试求其分子量。
解：肌红蛋白的分子量为：
100：0.335=M：56 M=100*56/0.335=16716.4
血红蛋白的分子量为：
100：0.335=M：（4*56）M=66865.7
4、一个大肠杆菌的细胞中含106个蛋白质分子，假设每个蛋白质分子平均分子量约为40000，并且所有的分子都处于α-螺旋构象，计算每个大肠杆菌细胞中的蛋白质多肽链的总长度。（假设氨基酸残基的平均分子量为118）解：（106*40000/118）*0.15*10-7=5.08（cm）
5、测得一个蛋白质的样品的含氮量为10克，计算其蛋白质含量。
解：1克氮=6.25克蛋白质10*6.25=62.5克
6、试计算油100个氨基酸残基组成的肽链的α.－螺旋的轴长长度。（2.5分）
解：0.15nmx100=15nm
7、下列氨基酸的混合物在pH3.9时进行电泳，指出哪些氨基酸朝正极移动？哪些氨基酸朝负极移动？（3分）
Ala（pI＝6.0）Leu（pI=6.02）Phe（pI=5.48）
Arg（pI=10.76 ）Asp（pI=2.77）His（pI=7.59）
解：朝负极移动者：Ala，Leu，Phe，Arg，His。
朝正极移动者：Asp
8、计算100个氨基酸残基组成的肽链的α—螺旋的轴长度。15nm
9、已知牛血清白蛋白含色氨酸0.58%(按重量算),色氨酸分子量为204。
(1)计算最低分子量；
(2)用凝胶过滤测得牛血清白蛋白分子量大约为7万,问该分子中含有几个Trp残基。
解答：（1）设：当该牛血清白蛋白只含一个Trp时的最低分子量为M
则:204/M=0.58%
M=0.58%/204=35172(约35000为计)
（2）该分子中应含Trp残基个数为：
70000/35000=2
六、问答
1、一个A肽：经酸解分析得知由Lys, His, Asp, Glu2, Ala, 以及V al, Tyr和两个NH3分子组成。当A肽与FDNB试剂反应后,得DNP-Asp; 当用羧肽酶处理后得游离缬氨酸。如果我们在试验中将A肽用胰蛋白酶降解时, 得到二肽, 其中一种( Lys, Asp, Glu, Ala, Tyr)在pH6.4时, 净电荷为零, 另一种(His,Glu,以及V al)可给出DNP-His, 在pH6.4时,带正电荷. 此外, A肽用糜蛋白酶降解时,也得到二种肽, 其中一种(Asp, Ala, Tyr)在pH6.4时呈中性, 另一种(Lys, His, Glu2,以及V al)在pH6.4时,带正电荷，问A肽的氨基酸顺序如何?（10分）
答：由题意可知A肽为八肽，由Lys、His、Asp、Glu2、Ala、V al、Tyr组成。且其中包括二个酰胺；
由FDNB及羧肽酶反应可知N端为Asp，C端为V al；
由胰蛋白酶解、pH＝6.4时电荷情况、生成DNP-His知所得二个肽段应为：Asp－Glu、Ala、Tyr、Lys－（Glu、Asp 其中有一个酰胺）
－His－Gln－V al
再由糜蛋白酶解、pH＝6.4时电荷情况知所得肽段应为：
Asn－Ala－Tyr－
－Glu－Lys－His－Gln－V al
所以整个八肽的氨基酸顺序应为：
Asn－Ala－Tyr－Glu－Lys－His－Gln－V al
2、将含有Asp(pI=2.98), Gly(pI=5.97), Thr(pI=6.53), Leu(pI=5.98)和Lys(pI=9.74)的pH＝3.0的柠檬酸缓冲液,加到预先用同样缓冲液平衡过的Dowex-50阳离子交换树脂中,随后用该缓冲液洗脱此柱,并分部的收集洗出液,,这五种氨基酸将按什么次序洗脱下来?（8分）
答：氨基酸在离子交换层析中被洗脱下的次序取决于氨基酸在该条件下所带电荷的种类、大小以及分子本身的极性等。因此以上五种氨基酸在pH＝3.0缓冲液洗脱，洗脱下来的次序是：
Asp－Thr－Glu－Leu－Lys先……………………后
3、有一个七肽, 经分析它的氨基酸组成是: Lys, Gly, Arg, Phe, Ala, Tyr, 和Ser. 此肽未经糜蛋白酶处理时, 与FDNB反应不产生α-DNP-氨基酸. 经糜蛋白酶作用后, 此肽断裂成两个肽段, 其氨基酸组成分别为Ala, Tyr, Ser, 和Gly, Phe, Lys, Arg. 这两个肽段分别与FDNB反应, 可分别产生DNP-Ser和DNP-Lys. 此肽与胰蛋白酶反应, 同样能生成两个肽段, 它们的氨基酸组成分别是Arg, Gly, 和Phe, Tyr, Lys, Ser, Ala. 试问此七肽的一级结构是怎样的?
答因为此肽未经糜蛋白酶处理时与FDNB反应不产生α-DNP-氨基酸可推断为：环七肽从经糜蛋白酶水解成的两个片段及它们与FDNB的反应产物可知该两片段可能为：－Ser－Ala－
Tyr－（1）
－Lys－Gly、Arg、Phe－（20）
此肽与胰蛋白酶反应生成的两个片段应是：
－Gly－Arg－（3）
－Phe、Tyr、Ser、Ala、Lys－（40）
（20）肽段结合（3）肽段综合分析应为：－Lys－Gly－Arg－Phe－（2）
（40）与（1）肽段综合分析应为－Phe－Ser－Ala－Tyr－Lys－（4）
综合（2）与（4）肽段，此肽应为：
Gly－Arg－Phe－Ser－Ala
??
Lys ________________Tyr
4、下列氨基酸的混合物在pH3.9时进行电泳，指出哪些氨基酸朝正极移动？哪些氨基酸朝负极移动？
Ala（pI＝6.0）Leu（pI=6.02）Phe（pI=5.48）
Arg（pI=10.76 ）Asp（pI=2.77）His（pI=7.59）
解：向负极移动者：Ala，Leu，Arg，Phe，His.
向正极移动者：Asp
5、某多肽的氨基酸顺序如下:
Glu-V al-Lys-Asn-Cys-Phe-Arg-Trp-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Glu-Ala-Thr-Cys-Arg-
-His-Met-Asp-Gln-Cys-Tyr-Pro-Gly-Glu-Glu-Lys. 如用胰蛋白酶处理,此多肽将产生几个小肽?（假设无二硫键存在）
答：产生四个小肽
1. Glu－V al－Lys
2. Asn－Cys－Phe－Arg
3. Trp－Asp－Leu－Gly－Ser－Leu－Glu－Ala－Thr－Cys－Arg
4. His－Met－Asp－Glu－Cys－Tyr－Pro－Gly－Glu－Glu－Lys
6、比较下列各题两个多肽之间溶解度的大小
（1）〔Gly〕20和〔Glu〕20，在pH7.0时
（2）〔Lys－Ala〕3和〔Phe－Met〕3，在pH7.0时
（3）〔Ala－Ser－Gly〕5和〔Asn－Ser－His〕5，在pH9.0时
（4）〔Ala－Asp－Gly〕5和〔Asn－Ser－His〕5，在pH3.0时
答：多肽在水中的溶解度主要取决它们侧链R基团大概相对极性，特别是离子化基团的数目，离子
化基团愈多，多肽在水中的溶解度就愈大。
7、一种酶分子量为360,000, 在酸性环境中可解离为二个不同成分, 其中一个成分分子量为120,000, 另一个为60,000. 大的占总蛋白的三分之二, 具有催化活性; 小的无活性. 用β-巯基乙醇处理时, 大的颗粒即失去催化活性, 并且它的沉降系数减小, 但沉降图案上只呈现一个峰. 关于该酶的结构可做出什么结论? 答：从题中已知酸水解结果可初步推测:
该酶有具有催化活性的大亚基，分子量为120000,
并含有二个（360000x2/3＝240000，240000/120000=2）,
还有分子量为6000无催化活性的小亚基，
个数也为二个,因（360000-120000x2）/6000=2
再从β－巯基处理结果又知在两个大亚基内有二硫键。
第四章酶
一、名词解释
#1、K cat：酶的转换数，即每秒钟每个酶分子，转换底物的微摩尔数。
#2、限制酶：在细菌的细胞内有一类识别并水解外源DNA的酶，称为限制性内切酶。
3、活性中心和必需基团
活性中心：是指酶分子中直接和底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。
必需基团：酶分子中有很多基团，但并不是所有基团都与酶的活性有关。其中有些基团若经化学修饰使其改变，则酶的活性丧失，这些基团称必需基团。
4、酶原：某些酶，特别与消化有关的酶，在最初合成和分泌时，没有催化活性，这种没有催化活性的酶的前体称为酶原。
5、同工酶：是指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构、组成却有所不同的一组酶。
#6、巯基酶：某些含有巯基的酶，在体内需要有自由的巯基存在时，才能发挥催化活性，若自由巯基发生改变，则酶的活性受到抑制或失去活性，这类酶叫巯基酶。
7、酶原激活：酶原在一定的条件下经适当的物质作用，可转变成有活性的酶。酶原转变成酶的过程成为酶原激活。这个过程实质上是酶活性部位形成或暴露的过程。
8、酶工程：指酶制剂在工业上的大规模生产及应用。
9、固定化酶：通过吸附、偶联、交联和包埋或化学方法做成仍具有酶催化活性的水不溶酶。
#10、中间产物学说：酶在催化反应，酶首先与底物结合成一个不稳定的中间产物，然后中间产物再分解成产物和原来的酶，此学说称中间产物学说。
11、金属酶：酶分子中含有金属元素的酶类
12、别构效应剂：能够与酶分子中的别构中心结合，诱导出或稳定住酶分子的某种构象，使酶活动中心对底物的结合与催化作用受到影响，从而调节酶的催化反应速度及代谢过程的物质。
13、诱导酶：某些物质能促进细胞内含量极微的酶迅速增加，这种是诱导生成的，称为诱导酶。
14、比活性：指单位重量样品中的酶活力，即U数/mg蛋白质或Kat数/kg蛋白质。
15、协同效应：在别构酶参与的酶促反应中，底物与酶结合后，引起了调节酶分子构象发生了变化，从而使酶分子上其它与底物结合部位与后继的底物的亲和力发生变化，或结合更容易，称为正协同效应，相反称为负协同效应。
17、别构酶：由于酶分子构相的变化而影响酶的催化活性，从而对代谢反应起调节作用的酶。
18、全酶与蛋白酶：一些结合蛋白质酶类，除蛋白组分，还含有一对热稳定的非蛋白小分子物质，前者称为酶蛋白，后者称为辅因子，只有两者结合成完整体系才具有活力，此完整酶分子称为全酶。
19、共价修饰调节：一类调节酶可由于其它酶对其结构进行共价修饰，而使其在活性形式与非活性形式之间相互转变，称为共价修饰调节。
20、多酶体系：在完整的细胞内的某一代谢过程中，由几个酶形成的反应链体系，称为多酶体系。
21、辅基：结合酶中与酶蛋白结合较紧的，用透析法不易除去的小分子物质称为辅基。
22、诱导契合学说：该学说认为酶分子活性中心的结构原来并非和底物的结构互相吻合，但酶的活性中心不是僵硬的结构，它具有一定的柔性，当底物与酶相遇时，可诱导酶蛋白的构象发生相应的变化，使活性中心上有关的各个基团达到正确的排列和定向，因而使酶和底物契合而结合成中间络合物，并引起底物发生反应。
23、核糖酶：具有催化功能的RNA分子称为核糖酶。
25、酶的反馈抑制：酶作用的产物对酶本身的活性产生抑制作用，称为酶的反馈抑制。
二、选择
1、核酶的化学本质是（核糖核酸）
Ａ、核糖核酸Ｂ、粘多糖
Ｃ、蛋白质Ｄ、核糖核酸和蛋白质的复合物
2、乳酸脱氢酶经过透析后，其活性大大降低或消失，这是因为：（失去辅酶）
A 亚基解聚
B 酶蛋白变性
C 失去辅酶
D 缺乏底物与酶结合所需要的能量
E 以上都不对
3、下列对酶的叙述，哪一项是正确的？（E）
A 所有的蛋白质都是酶
B 所有的酶均以有机化合物作为底物
C 所有的酶均需特异的辅助因子
D 所有的酶对其底物都具绝对特异性
E 上述都不对
#4、测酶活性时，反应速度对底物应呈：（一级反应）
A一级反应 B 混合级反应
C 零级反应
D 二级反应
5、在效应物作用下，蛋白质产生的变构（或别构）效应是蛋白质的（构象发生变化）
A 一级结构发生变化
B 构型发生变化
C 构象发生变化
D 氨基酸顺序发生变化
6、温度对酶活性的影响是：（最适温度随反应的时间而有所变化）
A.低温可使酶失活
B.催化的反应速度随温度的升高而升高
C.最适温度是酶的特征性常数
D.最适温度随反应的时间而有所变化
E.以上都不对
*7、在嘧啶核苷酸的合成途径中，CTP可以使天冬氨酸转氨甲酰酶产生别构效应的事实属于下列哪种情况：（别构激活、前体活化作用）
A. 别构抑制
B. 别构激活
C.酶的诱导生成作用
D. 非共价作用
E. 前体活化作用
*8、非竞争抑制作用是：(B,C,D)
A. 抑制剂与酶活性中心外的部位结合
B. 酶与抑制剂结合后，还可与底物结合
C. 酶与底物结合后，还可与抑制剂结合
D. 酶－底物－抑制剂复合物不能进一步释放产物
E. 以上都不对
9、关于研究酶反应速度应以初速度为准的原因中，哪项不对？（ E ）
A.反应速度随时间的延长而下降，
B.产物浓度的增加对反应速度呈负反馈作用，
C.底物浓度与反应速度成正比，
D.温度和pH有可能引起部分酶失活，
E.测定初速度比较简单方便
10、酶促反应达最大速度后，增加底物浓度不能加快反应速度的原因是：（A）
A.全部酶与底物结合成E-S复合体
B.过量底物对酶有负反馈抑制
C. 过量底物与激活剂结合影响底物与酶的结合
D.改变了化学反应的平衡点
E.以上都不是
11、底物浓度饱和后，再增加底物浓度，则（ D ）
A.反应速度随底物浓度的增加而增加
B.随着底物浓度的增加酶逐渐失活
C.酶的结合部位被更多的底物占据
D.再增加酶的浓度反应速度不再增加
E .形成酶—底物复合体增加
12、有机磷农药（ E ）
A.对酶有可逆性抑制作用
B.可与酶活性中心上组氨酸的咪唑基结合，使酶失活
C.可与酶活性中心上半胱氨酸的巯基结合使，酶失活
D.能抑制胆碱乙酰化酶
E.能抑制胆碱酯酶
13、非竞争性抑制剂的存在，使酶促反应动力学改变为：(C)
A V不变，km变小
B V不变，km变大
C V变小，km变大
D V变小，km不变
E V变小，km变小
F V变大，km变大
14、含唾液淀粉酶的唾液经透析后，水解淀粉的能力显著下降，其原因是：（B）
A、酶变性失活
B、失去Cl—
C、失去Ca2+
D、失去辅酶
*15、受共价修饰调节的酶有（糖原磷酸化酶、谷氨酰胺合成酶）
A糖原磷酸化酶
B 谷氨酰胺合成酶
C β—半乳糖苷酶
D 精氨酸酶
E 色氨酸合成酶
F 乙酰辅酶A羧化酶
16、竞争性抑制剂的存在,使酶促反应的动力学改变为：（B）
A V不变,Km变小
B V不变,Km变大
C V变小,Km变大
D V变小,Km不变
E V和Km都变小
F V和Km都变大
17、有机磷农药的杀菌机理是：（D）
A是酶的可逆性抑制作用
B 可与酶的活性中心上组氨酸的？？基结合使酶失活
C 可与酶活性中心上半胱氨酸的巯基结合使酶失活
D 能抑制胆碱脂酶
E 能抑制胆碱乙酰化酶
18、pH对酶促反应速度的影响，下列哪能项是正确的：(B)
A pH对酶促反应速度影响不大
B 不同的酶有其不同的最适pH
C 酶的最适pH都在中性即pH=7左右
D 酶的活性随pH的提高而增大
E pH对酶促反应速度影响最大的主要在于影响酶的等电点
19、在对酶的抑制中，Vmax 不变，Km增加的是（竞争性抑制）
Ａ、竞争性抑制
Ｂ、非竞争性抑制
Ｃ、反竞争性抑制
Ｄ、不可逆抑制
20、根据国际系统命名法原则，以下哪一个属转移酶类（A）
Ａ、ＥＣ２.7.1.126 B、ＥＣ１.7.1.126
Ｃ、ＥＣ３.7.1.126Ｄ、ＥＣ６.7.1.126
21、1、下列有关酶蛋白的叙述，哪个是不正确的？（C）
Ａ、属于结合酶的组成部分Ｂ、为高分子化合物
Ｃ、与酶的特异性无关Ｄ、不耐热Ｅ、不能透过半透膜22、关于变构酶的结构特点的错误叙述是：（D）
Ａ、有多个亚基组成Ｂ、有与底物结合的部位
Ｃ、有与变构剂结合的部位Ｄ、催化部位与别构部位都处于同一亚基上Ｅ、催化部位与别构部位既可处于同一亚基也可处于不同亚基上
*23、酶蛋白和辅酶之间有下列关系（ B D E ）
A、两者以共价键相结合,二者不可缺一
B、只有全酶才有催化活性
C、在酶促反应中两者具有相同的任务
D、一种酶蛋白通常只需一种辅酶
E、不同的酶蛋白可使用相同辅酶，催化不同的反应
*24、关于别构酶，正确的表达是（ A C F ）
A、它们一般是寡聚酶
B、它们一般是单体酶
C、当效应剂与别构酶非共价结合后，引起别构效应。
D、当效应剂与别构酶共价结合后，引起别构效应。
E、别构酶的动力学性质符合米氏方程式。
F、别构酶的动力学性质不符合米氏方程式。
25、酶促作用对反应过程能量的影响在于（ B ）
A、提高活化能
B、降低活化能
C、提高产物的能阈
D、降低产物的能阈
E、降低反应的自由能
26、下列哪一个酶的催化活性需要金属离子？（ B ）
A、溶菌酶
B、羧肽酶
C、胰凝乳蛋白酶
D、胰蛋白酶
三、判断
1、同一种辅酶与酶蛋白之间可有共价和非共价两种不同类型的结合方式。(×)
2、Km值仅由酶和底物的相互关系决定，而不受其它因素影响。（×）
3、酶的敏感性就是指酶对能使蛋白质变性的因素极为敏感。（√）
4、人体生理的pH值是体内各种酶的最适pH值。(×)
5、Km可近似表示酶对底物亲和力的大小，Km愈大，表明亲和力愈大。(×)
6、激活剂对酶具有激活作用，激活剂浓度越高，则酶活性越大。(×)
7、非竞争性抑制中，一旦酶与抑制剂结合后，则再不能与底物结合。(×)
8、毒气DFP为不可逆型抑制剂。(√)
5、溶菌酶和辅酶NAD和NADP是名种脱羧酶的辅酶。(×)
6、胰蛋白酶均属单体酶。(√)
7、酶促反应的初速度与底物浓度无关。（×）
8、酶的Km值是酶的特征常数，它不随测定的pH和温度而改变。（×）
9、别构酶动力学曲线的特点都是呈S形曲线。（×）
10、不可逆抑制作用中抑制剂通常以共价键与酶蛋白中的基团结合。( √)
11、反竞争抑制中，酶只有与底物结合后，才能与抑制剂结合。(√)
12、酶活性中心是亲水的介电区域。(×)
13、溶菌酶的实现催化功能需金属离子Mg2+参与。(√)
14、抗体酶既具有专一结合抗原的性质，又具有酶的催化功能。(√)
15、溶菌酶的实现催化功能需金属离子Mg2+参与。(√)
16、抗体酶既具有专一结合抗原的性质，又具有酶的催化功能。(√)
17、诱导酶是指在加入诱导物后本身构象发生变化，趋向于易和底物结合的一类酶。(×)
18、溶菌酶和胰蛋白酶均属单体酶。(√)
19、辅助因子都可用透析法去除。(×)
20、在酶分离纯化过程中，有时需在抽提溶剂中加入少量的巯基乙醇，这是为了防止酶蛋白的-SH被氧化。(√)
21、在稳态平衡假说中，产物和酶结合形成复合物的速度极小。(√)
22、Km可近似表示酶对底物亲和力的大小，Km愈大，表明亲和力愈大。(×)
23、人体生理的pH值是体内各种酶的最适pH值。(×)
24、诱导酶是指在加入诱导物后本身构象发生变化，趋向于易和底物结合的一类酶。(×)
25、抑制剂对酶的抑制作用是酶变性失活的结果。(×)
26、在酶分离纯化过程中，有时需在抽提溶剂中加入少量的巯基乙醇，这是为了防止酶蛋白的-SH被氧化。
(√)
27、在稳态平衡假说中，产物和酶结合形成复合物的速度极小。(√)
28、辅助因子都可用透析法去除。(×)
四、填空
1、使酶具有高催化效率的主要因素有___,__,___和____
（酶与底物的靠近及定向效应酶与底物发生变形作用共价催化酸碱催化_）
2、结合蛋白酶类必须和相结合才有活性，此完整的酶分子称为。（酶蛋白辅因子全酶）
3、酶原是。酶原变成酶的过程称为。这个过程实质上是酶的部位或的过程，某些酶以酶原的形式存在，其生物学意义是
。没有催化活性的前体酶原的激活活性形成暴露保护组织细胞不被水解破坏
5、根据蛋白质结构上的特点，可把酶分为三类：、
单体酶寡聚酶多酶复合物
6、要使酶反应速度达到Vmax的80%，此时底物浓度应是此酶Km值的1/4倍。
7、和一般化学反应相同，测定酶促反应速度有两种方法，（1）_________________(2)
（单位时间内底物的消耗量，单位时间内产物的生成量，）
8、米氏常数是酶的____________常数，可用来近似地表示_________________,Km愈
大，则表示酶与底物________________
（酶的特征物理常数酶对底物亲和力的大小酶与底物亲和力愈小）
9、酶的非竞争性抑制动力学特点是_________Vmax ，而Km_________。( 减小不变)
10、关于酶与底物的结合，现在普遍认为的是____________学说，该学说能较好地解释
酶催化作用的________；而酶催化作用的高效率可用__________和___________解释。
（诱导契合学说专一性能阀学说中间产物学说）
11、Mechaelis和Menten根据___________推导了__________的公式，称为________。
（中间产物学说表示底物浓度与反应速度之间的关系米氏方程）
12、可逆性抑制作用分为__________和___________两种主要类型，前者是_______改变而不改变______可通过___________方法来消除这种抑制作用；后者改变_______而不改变________。
（竞争性抑制，非竞争性抑制，Km，V, 增加底物浓度，V, Km）
13、酶活性部位上的基团可分为两类：和。酶的活性部位不仅决定酶的，同时也对酶的起决定性作用。（结合基团催化基团专一性催化性质）
14、米氏常数Km是常数，可用来近似表示。Km愈大，则表示，愈小则表示。
（酶的特征性物理酶对底物亲和力的大小酶对底物亲和力小酶对底物亲和力大）
15、根据酶催化反应的类型,把酶分为六大类,它们是（氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶、合成酶）
16、酶具有高催化效率的因素主要是（邻近定位效应、张力与变形、酸碱催化、共价催化）
17、当_ 时，酶促反应速度与[E]成正比。（底物过量）
18、酶活性中心的两个功能部位为__ 和__ 。（结合中心催化中心）
19、酶的负协同效应使酶的对不敏感。（反应速度底物浓度）
20、酶的辅助因子在酶促反应中起作用，而酶蛋白决定酶的（催化作用专一性）
21、蛋白水解酶类可分为、和三类。（肽链内切酶肽链外切酶二肽酶）
22、根据酶蛋白分子结构的特点，可把酶分为三类：（单体酶、寡聚酶、多酶络和物）
23、酶对底物的专一性可以分为两种情况：（结构专一性，立体异构专一性）
24、影响酶促反应速度的因素有（酶浓度，底物浓度，PH，温度，激活剂，抑制剂）
25、作为生物催化剂的酶与无机催化剂不同的特点是：（催化效率高，专一性强，酶易失活，酶活力的可调性）
26、竞争性抑制剂使Vmax , Km 。非竞争性抑制的酶反应中Vmax___ __,Km_____ ____。（不变，增加，减小，不变）
五、计算
1、某酶制剂的比活力为42单位/mg蛋白质,每ml含12mg蛋白质,
(1) 计算1ml反应液中含5μl酶制剂时的反应初速度
(2) 若1ml反应液内含5μl酶制剂,在10分钟内消耗底物多少?
解：
(1)1个酶活力单位为特定条件下,1分钟内能转化1μmol底物的量.
反应初速度v=5×10-3×12×42 =2.52（μmol/L/min）
(2) 10分钟内消耗底物: 2.52μmol/L/min×10min=25.2μmol
2、某酶的Km为4.7*10-3M，如果该反应的Vmax是22μmol*L-1*min-1,在底物浓度为2*10-4M和抑制的浓度为5*10-4M的情况下在：
（1）竞争性抑制，其反应速度将是多大？
（2）非竞争性，其反应速度又将是多大？（Ki在这两种情况下都是3*10-4）（共3分）
解：（1）v=Vmax[S]/{ Km(1+[I]/ Ki)+[S]}
=22*10-6*2*10-4/{4.7*10-3*(1+5*10-4/3*10-4)+2*10-4}
=3.46*10-7(mol*L-1*min-1)
(2)v=( Vmax/(1+[I]/ Ki) [S])/( Km+ [S])
=3.57*10-7(mol*L-1*min-1
3、某一符合米氏方程的酶，当[S]=2Km时，其反应速度Vmax等于多少？
v=Vmax[S]/(Km+[S])
v=Vmax*2Km/(Km+2Km)
v=2/3Vmax
即此时反应速度为最大反应速度2/3
5、已知1亳升酶溶液中含蛋白质量为0.625mg，每亳升酶溶液所含酶单位为250，些酶的活性是多少？（3’）
250/0.625=400U/mg
6、一酶促反应的速度为Vmax的80%,在Km与[S]之间有何关系?
Km=[S]/4
7、某一酶促80反应的速度从最大速度的10%提高到90%时，底物浓度要做多少改变？
需提高80倍
8、一种纯酶按重量算含Leu 1.65%和Ile 2.48%,问该酶最低分子量为多少?
解：设该酶的最低分子量为M, 最少含X个Leu残基, 含Y个Ile残基
则：XMLeu/M=1.65% YMIle/M=2.48%
因为MLeu ＝MIle ＝131
所以X/Y=1.65/2.48＝2/3
即X＝2 Y＝3
代入公式：2 x 131/M=1.65% M=2 x 131/1.65%=15800
答该酶最低分子量为15800
9、过氧化氢酶Km值为2.5*10-2克分子/升，当底物过氧化氢浓度为100毫克分子/升时，求在此浓度下，过氧化氢酶被底物所饱和的百分数（即V/Vmax=？）
解答：V=Vmax[S]/（Km+[S]）
故V/Vmax=[S]/（Km+[S]）=100*10-3/（2.5*10-2+10-1）=0.1/0.125*100%=80%
10、某酶的Km为4.0×10-4mol/L,Vmax=24μmol/L/min，计算出当底物浓度为2×10-4mol/L，非竞争性抑制剂浓度为6.0×10-4 mol/L,Ki为3.0×10-4 mol/L时的抑制百分数。
解答：有抑制剂存在时：
v=Vmax[S]/(1+[I]/Ki)(Km+[S])
v=24 *2×10-4/(1+6.0×10-4/3.0×10-4)( 4.0×10-4+2×10-4)
v=24 *2×10-4/18
v=8/3×10-4(μmol/L/min)
无抑制剂存在时：
v=Vmax[S]/(Km+[S])
v=24 *2×10-4/( 4.0×10-4+2×10-4)
v=8×10-4(μmol/L/min)
[1-8/3×10-4(μmol/L/min)/ 8×10-4(μmol/L/min)]*100%=66.7%
即有非竞争性抑制剂存在时,其抑制百分数为66.7%
六、问答
1、同工酶有何生理意义？
同工酶指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白分子结构组成却不同的一组酶。同工酶可能是生命有机体对环境变化或代谢变化的另一种调节方式，即当一种同工酶受抑制或破坏时，其他同工酶仍起作用，从而保证代谢的正常进行。
#2、简述多底物反应的几种机理。
多底物反应有：依次反衣机理，即产生的底物随酶催化反应依次释放；随机反应机理，即底物以随机的方式释放；乒乓反应机理。
3、如何解释酶活性与pH的变化关系，假如其最大活性在pH=4或pH=11时，酶活性可能涉及那些氨基酸侧链？
解答：(1)过酸、过碱影响酶蛋白的构象，甚至使酶变性失活。
(2)PH改变不剧烈时，影响底物分子的解离状态和酶分子的解离状态，从而影响酶对底物的结合与催化。
(3)PH影响酶分子中另一些基团的解离，这些基团的解离状态与酶的专一性及酶分子的活性中心构象有关。
如果酶的最大活性在PH=4时，可能涉及酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸；
如果酶的最大活性在PH=11时，可能涉及碱性氨基酸：赖氨酸、组氨酸和精氨酸。
4、述酶活性调控的几种机制。
解答：酶活性调控的机制有：别构效应的调控，可逆共价修饰调控，酶原的激活和激促蛋白或抑制蛋白质的调控。
5、运用生化理论，试分析下述现象：绝大多数酶溶解在纯水中会失活，为什么？
解答：酶溶解在蒸馏水中，（1）不能为酶催化反应提供最适的PH环境，特别是当反应过程中，PH发生变化时，不能起缓冲作用；（2）在蒸馏水中蛋白质容易变性；（3）酶在净水溶液中缺乏必需的离子，且对温度变化敏感，所以对酶来说在蒸馏水中容易失活。
第五章核酸
一、名词解释
1、cAMP和cGMP：分别是环腺苷酸和环鸟苷酸，它们是与激素作用密切相关的代谢调节物。
#2、断裂基因
断裂基因：真核生物的基因由于内含子的存在，而使基因呈不连续状态，这种基因称为断裂基因。
3结构基因：为多肽或RNA编码的基因叫结构基因。
4、假尿苷：在tRNA中存在的一种5-核糖尿嘧啶，属于一种碳苷，其C1‘与尿嘧啶的C5相连接。
#5、Southern印迹法：把样品DNA切割成大小不等的片段，进行凝胶电泳，将电泳分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上，再用杂交技术与探针进行杂交，称Southern印迹法。
6、核酸的变性：高温，酸，碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸中的氢键，使有规律的螺旋型双链结构变成单链的无规则的“线团”，此种作用称为核酸的变性。
7、核酸的变性：高温、酸、碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸种的氢键，使有规律的双螺旋结构变成单链，似无规则的“线团”，此谓核酸的变性。
8、内含子：基因中不为蛋白质、核酸编码的居间序列，称为内含子。
9、假尿苷：tRNA分子中存在一种核糖尿嘧啶，其C1’是与尿嘧啶的第三个碳原子相连。
10、增色效应：核酸变性或降解时其紫外线吸收增加的现象。
11、hnRNA：称为核不均一RNA，是细胞质mRNA的前体。
12、退火：变性核酸复性时需缓慢冷却，这种缓慢冷却处理的过程，叫退火。
13、复制子：基因组能独立进行复制的单位称为复制子。原核生物只有一个复制子，真核生物有多个复制子。
14、增色效应：DNA或RNA变性或降解时其紫外吸收值增加的现象称增色效应。
15、减色效应：DNA或RNA复性时其紫外吸收值减少的现象称减色效应。
16、Northern印迹法：将电泳分离后的RNA吸印到纤维素膜上再进行分子杂交的技术，称Northern印迹法。
17、解链温度：DNA的加热变性一般在较窄的温度范围内发生，通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为DNA的解链温度。
二、选择
#1、把RNA转移到硝酸纤维素膜上的技术叫：（B）
A Southern blotting
B Northern blotting
C Western blotting
D Eastern blotting
2、外显子代表：（E）
A一段可转录的DNA序列 B 一段转录调节序列
C一段基因序列D一段非编码的DNA序列
E一段编码的DNA序列
3、脱氧核糖的测定采用（ B ）
A、地衣酚法
B、二苯胺法
C、福林-酚法
D、费林热滴定法
*4、在DNA双螺旋二级结构模型中，正确的表达是：（CF）
A 两条链方向相同，都是右手螺旋
B 两条链方向相同，都是左手螺旋
C 两条链方向相反，都是右手螺旋
D 两条链方向相反，都是左手螺旋
E 两条链的碱基顺序相同
F 两条链的碱基顺序互补
5、可见于核酸分子的碱基是：（A）
A 5-甲基胞嘧啶
B 2-硫尿嘧啶
C 5-氟尿嘧啶
D 四氧嘧啶
E 6-氮杂尿嘧啶
6、下列描述中哪项对热变性后的DNA：( A)
A紫外吸收增加 B 磷酸二酯键断裂
C 形成三股螺旋
D （G-C）%含量增加
7、双链DNA Tm值比较高的是由于下列那组核苷酸含量高所致：（B）
A G+A
B C+G
C A+T
D C+T
E A+C
8、核酸分子中的共价键包括：（A）
A嘌呤碱基第9位N与核糖第1位C之间连接的β-糖苷键
B 磷酸与磷酸之间的磷酸酯键
C 磷酸与核糖第一位C之间连接的磷酸酯键
D核糖与核糖之间连接的糖苷键
9、可见于核酸分子的碱基是（A）
Ａ、５－甲基胞嘧啶Ｂ、２－硫尿嘧啶Ｃ、５－硫尿嘧啶
Ｄ、四氧嘧啶Ｅ、６－氮杂尿嘧啶
*10、Watson和Crick提出DNA双螺旋学说的主要依据是（ D E ）
A、DNA是细菌的转化因子
B、细胞的自我复制
C、一切细胞都含有DNA
D、DNA碱基组成的定量分析
E、对DNA纤维和DNA晶体的X光衍射分析
F、以上都不是主要依据
11、多数核苷酸对紫外光的最大吸收峰位于：（）C
A、220 nm附近
B、240 nm附近
C、260 nm附近
D、280 nm附近
E、300 nm附近
F、320 nm附近
12、含有稀有碱基比例较多的核酸是：（C）
Ａ、胞核DNAＢ、线粒体DNAＣ、ｔRNA
Ｄ、ｍRNAＥ、ｒRNAＦ、hnRNA
13、自然界游离核苷酸中的磷酸最常连于戊糖的 ( C )
A、C-2’
B、C-3’
C、 C-5’
D、C-2’及C-3’C-2
E、 C-2’及C-5’
*14、在DNA双螺旋二级结构中，正确的表达是（ C F ）
A、两条链方向相同，都是右手螺旋。
B、两条链方向相同，都是左手螺旋。
C、两条链方向相反，都是右手螺旋。
D、两条链方向相反，都是左手螺旋。
E、两条链的碱基顺序相同。
F、两条链的碱基顺序互补。
15、核酸分子储存、传递遗传信息的关键部分是：（C）
A. 磷酸戊糖
B. 核苷
C. 碱基序列
D. 戊糖磷酸骨架
E. 磷酸二酯键
16、嘌呤核苷中嘌呤与戊糖的连接键是：（A）
A．N9－C1 B. C8－C1 C. N1－C1
D. N7－C1
E. N1－C1
F. C5－C1
17、可用於测量生物样品中核酸含量的元素是：（B ）
A. N
B. P
C. C
D. H
E. O
F. S
18、X和Y两种核酸提取物，经紫外线检测，提取物X的A260/A280 =2, 提取物Y A260/A280 =1，该结果表明：（ B ）
A.提取物X的纯度低於提取物Y
B.提取物Y的纯度低於提取物X
C.提取物X和Y的纯度都低
D.提取物X和Y的纯度都高
E.不能表明二者的纯度
三、判断
1、Tm值高的DNA分子中（C=G）%含量高。(√)
1、由于RNA不是双链，因此所有的RNA分子中都没有双螺旋结构。(×)
3、Tm值低的DNA分子中（A=T）%含量高。(√)
4、由于RNA不是双链，因此所有的RNA分子中都没有双螺旋结构。(×)
5、DNA碱基摩尔比规律仅适合于双链，而不适合于单链。（是）
6、二苯胺法测定DNA含量必须用同源的DNA作标准样品。(×)
7、起始浓度高、含重复序列多的DNA片段复性速度快。(√)
8、核苷酸的等电点的大小取决于核糖上的羟基与磷酸基的解离。(×)
9、核苷酸的碱基和糖相连的糖苷键是C-O型。(×)
10、DNA碱基摩尔比规律仅适合于双链，而不适合于单链。(√)
四、填空
1、天然DNA的负超螺旋是由于DNA双螺旋中两条链引起的，为手超螺旋。正超螺旋是由于DNA双螺旋中两条链引起的，为手超螺旋。
松弛（少绕）右扭紧（多绕）左
2、可利用和这两种糖的特殊颜色反应区别DNA和RNA，或作为两者定量测定的基础。（苔黑酚二苯胺）
3、建立DNA双螺旋模型的主要实验依据是X-光衍射数据，关于碱基对的证据，电位滴定行为
4、mRNA约占细胞总RNA的，其分子量为道尔顿，在细胞质中常与结合。（3~5% 0.2-2.0*106核糖体）
5、3’，5’-环鸟苷酸的代号为，是生物体内与密切相关的代谢调节物。类似的化合物还有和（cGMP 激素作用cAMP cCMP）
6、DNA双螺旋结构模型是_________和___________於__________年提出的。这个结构
模型认为DNA分子是由两条_____________的多核苷酸链构成。_______和________
排列在外侧，形成了两条向____盘旋的主链，两条主链的横档代表一对_______排列
在外侧，它们彼此_______键相连（Wanton，Crick 1953 反向平行磷酸核糖右碱基氢）7、DNA的复性速度与、以及DNA片段的大小有关。
(起始浓度重复序列的多少)
8、因紫外光照射而引起的DNA破坏的修复系统有_________和____________两种。
(光复活修复切除修复)
9、tRNA的二级结构是___________型，其结构中与蛋白质生物合成关系最密切的是____________和______________。（三叶草叶，氨基酸臂，反密码环）
10、DNA的复性速度与、以及DNA片段的大小有关。
(起始浓度重复序列的多少)
11、原核生物核糖体的沉降系数约70S。它是由30S亚基和50S亚基构成的。这两个亚基中所包含的rRNA 的沉降系数分别为16S、5S 和23S。
12、tRNA的二级结构是三叶草型,其结构中与蛋白质生物合成关系最密切的是
和。（氨基酸臂反密码环）
13、结构基因为和编码。（多肽RNA）
14、DNA双螺旋结构模型是和于年提出的.这个结构模型认为DNA分子是由两条
多核苷酸链构成的和排列在外侧构成两条向盘旋的主链,两条链的横档代表一对排列在内侧,它们彼此以相连。
（Watson Crick 1953 反向平行磷酸脱氧核糖右手碱基氢键）
15、从E.coli中分离的DNA样品内含有20%的腺嘌呤（A），那么T= %，G+C
= %。（20 60）
16、生物基因的功能主要有二个方面：（1）；（2）
（通过复制将遗传物质从亲代传给子代通过转录和翻译进行基因表达）
17、真核mRNA一般是顺反子。其前体是，在成熟过程中，其5‘端加上帽子结
构，在3‘端加上尾巴结构，并通过分子的帮助除去和拼接。（单不均一核RNA7-甲基鸟苷多聚腺苷酸小核RNA内含子外显子）18、原核细胞中rRNA的前体是,经过甲基化作用和酶的作用转变成成熟的rRNA。（前核糖体RNA专一核酸内切）
19、嘌呤环上的第位氮原子与戊糖的第位碳原子相连形成，通过这种相连而成的化合物叫。（9 5’ 糖苷键糖苷键嘌呤核苷）
五、计算
2、按照根据Watson- Crick模型推测的大小，试计算每1微米DNA双螺旋的核苷酸对的平均数。
解：根据Watson- Crick模型，DNA双螺旋中，1对核苷酸之间的距离为0.34nm,
所以1微米DNA双螺旋的核苷酸对的平均数:
1*1000/0.34=2941对
3、大肠杆菌内RNA的总质量是3.2*1010道尔顿，其中80%是rRNA，15%是tRNA，5%是mRNA。一个核苷酸的平均分子量是340，计算
（1）假定每个核蛋白体中RNA的分子量是1.7*106，mRNA平均长度为1000个核苷酸，那么每个mRNA上有多少个核蛋白体？
（2）假定每个tRNA的长度为90个核苷酸，那么每个核蛋白体有几个tRNA 分子？
解：每个大肠杆菌内的核蛋白体数=（3.2*1010*80%）/1.7*106=1.5*104
每个大肠杆菌内的mRNA数=（3.2*1010*5%）/1000*340=0.47*104
每个大肠杆菌内的tRNA数=（3.2*1010*15%）/90*340=15.7*104
(1) 每个mRNA上的核蛋白体=1.5*104/0.47*104=3.19（个）
(2)每个核蛋白体上的tRNA分子数=15.7*104/1.5*104=10.47（个）
4、一个双链DNA的分子长度为15.22μm，
（1）计算这个双链DNA的分子量。（设：DNA中每对核苷酸平均分子量为670D）
（2）这个DNA分子约含有多少螺旋？
解：（1）这个双链DNA的分子量为15.22×103×670/0.34＝3.0×107 D
(2)这个DNA分子含有的螺旋数为15.22×103 /0.34=4476个
5、有一个λ噬菌体突变体的DNA外形长度是15μm，而正常的λ噬菌体DNA的长度是17μm，问：
(1）突变体DNA中有多少碱基对丢失掉？
（2）正常的λ噬菌体DNA按摩尔计含28.8%的胸腺嘧啶，求该噬菌体中其它碱基的摩尔百数。
解：（1）：(17-15)x103nm/0.34nm＝5882（bp）
（2）：根据碱基配对原则：A=T G=C
所以该噬菌体中[A] = [T] =28.8%；
[G] =[C] =(100-28.8X2)/2 % = 21.2%
6、按照Watson Crick的DNA双螺旋模型，试计算1微米DNA双螺旋的核苷酸对的平均数。
解：1×103/0.34=2941对核苷酸
8、一个双链DNA的分子长度为15.20 m
（1）计算这个双链DNA的分子量（设：DNA中每对核甘酸平均分子量为670）
（2）这个DNA含有多少螺旋？
答 (1)该双链DNA分子量为15.22×103×670/0.34=3.0×107(道尔顿)
（2）含有的螺旋数为15.22×103/0.34=4476(个)
10、如果大肠杆菌染色体DNA的75%用来编码蛋白质，假定蛋白质的平均分子量为6*103，请问：若大肠杆菌染色体DNA大约能编码2000种蛋白质。求该染色体DNA的长度是多少？该染色体DNA的分子量大约是多少？（以三个碱基编码一个氨基酸，氨基酸平均分子量为120，核苷酸对平均分子量为640计算。）解答：大肠杆菌染色体含有的碱基数为
2000*3*6*103/120=3*106
3*106/0.75=4*106
故染色体的长度=0.34nm*4*106=1.36*106nm
染色体DNA的分子量=640*4*106=2.56*109
11、单个人类细胞内存在的所有DNA，其总长度为2m，相当于5.5*109碱基对，假设DNA中有1/3是多余的，不能用作蛋白质合成的密码，并设每个基因平均含900对碱基，试计算单个人类细胞的DNA含多少基因？
解答：基因数=5.5*109*2/（3*900）=4.09×106
第六章维生素的结构与功能
概述 SDS-PAGE法测蛋白质相对分子质量的原理。 答案： (1）聚丙烯酰胺凝胶是一种凝胶介质，蛋白质在其中的电泳速度决定于蛋白质分子的大小、形状和所带电荷数量。 (2）十二烷基硫酸钠(SDS）可与蛋白质大量结合，结合带来两个后果：①由于SDS是阴离子，故使不同的亚基或单体蛋白质都带上大量的负电荷，掩盖了它们自身所带电荷的差异; ②使它们的形状都变成杆状。这样，它们的电泳速度只决定于其相对分子质量的大小。 (3）蛋白质分子在SDS-PAGE凝胶中的移动距离与指示剂移动距离的比值称相对迁移率，相对迁移率与蛋白质相对分子质量的对数呈线性关系。因此，将含有几种已知相对分子质量的标准蛋白质混合溶液以及待测蛋白溶液分别点在不同的点样孔中，进行SDS-PAGE;然后以标准蛋白质相对分子质量的对数为纵坐标，以相对应的相对迁移率为横坐标，绘制标准曲线;再根据待测蛋白的相对迁移率，即可计算出待测蛋白的相对分子质量。 试述丙酮酸氧化脱羧反应受哪些因素调控? 答案：(1）变构调控：丙酮酸氧化脱羧作用的两个产物乙酰 CoA和NADH都抑制丙酮酸脱氢酶复合体，乙酰CoA抑制二氢硫辛酰胺乙酰转移酶(E2），NADH抑制二氢硫辛酰胺脱氢酶 (E3）组分。 (2）化学修饰调控：丙酮酸脱氢酶磷酸化后，酶活性受到抑制，去磷酸化后活性恢复。
(3）丙酮酸脱氢酶(E1）组分受GTP抑制，为AMP所活化。 简述保证DNA复制忠实性的因素及其功能？ (1）半保留复制的原则， (2）碱基互补配对的规律，A-T G-C 。 (3)DNA聚合酶I的校对作用， (4)引物的切除， 简述真核生物与原核生物转录的不同点。 答案： 真核生物的转录在很多方面与原核生物不同，具有某些特殊规律，主要包括： (1）转录单位一般为单基因 (单顺反子），而原核生物的转录单位多为多基因(多顺反子） ; (2）真核生物的三种成熟的RNA分别由三种不同的RNA聚合酶催化合成; (3）在转录的起始阶段，RNA聚合酶必须在特定的转录因子的参与下才能起始转录; (4）组织或时间特异表达的基因转录常与增强子有关，增强子是位于转录起始点上游的远程调控元件，具有增强转录效率的作用; (5)转录调节方式以正调节为主，调节蛋白的种类是转录因子或调节转录因子活性的蛋白因子。 某一肽链中有一段含15圈α-螺旋的结构，问： (1）这段肽链的长度为多少毫微米？含有多少个氨基酸残基？ (2）翻译的模板链是何种生物分子？它对应这段α -螺旋片段至少由多少个基本结构单位组成？
1、简述钠钾泵的本质和工作原理。 答：钠钾泵是膜上的一种能够同时运输Na+和K+的ATP酶，本身就是Na+、K+-ATP酶，具有载体和酶的双重活性。它由大、小两个亚基组成，大亚基为贯穿膜全层的脂蛋白，为催化部分；小亚基为细胞膜外侧半嵌的糖蛋白。在Na+和K+存在时，Na+、K+-ATP酶分解1个分子ATP，产生的能量通过Na+-K+泵的构象变化，运送3个Na+从细胞内低浓度侧运到细胞外高浓度侧，同时把两个K+从细胞外低浓度侧运到细胞内高浓度侧。基本过程：1.膜内侧Na+、Mg+与酶结合；2.酶被激活，ATP分解，产生的高能磷酸根使酶发生磷酸化；3.酶构象改变，Na+结合位点暴露到外侧，酶与Na+亲合力变低；4. Na+被释放到细胞外，酶和K+亲合力变高，K+结合到酶上；5.酶发生去磷酸化；6.酶构象复原，K+被释放到细胞内侧； 7.恢复至初始状态。如此反复进行。 2、蛋白质进入内质网的机制（信号假说）？ 答：1.核糖体上信号肽合成；2.胞质中信号识别颗粒（SRP）识别信号肽，形成SRP-核糖体复合体，蛋白质合成暂停；3.核糖体与ER膜结合，形成SRP-SRP受体-核糖体复合体；4.SRP 脱离并参加再循环，核糖体蛋白质合成继续进行；5.信号肽被切除；6.合成继续进行；7.核糖体在分离因子作用下被分离；8.成熟的蛋白质合成暂停。 3、如何理解高尔基体在蛋白质分选中的枢纽作用？ 答：在ER合成的蛋白质，通过转运小泡运输到GC，这种转运小泡被COPⅡ所包绕；蛋白质在GC内进行加工和修饰，再被分拣送往细胞的相关部位。反面GC网络（TGN）执行分拣功能，包装到不同类型的小泡，并运送到目的地, ，包括内质网、高尔基体、溶酶体、细胞质膜、细胞外和核膜等。因此GC在蛋白质分选中具有枢纽作用。 4、G蛋白的结构特点和作用机制？ 答：G蛋白是指任何可与鸟苷酸结合的蛋白质的总称，位于细胞膜胞液面的外周蛋白。由α、β、γ3个不同的亚单位构成，具有结合GTP或GDP的能力，并具有GTP酶的活性。G蛋白有两种构象，一种以αβγ三聚体存在并与GDP结合，为非活化型，另一种构象是α亚基与GTP结合并导致βγ二聚体脱落，为活化型。作用机制：静息状态下，G蛋白以异三聚体的形式存在于细胞膜上，并与GDP结合，而与受体呈分离状态。当配体与相应受体结合时，触发了受体蛋白分子发生空间构象的改变，α亚单位转而与GTP结合，与βγ二聚体分离，具有了GTP酶活性，使GTP分解释放磷酸根，生成GDP，诱导α亚单位构象改变，使之与GDP亲合力增强，最后与βγ二聚体结合，回到静息状态。β亚单位的浓度越高，越趋向于形成静息状态的G蛋白异三聚体，G蛋白的作用就越小。 5、G蛋白耦联受体介导的cAMP信号途径？ 答：激素、神经递质等第一信使与相应的膜受体结合后，可以激活G蛋白，并活化位于细胞膜上的G蛋白效应蛋白——腺苷酸环化酶，使ATP转化生成第二信使cAMP，cAMP可进一步分别引起相应底物的磷酸化级联反应、离子通道活化等效应，参与调节细胞代谢、增殖、分化等不同生理过程。绝大多数细胞中cAMP进一步特异地活化cAMP依赖性蛋白激酶（PKA）来调节细胞的新陈代谢。对于不同的腺苷酸环化酶，影响其活性的因素也不一样。 6、G蛋白耦联受体介导的PIP2信号途径？
1．简述酶的“诱导契合假说”。 酶在发挥其催化作用之前，必须先与底物密切结合。这种结合不是锁与钥匙式的机械关系，而是在酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，这一过程称为没底物结合的诱导契合假说。酶的构象改变有利于与底物结合；底物也在酶的诱导下发生变形，处于不稳定状态，易受酶的催化攻击。这种不稳定状态称为过渡态。过渡态的底物与酶的活性中心在结构上最相吻合，从而降低反应的活化能。 2．受试大鼠注射DNP（二硝基苯酚）可能引起什么现象？其机 理何在？ 解偶联剂大部分是脂溶性物质，最早被发现的是2，4-二硝基苯酚（DNP）。给受试动物注射DNP后，产生的主要现象是体温升高、氧耗增加、P/O比值下降、ATP的合成减少。其机理在于，DNP虽对呼吸链电子传递无抑制作用，但可使线粒体内膜对H+的通透性升高，影响了ADP+Pi→ATP的进行，使产能过程与储能过程脱离，线粒体对氧的需求增加，呼吸链的氧化作用加强，但不能偶联ATP 的生成，能量以热能形式释放。 3．复制中为什么会出现领头链和随从链？ DNA复制是半不连续的，顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。原因有①.链延长特点只能从'5→'3②.同一复制叉只有一个解链方向。DNA单链走向是相反的。因此在沿'3→'5方向上解开的母链上，子链就沿'5→'3方向延长，另一股母链'5→'3解开，子链不可能沿'5→'3。复制的方向与解链方向相反而出现随从链。 4．简述乳糖操纵子的结构及其调节机制。 ．乳糖操纵子含Z、Y、及A三个结构基因，编码降解乳糖的酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P和一个调节基因I，在P 序列上游还有一个CAP结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个编码基因由同一个调控区调节。 乳糖操纵子的调节机制可分为三个方面： (1)阻遏蛋白的负性调节没有乳糖时, 阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录起动；有乳糖时,少量半乳糖作为诱导剂结合阻遏蛋白，改变了它的构象，使它与O序列解离,RNA聚合酶与P序列结合,转录起动。 (2) CAP的正性调节没有葡萄糖时，cAMP浓度高，结合cAMP的CAP与lac操纵子启动序列附近的CAP结合位点结合，激活RNA转录活性；有葡萄糖时，cAMP浓度低，cAMP与CAP结合受阻，CAP不能与CAP结合位点结合，RNA转录活性降低。 (3)协调调节当阻遏蛋白封闭转录时，CAP对该系统不能发挥作用；如无CAP存在，即使没有阻遏蛋白与操纵序列结合，操纵子仍无转录活性。 5．何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识别 DNA序列的结构特点。 解释限制性内切核酸酶；酶识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构。 1．酮体是如何产生和利用的？ 酮体是脂肪酸在肝脏经有限氧化分解后转化形成的中间产物，包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮。肝细胞以β-氧化所产生的乙酰辅酶A为原料，先将其缩合成羟甲戊二酸单酰CoA（HMG-CoA），接着HMG-CoA被HMG-CoA裂解酶裂解产生乙酰乙酸。乙酰乙酸被还原产生β-羟丁酸，乙酰乙酸脱羧生成丙酮。HMG-CoA 合成酶是酮体生成的关键酶。肝脏没有利用酮体的酶类，酮体不能在肝内被氧化。 酮体在肝内生成后，通过血液运往肝外组织，作为能源物质被氧化利用。丙酮量很少，又具有挥发性，主要通过肺呼出和肾排出。乙酰乙酸和β-羟丁酸都先被转化成乙酰辅酶A，最终通过三羧酸循环彻底氧化。 2．为什么测定血清中转氨酶活性可以
考研这个念头，我也不知道为什么，会如此的难以抑制，可能真的和大多数情况一样，我并没有过脑子，只是内心的声音告诉我：我想这样做。 得知录取的消息后，真是万分感概，太多的话想要诉说。 但是这里我主要想要给大家介绍一下我的备考经验，考研这一路走来，收集考研信息着实不易，希望我的文字能给师弟师妹们一个小指引，不要走太多无用的路。其实在刚考完之后就想写一篇经验贴，不过由于种种事情就给耽搁下来了，一直到今天才有时间把自己考研的历程写下来。 先介绍一下我自己，我是一个比较执着的人，不过有时候又有一些懒散，人嘛总是复杂的，对于考研的想法我其实从刚刚大一的时候就已经有了，在刚刚进入大三的时候就开始着手复习了，不过初期也只是了解一下具体的考研流程以及收集一些考研的资料，反正说到底就是没有特别着急，就我个人的感受来说考研备考并不需要特别长的时间，因为如果时间太长的话容易产生疲惫和心理上的变化反而不好。 下面会是我的一些具体经验介绍和干货整理，篇幅总体会比较长，只因，考研实在是一项大工程，真不是一两句话可描述完的。 所以希望大家耐心看完，并且会有所帮助。 文章结尾处附上我自己备考阶段整理的学习资料，大家可以自取。 苏州大学生物学的初试科目为: (101)思想政治理论 (201)英语一 (631)生物化学（F）
(857)细胞生物学（F） 参考书目为： 1.王镜岩等.《生物化学》.高等教育出版社第三版,200 2. 2.《细胞生物学》翟中和高等教育出版社 先说一下我的英语单词复习策略 1、单词 背单词很重要，一定要背单词，而且要反复背！！！你只要每天背1-2个小时，不要去纠结记住记不住的问题，你要做的就是不断的背，时间久了自然就记住了。 考察英语单词的题目表面上看难度不大，但5500个考研单词，量算是非常多了。我们可以将其区分为三类：高频核心词、基础词和生僻词，分别从各自的特点掌握。 （1）高频核心词 单词书可以用《木糖英语单词闪电版》，真题用书是《木糖英语真题手译》里面的单词都是从历年考研英语中根据考试频率来编写的。 核心，顾名思义重中之重。对于这类词汇，一方面我们可以用分类记忆法，另一方面我们可以用比较记忆法。 分类记忆法，这种方法指的是把同类词汇收集在一起同时记忆。将同类词汇放在一起记忆，当遇到其中一个词时，头脑中出现的就是一组词，效率提高的同时，也增强了我们写作用词的准确度和自由度。例如：damp，wet，dank，moist，humid都含“潮湿的”意思。damp指“轻度潮湿,使人感觉不舒服的”。wet指“含水分或其他液体的”、“湿的”。moist指“微湿的”、“湿润的”,
脂类、生物膜的组成与结构生物化学习题集 糖一、名词解 释 1、直链淀粉：是由α―D―葡萄糖通过1，4―糖苷 键连接而成的，没有分支的长链多糖分子。 2、支链淀粉：指组成淀粉的D－葡萄糖除由α－1,4 糖苷键连接成糖链外还有α－1，6糖苷键连接成分 支。 3、构型：指一个化合物分子中原子的空间排列。这 种排列的改变会关系到共价键的破坏，但与氢键无 关。例氨基酸的D型与L型，单糖的α—型和β— 型。 4、蛋白聚糖：由蛋白质和糖胺聚糖通过共价键相连 的化合物，与糖蛋白相比，蛋白聚糖的糖是一种长 而不分支的多糖链，即糖胺聚糖，其一定部位上与 若干肽链连接，糖含量可超过95%，其总体性质与多 糖更相近。 5、糖蛋白：糖与蛋白质之间，以蛋白质为主，其一 定部位以共价键与若干糖分子链相连所构成的分子 称糖蛋白，其总体性质更接近蛋白质。 二、选择 *1、生物化学研究的内容有（ABCD） A 研究生物体的物质组成 B 研究生物体的代谢变化及其调节 C 研究生物的信息及其传递 D 研究生物体内的结构 E 研究疾病诊断方法 2、直链淀粉的构象是（Ａ） A螺旋状B带状C环状D折叠状 三、判断 1、D-型葡萄糖一定具有正旋光性，L-型葡萄糖一定 具有负旋光性。（×） 2、所有糖分子中氢和氧原子数之比都是2:1。（×） #3、人体既能利用D-型葡萄糖，也能利用L-型葡萄 糖。（×） 4、D-型单糖光学活性不一定都是右旋。（√） 5、血糖是指血液中的葡萄糖含量。（√） 四、填空 1、直链淀粉遇碘呈色，支链淀粉遇碘呈 色，糖原与碘作用呈棕红色。（紫蓝紫 红） 2、蛋白聚糖是 指 。 (蛋白质和糖胺聚糖通过共价键连接而成的化合物) 3、糖原、淀粉和纤维素都是由组成的均 一多糖。(葡萄糖) word文档可自由复制编辑
苏州大学2008研究生入学考试试题 生物化学 一、名词解释（共10题，每题2分，共20分） 1、等电聚焦电泳 2、Edman降解 3、疏水相互作用 4、双倒数作图 5、转化 6、限制性内切酶 7、柠檬酸转运系统 8、位点特异性重组 9、信号肽 10、锌指 二、是非题：（共10题，每题1分，共10分） 1、构成天然蛋白质分子的氨基酸约有18种，除脯氨酸为α-亚氨基酸、甘氨酸不含手性碳原子外，其余氨基酸均为L-α-氨基酸。 2、磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺是VitB6的衍生物，可作为氨基转移酶，氨基酸脱羧酶，半胱氨酸脱硫酶等的辅酶。 3、核酸具有方向性，5’-位具有自由羟基，3’-位上具有自由的磷酸基。 4、6-磷酸果糖激酶-1受A TP和柠檬酸的变构抑制，AMP、ADP、1,6-双磷酸果糖和2，6双磷酸果糖的变构激活。 5、16C的软脂酸可经七次β-氧化全部分解为8分子乙酰CoA,可净生成130分子A TP. 6、丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基移换反应，为可逆反应。 7、胸腺嘧啶降解的终产物为β-氨基异丁酸、NH3和CO2. 8、RNA pol Ι存在于核仁，对α-鹅蒿覃碱不敏感。（不会打那个字） 9、顺式作用元件（cis-acting element）指一些与基因表达调控有关的蛋白质因子。 10、天然双链DNA均以负性超螺旋构象存在，当基因激活后，则转录区前方的DNA拓扑结构变为正性超螺旋。 三、多项选择题（共15题，每题2分，共30分，在备选答案中有1个或1个以上是正确的，请选出正确的答案，错选或未选全的均不给分） 1、含硫氨基酸包括： A、蛋氨酸 B、苏氨酸 C、组氨酸 D、半胱氨酸 2、关于α-螺旋正确的描述为： A、螺旋中每3.6个氨基酸残基为一周。 B、为右手螺旋结构。 C、两螺旋之间借二硫键维持其稳定。 D、氨基酸侧链R基团分布在螺旋外侧。 3、下列那种蛋白质在pH5的溶液中带正电荷？ A、 pI为4.5的蛋白质 B、 pI为7.4的蛋白质 C、 pI为7的蛋白质 D、pI为6.5的蛋白质。 4、关于同工酶，哪些说明是正确的？
一、名词解释（每题2分，共20分） 1、同工酶 2、酶活性中心 3、蛋白质等电点 4、底物水平磷酸化 5、葡萄糖异生作用 6 7 8 9 10 ( ) 10、考马斯亮蓝染料与蛋白质（多肽）结合后形成颜色化合物，在534nm波长下具有最大吸收光。 三、选择题（每题1分，共10分） ( ) 1、Watson和Crlick的DNA双股螺旋中，螺旋每上升一圈的碱基对和距离分别是： A. 11bp， 2.8nm B. 10bp， 3.4nm C. 9.3bp， 3.1nm D. 12bp， 4.5nm
( ) 2、哪一种情况可用增加底物浓度的方法减轻抑制程度： A. 不可逆抑制作用 B. 非竞争性可逆抑制作用 C. 竞争性可逆抑制作用 D. 反竞争性可逆抑制作用 ( ) 3、米氏动力学的酶促反应中，当底物浓度（[S]）等于3倍Km时，反应速度等于最大反应速度的百分数（%）为： A. 25％ B. 50％ C. 75％ D. 100％( ) 4、TCA循环中发生底物水平磷酸化的化合物是： A. α-酮戊二酸 B. 琥珀酸 C. 琥珀酰CoA D. 苹 A. 考马斯亮蓝试剂 B. 二苯胺试剂 C. 地衣酚试剂 D. DNS试剂 四、填空题（每空1分，共30分） 1、20种天然氨基酸中_____和色氨酸只有一个密码子。 2、某一种tRNA的反密码子是UGA，它识别的密码子序列是 ___ 。 3、pI为4.88的蛋白质在pH8.6的缓冲液将向电场的 _______ 极移动。
4、核酸的基本结构单元是 __ ，蛋白质的基本结构单元是 _ _ 。 5、糖酵解途径的限速酶是 _ _、_ _、__ 。 6、大肠杆菌RNA聚合酶全酶由 ___????____ 组成；参与识别起始信号的是 __?___ 因子。 7、3-磷酸甘油穿梭和苹果酸-天冬氨酸穿梭可将 ___ 产生的___所携带的电子转 入线粒体内膜。 8、某DNA模板链核酸序列为5’ TTACTGCAATGCGCGATGCAT-3’，其转录产物mRNA的核苷 酸排列顺序是____，此mRNA编码的多肽链N-端第一个氨基酸为 ___，此多 9 10 O O ( CH 3 CH 2 ) 11 _____________________ 五、简答题（30分） 1、请写出米氏方程，并解释各符号的含义（5分） 2、计算1mol丙酮酸彻底氧化为CO 2和H 2 O时产生ATP的mol数。（6分） 3、按下述几方面，比较软脂酸氧化和合成的差异：发生部位、酰基载体、二碳片段供 体、电子供体（受体）、底物穿梭机制、合成方向。（6分） 4、简述三种RNA在蛋白质生物合成过程中所起的作用。（6分） 5、请写出参与原核生物DNA复制所需要的主要酶或蛋白，并简要解释其功能。（7分）
1.写出大多数限制性内切酶识别DNA序列的结构特点？ 生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶(简称限制酶． Ⅱ型（type Ⅱ）限制与修饰系统所占的比例最大，达93% 。Ⅱ型酶相对来说最简单，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或附近切割DNA ，产生带3'- 羟基和5'- 磷酸基团的DNA 产物，需Mg2+ 的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需SAM 。识别序列主要为4-6bp ，或更长且呈二重对称的特殊序列，但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异，有些是隔开的。 Ⅱs 型（type Ⅱs）限制与修饰系统，占5% ，与Ⅱ型具有相似的辅因子要求，但识别位点是非对称，也是非间断的，长度为4-7bp ，切割位点可能在识别位点一侧的20bp 范围内。 Ⅱ型限制酶一般是同源二聚体（homodimer），由两个彼此按相反方向结合在一起的相同亚单位组成，每个亚单位作用在DNA 链的两个互补位点上。修饰酶是单体，修饰作用一般由两个甲基转移酶来完成，分别作用于其中一条链，但甲基化的碱基在两条链上是不同的。 在Ⅱ型限制酶中还有一类特殊的类型，该酶只切割双链DNA 中的一条链，造成一个切口，这类限制酶也称切口酶（nicking enzyme），如N.Bst NBI 。 2.PCR循环的参数是如何确定的？ （1）变性时间是如何确定的？ 在选择的变性温度下，DNA分子越长，两条链完全分开所需的时间也越长。如果变性温度过低或时间太短，模板DNA中往往只有富含AT的区域被变性。在PCR的第一个循环中，有时常把变性时间设计为5 min，来增加大分子模板DNA彻底变性的概率，又称此为预变性。当模板DNA的G+C含量超过55%时，需要更高的变性温度，来源于古细菌的DNA聚合酶比TaqDNA聚合酶更能耐受高温，因此更适合用来扩增富含GC的DNA 模板。 （2）复性温度的确定有什么考虑？ 复性过程（即退火）采用的温度至关重要。如果复性温度太高，寡核苷酸引物不能与模板很好地复性，扩增效率将会非常低。如果复性温度太低，引物将产生非特异性复性，从而导致非特异性的DNA片段的扩增。 （3）延伸的时间是如何确定的？ Taq DNA聚合酶在最适反应温度（72～78 ℃）下聚合速率约为2 000 bp/min。根据多数研究者的经验，确定了一个规则，即：靶基因的每1 000 bp的扩增产物的延伸时间被设计为1 min，以此类推。对于PCR的最后一个循环，许多研究者常把延伸时间增加为以前循环的延伸时间的3倍以上，以使所有扩增产物完成延伸，这又称为后延伸。（4）循环数目一般都为30，这个数值是怎么来的？ PCR扩增所需的循环数目决定于反应体系中起始的模板拷贝数以及引物延伸和扩增的速率。一旦PCR反应进入几何级数增长期，反应会一直持续下去，直至某一成分成为限制因素。从这一点上来说，扩增产物中绝大多数应该是特异性的扩增产物，而非特异性的扩增产物低到难以检测的程度。用TaqDNA聚合酶在一个含有105个拷贝的靶
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苏州大学生物化学(四) 课程试卷（1）卷参考答案共3页院系基础医学与生物科学学院专业生物科学大类 一、名词解释（1.5×10＝15分） 1．中间产物学说：酶在催化反应，酶首先与底物结合成一个不稳定的中间产物，然后中间产物再分解成产物和原来的酶，此学说称中间产物学说。 2．复制体：在DNA复制时，为数众多的酶和蛋白质参与作用，所形成的复合物，称为复制体。 3．酶工程：指酶制剂在工业上的大规模生产及应用。 4．固定化酶：通过吸附、偶联、交联和包埋或化学方法做成仍具有酶催化活性的水不溶酶。 5．生物氧化：有机物在生物体细胞内的氧化。 6．NADP：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，是具有传递氢功能的脱氢酶的辅酶。 7．核苷酸合成的“补救途径”：利用体内游离的碱基或核苷合成核苷酸的途径。 8．生糖氨基酸：在体内可以转变为糖的氨基酸称为生糖氨基酸，按糖代谢途径进行代谢。 9．盐溶：浓度中性盐可以增加蛋白质的溶解度，这种现象叫盐溶。 10．构象：分子中由于共价单键的旋转所表现出的原子或基团的不同空间排列。指一组结构而不是指单个可分离的立体化学形式。构象的改变不涉及共价键的断裂和重新组成，也无光学活性的变化。 二、判断题（每题1分，共20分。正确的在括号内打“√”，错误的在括号内打“×”） （）1．脂肪酸经活化后进入线粒体内进行β-氧化，需经脱氢、加水、脱氢和硫解四个 过程完成一轮反应。 （）2．引物是指DNA复制时所需要的一小段RNA，催化引物合成的引物酶是一种特 殊的DNA聚合酶。 （）3．DNA半不连续复制是指复制时一条链的合成方向是5’→3’，另一条链的合成 方向为3’ →5’。 （）4．细胞核内的RNA都从DNA转录而来，是由一种RNA聚合酶合成的。 （）5．基因表达是指遗传信息从DNA经RNA传递给蛋白质的过程。 （）6．DNA上遗传信息转录的产物是蛋白质。 （）7．人类RNA聚合酶和DNA主要分布在细胞核内，所以RNA主要在细胞核内合成。 （）8．UAA、UAG、UGA除作为终止密码外，又分别代表三种氨基酸。 （）9．DNA聚合酶和RNA聚合酶的催化作用都需要引物。
河南科技学院2014-2015学年第二学期期终考试 生物化学试题（A ） 适用班级：园林131-134 注意事项：1.该考试为闭卷考试； 2.考试时间为考试周； 3.满分为100分，具体见评分标准。 一、名词1、蛋白质的变性作用： 2、氨基酸的等电点： , 3、氧化磷酸化： 4、乙醛酸循环： 5、逆转录： 二、选择题（每题1分，共15分） 1、蛋白质多肽链形成α-螺旋时，主要靠哪种次级键维持（ ） A ：疏水键； B ：肽键： C ：氢键； D ：二硫键。 2、在蛋白质三级结构中基团分布为（ ）。 , A ：疏水基团趋于外部，亲水基团趋于内部； B ：疏水基团趋于内部，亲水基团趋于外部；
C：疏水基团与亲水基团随机分布；D：疏水基团与亲水基团相间分布。 3、双链DNA的Tm较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致（） A：A+G；B：C+T： C：A+T；D：G+C。 4、DNA复性的重要标志是（）。 A：溶解度降低；B：溶液粘度降低； C：紫外吸收增大；D：紫外吸收降低。 " 5、酶加快反应速度的原因是（）。 A：升高反应活化能；B：降低反应活化能； C：降低反应物的能量水平；D：升高反应物的能量水平。 6、鉴别酪氨酸常用的反应为( )。 A 坂口反应B米伦氏反应C与甲醛的反应D双缩脲反应 7、所有α-氨基酸都有的显色反应是( )。 A双缩脲反应B茚三酮反应C坂口反应D米伦氏反应 ？ 8、蛋白质变性是由于( )。 A蛋白质一级结构的改变B蛋白质空间构象的破环 C 辅基脱落D蛋白质发生水解 9、蛋白质分子中α-螺旋构象的特征之一是( )。 A肽键平面充分伸展B氢键的取向几乎与中心轴平行C碱基平面基本上与长轴平行D氢键的取向几乎与中心轴平行 10、每个蛋白质分子必定有( )。 Aα-螺旋Bβ-折叠结构C三级结构D四级结构 # 11、多聚尿苷酸完全水解可产生( )。 A 核糖和尿嘧啶B脱氧核糖和尿嘧啶C尿苷D尿嘧啶、核糖和磷酸 12、Watson-Crick提出的DNA结构模型( )。 A是单链α-螺旋结构B是双链平行结构 C是双链反向的平行的螺旋结构D是左旋结构 13、下列有关tRNA分子结构特征的描述中，( )是错误的。 A 有反密码环 B 二级结构为三叶草型 C 5'-端有-CCA结构 D 3'-端可结合氨基酸 【
一、蛋白质化学 1. 蛋白质的化学概念、分类、化学组成 2. 氨基酸的类型、结构和性质 3. 蛋白质的一级结构测序和蛋白质的空间结构 4. 蛋白质的分离、纯化与鉴定。 二、酶化学 1. 酶的分离提纯及活力测定 2. 酶促反应的动力学 3. 酶的催化功能与结构的关系 4. 酶活性的调节控制 三、核酸的化学 1. 核酸的概念和重要性质 2. DNA双螺旋结构的基本结构特征和性质 3. 核糖核酸（RNA）的结构和性质。 四、DNA的复制和修复 1. DNA半保留半不连续复制的机制 2. DNA的损伤和修复 3. RNA指导的DNA合成 五、RNA的生物合成 1. DNA指导的RNA合成 2. RNA的转录后加工 3. RNA的复制 4. RNA生物合成的抑制。 六、蛋白质的生物合成 1.mRNA和遗传密码 2.核糖体和转移RNA的功能 3.蛋白质合成的生物机制 七、糖类化学及糖的代谢 1. 糖的概念与性质 2. 糖酵解和三羧酸循环的途径与调控 3. 糖类合成的一般途径与调控。 八、生物氧化 1. 生物氧化的概念 2. 电子传递过程和氧化呼吸链 3. 氧化磷酸化作用。 九、脂类化学及脂的代谢 1. 脂类的概念 2. 脂类的消化吸收和转运 3. 脂肪酸和甘油三脂的分解代谢与调节 4. 脂肪酸和甘油三脂的合成代谢与调节 十、蛋白质的酶促降解及氨基酸代谢 1. 氨基酸降解与合成的主要途径 2. 蛋白质代谢与糖类代谢、脂类代谢的相互关系十一、核酸的酶促降解和核苷酸代谢
1. 核苷酸分解和合成的一般途径 2. 核酸限制性内切酶的催化作用特点十二细胞代谢和基因表达的调节 1.了解激素及激素的一般作用机理 2.代谢途径的相互联系 3.细胞结构对代谢途径的空间调节 4.酶活性和细胞信号对代谢的调节
生物化学试卷13 院系学号 姓名成绩 一、名词解释（每题3分，共30分，凡进行双语教学的章节，英文名词解释如用中文回答，全对者只得1分）： 1．Plasmid 2．反密码环 3．LCAT（卵磷脂胆固醇酯酰转移酶） 4．引发体 5．DNA library 6．碱基互补 7．酶原 8．Vitamin（维生素）
9．Isoenzymes（同工酶） 10．不对称转录 二、填空（每空1分，共24分）： 1．植物中含有β-胡萝卜素，它可被小肠粘膜的酶作用，使其分子中部加氧断裂，分解为，后者再还原为。 2．蛋白质颗粒在电场中移动，移动的速率主要取决于＿＿＿＿和＿＿＿＿，这种分离蛋白质的方法称为＿＿＿＿。 3．酶所催化的反应称为，酶所具有催化反应的能力称为。 4．肝糖原分解代谢主要受调控，而肌糖原分解代谢主要受调控。 5．脂酰CoA脱下的2H通过＿＿＿＿＿＿＿＿氧化呼吸链氧化，β-羟丁酸脱下的2H通过＿＿＿＿＿＿＿氧化呼吸链氧化。 6．肝细胞中的氨基甲酰磷酸可分别参与合成 和。 7．转录的原料是______________，复制的原料是_______________。8．原核生物翻译起始复合物的形成包括﹑ ﹑
和四个步骤。 9．维生素B12是的辅酶，当其缺乏时可影响核苷酸及蛋白质的合成，可引起贫血。 10．脂肪酸生物合成在细胞的中进行，关键酶是。 三、问答（第1.2.3每题10分，第4.5题每题8分， 共46分）： 1．叙述呼吸链的组成与排列，这样排列的依据是什么？ 2．举例说明蛋白质一级结构、空间构象与功能间的关系。 3．在糖代谢过程中生成的丙酮酸可进入哪些代谢途径？ 4．遗传密码有哪些主要特性？ 5．为什么测定血清中转氨酶活性可以作为肝、心组织损伤的参考指标？
1.何为球状蛋白质的一、 二、三和四级结构？各结构有何特点？ 1一级结构：组成蛋白质的肽链数目，氨基酸顺序，以及链内或链间二硫键的数目和位置，其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，他还是死蛋白质生物功能的基础。 特点：①蛋白质的一级结构决定 了二级、三级等高级 结构，决定每一种蛋 白质生物学活性结构 特点，首先在于其肽 链的的氨基酸顺序。 ②主要靠共价键维持，包括二硫键。 （1）二级结构：多肽链 的主链局部在空 间的排列或规则 的几何走向，所有 蛋白质的主链结 构相同，长短不同。 主要靠氢键维持， 包括α螺旋，β折 叠，以及β转角， 无规卷曲等。 特点：①α螺旋：蛋白质中常见 的一种二级结构，肽 链主链绕假想的中心 轴盘绕成螺旋状，一 般都是右手螺旋结构， 螺旋是靠链内氢键维 持的。每个氨基酸残 基(第n个)的羰基氧与 多肽链C端方向的第 4个残基(第n+4个) 的酰胺氮形成氢键。 在典型的右手α-螺旋 结构中，螺距为 0.54nm，每一圈含有 3.6个氨基酸残基，每 个残基沿着螺旋的长 轴上升0.15nm。螺旋 的半径为0.23nm。 ②β折叠：是蛋白质 中的常见的二级 结构，是由伸展的 多肽链组成的。折 叠片的构象是通 过一个肽键的羰 基氧和位于同一 个肽链或相邻肽 链的另一个酰胺 氢之间形成的氢 键维持的。氢键几 乎都垂直伸展的 肽链，这些肽链可 以是平行排列(走 向都是由N到C 方向);或者是反平 行排列(肽链反向 排列)。 ③β-转角：多肽链 中常见的二级结 构，连接蛋白质分 子中的二级结构 (α-螺旋和β-折 叠)，使肽链走向 改变的一种非重 复多肽区，一般含 有2~16个氨基酸 残基。含有5个氨 基酸残基以上的 转角又常称之环 (loops)。常见的转 角含有4个氨基 酸残基，有两种类 型。转角I的特点 是:第1个氨基酸 残基羰基氧与第 4个残基的酰胺 氮之间形成氢键; 转角II的第3个残 基往往是甘氨酸。 这两种转角中的 第2个残基大都 是脯氨酸。 ④无规卷曲：此种结 构为多肽链中除 以上几种比较规 则的构象外，其余 没有确定规律性 的那部分肽链的 二级结构构象。（2）三级结构：指整条 肽链中全部氨基 酸残基的相对空 间位置，也就是整 条肽链所有原子 在三维空间的排 布位置，包括结构 中相距较远的肽 段之间的几何相 互关系和侧链在 三维结构中彼此 间的相互关系。 特点：①分子呈现球状或椭球状 ②三级结构的稳定性主 要靠非共价键维持，尤其是疏 水键。 ③疏水侧链埋藏在分子 内部，形成疏水核，亲水侧链 暴露在外表形成亲水面。 ④表面常有空穴、配体 结合部位。（活性中心） （3）四级结构：由多条 具有完整三级结 构的肽链构成，每 条肽链形成一个 亚基，亚基与亚基 之间以特定的三 维空间排布，并依 靠疏水作用，氢键 及离子键联系在 一起，形成一个完 整的具有生物学 活性的四级结构。 特点：①有多个亚基 ②稳定性主要靠亚基间 的疏水作用维持，其次是氢键 和离子键。 ③亚基单独存在时无生 物活性或活性很小，只有通过 亚基相互聚合成四级结构后， 蛋白质才具有完整的生物活性。 ④亚基间具有协同性和 别构效应。 2.从翻译形成的多肽裢 到有活性的蛋白质结构 和功能的关系？ 一、翻译后加工 (post-translation processing) 是指从核糖体释放出不具备蛋 白质生物活性的新生多肽链， 经过分子折叠及不同的加工修 饰，转变为具有天然功能构象 的成熟蛋白的过程。 内容主要包括: ?多肽链折叠为天然的三维结 构 ?肽链一级结构的修饰 ?肽链空间结构的修饰 (一)新生肽链的折叠 蛋白质多肽链折叠成天然空间 构象是一种释放自由能、形成 大量非共价键的自发过程;对 于核糖核酸酶，其折叠过程在 初始或变性状态都能自动完成， 称为自我组装 (self-assembly)。 影响肽链折叠的因素: 内在因素: 氨基酸侧链和肽链的二级结构 ◆氨基酸侧链影响肽链二级结 构形成。 ◆二硫键的形成和脯氨酸残基 酰胺键的顺反异构化是折叠过 程的关键反应。 ◆形成a-螺旋的起始阶段是慢 反应。 ◆单个结构域作为独立单位进 行折叠。 细胞内环境: ■细胞内生物大分子拥挤效应 影响多肽链折叠。 ■温度和pH值。 ■金属离子的配位效应可以影 响蛋白质的天然结构。 辅助分子 几种有促进蛋白折叠功能的大 分子 1.分子伴侣(molecular chaperon) 2.蛋白二硫键异构酶(protein disulfide isomerase, PDD) 3.肽-脯氨酰顺反异构酶 (peptide prolyl cis-transisomerase, PPI) (二)一级结构的修饰 1、肽链N-端的切除肽链N 端甲硫氨酸残基的切除 2、特定氨基酸的共价修饰 (1)磷酸化:丝、苏、酪氨酸残 基 (2)甲基化:肽链N末端、组蛋 白 (3)乙酰化:组蛋白分子的赖氨 酸残基 (4)羟基化:胶原蛋白前体赖、 脯氨酸残基 (5)羧基化:凝血因子谷氨酸残 基y-羧基化 (6)糖基化: 0-糖苷键型、N-糖 苷键型 (7)脂酰化:长链脂肪酸共价修 饰 3、二硫键的形成 4、多蛋白(polyprotein)的加 工 5、蛋白质前体不必要肽段的切 除 } (三)空间结构的修饰 1、亚基聚合 具有四级结构的蛋白质由两条 以上的肽链通过非共价键聚合， 形成寡聚体(oligomer)。 2、辅基连接 结合蛋白质合成后都需要结合 相应辅基，成为具有功能活性 的天然蛋白质。 3.举例说明蛋白质结构 和功能的关系？ 蛋白质一级结构是空间构象的 基础 一级结构是空间构象的基础 核糖核酸酶的变性与复性 124个氨基酸残基组成 相似结构表现相似的功能：如 不同物种的胰岛素 抗利尿激素 H2N－半胱－酪－苯丙－谷－ 天冬－半胱－脯－精－甘… 催产素 H2N－半胱－酪－异亮－谷－ 天冬－半胱－脯－亮－甘… 不同结构具有不同功能 催产素对子宫平滑肌和乳腺导 管的收缩作用>>抗利尿激素 催产素对血管平滑肌的收缩效 应和利尿作用<<抗利尿激素 （1％） 请从生物化学角度解释疯 牛病产生的原因及分子机 制？ 蛋白质的一级结构是其特 殊的空间构象和生物活性的基 础，一旦其一级结构发生改变， 将会导致其空间结构的改变， 最终导致酶失活，甚至一些严 重的生理疾病。蛋白质的功能 不仅与一级结构有关，更重要 的依赖于蛋白质的空间结构， 牛胰RNaseA变性时，其一级结 构没有改变，但其空间结构完 全破坏，导致其酶活性的丧失。 酶原的激活或各种蛋白质前体 的加工和激活也证明，蛋白质 只有具备适当的空间结构形式 执行其功能，蛋白质才折叠形 成酶的活性中心。 镰刀形贫血：主要是由于 血红蛋白表面的β亚基的第6 位谷氨酸突变为缬氨酸，这种 突变使得β亚基的表明产生了 一个黏性位点，在氧合和脱氧 血红蛋白表面存在一个与黏性 位点互补的位点，不过在正常 血红蛋白中这一互补位点被屏 蔽。但是在镰刀形贫血病患者 中，脱氧血红蛋白能与另一分 子的脱氧血红蛋白的互补位点 结合，导致血红蛋白的纤维样 沉淀，沉淀的长纤维能扭曲并 刺破红细胞，引起溶血等多种 症状。 疯牛病是由朊病毒蛋白 （PrP）引起的一组疾病，这类 疾病具有传染性和遗传性。正 常动物和人的PrP是富含α螺 旋，水溶性强，对蛋白酶敏感， 称为PrPc。当受到某些致病因 素影响，引起朊病毒蛋白编码 基因突变，导致PrPc空间构象 改变，转变为PrPsc，PrPsc是 PrPc的构象异构体，富含β折 叠结构，对蛋白酶不敏感，水 溶性差，而且对热稳定，可以 相互聚集，最终形成淀粉样纤 维沉淀而致病。 高级结构与蛋白质功能的表现 有关。 构象破坏，功能丧失；恢复 自然构象，功能恢复。 4.基于蛋白质的哪些性 质进行蛋白质的分离和 纯化？对应这些性质有 哪些分离纯化方法？ 蛋白质两性解离性质（溶解度， 荷电情况） 蛋白质的高分子性质（溶解度， 分子大小） 蛋白质沉淀（溶解度） 蛋白质的变性 沉淀法：溶解度 ①盐析 ②有机溶剂沉淀法 ③等电点沉淀法 膜分离法：分子大小 ①透析法 ②超过滤法 层析法：分子大小，带电荷， 特异亲和力等 电泳法：带电荷 1.蛋白质两性解离性质 1）等电点沉降分离蛋白（蛋白 质两性解离性质）在等 电点时，蛋白成中性，溶解度 最小，容易沉淀，不同蛋白具 有不同等电点，利用该特性来 分离不同的蛋白质 蛋白质的等电点：当蛋白质溶 液处于某一pH时，蛋白质解离 成正、负离子的趋势相等，即 成为兼性离子，净电荷为零， 此时溶液的pH称为蛋白质的等 电点。 2）电泳分离（根据带电荷性质） 蛋白分子在溶液中可带净的负 电荷或带净的正电荷，故可在 电场中发生移动。不同的蛋白 分子所带电荷量不同，且分子 大小也不同，故在电场中的泳 动速度也不同，由此可彼此分 离。 2.蛋白质的高分子性质 水化膜：蛋白质分子表面的水 层，使蛋白质分子相互隔开， 不易沉淀 电荷：电荷排斥，防止聚集 蛋白质沉淀：分散在溶液中的 蛋白质分子发生凝聚，从溶液 中沉淀析出的现象。 1）盐析法：高浓度的中性盐破 坏水化膜，中和电荷使蛋白质 沉淀的过程，称为～。如硫酸 铵，硫酸钠，氯化钠 2）重金属盐沉淀蛋白Ag+, Hg2+,Cu2+, Pb2+对于重金属盐 中毒的病人服用酪蛋白和清蛋 白 3）生物碱试剂和酸沉淀蛋白 4）有机溶剂沉淀蛋白质乙 醇，甲醇，丙酮 5.蛋白质纯度鉴定和结 构的解析的方法有哪 些？ 纯度鉴定方法 色谱纯：在层析图谱中只有一 个洗脱峰 电泳纯：在电泳图谱中只有一 条电泳条带 结晶纯：能够获得蛋白质晶体 质谱法 相互验证：在某一种鉴定方法 下表现为均一的蛋白质在另一 种方法可能表现为不均一，因 此需要互相验证 结构解析的方法 1. 一级结构解析 1）氨基酸组成 -水解蛋白质为氨基酸 -全自动氨基酸分析仪或高效液 相色谱进行测定 2）序列分析 -质谱法 -推定法:从已知基因序列推断 蛋白质氨基酸序列 -化学法(手工、自动) ?水解法: Sanger法、Edman降 解法、氨肽酶法、肼解法、羧 肽酶法 2.空间结构分析 二级结构的分析 -圆二色谱法 三维结构 x射线晶体衍射法—蛋白质晶 体 核磁共振一溶液中蛋白质的三 维结构 电子显微镜 高级结构预测的方法 生物信息学方法 1.离子交换层析和亲 和层析分离物质的原理。 离子交换层析技术是以离子交 换纤维素或以离子交换葡聚糖 凝胶为固定相，以洗脱液为流 动相，分离和提纯蛋白质、核 酸、酶、激素和多糖等的一项 技术。 原理: 利用被分离物质的电荷 有与层析介质的电荷间的相互 作用，进而达到分离纯化的目 的。 6.在进行离子交换层析 时，如何选择离子交换 剂? 1、离子交换剂的选择 1）配基的选择 ◆取决于被分离的物质在其稳 定的pH下所带的电荷，如果带 正电，则选择阳离子交换 剂;如带负电，则选择阴离子交 换剂。 ◆酸性和中性蛋白质:弱碱型阴 离子交换剂。 ◆碱性和中性蛋白质: 弱酸型 阳离子交换剂。