《动物病毒学》实验课
讲稿
任课教师：方六荣
授课对象：2002级动物医学专业1-4班
授课时间：2004.09-2005.01
目录
实验一鸡胚接种 (1)
实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养 (6)
实验三原代细胞培养 (9)
实验四病毒TCID50的测定 (11)
实验五中和试验 (13)
实验一鸡胚接种
一、实验目的
了解鸡胚的基本结构与功能及鸡胚接种的方法，掌握常用的鸡胚接种方法。
二、鸡胚接种的作用
主要用于：
①分离病毒，并根据病变初步鉴定病毒
②培养病毒，制造抗原和疫苗
③测定各毒株之间的抗原关系（用鸡胚作中和试验和交叉保护实验）
④测定病毒毒力
三、材料
1、鸡胚10日龄
2、病毒鸡传染性支气管炎病毒（IBV）
3、照蛋灯
4、打孔器
5、石蜡
6、注射器
7、蛋座
8、酒精棉球、碘酊棉球
四、鸡胚用于病毒培养的优缺点
（一）优点
1、组织分化程度低
2、可选择不同的日龄和接种途径
3、病毒易于增殖
4、感染病毒的组织和液体中含大量病毒
5、容易采集和处理
6、来源充足
7、设备和操作简便易行
（二）缺点
1、胚内可能污染细菌和病毒
沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒
2、母源抗体
3、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针
五、鸡胚的结构与功能
1、卵壳上有细孔，进行气体交换
2、壳膜使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。
3、气室呼吸和调节压力
4、绒毛尿囊膜起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。
5、尿囊腔胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中
尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。
6、羊膜与羊膜腔其中盛有羊水，胎体浸泡于其中
7、卵黄在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
8、卵白在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
六、受精卵的选择
1、最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响。
2、受精卵的壳最好是白色的，以便于检卵。
3、受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
七、鸡胚的孵育
1、孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃
2、相对湿度：50%-60%
3、必须保证具有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后
4、从孵育后第3天开始，每天翻卵一次
八、检卵
自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。
孵育4-5日后即可于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。
未受精卵：只见模糊的卵黄卵影，不见血管和鸡胚痕迹
活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还可见到胚动，但孵育14、15天以后胎动不明显，甚至无胎动。
死胚：血管昏暗模糊，没有胚动
九、接种前处理
1、用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。
2、对鸡胚进行消毒。
十、接种途径
1、绒毛尿囊膜接种
2、尿囊腔接种
3、卵黄囊接种
4、静脉接种蓝舌病毒
5、羊膜腔接种正粘病毒和副粘病毒
6、脑内接种狂犬病毒
7、眼球接种
（一）卵黄囊接种法
主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的分离和增殖。
方法一：
1）取6-8日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大头向上)
2）用碘酊和酒精消毒气室端
3）用钢锥在气室中央锥一小孔
4）用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。
5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。
方法二：
1）2）同一
3）将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。在卵长径的1/2处用碘酊和酒精消毒。
4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml
5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，24h内死亡者废弃
（二）绒毛尿囊膜接种
主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖。
方法一：
1）取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒
2）在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口
3）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜
4）滴入接种物
5）用胶布或透明胶纸封闭切口
方法二：（要做人工气室）
1、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm的烤焦圈。
2、用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳，造成卵窗。
3、在气室端中央钻一个小孔。
4、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。
5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而形
成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐水迅速渗入。
6、用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。
7、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用
石蜡密封。
8、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。
（三）尿囊腔接种
主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病毒、新城疫病毒的分离和增殖。
1、选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位
2、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒
3、用钢锥穿一小孔
4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.1-0.2ml接种物
5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵一次，24h内死亡者废弃。
十一、传染性支气管炎病毒（IBV）接种鸡胚后对鸡胚的影响
IBV一般采用尿囊腔接种
最初几代鸡胚极少发生变化，随着传代次数的增加，鸡胚死亡率增高，鸡胚病变明显，至第10代时，可使80%鸡胚死亡。
病变：
1、鸡胚停止生长，卷曲呈球形，即所谓卷曲胚。
2、羊膜水肿增厚，紧贴鸡胚，尿囊液增量，卵黄囊皱缩，肾中尿酸盐沉着，鸡胚发生肝坏死、肺炎和肾炎。
3、病毒经尿囊腔接种后36h，最高滴度可达107个鸡胚致量。
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上，冻死胚胎，防止出血。
根据接种途径的不同，收获相应的材料
1、绒毛尿囊膜接种收获接种部位绒毛尿囊膜
2、尿囊腔接种收获尿囊液（5-8ml）
3、卵黄囊接种收获卵黄囊或胚体
4、羊膜腔接种收获羊水（0.5-1ml）
实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养
一、实验目的
了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病毒接种方法及收毒方法。
二、常用细胞的种类
BHK-21：仓鼠肾传代细胞
PK-15：猪肾传代细胞
IBRS-2：猪肾传代细胞
Hela：人的子宫瘤细胞
Vero：非洲绿猴肾细胞
Marc-145：来源于Vero细胞
TK-143：人的胸苷激酶阴性细胞
Sf9：昆虫细胞
三、材料
1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头
2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞
3、0.25%胰酶
4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM
维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM
5、伪狂犬病病毒液（PRV）
四、传代细胞培养的条件要求
1）细胞密度：2-3×105个/ml
2）pH范围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.8
3）培养温度
哺乳动物细胞一般为37℃
昆虫细胞28-30℃
五、常用细胞分散剂与作用原理
1、胰酶使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解，导致细胞间质水
解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。
2、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：与二价钙、镁离子结合，从而使细胞分散。
3、灰色链丝菌酶：由灰色链丝菌提取的一种酶制剂，是蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶的混合物。
六、营养液
1、人工综合营养液
氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嘌呤、嘧啶、辅助生长因子。
2、血清
1）血清的种类
胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。
2）血清的处理
无菌采集，过滤除菌。用前56℃灭活30min。
3）血清的作用
A、能提供细胞生存、生长和增生所必须的生长调节因子。
B、能补充基础培养液中没有或量不足的营养成分。
C、含有一些可供贴壁依赖型细胞在培养器皿表面贴附和铺展的生长基质成分。
D、有中和毒性物质保护细胞不受伤害的作用。
E、给培养液提供良好的缓冲系统。
F、提供蛋白酶抑制剂，保护细胞免受细胞释放的蛋白酶的损害。
4）应用血清存在的问题
A、血清中存在不少有害于细胞生长和繁殖的物质：补体、免疫球蛋白、生长抑制因子。
B、血清的成分不明确，影响对结果的分析。
C、不同动物、不同批次的血清成分和活性差别较大，使得培养结果不稳定。
七、传代细胞系培养
1、优点：1) 可以无限的传代。
2) 不少细胞系对病毒很敏感。
3) 某些传代细胞系能在悬浮培养条件下培养，适合病毒抗原的大量生产。
4) 生长旺盛，繁殖快速，对营养条件不苛刻。
2、缺点：在传代过程中遭到支原体和病毒的污染。
3、培养方法
1）取长满单层的细胞一瓶，倾去培养液。
2）加入2ml 胰酶消化液，于37℃培养箱放置几分钟，至细胞间出现空隙或细胞变圆后，倒去消化液。
3）加入生长液,反复吹打几次，使细胞分散成单个细胞，然后分装于3个小瓶中。再在每个小瓶中补充生长液至10ml，然后置37℃培养箱培养，培养1-2天即可长成单层。
八、病毒（PRV）在传代细胞中的培养
1、选长满单层的细胞，倒掉培养液。
2、加入适量的病毒悬液
3、置温箱中感作（吸附）45min-1h。
4、取出瓶子，倒掉或不倒掉培养液，补足维持液，置温箱中继续培养，直至80%以上的细胞病变。
5、收毒：将病变的细胞置于-20℃冰箱中，冻结后取出自然解冻，在解冻过程中振摇几次，以使细胞完全从瓶壁上脱落。然后将病毒液收集于盐水瓶或其它容器中。低温贮藏备用。
实验三、原代细胞培养（以鸡胚成纤维细胞为例）
一、实验目的
了解不同原代细胞的形态，掌握鸡胚成纤维细胞的制备与培养方法。
二、材料
1、9-11日龄鸡胚
2、照蛋灯与蛋座
3、碘酊棉球与酒精棉球
4、大剪子、眼科剪、小镊子
5、平皿、细菌瓶、吸管、吸球、细胞瓶、
6、胰酶、生长液、维持液
三、细胞培养的条件要求
1）细胞密度
原代细胞：4-6×105个/ml
传代细胞：2-3×105个/ml
2）pH范围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.8
3）培养温度
哺乳动物细胞一般为37℃
昆虫细胞28-30℃
四、操作步骤
1、取9-12日龄孵育良好的鸡胚，依次用碘酊和酒精消毒气室部。
2、无菌操作下用剪子去除气室部卵壳，去除壳膜，穿破绒毛尿囊膜，夹住鸡胚颈部，取出鸡胚放
于灭菌平皿中。
3、用眼科剪、镊去除鸡胚头、四肢及内脏，用DMEM冲冼2次。
4、将冲洗后的鸡胚用剪子充分剪碎，使其近于乳糜状。
5、将剪碎的组织块倒入锥形瓶或烧杯或大青霉素瓶中，用DMEM充分冲洗，并静置几分钟，待组织
块下沉，吸弃上层液体，再加DMEM。如此反复冲洗2-3遍。
6、于沉淀组织块内加入约4倍量的0.25%胰酶，并调pH至7.6-7.8，振荡混匀后置37℃水浴中感
作30分钟，每10分钟轻轻摇动一次，使细胞消化完全（组织块变散松，沉降渐变缓慢时即表示消化足够）。
7、取出，静置几分钟，小心吸弃上层胰酶溶液，用DMEM轻洗2次后，加入生长液5ml，用大口径
吸管反复吹打，使细胞游离。
8、静置几分钟，使未消化好的组织块下沉。
9、细胞计数
取细胞悬液0.5ml+2ml 0.1%结晶紫—枸椽酸（0.1mol/L）溶液，室温或37℃温箱中5-10min，充分振荡后进行计数。
按白细胞计数法计算4角4个大方格内的细胞总数（N）。
每ml悬液中的细胞数（n）=N/4×10000×K（稀释倍数）。
活细胞数应在90%以上。
10、将计数好的细胞稀释到合适的浓度，使细胞量约为4-6×106个/ml，分层于细胞培养瓶中，每
瓶1ml，再补加DMEM生长液至10ml，盖上盖子，置于37℃恒温箱中培养。
○表示可计数
●表示不计数
五、结果的观察
于培养后每天观察结果，至长层单层。细胞量较大时，一天即可长成单层，细胞呈纤维状。
实验四病毒感染力的滴定（TCID50的测定）
一、实验目的
了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID
的操作步骤、计算方
50
法及含义。
二、测定病毒感染力的方法
( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测
半数致死量LD
50
(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测
半数鸡胚感染量EID
50
（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测
半数细胞培养物感染量TCID
50
蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测
三、材料
1、长满单层的细胞1瓶
2、胰酶、吸球、吸管、生长液
3、96孔细胞培养板
4、加样器、枪头
5、病毒液（PRV）
四、TCID50的操作步骤
1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl。
3、在每孔加入细胞悬液100μl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100μl生长液+100μl细胞悬液）
5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法
五、TCID50的计算方法
1、Reed-Muench两氏法
CPE：Cytopathic effect
距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）
＝（91.6-50）/（91.6-40）
＝ 0.8
=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数
lgTCID
50
=0.8×(-1)+(-3)
=-3.8
=10-3.8/0.1ml
TCID
50
含义：将该病毒稀释103.8接种100μl可使50%的细胞发生病变。
2、Karber法
lgTCID
=L-d(s-0.5)
50
L：最高稀释度的对数
D：稀释度对数之间的差
S：阳性孔比率总和
=-1-1×(3.375-0.5)
lgTCID
50
=-3.875
=10-3.875/0.1ml
TCID
50
含义：将该病毒稀释103.875接种100μl可使50%的细胞发生病变。
实验五血清中和试验
一、实验目的
了解中和试验的基本原理和几种不同的测定方法，掌握固定病毒—稀释血清法的操作步骤和计算方法及含义。
二、原理
抗体与相应的病毒粒子特异性地结合，使病毒的感染力丧失。
三、用途
1、疾病诊断
2、病毒分离株的鉴定
3、不同病毒株的抗原关系研究
4、疫苗免疫原性的评价
5、免疫血清的质量评价
6、测定实验动物血清中是否存在抗体
四、分类
(一) 蚀斑（痘斑）减数试验
将病毒—正常血清混合物以及病毒—待检血清混合物分别接种到单层细胞上，随后覆盖营养琼脂或甲基纤维素，进行蚀斑测定，比较病毒—正常血清组和病毒—待检血清组产生的蚀斑数，两者的差数表示待检血清的中和能力。
以试验组的蚀斑数比对照组减少50%作为判定依据，血清稀释度就是其蚀斑减数试验效价。
(二) 交叉保护试验
先将实验动物进行主动免疫或被动免疫，然后以待检病毒进行攻击，根据实验动物被保护的情况，判定待检V的种类或型别。这一方法的缺点是试验周期太长，并且需要大量的实验动物。可用于以下几方面：应用已知V鉴定未知V ；应用已知免疫血清鉴定未知V；应用已知V鉴定未知血清。
（三）终点法中和试验
1、固定病毒—稀释血清法
将不同稀释度的血清与固定量的病毒液（一般为100或200个TCID50、EID50或LD50）混合，置适当的条件下感作一定时间，再将血清-病毒混合物接种于敏感细胞、鸡胚或实验动物，测定被检血清阻止组织培养细胞、鸡胚或实验动物发生病毒感染的能力及其效价。
以能保护50%组织培养细胞、鸡胚或实验动物不发生病变、感染或死亡的血清最高稀释倍数，作为该血清的50%中和效价（PD50）。
2、固定血清——稀释病毒法
在固定量的血清中，加入等量不同稀释度的病毒，用对照非免疫血清（对照组）和待检血清同时进行测定，计算每一组的TCID50、EID50或LD50，然后计算中和指数。
五、材料
1、长满单层的细胞1瓶
2、胰酶、吸球、吸管、生长液
3、96孔细胞培养板
4、加样器、枪头
5、病毒液（PRV ）
6、待检血清、PRV 阳性对照血清、PRV 阴性对照血清 六、操作步骤
1、固定病毒—稀释血清法 1）测定病毒液的TCID 50
2）将测好TCID 50的病毒液稀释成200个TCID 50的病毒悬液。
3）在96孔微量培养板中将血清（预先56℃灭活30min ）作连续倍比稀释（具体方法是在96孔板中先加入50μl 生长液，再加50μl 待检血清，混匀后，吸50μl 至下一孔，如此下去。一直到1∶256），每个稀释度作4孔。
4）在上述各孔内加入50μl 稀释好的病毒液，混匀后放入37℃ 5%CO 2培养箱中作用45min-60min 。 5）同时设待检血清毒性对照，阴、阳性血清对照，病毒对照和正常细胞对照，其中病毒对照要作 200个TCID 50、20个TCID 50、2个TCID 50、0.2个TCID 50 4个不同浓度的对照。
6）感作完成后每孔加入100μl 细胞悬液，放37℃ 5%CO 2培养箱培养，逐日观察并记录结果，一般要观察5-7天。
7）结果计算，按Reed-Muench 两氏法或Karber 法进行。 血清稀释度 CPE 孔数
无CPE 孔数
累计
保护率% CPE 孔数 无CPE 孔数
1∶2（10-0.3） 0 4 0 15 100（15/15） 1∶4（10-0.6） 0 4 0 11 100（11/11） 1∶8（10-0.9） 1 3 1 7 87.5（7/8） 1∶16（10-1.2） 1 3 2 4 66.7（4/6） 1∶32（10-1.5） 3 1 5 1 16.7（1/6） 1∶64（10-1.8） 4 0 9 0 0（0/9） 1∶128（10-2.1） 4 0 13 0 0（0/13） 1∶256（10-2.4）
4
17
0（0/17）
即1∶20稀释的待检血清可保护50%的组织培养细胞免于出现CPE 。 2、固定血清——稀释病毒法 1）将病毒作连续10倍稀释
2）将稀释好的病毒接种96孔板，每个稀释度接种一纵排共8孔，每孔50μl ，做两块板子。在其中一块板子的每孔加入50μl 待检血清（试验组），另一块板子的每孔加入50μl 正常血清（对
距离比例=（高于50%的保护率-50% ）/（高于50%的保护率—低于50%的保护率） =（66.7-50）/（66.7-16.7）
=-1.2+0.33×(-0.3) =-1.299
lgPD50=高于50%的保护率的血清稀释度的对数+距离比例×稀释度对数的差 PD50=-1.299的反对数=0.05=1/20
=0.33
照组），混合后置37℃5%CO2培养箱作用1h。
3）然后在每孔中加入100μl细胞悬液。
4）设两纵排正常细胞对照。
5）置37℃5%CO2培养箱培养，逐日观察并记录结果。
6）分别计算每组病毒的TCID50，然后计算血清的中和指数。
中和指数=试验组TCID50 /对照组TCID50
如：中和指数=10-4.0/10-7.0 =103.0=1000
判定标准：以待检血精的中和指数大于50者，判为阳性；10-49为可疑；小于10为阴性。t
一、名词解释： 1. spike 2. DI(defective interfering) 3. Replication intermediate (RI) 4. Plague（噬斑） 5. PFU（噬斑形成单位）、CPE（细胞病变）、隐蔽期 6、信息体（informosome） 7、温度敏感性变异株连 8、抗原漂移与抗原转变 9 准种10、互补11、细胞原癌基因12、干扰素 13、Ribozyme 14、DNA疫苗15单克隆抗体 16法氏囊，网状内皮组织增殖症等（传染病英文翻译成中文） 二、简答题： 1、慢病毒感染的概念及原因（两个方面即病毒方面与机体方面） 2、病毒载体活疫苗的概念并举例说明病毒载体构建的技术路线 3、亚病毒的分类及其定义 4、病毒的特性及其疫苗的研究进展（病毒学） 5、病毒的吸附和侵入过程（分两步）（病毒学） 6、请设计试验方案，如何证明某一种病毒的核酸具有感染性（病毒学） 7、简述病毒对细胞的损害作用方式（病毒学） 8、叙述新病毒出现的机制（病毒学） 9、叙述反转录病毒的复制步骤（病毒学） 10、有几个是写出病毒的英文名称让写出分别属哪科、哪属（不常见的几个） 11、如果一牛场发生布氏杆菌，请制定免疫计划（传染病）？ 12、假如发生烈性传染病如何做？（传染病） 三、论述题
1、详细叙述禽流感病毒的基因组结构，并写出每段基因组所编码的蛋白及其每 种蛋白的功能（病毒学） 2、详细叙述SARS病毒与禽流感病毒在分子水平上的异同（传染病）。 2003年农科院考博题 动物病毒学 一、名词解释 1 DI 2 Antigentic drift 3 感染性cDNA 4 核酸疫苗 5 PFU 6 Ribozyme 7 LTR 8 温度敏感突变株 9 envelope 10 准种 二、简答题 1 类病毒与朊病毒的区别。 2 鉴定新城疫病毒毒力的依据。 3 病毒血凝、血凝抑制作用及血吸附机理。 4 写出下列各科病毒的一种病毒 Herpesviridae, Adenoviridae, Coronaviridae, Rhabdoviridae, Orthomyxoviridae 5 黄病毒科有几个属，各写出一个病毒。 6 OIE高致病力禽流感病毒的特征。 7 J亚群白血病病毒的致病特点。 三、问答题 1 动物病毒的分离与鉴定过程。 2 以某动物病毒为例，论述研究病毒的分子致病机理的技术路线。 传染病试题可能与中国农大相同 2003年中国农业大学考博试题 微生物试题 1 名词解释： prion 感染性核酸回复突变CTL MAC 合胞体溶原化重组抗体cytokine 2 简答： 缺损病毒微RNA病毒属共有几个科，各种的代表病毒 动脉炎病毒属蛋白特性内源性抗原 胞内菌相关的细胞内免疫抗体产生的动力学 3 论述 阻断ELISA的原理，技术路线，操作，判定 分子生物学诊断技术 外源性抗原的加工过程 2003传染病试题 1 进口动物时应如何做 2 鸡呼吸道疾病的区别 3 子猪肠道疾病的病变 4 非典型猪瘟的控制 5 猪伪狂犬病的种猪场净化 6 从传染病流行的三因素，论述防治措施
过程控制系统论文关于过程控制的论文 高炉TRT过程控制系统的研究与应用 摘要：TRT为高炉煤气余压能量回收透平发电装置的简称，它是把高炉出口煤气中所蕴含的压力能和热能，通过透平膨胀机作功，驱动发电机发电的一种能量回收装置。从而达到节能、降噪、环保的目的，具有很好的经济效益和社会效益，是目前现代国际、国内钢铁企业公的节能环保装置。TRT机组运行的关键是：在任何时刻，都不能影响高炉的炉顶压力。 关键词：PLC；可靠性；PID；自动控制 1 概述 TRT为高炉煤气余压能量回收透平发电装置的简称，它是把高炉出口煤气中所蕴含的压力能和热能，通过透平膨胀机作功，驱动发电机发电的一种能量回收装置。从而达到节能、降噪、环保的目的，具有很好的经济效益和社会效益，是目前现代国际、国内钢铁企业公认的节能环保装置。 2 高炉TRT过程控制系统工艺简介 目前，作为我国高炉节能、降噪、环保的能量回收装置TRT，不可避免在运行过程中出现紧急停机现象。特别是目前高炉普遍的塌料现象，如果对于系统的过程控制方案采取不当，将会导致高炉炉顶压力迅间增大，以至“憋压”。当压力超上限，就迫使TRT紧急跳车，使机组及时的退出静叶对高炉顶压的自动调节。当快切阀门关闭以后，调节高炉顶压的控制权就交给两个液压伺服控制的旁通阀（快开阀）。在国内TRT的发展历史上，由于所选择的控制系统方案不当而导致了多次事故的发生，一般情况下很容易将透平止推瓦损坏，更为严重的是由于炉顶压力的迅间增大，给高炉造成了极大的危险和危害，以至被迫停炉，影响了生产。 3 关键技术 通过参照TRT工艺的要求，对机组紧急停机时的高炉顶压调节采取了前馈-反馈（FFC-FBC）控制方案。该控制方案综合了前馈控制与反馈控制的优点，将反馈控制不易克服的干扰（高炉煤气流量）进行前馈控制，快速打开旁通阀，使高炉煤气形成畅通。但是由于前馈控制属于开环控制，尽管可以消除这一不安全因素，但不能完全保证顶压稳定，如果顶压波动较大，势必影响高炉生产，因此就对该过程采取了前馈-反馈控制（也称为复合控制）。机组发电运行阶段，高炉顶压的控制权交给了透平静叶，具有一定的干扰。如果不选择合适的控制方案，则也将影响高炉炉顶压力。为了提高系统的抗干扰能力，我们对这一过程采取了串级控制通过静叶来调节高炉顶压，目前，在国内很多公司TRT控制设备通常在TRT自动投入的时候，通常采取顶压功率复合控制，他们把功率PID调节器输出与顶压PID调节器输出的最小值作为顶压功率复合调节的输出。这种控制方案的实施在抗干扰能力方面稍逊于串级控制思想方案的调节。因为一般在设备运行过程中，高炉煤气发生量随时变化，除此之外，煤气的温度及透平入口的压力也时刻在发生变化，这将会造成静叶的开度时刻的改变，这就是调节过程中产生的干扰因素。为此要克服对高炉顶压调节的干扰，采取串级控制回路调节是山东莱钢银前1000m3高炉TRT系统控制的一大亮点。这种调节方案的实施稳定的调节高炉的炉顶压力，设备运行稳定，也给操作人员带来了便利。从高炉TRT串级调节系统方框途中可以看出，该系统有两个环路，一个内环（副环）和一个外环（主环）。PID调节器是主调节器，伺服控制器是副调节器。主被控变量为高炉炉顶压力，透平静叶的开度为副变量。主控制器的输出是副控制器的给定，而副控制器的输出直接送到电液伺服阀。在该串级控制系统中，主环是一个定值控制系统，而副回路是一个随动系统。对于本系统采取串级控制思路有如下好处：首先，从TRT系统的串级调节方框图上可以看出，由于副回路的存在，改善了对象（高炉炉
1 土地及大配套费 1.1 土地款 1.1.1 土地购买价 1.1.2 土地征用费 1.1.3 土地转让费 1.1.4 土地评估费 1.1.5 土地堪察费 1.2 大配套费 1.2.1 政府缴费 1.2.2 代征土地部分建造费1.3 土地出让金 1.4 土地契税 1.5 拆迁费 1.5.1 拆迁补偿费 1.5.2 拆迁工程费 1.5.3 拆迁评估费 1.5.4 拆迁管理费 1.6 土地交易费 1.7 拍卖佣金 1.8 耕地占用税 1.9 其他土地费用 2 前期费用 2.1 三通一平费 2.1.1 临电工程费 2.1.2 临水工程费 2.1.3 临路工程费 2.1.4 填土及平整场地费2.2 临时设施 2.2.1 临时围墙 2.2.2 临时办公室 2.2.3 临时场地占用费 2.3 设计费 2.3.1 方案规划设计费 2.3.2 建筑施工图设计费2.3.3 装修设计费 2.3.4 环境设计费 2.3.5 综合管网设计费 2.3.6 人防设计费 2.3.7 设计咨询费 2.4 服务咨询费 2.4.1 可研编制费 2.4.2 招投标费
2.4.3 环境评估费 2.4.4 交通评估费 2.4.5 施工图审查费 2.4.6 合同审查费 2.4.7 勘察费 2.4.8 测绘费 2.4.9 工程造价咨询费 2.4.10 工程监理费 2.4.11 法律咨询费 2.5 行政收费 2.5.1 规划管理费 2.5.2 墙改费 2.5.3 地名费 2.5.4 产权登记费 2.5.5 销售许可证及面积测量 2.5.6 分户土地登记费 2.5.7 地籍地形图、核地 2.5.8 水泥专项基金 2.5.9 公告费 2.5.10 质量监督费 2.5.11 氡气检测费 2.5.12 人防监督及档案费 2.5.13 证照费 2.5.14 养老保险费 2.5.15 农民工工资保障金 2.5.16 价格认证费 2.5.17 建筑垃圾管理费 2.5.18 白蚁防治费 2.5.19 公安编号费 2.6 工程保险费 2.7 其他前期费用 2.7.1 合同担保费 2.7.2 消防图纸缩微 2.7.3 工程档案编制费 2.7.4 其他费用 3 建安工程费 3.1 地基处理 3.1.1 桩基工程费 3.1.2 桩基检测费 3.1.3 地基处理工程费 3.1.4 基坑开挖及边坡支护、降水3.2 建筑工程费
过程控制的综述与发展 摘要:本文介绍过程工业的特点，回顾过程控制的发展过程，指出过程控制发展的趋势,强调 过程综合自动化这一发展方向，并讨论过程控制面临的理论和实际问题。 关键词:过程控制；综合自动化；先进控制；过程优化；现场总线；发展。 一、过程控制发展的回顾 过程控制的发展是与控制理论、仪表、计算机以及有关学科的发展紧密相关的.过程控制 的发展大体上可以分为如表1所示的三个发展阶段： 70年代以前这一时期应属于自动化孤岛模式的阶段，其控制目标只能是保证生产平稳和少出事故。70~80年代是发展的第二阶段,分布式工业控制计算机系统(DCS)的出现为实现先进控制创造了条件,多变量预测控制等先进控制方法的应用，使控制达到了新的水平,在实现优质、高产、低消耗的控制目标方面前进了一大步。值得指出的是在70年代中期,出现了现代控制理论是否适用于过程控制的困惑，这迫使人们去研究生产过程的特点与难点,以缩小理论与应用之间的鸿沟。80年代后期,工业控制中出现了多学科间的相互渗透与交叉，人工智能和智能控制受到人们的普遍关注,信号处理技术、数据库、通讯技术以及计算机网络的发展为实现高水平的自动控制提供了强有力的技术工具。过程控制开始突破自动化孤岛的传统模式，采用CIM 的思想和方法来组织、管理和指挥整个生产过程，出现了集控制、优化、调度、管理于一体的新模式.在连续工业中，也将这种模式称为综合自动化或ClpS(eomputerintegratedprocessingsystems)。可以看到，过程控制在这阶段的目标已从保持平稳和少出事故转向提高产品质量、降耗节能、降低成本、减少污染，并最终以效益为驱动力来重新组织整个生产系统,最大限度地满足动态多变市场的需求,提高产品的市场竞争力。 阶段 第一阶段 （70年代以前） 第二阶段 （70~80年代） 第三阶段 （90年代） 控制理论 经典控制理论 现代控制理论 控制论、信息论、系统论、人工智能等学科交叉控 控制工具 常规仪表 分布式控制计算机 计算机网络 控制要求 安全平稳 优质、高产、低耗能 市场预测、快速响应、柔性生产、创新管理 控制水平 简单控制系统 先进控制系统 综合自动化
石家庄科技信息职业学院毕业论文 题目：基于plc的压力过程控制系统设计 学号： 姓名： 专业班级： 指导教师： 完成日期：
基于plc的压力过程控制系统设计 摘要：自二十世纪六十年代美国推出可编程逻辑控制器（Programmable Logic Controller，PLC）取代传统继电器控制装置以来，PLC得到了快速发展，在世界各地得到了广泛应用。同时，PLC的功能也不断完善。随着计算机技术、信号处理技术、控制技术网络技术的不断发展和用户需求的不断提高，PLC在开关量处理的基础上增加了模拟量处理和运动控制等功能。今天的PLC不再局限于逻辑控制，在运动控制、过程控制等领域也发挥着十分重要的作用。 目前，PLC在国内外已广泛应用于钢铁、石油、化工、电力、建材、机械制造、汽车、轻纺、交通运输、环保及文化娱乐等各个行业。 同时，计算机监控系统是采用集中监测、集中控制、集中显示、集中管理、集中保存的系统，融合了较先进的自动化技术、计算机技术、通讯技术、故障诊断技术和软件技术，广泛应用在化工、供暖、机械、供水、水处理等多个领域，在工业生产中发挥越来越显著的作用。 关键词：MCGS软件编程FX2N-4DA 模拟特殊模块plc
ABSTRACT :Since the 1960s, was launched in the USAprogrammable logic controller to replace traditional relay control device since, PLC obtained fast development, In the world can be widely used. Meanwhile, PLC function also continuously improved. Along with the computer technology, the signal processing technology, control technology network technology unceasing development and user demand unceasing enhancement, PLC in the switch quantity processing based on increased analogue processing and motion control etc. Function. Meanwhile, PLC function also continuously improved. Today's PLC no longer bureau be confined to logic control, motion control, process control etc also plays a very important role. At present, the PLC at home and abroad have been used widely steel, petroleum, chemical industry, electric power, building materials, machinery manufacturing, automotive, textile, transportation, environmental protection, and cultural entertainment industries. At the same time, computer monitoring system is to adopt the centralized monitoring, centralized control, centralized display, centralized management, the concentrated preservation system, shirt-sleeve relatively advanced automation technology, computer technology, communication technology, fault diagnosis technology and software technology, widely used in chemical industry, heating, machinery, water supply, water treatment etc, in the course of industrial production plays more and more important role. KEY WORDS：The MCGS software programming FX2N - 4DA simulation special modules plc
过程控制论文 加强过程控制的管理实践 摘要：文章根据中国南方电网超高压输电公司广州局表单化管理实际，重点对如何编制科学的表单体系，如何确保表单应用过程中的刚性，如何发挥员工在表单化管理实施过程中的积极主动性提出见解，最后举例说明表单化管理在广州局的成功运用。 关键词：表单化管理；安全生产；过程控制 随着社会经济的发展，现代化、自动化、工业化水平不断提高，电力对当今社会的影响日益加深，电力行业安全稳定运行为全社会所关注。电力行业是一个技术密集型行业，从电力生产到电力传输，再到应用于千家万户，中间任何一个环节出问题都将导致社会的混乱和用户的损失，如何增加供电可靠性，杜绝大范围停电事故一直是电力人潜心思考的问题。 长期的生产实践表明，电力安全可靠性的核心在“人”：消灭人为因素造成的三大安全敌人——违章、麻痹、不负责任，减少人员执行过程中的不安全因素，实现人员工作过程的可控性，降低员工执行规章制度的成本，培养员工习惯性尊章的习惯，减少不安全事件的发生。中国南方电网超高压输电公司广州局经过多年的探索和实践，总结出“以制度为牵引的习惯性尊章管理制度”，减少人为因素的不确定性，并找到了落实这一管理制度的具体方法——表单化管理。 表单化管理的主要思想是：将各项管理制度、技术规定、行业规范进行有效整合，形成工作表单，固化工作流程，让每一位员工均能无纰漏的进行工作，彻底规范员工的工作流程，减少工作执行过程的不确定性，从根源上杜绝三大安全敌人。电力行业的工作特点，规范性、反复性和工作内容的提前预知性决定了表单化管理思想在电力行业有着广阔的应用空间。 下面就四个方面的内容对表单化管理思想的应用做概要阐述。 一、表单化管理的适用范围 作为一种安全生产管理方法，表单化管理有其一定的适用范围。分析电力行业的工作特点，具有如下特点的工作可适用表单化管理：可明确工作步骤、能预知工作内容、工作流程有逻辑性和唯一性、工作结果有可控性；如此电力设备竣工验收、设备定期试验、设备定期检查、设备巡视、日程工作流程管理等具备重复性特征的工作均可采取表单化管理。上述工作大多有明确的规程制度和规范规定，不需要员工现场发挥，不需要去创造思路和方法，而有现成的制度和步骤去规范执行，故此表单化管理有广阔的适用空间。表单是流程的目视化手段，是规程制度的有形落地，可以作为电力行业诸多工作领域的作业管理方法。 其他涉及行业日常管理，需要员工间沟通协调的工作，无法预期的工作，虽然无法直接运用表单进行指导，但可以运行表单化管理思维，明确工作步骤，理清工作重点，增强员工习惯性遵章的理念。 二、如何保证表单编制的科学性和正确性
第一章：热电偶的选择第一节：标准热电偶第二节：热电偶的规格第三节：热电偶的结构第四节：适用温度范围第五节：颜色代号标准第六节：热电偶的选择 第二章：热电偶的正确使用第一节:安装不当引入的误差第二节:绝缘度变差而引入误差第三节:热惰性引入的误差第三节:热惰性引入的误差第四节:热阻误差 第三章：热电偶测温误差分析第一节：热电偶测温过程的理论分析第二节:辐射换热引起的测温误差第三节:热电偶导热引起的测温误差第四章:热电偶的劣化及对策第一节:贵金属热电偶的劣化 第二节:廉金属热电偶的劣化 第三节:钨徕热电偶的劣化 第四节:渗碳炉用热电偶的劣化及对策 第一章：热电偶的选择 在化工生产过程中，热电偶是极为重要的一次元件。热电偶的正确合理使用，不仅能够确保生产安全，而且可以提高产品的产量和质量。为此，应对热电偶的技术规范和结构作较全面的了解。现根据文献『1』，结合我国具体特点进行了一次删减和补充，希望能够对仪表测量行业的同行们在国内及国外引进项目中热电偶的选用及维护方面有所帮助。 第一节：标准热电偶 热电偶系统由热电偶传感器、测领和控制仪表一级热电偶传感器与仪表连接 的导线组成。热电偶可以分为两大类：廉金属类（分度号为J、K、T、E、N ）和贵金属类（分度号为R、S、B）。其中J型和K型是工业控制中使用最广泛的热电偶。
J 型是铁－康铜热电偶，主要特点是通用性强，可以在温度高达760 °C （1400F）的氧化和还原气体环境中使用。这种热电偶正极为纯铁偶丝，铁的氧 化电阻的，极易生锈。目前尚无好的防锈措施，因此沿海地区的工厂或有盐害存 在的区域不宜采用。这就使J型热电偶在中温场合中的应用受到了限制。 K型热电偶的正、负极都是高镍合金、适用于氧化或惰性气氛，测温温度可 达1260 C（2300F ）。K 型热电偶不能用于还原气氛，如热处理过程及含有氢气，游离氨、一氧化碳等的过程都是还原性气氛。在还原气氛中，如果温度达到 800?950 C ,K型热电偶的正极（含有9%铬的镍基合金）会氧化生成一种浅绿色的氧化铬,使原来的尖晶石型镍铬氧化物结构受到破坏，即所谓的“律师现 象”（在渗碳气氛中，在高温下，由于形成碳铬以至在金晶界发生选择性氧化而造成的一种很强的腐蚀作用），从而消耗正极中的铬含量，造成电动势的降低。 K型热电偶的正极暴露在400 —600 C温度范围时，易发生老化并引起热电偶在正方向大约5 C的变化。因此，如果选用K型热电偶测量范围是400 —600 C 时，被测过程的温升必须十分缓慢，如欲测出4 C的温度变化就需要一小时或更长时间。N型（镍铬硅合金一镍硅）热电偶在400 —600 C的温度条件下，不会出现老化。因此，在相同环境条件下，N型热电偶校验值的稳定性要比K型的好。 N 型热电偶是一种较新型的热电偶。在第六届国际温度讨论会上（1982 年3 月于美国）肯定了N 型热电偶的有用性。其合金组成见表1 所列。这种热电偶在高温环境中耐氧化性能好，最高测量温度为+1300 C,但其热电势特性的线性不如K 型热电偶。在国外N 型热电偶多用于核电站的温度测量，其使用范围正逐步向其它应用领域扩展，有普及和取代贵金属热电偶的趋势。 T 型（铜一康铜）热电偶主要用于低温和环境温度的测量。T 型热电偶的热电势特性
厦门大唐房地产集团有限公司文件 大唐集投字〔2016〕1号 厦门大唐房地产集团有限公司 项目经济测算指标体系规定 修订记录 修改内容修改人批准人发布日期
第一章总则 第一条、为提高房地产项目可行性论证工作的效率和效果，促进项目决策的科学性，选择符合公司发展战略的项目，保障公司可持续发展，特制定本指标体系。本体系适用于大唐地产集团房地产项目可行性论证阶段的经济测算。 第二条、项目经济测算指标体系的设计应遵循如下原则： （一）反映公司阶段特征和战略目标要求。经济测算指标体系的设计应结合公司经营特征和战略目标要求，确定项目经济效益评价的侧重点，依据侧重点有针对性的设计经济测算指标体系。 （二）科学合理性。经济测算指标体系应包括影响项目经济效益 的各个主要方面，综合反映项目的经济效益。 （三）系统性。经济测算指标体系应综合和全面反映项目的经济 效益，并依据各指标对项目经济效益评价的重要程度，区分核心指标和参考指标。 （四）可比性。经济测算指标应具有普遍的统计意义，指标值能 够在同一行业内不同公司间进行横向比较和在公司内部进行不同时 期的纵向比较。 （五）可操作性。经济测算指标在满足评价目标的前提下，在实 际应用中要简单，便于计算。 第二章定义及分类
第三条、房地产项目分为住宅类项目和商业地产项目。 第四条、商业地产项目指用地性质为商业、办公、物流等非住宅 用地的房地产开发项目，包括办公楼、写字楼、商务楼、SOHO楼、酒店公寓、酒店、商场、商业综合体以及集中式商业楼等。 第五条、商业地产项目分为销售型、持有型和混合型三类： （一）销售型商业地产项目：指可分割产权进行销售或虽不能分 割产权、但业务实质为销售、且总建筑面积销售比例不小于85%的商业地产项目； （二）持有型商业地产项目：指不能分割产权进行销售，或虽可 分割产权、但不销售或难以销售，通过持有来实现项目利润、且总建 筑面积销售比例不大于15%的商业地产项目； （三）混合型商业地产项目：指同一个商业地产项目中同时存在 销售型和持有型商业地产产品，且总建筑面积销售比例介于15%与85%之间。 第六条、销售型商业地产项目和混合型商业地产项目中可售部分， 视同住宅类项目开展评估，下文统称“销售项目”。混合型商业地产 项目中持有部分视同持有型项目开展评估，下文统称“持有项目”。 项目分类图示请见附件一。 第三章体系结构 第七条、依据指标体系的应用目的和设计原则，本指标体系分为
《动物病毒学》实验课 讲稿 任课教师：方六荣 授课对象：2002级动物医学专业1-4班 授课时间：2004.09-2005.01
目录 实验一鸡胚接种 (1) 实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养 (6) 实验三原代细胞培养 (9) 实验四病毒TCID50的测定 (11) 实验五中和试验 (13)
实验一鸡胚接种 一、实验目的 了解鸡胚的基本结构与功能及鸡胚接种的方法，掌握常用的鸡胚接种方法。 二、鸡胚接种的作用 主要用于： ①分离病毒，并根据病变初步鉴定病毒 ②培养病毒，制造抗原和疫苗 ③测定各毒株之间的抗原关系（用鸡胚作中和试验和交叉保护实验） ④测定病毒毒力 三、材料 1、鸡胚10日龄 2、病毒鸡传染性支气管炎病毒（IBV） 3、照蛋灯 4、打孔器 5、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球 四、鸡胚用于病毒培养的优缺点 （一）优点 1、组织分化程度低 2、可选择不同的日龄和接种途径 3、病毒易于增殖 4、感染病毒的组织和液体中含大量病毒 5、容易采集和处理 6、来源充足 7、设备和操作简便易行 （二）缺点 1、胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒 2、母源抗体 3、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针
五、鸡胚的结构与功能 1、卵壳上有细孔，进行气体交换 2、壳膜使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。 3、气室呼吸和调节压力 4、绒毛尿囊膜起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。 5、尿囊腔胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中 尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。 6、羊膜与羊膜腔其中盛有羊水，胎体浸泡于其中 7、卵黄在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 8、卵白在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。 六、受精卵的选择 1、最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响。 2、受精卵的壳最好是白色的，以便于检卵。 3、受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。 七、鸡胚的孵育 1、孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ 2、相对湿度：50%-60% 3、必须保证具有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后
第三篇病毒学实验技术 实验学时计划：实验一实验须知6小时；实验二细胞培养用水的制备及检验15小时；实验三组织培养技术20小时；实验四病毒的分离及其理化性质的测定20小时；实验五病毒提纯技术15小时。 实验一实验须知 一、实验室注意事项 1．凡参加病毒学实验的人员均应接种与实验有关的病毒疫苗。 2．实验室内，特别是组织培养操作室，须经常保持干燥、清洁。在进行病毒接种或无菌操作前后，均应用紫外线照射灭菌，必要时可用3～5%的酚或煤酚皂溶液擦拭或喷雾消毒。 3．进入操作室，须先洗净双手并用消毒药水严格消毒；更换拖鞋，戴口罩和帽子，穿消毒的实验服。 4．病毒实验操作完毕后，将所穿戴实验服、口罩、帽子和拖鞋等物，出操作室前须更换；两手须经消毒药水严格浸洗后方能外出。 5．一个接种操作室，严禁同时进行两株病毒株的传种；吸取病毒材料时，勿于悬空吹出或打出。 6．凡沾病毒材料的吸管、试管等器具，须随时投入5%煤酚皂或1%盐酸溶液内，浸泡过夜，或煮沸消毒后才能进行洗涤。 7．凡带有感染性的鸡胚或动物尸体，须立即投入炉内焚化或进行煮沸消毒，或盛入容器内进行高压消毒后，方能携出室外进行处理。 8．工作人员要随时注意安全操作，以免发生事故；如发生意外，应迅速采取有效措施补救。 二、病毒材料收集、运送和保存 （一）材料的收集 分离病毒的成功率与采集材料有密切的关系。采集病料必须在适当的部位和时间内进行，前者与各种传染的发病机理有关，后者常规在疾病早期，因为通常在疾病刚出现时病毒的滴度高。各种病毒感染所采适宜病料参见图1和图2。 由于许多病毒的不稳定性，欲作病毒分离的材料，都应尽快的冷藏。－30℃保存的病毒材料（除少数例外），至少可以活存几个月以上；而－70℃保存的病毒，甚至几年不见毒力降低。有些病毒需在潮湿环境下保存，有的则需干燥环境（如Orf virus）。
过 程 控 制 作 业 姓名：常孔帅 学号：310808020105 班级：自动化08—1 学院：电气学院
1 .PID控制的背景介绍 目前工业自动化水平已成为衡量各行各业现代化水平的一个重要标志。同时，控制理论的发展也经历了古典控制理论、现代控制理论和智能控制理论三个阶段。自动控制系统可分为开环控制系统和闭环控制系统。闭环控制系统如图1-1所示。 图1-1闭环系统框图 一个控制系统包括控制器、传感器、变送器、执行机构、输入输出接口。控制器的输出量经过输出接口给执行机构，通过执行机构加到被控对象上。控制系统的被控量，经过传感器和变送器，通过输入接口送到控制器。不同的控制系统，其传感器、变送器、执行机构是不一样的。比如压力控制系统要采用压力传感器，电加热控制系统的传感器是温度传感器。执行机构如步进电机、伺服电机液压与气动执行装置等。 在工程实际中，应用最为广泛的控制器控制规律为比例(proportional)、积分(integral)、微分(derivative)控制，简称PID控制，又称PID调节。PID 控制，实际中也有PI和PD控制。PID控制器就是根据系统的误差，利用比例、积分、微分计算出控制量进行控制的。 PID控制器问世至今已有近70年历史，它以其算法简单、鲁棒性好、可靠性高，被广泛应用于过程控制和运动控制。各种各样的PID控制器产品已在工程实际中得到了广泛的应用，有利用PID控制实现的压力、温度、流量、液位控制器，有实现PID控制功能的可编程控制器(PLC)，还有可实现PID控制的PC系统等等。据统计，工业控制的控制器中PID类控制器占90%以上。PID控制成为工业控制的主要技术之一。PID参数包括pk,ik,dk。 PID控制适用于无法建立精确数学模型的控制系统。随着工业发展，被控对象复杂程度不断加深，尤其是对于大滞后、时变的、非线性的复杂系统，其中有的参数未知或变化缓慢，有的带有延时或随机干扰，有的无法获得比较精确的数学模型或模型比较粗糙，加之人们对控制品质的日益提高，常规PID的控制缺陷逐渐暴露出来： PID控制参数一般是人工整定，要求设计者有丰富的工程经验。尽管用于参数整定的方法有很多种，如工程上常用的扩充临界比例法，凑试法和阶跃曲线法，但这些方法都是根据对象的特性离线的进行，而且是阶段性的非自动的其次：一次性得到的PID参数很难保证控制效果始终处于最佳状态，对于时变对象和非线性系统，经典PID控制更是显的无能为力。因此常规PID控制受到很大的限制和挑战。
基于PLC 的压力过程控制系统 压力过程控制系统的被控对象是由两个压力容器对象组成，可以根据需要构成不同阶（1或2阶）的被控对象。压缩空气经过两路进入压力容器中，经过两个流量调节阀，在单回路控制过程中，可以把一路作为主回路，另一路作为干扰回路。被控对象调节采用线性的理想特征，构成的控制系统为线性控制系统。 2.1 设计方案 2.1.1 设计方案 “基于PLC 的压力过程控制系统”利用工业控制计算机 (IPC) 作为上位机，利用MCGS 软件作为程序开发平台，下位机采用可编程序控制器 (三菱FX2N —16M PLC)，组成一个压力过程控制监控系统（如图2.1）。 图2.1 压力过程监控系统 被控对象由上、下两个压力罐组成，其控制要求为：将压力罐 1 的压力值P1和压力罐 2 的压力值 P2 分别控制在某个范围内。两个个压力罐的压力信号分别由检测装置进行实时检测，然后将被测的标准信号经 A/ D 转换后输入计算机，根据采集到的信号情况，计算机将控制信号经 D/ A 转换后输出给执行机构，对气泵和控制阀进行通断控制，从而形成计算机控制的闭环控制方案。 2.1.2 控制阀的选择 1．主、副控制器：三菱FX2N PLC MCGS IPC 工控机 PLC 上位机 下位机
2．压力变送器：2台DBYG-300A压力变送器 3．调节阀：2台ZMAP-100B小流量调节阀 4．电气转换器：2台QZD-1000电气转换器 5．减压器：3台QFH-221型空气过滤减压器 6．24VDC电源 所有仪表所需的接线端子都全部拉到接线板上，也就是面板上的接线端子都是跟仪表的对应接线端子相并联的，所以可以直接在接线板上通过合理的连线组成所需要的控制系统。 气动调节阀动作分气开型和气关型两种。气开型是当膜头上空气压力增加时，阀门向增加开度方向动作，当达到输入气压上限时，阀门处于全开状态。反过来，当空气压力减小时，阀门向关闭方向动作，在没有输入空气时，阀门全闭。气关型动作方向正好与气开型相反。当空气压力增加时，阀门向关闭方向动作；空气压力减小或没有时，阀门向开启方向动作直到全开为止。气动调节阀的气开或气关，通常是通过执行机构的正反作用和阀态结构的不同组装方式实现。 气开气关的选择是根据工艺生产的安全角度出发来考虑。即当气源切断时，调节阀是处于关闭位置安全还是开启位置安全。比如：一个加热炉的燃烧控制，调节阀安装在燃料气管道上，根据炉膛的温度或被加热物料在加热炉出口的温度来控制燃料的供应。这时，宜选用气开阀更安全些，因为一旦气源停止供给，阀门处于关闭比阀门处于全开更合适。本系统的压力罐控制阀采用气关型。考虑原因是，当压力信号中断时应保证设备和工作人员的安全。在事故状态下保持阀门全开。当压力罐内正常工作时，可保持气体不外泄。总体而言，用气关型比较安全。 2.1.3 控制方式的选择 在控制系统中，串级控制系统对改善控制过程的品质极为有效，它改善了单回路系统时间常数大、容易受到干扰等缺点，因此在生产过程中得到了广泛的应用。鉴于其能够提高系统的放大系数、抗干扰能力以及有一定的自适应能力等优点。“基于PLC的压力过程控制系统”采用串级控制系统。
西西4#地项目 成 本 测 算 及 费 用 分 析 二零零三年十月三十一日
一、总论 1、项目概况： 北京西单北商业大街西侧综合改造工程，简称“西西工程”。本工程为西西4#地工程，项目处在北京市西单北大街西侧，南临皮库胡同，西向华远街，北临大木仓胡同。地处北京西城区最繁荣之商业区西单大街的中心地带。 西西工程4#地用地面积约16703平方米，目前已完成三通一平条件，同时甲方负责电力、热力、给排水等七通一平施工条件。 2、建设规模及经济技术指标 本项目处在北京市西单北大街,项目东侧为西单文化广场、四周围为规划中的1318平米的绿地。 项目技术指标如下： 占地面积：16072.66平方米 总建筑面积21.4866平方米 其中：地下建筑面积63760平方米 地上建筑面积151106平方米 层数：地上：15层 地下：4层 檐高：59.4米 容积率：9.4 停车位：996个 绿化率：11.6% 建筑形式：共分为1#、2#、3#、4#四栋单体建筑， 其中： 1#楼：地上建筑面积为19001平方米，1-5层为商业部分共8738平方米，6-11层为办公部分共10263平方米。 2#楼：地上建筑面积为46879平方米，1-5层为商业部分共21213平方米，6-11层为餐饮娱乐部分共25666平方米。 3#楼：地上建筑面积为52944平方米，其中1-5层为商业部分5736
平方米，1-6层为剧场13853平方米；8-11层为影院7354平方 米，6-11层为休闲娱乐11946平方米；12-15层为办公部分共 14055平方米。 4#楼：地上建筑面积为32282平方米，1-5层为商业部分共10544平方米，1-15层为办公部分共21738平方米。 西西4#地楼层功能分布图 二、费用估算 1、项目的成本估算：
理工大学 自动化系课程学习报告题目：过程工业自动化概述 电气电子工程学院 2017 年月日 过程工业自动化概述
摘要： 工业自动化就是工业生产中的各种参数为控制目的，实现各种过程控制，在整个工业生产中，尽量减少人力的操作，而能充分利用动物以外的能源与各种资讯来进行生产工作，即称为工业自动化生产，而使工业能进行自动生产值过程称为工业自动化。过程控制是工业自动化的重要分支。过程控制最主要的理论基础是自动化控制理论，同时它也与相关过程机理及自动化仪表和计算机技术密切相关。 Industrial automation is the industrial production of various parameters for the control purposes, to achieve a variety of process control, in the whole industrial production, the operation to minimize the human, and make full use of anim als other than energy production with a variety of informati on to work, that is, known as industrial automation, leaving the production value of industrial process can be automatic ally referred to as industrial automation. Process control is an important branch of industrial automation. The main theo retical basis of process control automation control theory, a nd it is also the mechanism and related processes and autom ation instrumentation and computer technology are closely rela ted. 关键字：过程控制、工业自动化、过程工业自动化的发展。 Keywords:Process control, Industrial automation, Process automation development. 1. 前言： 过程控制是工业自动化的重要分支。几十年来，工业过程控制取得了惊人的发展，无论是在大规模的结构复杂的工业生产过程中，还是在传统工业过程改造中，过程控制技术对于提高产品质量以及节省能源等均起着十分重要的作用。过
Unit 1 Introduction to Process Control In recent years the performance requirements for process plants have become increasingly difficult to satisfy. Stronger competition, tougher environmental and safety regulations and rapidly changing economic conditions have been key factors in the tightening of plant product quality specifications. A further complication is that modern processes have become more difficult to operate because of the trend toward larger, more highly integrated plants with smaller surge capacities between the various processing units. Such plants give the operators little opportunity to prevent upsets from propagating from one unit to other interconnected units. In view of the increased emphasis placed on safe. efficient plant operation, it is only natural that the subject of process control has become increasingly important in recent years. In fact, without process control it would not be possible to operate most modern processes safely and profitably, while satisfying plant quality standards. 近年来，对于过程系统的执行的必要条件越来越难满足了，在紧缩的工厂产品质量规范中，强大的竞争，严峻的环境和安全规范，快速变化的经济状况，这些重要因素都是我们必须考虑的。由于工厂朝着规模更大，更集成化，在各种生产过程中，我们将面临又一个困难是越来越难操作和运行。对于操作员来说，阻止误差从一个单元到另一个互联的单元的可能性很小。鉴于把重点放在安全和系统运行，自然而然，过程控制变得越来越重要了。事实上，要是没有过程控制，我们不可能安全和效率的处理大多数现代过程，也不能满足工厂质量标准。 1.1.1 Illustrative Example As an introduction to process control. Consider the continuous stirred-tank heater shown in Fig. 1. 1. 1 The inlet liquid stream has a mass flow rate w and a temperature T . The tank contents are well agitated and heated by an electrical heater that provides Q watts. It is assumed that the inlet and outlet flow rates are identical and that the liquid density p remains constant ,that is the temperature variations are small enough that the temperature dependence of p can be neglected. Under these conditions the volume V of liquid in the tank remains constant. 在图1.1.1中连续的搅拌槽加热器的入口液体有质量流速w和温度Ti，这个被加热的和搅拌的系统提供Q，假定入口和出口的流速一样和液体的密度保持常量，也就是，这个温度是足够的小以至于温度对密度的相互关系可以忽略，在这种情况下液体的体积保持常量。 The control objective for the stirred-tank heater is to keep the exit temperature T at a constant reference value TR. The reference value is referred to as a set point in control terminology. Next we consider two questions. 搅拌槽加热器的控制目标是为了保持出口温度T总是维持在一个恒定的参考值TR。在控制术语中，这个参考值被称为设定值。下一步，我们考虑两个问题。 Question 1. How much heat must be supplied to the stirred-tank-heater to heat the liquid From an inlet temperature T, to an exit temperature TR? 问题1。需要给搅拌槽加热器提供多少热量来加热液体，以使液体温度从由入口温度T达到出口温度TR？ To determine the required heat input for the design operating conditions, we need to write a steady-state energy balance for the liquid in the tank. In writing this balance, it is assumed that the tank is perfectly mixed and that hear losses are negligible. Under these conditions there are no temperature gradients within the rank contents and consequently, the exit temperature is equal to the temperature of the liquid in the tank. A steady-state energy balance for the tank indicates that the heat added is equal to the change in enthalpy between the inlet and exit streams: Q= wC(T-Ti) (1)