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. 无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。
范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。
依据：中国药典》2015年版
《药品生产质量管理规范》2010年修订
《中国药品检验标准操作规程》2010年版
责任：QC化验员对实施本规程负责。
内容:
1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。
2、材料及设备
2.1 生化培养箱
2.2 生物安全柜
2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供）
2.4 灭菌试管、灭菌注射器
2.5 0.9%无菌氯化钠溶液
2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。
3、无菌检查培养基的适用性检查
3.1无菌性检查
取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。
3.2灵敏度检查
3.2.1菌种
培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），.
. 并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]
铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]
枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]
生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941]
白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]
培养基适用性检查（控制菌）
菌悬液制备
金黄色葡萄球菌
菌种→胰酪大豆胨琼脂或胰酪大豆胨肉汤(30～35℃/18～24小时)→用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液 铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
乙型副伤寒沙门菌
白色念珠菌 菌种→沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤中(20～25℃/2～3天) →用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液
生孢梭菌 菌种→接种于梭菌增菌培养基中(置厌氧条件下30～35℃/24～48小时)→用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液
适用性检查
控制菌检查 培养基 试验菌株 特性 菌液量 培养温度及时间
耐胆盐革兰阴性菌 肠道菌增菌肉汤 大肠埃希菌
铜绿假单胞菌 促生长能力 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
金黄色葡萄球菌 抑制能力 ≤100cfu (30～35℃/不少于3天)
紫红胆盐葡萄糖琼脂 大肠埃希菌
铜绿假单胞菌 促生长能力+指示特性 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
大肠埃希菌 麦康凯肉汤 大肠埃希菌 促生长能力 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
金黄色葡萄球菌 抑制能力 ≤100cfu (30～35℃/不少于3天)
麦康凯琼脂 大肠埃希菌 促生长能力+指示特性 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
沙门菌 RV沙门菌增菌肉汤 乙型副伤寒沙门菌 促生长能力 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
金黄色葡萄球菌 抑制能力 ≤100cfu (30～35℃/不少于3天)
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 乙型副伤寒沙门菌 促生长能力+指示特性 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
三糖铁琼脂培养基 乙型副伤寒沙门菌 指示能力 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
铜绿假单胞菌 溴化十六烷基三甲铵琼脂 铜绿假单胞菌 促生长能力 ≤100cfu (30～35℃/不超过3天)
题 目 计数培养基适用性验证方案
方 案 号
版 本 号 01
批准页
起草人
审核人 签字 日期
QC经理
批准人 签字 日期
QA经理
目 录
1.验证目的
2. 参照标准
3. 验证项目
4. 验证人员及职责
5. 判定标准
6. 实验材料
7. 菌液制备
8. 菌液计数
9. 适用性检查
10.阴性对照
附件1.检测记录
1.验证目的
纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。
2.参照标准
2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。
3.验证项目
R2A培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：
4.1验证小组人员:
4.2验证人员职责及要求
4.3验证中各部门的职责
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责
4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责 小组人员职务 姓 名 所在部门
组 长 质量部
组 员 质量部
组 员 质量部
4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
证过程中的各项检验工作负责。
5.判定标准
被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在
0.5-2的范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
6.试验材料
6.1 被验证产品： R2A琼脂培养基
培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程
1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。
4. 内容：
4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版
4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。
4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法
稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。
4.3.4 灵敏度检查
4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的
⽣物学特性。
⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕
