微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用
新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病（haemolytic
disease of the newborn），简称HDN。在我国，因ABO血型不合引起的新生儿溶血病较为常见，Rh血型不合引起的新生儿溶血病次之。新生儿溶血病严重时，可出现核黄疸，导致智力发育不全、脑瘫等后遗症。新生儿溶血病是严重影响新生儿健康的疾病。采用微柱凝胶技术对新生儿溶血病诊断的三项试验(直接抗球蛋白试验、抗体放散试验、血清游离抗体试验)的快速检出，更有利于临床及时对患儿的诊断和治疗。微柱凝胶技术（microcolumn get
Immunoassay）是目前国内外血型血清学检查方法之一。其设计理论先进，具有操作简单迅速、标本用量少、结果易判断、敏感性高和特异性强的优点。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器 试剂：DianaGeL coombs卡（每卡含8个微柱孔管），每个微柱孔管含低离子强度缓冲液（LISS）浸泡中的微粒筛，加上多价抗人球蛋白（兔多克隆抗IG和单克隆抗C3d克隆12011.D10）。
标准红细胞：0.8%O型筛查细胞（）批号：8004801 801001 801101 801201 900201 900101
900301 900401。0.8%A型细胞0.8%B型细胞 批号：8001801 8001901 8007801 8002501
900201 901001 900501 900601 901001。
Diasnvstic Grifols S.A卡：用于ABO、Rh血型、直接抗球蛋白试验，批号：50040101
60010101 80010201 80010301 80030101 80060201。
DianaGeL Coombs卡（抗人球卡）批号：80080101 80420101 80750101 81180101 81380101
微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程
一、目的
为规范ABO和RhD血型鉴定（微柱凝胶卡式法）的技术操作，保证鉴定结果准确即临床输血安全有效。
二、适用范围
适用于微柱凝胶卡式法进行ABO和RhD血型鉴定。
三、原理
红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。
四、步骤和方法
1，取微柱凝胶ABO血型鉴定检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
2，用微量移液器在A、B、D、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液，在Ac、Bc微孔中各加入受检者血清（血浆）50微升，再分别加入1%A、B型试剂红细胞悬液50微升。
3，将准备就绪的检测卡静止3分钟使其充分反应后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后，取出判断结果。
4，判断标准如下表
阳性 4+ RBC绝大部分凝聚于凝胶表层
3+ RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层
2+ RBC部分沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中
1+ RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中
+/- RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底
dcp 混合凝集外观，部分RBC凝集颗粒位于凝胶表层，部分RBC沉于胶底
PH 部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留RBC
H 完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无RBC
阴性 — RBC全部沉积于胶底
结果判读：如Ctrl微孔为阴性：A、B、D各微孔阳性表明受检红细胞表达相应抗原，Ac、Bc微孔阳性表明受检者血清（血浆）存在抗-A或者抗-B；若各微孔阴性，则结果相反；结合反应格局判读血型结果。若Ctrl微孔为阳性，结果不可信，重新试验。
交叉配血试验标准操作规程
（微柱凝胶抗人球蛋白法）
1. 目的
为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。
2. 适用范围
适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。
3. 职责
医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。
4. 原理
红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。
5. 所需设备和试剂
普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡
6. 检测环境条件
室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。
7. 操作步骤
7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。
7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者 0.5% 红细胞LIM悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。
7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min,2500r/min离心1min。
7.4取出，判定结果，结果判定标准按下表：（可参照结果判定示图）
阳性 4+ 表示RBC绝大部份凝聚于凝胶表层
3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层
2+ 表示部份RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中
1+ 表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中
± 表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RCB凝集颗粒悬浮于近胶底
微柱凝胶免疫检测技术在临床血型鉴定与输血中的应用分析
摘要：目的：分析微柱凝胶免疫分析在临床血型鉴定和输血中的应用价值。方法：选择2021年1月至2022年6月在我院输血科住院的60例患者为研究对象，抽取患者静脉血进行分析。分别进行血型鉴定和输血试验。血型鉴定采用微柱凝胶法、盐水管法，输血前交叉配血试验采用微柱胶法和多胺法。比较不同检测方法的血型鉴定和输血结果。结果：微柱凝胶法与盐管法阳性分型与阴性分型符合率无显著性差异（P>0.05），与多胺法相比，微柱凝胶交叉配型成功率显著提高（P<0.05），结论：微柱凝胶法可用于临床患者的血型鉴定和交叉配血，成功率高，具有较高的灵敏度、特异性和准确性。
关键词：微柱凝胶免疫检测技术；临床血型鉴定；输血；应用
1资料与方法
1.1一般资料
本研究以2021年1月—2022年6月医院输血科收治的60例患者为对象，男性36例，女性24例；年龄19～62岁，平均（42.50±3.26）岁；病程1～12个月，平均（6.50±0.50）个月；体质量52～80kg，平均（60.50±1.25)kg；身体质量指数（bodymassindex,BMI)18～28kg/m2，平均（22.50±1.50)kg/m2；血型：A型15例，B型20例，AB型20例，O型5例。所有患者均采集静脉血进行微柱凝胶检验，资料齐全，可进行后续分析。研究经医院伦理委员会批准。
1.2方法
血型鉴定：（1）微柱凝胶检验技术：取患者静脉血3mL，采用全自动生化分析仪（济南爱来宝医疗科技公司，BK600）进行高速离心处理，分离血浆、红细胞。室温保存血型鉴定卡，制作5%红细胞悬液，悬液制作完成后取10μL倒入微孔管进行正定型处理；反定型处理：准备10μL5%浓度A型标准红细胞、B型标准红细胞，与50μL血浆共同加入微孔板，离心处理后快速读取结果。（2）盐水试管法：所有血液样本离心处理，参照相应的国家标准进行血型鉴定。正定型处理：将2滴抗血清滴入5%的红细胞悬液中，完全摇匀后高速离心处理15s，设置转速3000r/min，处理完成后观察并记录结果。反定型处理：抽取2滴血液样本血清，加入1滴红细胞混悬液到血清中，完全摇匀后高速离心处理15s，设置转速3000r/min，处理完成后观察并记录结果。设置阴性对照管，排除冷凝集。
