1. 细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105 至4×105 细胞/cm2 的密度平铺细胞于60 mm 组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占面积达到培养皿总面积的30%）。将细胞置于含5％CO2 的37℃温箱中孵育8-24 h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前2 h 换液（用4 ml 新鲜的完全培养基置换旧的培养基

2×HBS (ul)配方：8g NaCl ，0.14g Na2HPO4•2H2O 或0.2g Na2HPO4•7H2O ，6.5g HEPS ，调节pH 值7.0， 最终溶于500ml 双蒸水中,4℃保存。2MCacl 2配方：87.6g Cacl 2·6H 2O 溶于200ml 双蒸水中，用0.22μm 滤器过滤除菌，4℃保存，不可冻牢凝固。^^^Day

小鼠胚胎干细胞mES小鼠iPS培养Protocol

总RNA的提取1)匀浆处理：a. 组织将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1mlTRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm 直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRI

P E I转染试剂的P r o t o c o l精品资料PEI转染Protocol1.转染前一天（24h左右）胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时汇合度为70~90%。2.转染前1h，将细胞培养基更换为Opti-MEM或者DMEM基础培养基（若使用Opti-MEM，PEI转染效果更佳）。3.用一定体积的Opti-MEM稀释质粒，小心混匀，记为A液；用

大鼠神经干细胞分离培养鉴定标准化protocol一、大鼠神经干细胞分离和传代步骤手术前准备1. 水浴锅温度调至37°C。2.组织解离液置95%O2 5%CO2 培养箱中10min。3. 用95%乙醇消毒解剖区。4. 用消毒溶液消毒解剖器械（戊二醛，后用无菌dH2O 冲洗，浸泡在95%乙醇中）。5.在3 个60 ×15 mm 皿中各加3ml 的组织解离液。提示

细胞免疫荧光步骤1.在24孔板里加500微升培养基，放爬片，接种细胞（做实验以30-50%汇合度较好。10000-30000左右2.给药处理24h。3.PBS洗三遍。4. 4％冷的多聚甲醛固定15分钟，PBS洗三遍，每次5min，摇床。（避光）5.0.5％Triton X－100（PBS配）破膜15min，PBS洗三遍，每次5min，摇床。6.5%BSA（牛

产品中文说明书OriCell TM Strain Balb/c小鼠骨髓间质干细胞货号： MUCMX-01001目录产品基本信息 (1)产品介绍 (1)产品特性 (1)产品应用领域 (2)处理原则 (2)OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养 (2)OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的传代 (4)OriCell TM

PROTOCOL1.Anesthetize mouse with 150uL heparin (100U/ml) + 0.5mL ketamine/xylazine stock2.Sacrifice by opening thorax after toe pinch test.3.Remove and cannulate heart, secure with

分子克隆及细胞培养基本实验方法1.载体构建实用操作技术1.1菌种的保存一20%甘油菌2体积菌液与1体积70%的甘油混合后，储存于-20C或-70 C备用。（甘油菌中甘油的浓度为20-30%均可）1.2甘油菌复苏、培养方法一、挑取甘油菌一环，接种在含100ug/ml Amp的LB固体培养基上（活化菌种）,37 C培养过夜（约16小时）；挑取一个菌落转接在含10

PEI转染Protocol1.转染前一天（24h左右）胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时汇合度为70~90%。2.转染前1h，将细胞培养基更换为Opti-MEM或者DMEM基础培养基（若使用Opti-MEM，PEI转染效果更佳）。3.用一定体积的Opti-MEM稀释质粒，小心混匀，记为A液；用相等体积的Opti-MEM稀释PEI，小心混匀，记为B液（

亚细胞定位Confocus一、实验材料玻片，镊子，75%酒精，细胞转染用物品，PBS，4%多聚甲醛，Trixon-X-100，铝箔，摇床，DAPI染色液，荧光封片液，指甲油，载玻片，激光扫描共聚焦显微镜（型号：ZEISS LSM 510 META），光盘二、实验原理亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位，如胞核，胞浆内，细胞膜或某一特定细胞器

诱导表达1、挑取含重组质粒的单菌落至５ml LB（含抗性）培养基中37℃过夜培养。2、按1∶100比例稀释过夜菌，一般将５０µl菌接种到含５ml LB（含抗性）培养基的5 ml试管中, 37 ℃震荡培养至OD600≌0.4－0.8（最好0.6，单抗大约需２－２.5 hr，双抗大约需３－３.５hr）。3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入诱导剂至终浓度作

第一章流式细胞仪的结构和原理第1节流式细胞术发展史纵观历史，几乎没有哪一门科学技术象流式细胞术这样凝结了众多不同学术背景、不同科研领域科学家的心血。从流式细胞术的发明、改进、革新，到今天在各个领域应用的拓展，每一步都是诸如生物学、生物技术、计算机科学、流体力学、激光技术、高等数学、临床医学、分子生物学、有机化学和生物物理学等学科知识综合运用的结晶。现代流式细

1/cellculture1.0 Introduction (4)2.0 Design and Equipment for theCell Culture Laboratory (4)2.1 LaboratoryD esign (4)2.2 Microbiological Safety Cabinets (5)2.3 Centrifuges (6)2.4 I

原代平滑肌细胞培养Protocol实验准备：器材：注射器（10mL），玻璃吸管，胶头（用于细脚吸管，吹匀组织块用），枪头（蓝色、黄色），移液器（1000μL，100μL），电动移液器，玻璃培养皿（2-3个），小烧杯（10 mL或5 mL），青霉素瓶（配鼠尾胶原），剪刀（大，小，弯）多把，镊子（大，小，弯）多把，纱布，六孔板（真空包装），托盘（放老鼠），酒精棉

PI染色检测细胞周期1、HepG2细胞培养至70%左右，细胞铺板（60mm小皿），8万/皿，饥饿48小时，加药处理96h（加药组10万/皿）2、收集培养基，2ml胰酶消化细胞，新培养基3ml重悬，收集细胞悬液，1000rpm，5min离心3、弃去上清，加入1ml预冷的PBS充分重悬细胞，转移到1.5ml的EP管4、混匀，4°，600g，5min离心5、弃去上

动物固体组织蛋白提取Protocol1、前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。2、裂解液配制：RIPA：PMSF=100：1，现配现用。（1000ulRIPA+10ulPMSF）。置入4℃冰上。3、抽蛋白（应冰上进行）：a、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。一般10ml管体系

小鼠胚胎干细胞（mES细胞）、小鼠iPS细胞培养ProtocolMEF细胞铺制：1. 在T25培养瓶中加入0.2%明胶，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱至少放置15min以上。2. 吸除0.2%明胶，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地，一个T25培养瓶中加入5ml MEF完全培养液。3. 按实验需要：小鼠胚胎干细胞使用KM-r P3 M

原代平滑肌细胞培养Protocol实验准备：器材：注射器（10mL），玻璃吸管，胶头（用于细脚吸管，吹匀组织块用），枪头（蓝色、黄色），移液器（1000μL，100μL），电动移液器，玻璃培养皿（2-3个），小烧杯（10 mL或5 mL），青霉素瓶（配鼠尾胶原），剪刀（大，小，弯）多把，镊子（大，小，弯）多把，纱布，六孔板（真空包装），托盘（放老鼠），酒精棉