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生理测定方法

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一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）0.25%硫代巴妥酸(纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met）NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0）30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12）(乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6：ASA(维生素C)含量测定偏磷酸95%乙醇磷酸4% 2,2-二联吡啶FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸）PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。

80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。

三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：①Na2HPO4·12H2O ②NaH2PO4·2H2O取①71.64g，蒸馏水定容至1L，取②31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取①91.5ml+②8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸(纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定OD532，OD600，OD450值↓按公式求MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。

2.硫代巴妥酸溶液改为0.5%的硫代巴比妥酸（溶于20%的三氯乙酸）溶液。

实验2：可溶性蛋白含量（参照Bradford方法测定），以BSA作为标准蛋白（牛血清蛋白）2.1所需试剂及配制：牛血清蛋白（BSA），考马斯亮蓝G-250 ，95%乙醇，85%磷酸考马斯亮蓝G-250蛋白染色剂的配制：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%的磷酸，最后蒸馏水定容到1L，混匀，放置过夜，过滤后贮放在棕色瓶中，常温下可放置一个月。

●标准曲线制作：①标准溶液配制：称取10mg牛血清蛋白标准液，溶于蒸馏水，定容至100ml，制成100μg/ml的标准液，4℃下保存备用。

（必须是牛血清蛋白向水中溶解，不能颠倒）②取6支具塞试管（10ml），按下表配制含0-100μg/ml的牛血清蛋白液各1ml（★调零管）★1 2 3 4 5 6蛋白标准液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0蒸馏水（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0蛋白含量（μg）0 20 40 60 80 100③ 各试管加入5ml G-250染色剂，翻转混合，放置2分钟，595nm 比色，绘制过原点标准曲线（方程式）。

（相关系数要两个9以上）2.2步骤：①标准曲线（参考邹琦）（595nm 比色）注意：制作通过原点的标准曲线，以含0μg 蛋白质液调零②取0.1g 样品，加5ml 蒸馏水提取，5000g 离心10分钟，取上清1ml 测定③1ml 样液+5ml G-250液盖塞翻转混合数次，最后595nm 比色，直接从标准曲线读含量。

（此方法反应十分迅速，2分钟即达到平衡，其结合物在室温下1小时内保持稳定）实验3：SOD 酶活性3.1步骤：1. 取50μl 酶液①加入2ml 39m mol/L 甲硫氨酸（Met ）②2ml 0.225m mol/L NBT , （氮蓝四唑）③1ml 0.6m mol/L EDTA-Na 2（① ② ③可以配制在一个试剂瓶里）④1ml 0.012m mol/L 核黄素，摇匀。

（现配现用）2．（人工培养箱内）4000L χ日光灯下放置30分钟后，温度控制在30℃ ，于暗处终止反应。

（用大烧杯套着小烧杯，将试管放在同心圆内，每隔5min 转过90度，转四次。

对照（不加酶液）每次至少对称地放3支，调零的不照光和不加酶液）3．560nm 处测吸光值，酶活性以抑制NBT 光反应50%为一个酶活单位表示。

（实验中可将除酶液和核黄素外其它试剂按比例混合好后，一次加入5ml ，然后依次加入核黄素和酶液，以不加酶液的照光管为对照。

）3.2所需试剂： dl-甲硫氨酸（Met ） 39mmol/L 1.1638g/200ml NBT 0.225mmol/L (0.01840克)/ 100ml 0.0368g/200ml EDTA-Na 2 0.6mmol/L 0.0223g/100ml核黄素 0.012mmol/L 0.0045g/L 或 0.0045g/100ml 用时稀释10倍各试剂溶液均在用前配置，配置好后均应避光保存，尤其是核黄素，必须随用随配，避光保存。

试验进行时一次性加5ml 的反应混合液配置方法：Met + NBT + EDTA-Na 2200mll+200ml+100mlSOD 酶测定时，酶液量50μl 偏少，改为100μl 为佳，另外反应时间30分钟过长，改为20分钟适合。

SOD 活性（酶单位u /gFW ）=(A0-A1)*V / A0*0.5*FW*aA0---对照照光管光吸收值； A1---样品管光吸收值。

V---样液总体积（ml ）5ml FW---鲜重（g ） 1g a---测定用样品的量（ml ） 0.1ml实验4：CAT 活性（过氧化氢酶）4.1所需试剂：①PBS （PH=7.0）50mmol/L （61份50mmol/l Na 2HPO 4, 39份50mmol/l NaH 2PO 4）②15mmol/L H 2O 2(以30% H 2O 2配 )（取85.2μL 30% H 2O 2，以50mmol/L PBS((PH 7.0)定容至100ml ）4.2步骤：1. 3ml 50mmol/L PBS (PH7.0)加入50μl 酶液（加比色杯的盖子摇2-3下，让酶液与缓冲液充分分散）再加入5μl 15 mmol/L H 2O 2 摇匀（加比色杯的盖子摇2-3下，让酶液与缓冲液充分分散）。

2．240nm 处作时间扫描（每0.5分钟测1次，共测3分钟）3．CA T 活性以每分钟消耗1μmol 的H 2O 2为一个酶活单位。

活性计算改动：（以每分钟OD 值减少0.01为一个酶活单位u ）（2005和2006年均是按OD 值减少0.01算的）（以每分钟OD 值减少0.1为一个酶活单位u ）均以50mmol/L PBS 配置 PH=7.8注意：以PBS作空白调零50mmol/L实验5：APX活性(抗坏血酸过氧化物酶)（即ASA—POD活性）5.1所需试剂：ASA（分子量167.12）0.3m mol=0.052836 (g)(乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 (以PBS配成0.1m mol/L=0.0372 (g)/L)50m mol/L PBS (pH7.0)9m mol/L H2O2(以30%H2O2配制)(51μl 30%H2O2定容至100ml)计算为：K1=2.8，K2=3，K3=-1，K4=100可得到总取样（5ml酶液或1g样）的最终活性。

酶活性单位为μmol/g (鲜重)·min以后APX活性测定可参考沈文飚：抗坏血酸过氧化物酶活性测定的探讨3 ml反应液中含50 mmol/L PBS, pH7. 0, 0. 1 mmol/L EDTA（或EDTA—Na2），0. 1 mmol/L H2O2，0. 5(或0.3) mmol/L AsA，最后加入适量酶液（20、50、100ul均可）启动反应，连续记录测定室温下290 nm吸收值的变化。

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小麦叶片生理指标测定

小麦叶片生理指标测定

小麦叶片生理指标测定一、种子处理：1、0.1%氯化汞浸泡小麦种子30分钟，进行消毒，小麦种子放在较大的培养皿中2、将氯化汞倒入废液瓶，注意必须戴两层手套，因为氯化汞剧毒，且用完的手套不能碰实验室里其它的任何东西，以防污染，最好把用完的手套放到DNA显色室中的废手套收集桶里；3、然后用无菌蒸馏水冲洗3遍以上4、最后用倒入适量无菌水（稍微让水浸没种子表面）进行种子萌发，每天换次新水。

二、小麦培养1、在种子发芽以后，在芽长1cm左右的时候，将种子放入用网缝好的塑料泡沫上，然后放入装有自来水的培养盒中2、大概三天左右的时间，将水倒掉，换上1/2 hoagland 营养液（配方见下面的附件），每三天换一次营养液。

三、小麦处理及指标测定1、小麦培养两周后，在两叶一心期，用适当PEG6000浓度的1/2hoagland营养液换掉原营养液，各设一个对照（即没加PEG6000的1/2hoagland营养液）2、每隔24h取一次样，在72h后复水（即将PEG6000溶液倒掉，换成新配的1/2hoagland 营养液）四、生理指标测定1、相对含水量测定⒈鲜重测定迅速剪取植物材料，装入已知重量的容器（或塑料袋）中，带入室内，用分析天平称取鲜重（FW）。

⒉饱和鲜重测定将称过鲜重的植物材料浸入水中，数小时后取出，用吸水纸吸干表面水分，立即称重；再次将材料放入水中浸泡一段时间后，再次取出，吸干表面水分，称鲜重，直到两次称重的结果基本相等，最后的结果即为饱和鲜重（SFW）。

若事先已知达到水分饱和所用的时间，则可一次取得饱和鲜重的测量定值。

⒊干重测定提前把烘箱打开，温度升至120℃。

把称过鲜重的植物材料装入纸袋中，放入烘箱内，120℃杀青10min，然后把烘箱的温度降到70℃左右，烘至恒重。

取出纸袋和材料，放入干燥器中冷却至室温，称干重（DW）。

⒋取得以上数据后，按公式相对含水量。

相对含水量=FW-DW/SFW-DW2、MDA含量测定一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。

植物生理生化指标测定

植物生理生化指标测定

小黑豆相关生理指标测定1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。

株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。

主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。

叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。

每个测6个重复。

2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。

总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。

测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。

可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）)蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。

丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。

检验科电生理常见检测与分析方法

检验科电生理常见检测与分析方法

检验科电生理常见检测与分析方法电生理学是医学检验科的一个重要分支，主要用于评估和诊断与神经和肌肉有关的疾病。

它通过测量神经传导速度、肌肉电活动和其他相关参数，为医生提供详尽的信息。

本文将介绍一些常见的电生理检测方法及其分析。

一、神经传导速度测定（Nerve Conduction Velocity, NCV）神经传导速度测定是一种电生理检测方法，用于评估神经传导功能是否正常。

它通过在神经上施加电刺激，并测量刺激所需的时间和距离，来确定神经传递信息的速度。

这一方法通常用于诊断周围神经病变，如末梢神经炎、坐骨神经损伤等。

在进行神经传导速度测定时，医生会在皮肤上放置电极，并施加适当的电刺激。

然后，通过计算刺激在神经上传播的时间和距离，得出神经传导速度。

二、肌电图（Electromyogram, EMG）肌电图是评估肌肉电活动的一种常见方法。

它通过检测肌肉的电活动，并将其信号转化为图形形式，来帮助医生判断肌肉功能是否正常。

肌电图可用于诊断和鉴别多种肌肉疾病，如肌无力、神经肌肉疾病等。

在进行肌电图检测时，医生会在患者的肌肉上放置电极，并记录下电活动的变化。

然后，通过分析记录的电信号，医生可以了解肌肉的收缩和松弛过程，从而作出相应的诊断。

三、脑电图（Electroencephalogram, EEG）脑电图是评估大脑电活动的一种常见方法。

它通过在患者的头皮上放置多个电极，并记录神经元电活动的变化，来帮助医生评估大脑功能。

脑电图可用于检测和诊断多种与脑电活动相关的疾病，如癫痫、睡眠障碍等。

在进行脑电图检测时，患者通常需要保持放松状态，并避免引发干扰信号的活动。

医生会在头皮上放置多个电极，并记录下脑电活动的变化。

通过分析记录的电信号，医生可以了解大脑各个区域的功能状态，从而做出相应的诊断。

四、视觉诱发电位（Visual Evoked Potential, VEP）视觉诱发电位是评估视觉系统功能的一种常见方法。

它通过对患者眼睛进行视觉刺激，并记录大脑皮层电活动的变化，来判断视觉信息处理的正常与否。

生理学实验神经干动作电位的测定

生理学实验神经干动作电位的测定

⽣理学实验神经⼲动作电位的测定实验四神经⼲动作电位的测定【实验⽬的】学习⽣物电活动的细胞外记录法；观察坐⾻神经⼲动作电位的基本波形、潜伏期、幅值以及时程。

【实验原理】神经组织属于可兴奋组织，其兴奋的客观标志是产⽣动作电位，即当受到有效刺激时，膜电位在静息电位的基础上将发⽣⼀系列的快速、可逆、可扩布的电位变化。

动作电位可以沿着神经纤维传导。

在神经细胞外表⾯，已兴奋的部位带负电，未兴奋的部位带正电。

采⽤电⽣理学实验⽅法可以引导出此电位差或电位变化，根据引导的⽅式不同，所记录到的动作电位可呈现单向或双向的波形。

由于坐⾻神经⼲是由许多神经纤维组成的，所以其产⽣的动作电位是众多神经纤维动作电位的叠加，即为⼀个复合动作电位。

这些神经纤维的兴奋性是不同的，所以在⼀定范围内增⼤刺激强度可以使电位幅度增⼤。

这和单⼀细胞产⽣的动作电位是有区别的。

本实验所引导出的动作电位即为坐⾻神经⼲的复合动作电位。

【实验对象】蛙或蟾蜍。

【实验材料】两栖类⼿术器械 1 套、滴管、BL-410⽣物机能实验系统、神经屏蔽盒、刺激电极、接收电极、任⽒液。

【实验步骤】1．制备坐⾻神经⼲标本坐⾻神经⼲标本的制备⽅法与制备坐⾻神经-腓肠肌标本相似。

⾸先按照制备坐⾻神经- 腓肠肌标本的⽅法分离坐⾻神经，当游离⾄膝关节处时，在腓肠肌两侧找到胫神经和腓神经，任选其⼀剪断，然后分离留下的⼀⽀直⾄⾜趾并剪断。

保留与坐⾻神经相连的⼀⼩段脊柱，其余组织均剪除。

此时，即制成了坐⾻神经⼲标本。

将标本浸于任⽒液中，待其兴奋性稳定后开始实验。

2．接标本与实验仪器1）棉球沾任⽒液擦拭神经标本屏蔽盒内的电极，将标本的脊柱端置于屏蔽盒的刺激电（图 4－1 屏蔽盒）极端（即 0刻度端），其神经部分横搭在各个电极上。

2）取出 BL-410 ⽣物机能实验系统专⽤刺激电极，将其插头插在与主机“刺激”插⼝中，另⼀端的两个鳄鱼夹分别夹在屏蔽盒左侧的两个刺激接⼝上。

红⾊接正极，⿊⾊接负极。