原位杂交(In situ hybridization)一、目的掌握核酸探针原位杂交操作技术，并利用该技术对单细胞的靶目标进行定位，用于细胞生物学基础研究。二、原理原位杂交技术（in situ hybridization）是分子生物学和组织化学成功结合的产物，是特定标记的已知序列核酸作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其实行检测的方法。其基本原理是含互补

原位杂交1 探针的设计与合成1)根据实验室已有的p8基因cDNA全长序列，用premier primer5.0设计引物p81和p82，以卤虫cDNA为模板，PCR扩增得到346bp的产物，用Takara胶回收试剂盒回收纯化。引物编号引物序列长度p81 TGCGGACGAAACAGGAAG 18 bpp82 GCTCAAACAGTGA TGCCAGT 20 b

荧光原位杂交（FISH）探针的制备及其应用概述1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征2、染色体异常常见的类型3、染色体异常的检测方法二、荧光原位杂交及其探针1、荧光原位杂交的原理2、荧光原位杂交的探针三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交（按试验流程介绍）一、概述1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关，然

原位杂交技术

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原位杂交实验原理与方法一、目的本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。二、原理原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物相关的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术

此技术最先由Gall和Pardue于1969年 此技术最先由Gall和Pardue于1969年 建立，以后广泛应用于组织学、病理学、 建立，以后广泛应用于组织学、病理学、 遗传学、

④ 牛血清白蛋白和载体DNA等 （阻断探针与组织非特异结合， ↓背景）（complementary DNA） （长度为数百-数千碱基对）☆ 双链cDNA探针是最常用的核酸探针 特别

斑马鱼全胚胎原位杂交技术Form Dr. Kevin第一节原位杂交技术的历史Joseph G. Gall被誉为现代细胞生物学的一位奠基人，他在染色体结构和功能领域作出了杰出贡献，并发明了原位杂交技术（in situ hybridization，ISH）。自Gall同他的研究生Mary Lou Paudue和Susan Gerbi在1969年利用放射性标记DN

针。3、杂交 杂交是在一定温度和离子强度条件下让标记 探针与组织中靶分子结合的过程。将杂交 液体滴于切片的组织上，加盖硅化的盖玻 片用以防止杂交夜的挥发 探针的浓度：非放射性标记探

原位杂交的基本方法一、组织的取材注意事项：刀要锋利、不能用力向下挤压组织；组织块不宜过大、及时固定。二、固定（一）原则：及时固定、避免RNA酶的污染4％多聚甲醛（0.1M PBS PH7.4，可加1/1000的DEPC）,动物实验标本最好先灌流固定。（二）固定液的浓度、固定时间及温度要适宜1 浓度越高组织结构保存的越好，但mRNA的保存越差；2 固定时间越长

(一)探针的种类RNA探针是指带有标记的能与组织内相对应的核苷酸序列互补结合的一段单链cDNA或cRNA分子。根据在RNA杂交中所使用的探针依其来源可分为三种：即特异性cDNA、cRNA 探针和人工合成寡核苷酸探针。1. 单链cDNA探针：由于cDNA中不存在内含子及其它高度重复序列，又克服了双链cDNA 探针在杂交反应中两条链之间复性的缺点，从而提高了杂交

原位杂交探针大体可分为三类：寡核苷酸探针，CDNA探针，RNA探针。寡核苷酸探针由25bp左右的核苷酸组成，通常可以由公司合成，由于其序列较短，因此特异性较强，原位杂交时可以区分家族基因，同一基因的不同剪切体，cDNA探针长约500bp左右，可以通过非对称PCR扩增合成，由于探针式DNA，可以有效的避免降解，但DNA和RNA的结合不如RNA与RNA结合强，通

• 多聚甲醛固定后，浸入乙酸酐（acetic anhydride）和三乙醇胺（tri－ ethanolamine）中以减低静电效应，减少 探针对组织的非特异性背景染色。 • 有的作

体积（20ul） >1ug in 10ul 水中 2ul 4ul 2ul 2ul 0.5ul混匀后37度2小时 加2ul DNase 1 (RNase-free)，37度15

原位杂交实验1 探针的设计与合成1)根据实验室已有的p8基因cDNA全长序列，用premier primer5.0设计引物p81和p82，以卤虫cDNA为模板，PCR扩增得到346bp的产物，用T akara胶回收试剂盒回收纯化。引物编号引物序列长度p81 TGCGGACGAAACAGGAAG 18 bpp82 GCTCAAACAGTGATGCCAGT 20

荧光原位杂交探针的制备及其应用一、概述1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征之一1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关，然而这还仅仅只是一个假说；1960年Nowell和Hungerford在7例慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia，CML）的患者中发现后来被称为费城染色体（Ph iladelphia chro

• 2．增强组织的通透性和核酸探针的穿透性 • 此步骤根据应用固定剂的种类、组织的种类、 切片的厚度和核酸探针的长度而定。 • 增强组织通透性常用的方法如应用稀释的酸 洗涤、去垢剂

目前，公共和商业数据库中已发布的16S rRNA序列逐渐增多，因此，基于16S rRNA的FISH技术的应用也越来越广泛，对环境样品中微生物的原位研究也越来越方便和准确。除16S