微柱凝胶法血型鉴定操作规程

血型鉴定（微柱法ORTho）

1.目的：为了进一步提高ABO和RH血型鉴定的检测水平，以最大程度保障临床输血的安全

性。

2.适用范围：适用于目前输血科所有血型检测标本。

3.职责：输血科主任负责对该标准化操作规程监督执行。

4.原理

要确定红细胞是否包含或缺少A和/或B血型抗原，须使用抗A和抗B试剂进行检测。

红细胞中缺少A和/或B血型抗原的正常成人个体，通常在其血清中含有相应的抗体。ABO

输血不相容存在潜在的严重后果，因此必须对输血接受者和献血者进行可靠测试，以确认是

否存在A和B抗原、红细胞ABO定型的结果通过使用已知的A1和B试剂红细胞进行反定型

（血清）检测加以确认。

D抗原能够在缺乏D抗原的人体内刺激产生抗D抗体。抗D是一种能够导致红细胞损坏

的具有重大临床意义的抗体，可能会引起新生儿溶血病（HDN）和输血反应。因此，在进行

输血和抗D免疫球蛋白治疗中选择血液时，通常会抗虑D抗原测定

使用这些试剂的操作步骤基于柱凝集原理。若存在对应于抗原的抗体，则包含抗原的正

常人红细胞将会凝集。ORTho BioVue血型诊断系统采用柱凝集技术，柱内有玻璃珠和试剂。

在添加红细胞并随后离心试剂卡之后，凝集的红细胞被玻璃珠阻挡在微柱上端，而未凝集的

红细胞则穿过玻璃珠到达微柱底部。

5标本

5.1标本种类：新抽取的抗凝血

5.2标本要求：

5.2.1 抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝

5.2.2 采血量：至少不低于3ml的静脉血（加入试管后注意与抗凝剂混匀）

5.2.3 离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟

5.3 标本采集要求

5.3.1 采血时，一定要认真核对病室、床号和病人姓名，无误后再抽血。

5.3.2 血标本容器要清洁干燥并事先贴好标签，加血标本前要认真核对、无误后再将血液注

入。

5.3.3 血标本标签填写必须与申请单上的病人姓名、科别、床号、编号完全一致。

・　５７６　・　山西医药杂志２０１３年５月第４２卷第５期下半月　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．５　ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　

１．４检测方法　各取２　Ｌ上清加入ＰＣＲ反应管中扩增，条件为９３℃　

２　ｒａｉｎ，９３℃４５　ｓ一５５℃６Ｏ　ｓ一１Ｏ个循环，９３℃３０　ｓ一５５　

℃４５　ｓ一３Ｏ个循环。　

１．５结果判定　若增长曲线不呈ｓ型或Ｃｔ值一３０，判定为＜５．０　Ｘ　１０　

拷贝。　

１．６统计学方法　

采用ｙ　检验进行统计学分析，以Ｐ＜ｏ．０５为差异有统　

计学意义。　

２结　果　通过用ＲＴ—ＰＣＲ法对２２５例来本院就诊的女性患者进　

行血清、尿液、宫颈分泌物的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检测，血清ＨＣ—　

ＭＶ－ＤＮＡ阳性１例，阳性率０．４　；尿液ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性　

４例，阳性率１．７　；宫颈分泌物阳性３例，阳性率１．３　（　

一６．７５，Ｐ＜０．０５）。　

３讨　论　ＨＣＭＶ具有潜伏活化的生物学特性［４］，通常呈隐性感　

染，感染后临床缺乏特异性表现，但在一定条件下侵袭多个　

器官和系统可产生严重疾病。先天性感染可通过激活小胶　

质细胞，诱导神经细胞凋亡等多种途径使神经系统发育异　

常，导致儿童出现先天性畸形、智力低下、发育迟缓等中枢　

神经系统疾病。后天人体感染ＨＣＭＶ后，可以引起冠状动　

脉内皮功能损害，诱发冠心病、高血压、动脉硬化、消化性溃　

疡等疾病¨４］。　

目前，ＲＴ—ＰＣＲ法是测定巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染较　

常用的方法。ＰＣＲ法通过严格设计引物序列，控制反应条　

件以及扩增参数，对核酸（ＤＮＡ或ＲＮＡ）的感染状况进行　

分子水平的研究与分析，其灵敏性与特异性很高。本文就　

２２５例本院就诊的女性患者采用ＲＴ—ＰＣＲ法对不同标本的　

ＨＣＭＶ－ＤＮＡ进行检测。尿液和分泌物ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的检　

测阳性率均比血清ＨＣＭＶ—ＤＮＡ高。　

ＨＣＭＶ为细胞内寄生，在健康携带者的外周血中，被　

潜伏感染的细胞所占的比例很少，仅为０．００４　～０．Ｏ１　，　

ABO、RHD血型抗原正定操作规程

[样本要求]：血样最好用枸橼酸、EDTA或抗凝，用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。

[样本准备]：红细胞标本的制备：配制0.5%－1%红细胞生理盐水悬液。

试剂卡室温平衡。

[配套试剂]：ABO、RHD血型抗原正定型卡

[实验步骤]:

(1)将微柱凝胶试剂卡的3个凝胶管标号；

(2)将待检者0.5%－1%红细胞悬液分别加入A、B、D管,每管50UL;

(3)使用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟、1500r/min，3分钟），判定结果。

[结果判定]：

一、阳性（+ ）：红细胞浮在凝胶表面或部分散入于胶中。

阴性（－）：红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。

溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。

二、微柱凝胶免疫检测ABO、RHD血型判定

血 型 抗A 抗B 抗D

D

阳

性 A抗原 + - +

B抗原 - + +

O抗原 - - +

AB抗原 + + +

D

阴

性 A抗原 + - -

B抗原 - + -

O抗原 - - -

AB抗原 + + -

可编辑

--------------------------------------------------------------------- 新生儿溶血病检测操作SOP

一、 产前诊断

1.夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh(D)血型定型检测卡）

1.1将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；

1.2撕开微胶卡的封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1% 待检 RBC生理盐水悬液各50μl；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入1.0% A1、B、O型试剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50μl，再分别加入待检血浆（血清）50μl；

1.3将检测卡室温反应≥10 min,取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min离心；

1.4取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。

按下表检验结果判定ABO、RhD血型：

检验结果

ABO、RhD血型判定

兰A 黄B 灰D Control

（待检RBC） A1 B O Control

（血浆与自身RBC）

+ - +或- - - + - - A型RhD（+或-）

- + +或- - + - - - B型RhD（+或-）

- - +或- - + + - - O型RhD（+或-）

+ + +或- - - - - - AB型RhD（+或-）

2.孕妇抗体效价的测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）

2.1孕妇IgG(抗A/抗B)效价

2.1.1取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各0.2ml，充分混匀，37℃水浴2小时（以充分破坏血清中的IgM类抗体）。

2.1.2取4支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中和血清和1.6毫升低离子介质（原液为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的64倍）。

2.1.3 第2－4管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。