苏云金杆菌菌株的毒力比较及筛选
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苏云金芽胞杆菌6618杀虫菌株的分离和鉴定张晨;黄菲;陆秀青;谢俊雁;丁学知;夏立秋;孙运军【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2015(000)004【摘要】从我国不同地区采集118份土样,利用温度筛选法分离获得一株苏云金芽胞杆菌( Bacillus thuringien-sis,简称Bt)6618,镜检观察发现该菌株能产生典型的菱形晶体,PCR分析表明其含有cry1类杀虫基因。
采用SDS-PAGE和质谱分析发现该菌株主要产生130 kD原毒素,其组分由Cry1Ae和Cry1Ac原毒素组成。
基因序列分析表明该菌株的cry1 Ac基因为已知的 cry1 Ac1,而 cry1 Ae为新型杀虫基因。
毒力生测表明该菌株对棉铃虫( Helicoverpa armigera)幼虫具有显著的杀虫效果。
筛选获得的高毒力Bt菌株6618为丰富我国苏云金芽胞杆菌储备和研发新型高效生物杀虫剂提供了菌株资源。
%118 soil samples were collected from different parts of our country and a new Bacillus thuringiensis strain 6618 was isolated by temperature screening method. This strain could produce typical bipyramidal crystal under micro-scope observation. PCR analysis showed that it contained cry1-type gene. SDS-PAGE analysis indicated that this strain expressed a major protein band about 130 kD, which was verified by mass spectrometry analysis to be the products of Cry1Ae and Cry1Ac protoxins. Sequence analysis showed that the cry1Ac gene in this strain was identical to the pub-lished cry1Ac1 gene, while the cry1Ae gene was found to be different from the known gene. The crystal-spore mixture of the strain 6618 exhibited high toxicity towards the larvae of Helicoverpaarmigera. The isolated Bacillus thuringiensis strain 6618 with high toxicity will not only enrich the reserve of Bacillus thuringiensis strains of our country, but also pro-vide resource for the development of new efficient biological pesticide.【总页数】5页(P373-376,399)【作者】张晨;黄菲;陆秀青;谢俊雁;丁学知;夏立秋;孙运军【作者单位】湖南师范大学生命科学学院,湖南长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,湖南长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,湖南长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,湖南长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,湖南长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,湖南长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,湖南长沙410081【正文语种】中文【中图分类】Q939.1【相关文献】1.几株具有杀虫特异性的苏云金芽胞杆菌菌株的生物活性及杀虫蛋白基因型的鉴定[J], 李青;刘华梅;丁咏梅;陈振民;宋福平;张杰2.苏云金芽胞杆菌V4菌株cry杀虫基因的鉴定、表达及杀虫活性分析 [J], 何宝楠;李海涛;刘荣梅;王博;高继国3.苏云金芽胞杆菌4.0718菌株中杀虫晶体蛋白基因的定位及鉴定 [J], 付祖姣;孙运军;夏立秋;丁学知;胡胜标;李文萍;张友明4.煤矿中苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株的分离及其鉴定 [J], 林白容;章秋萍;王毅斌;关雄5.苏云金芽胞杆菌SG3-7菌株的鉴定及杀虫活性研究 [J], 关鹏; 代小娟; 秦培刚; 宋金东; 贺志有因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
苏云金杆菌H3-111菌株防治舞毒蛾毒性试验
吴洪生;许钟明;陈佳宏;赵南海
【期刊名称】《东北林业大学学报》
【年(卷),期】2002(030)005
【摘要】采用苏云金杆菌H3-111菌株摇瓶培养液对舞毒蛾进行了室内毒力测定,48 h毒力回归方程为y=4.4220+1.6311 X,γ=0.965 2,LC50=0.000045 2,与标准品比较,其生物效价为2 766.04IU@mg-1,大田试验菌液稀释200~600倍,96 h防效达61.1%~83.8%,有较高的毒效,有必要进一步扩大试验,以明确其防治舞毒蛾的实用价值.
【总页数】2页(P86-87)
【作者】吴洪生;许钟明;陈佳宏;赵南海
【作者单位】扬州市农业科学研究所,扬州,225007;扬州市科委;扬州市环境监测站;扬州逸仙科技开发有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S482.7;S630.8
【相关文献】
1.苏云金杆菌H3136菌株与化学农药防治小菜蛾比较试验 [J], 吴洪生;刘怀阿;陈佳宏;赵南海
2.苏云金杆菌H3136菌株防治菜青虫、小菜蛾试验 [J], 吴洪生;刘怀阿;赵南海
3.苏云金杆菌H3-111菌株对蓑蛾的毒效 [J], 吴洪生;许钟明;赵南海
4.苏云金杆菌H3-111菌株对刺蛾的毒效 [J], 吴洪生;陈佳宏;石光辉;赵南海
5.苏云金杆菌H3-111菌株对黄刺蛾的毒效试验 [J], 吴洪生;刘怀阿;赵南海
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苏云金杆菌H3-111菌株对蓑蛾的毒效
吴洪生;许钟明;赵南海
【期刊名称】《哈尔滨商业大学学报(自然科学版)》
【年(卷),期】2003(019)002
【摘要】通过苏云金杆菌H3-111菌株摇瓶培养液对蓑蛾进行室内毒力测定,48 h 毒力回归方程为y=4.194 0+3.318 5x,r=0.953 1,LC50=0.000 025 7,与标准品比较其生物效价为4 862.93 IUmg-1,有较高的毒效;同时经大田试验表明BtH3-111菌株防治蓑蛾高峰期在药后72~96 h,稀释500~1 000倍的防效达92.46%~95.15%,超过化学农药DDVP的最高防效(85.07%),可替代化学农药用于蓑蛾的防治中.
【总页数】3页(P248-249,225)
【作者】吴洪生;许钟明;赵南海
【作者单位】扬州市农业科学研究所,江苏,扬州,225007;扬州市科技局,江苏,扬州,225000;扬州逸仙科技开发有限公司,江苏,扬州,225007
【正文语种】中文
【中图分类】S482.7;S630.8
【相关文献】
1.苏云金杆菌H3-111菌株防治舞毒蛾毒性试验 [J], 吴洪生;许钟明;陈佳宏;赵南海
2.小菜蛾作供试虫生物测定苏云金杆菌制剂毒效的研究 [J], 吕淑珉;邝明真;钟启超;
马冬梅;彭中允;
3.苏云金杆菌H3-111菌株对刺蛾的毒效 [J], 吴洪生;陈佳宏;石光辉;赵南海
4.苏云金杆菌H3-111菌株对黄刺蛾的毒效试验 [J], 吴洪生;刘怀阿;赵南海
5.苏云金杆菌敏感性菌株对苹掌舟蛾的毒效试验 [J], 汤勇华
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科普:苏云金杆菌
苏云金杆菌
即苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)被发现已有100 年的历史,其在害虫防治中发挥了巨大的作用,是近年来研究最深入、开发最迅速、应用最广泛的微生物杀虫剂。
苏云金杆菌的防虫原理是其菌株可产生内毒素(伴胞晶体)和外毒素两类毒素,使害虫停止取食,害虫均因饥饿、血液败坏和神经中毒而死。
应用领域
苏云金杆菌适用对象非常广泛,可应用于十字花科蔬菜、茄果类蔬菜、瓜类蔬菜、烟草、水稻、玉米、高粱、大豆、花生、甘薯、棉花、茶树、苹果、梨、桃、枣、柑橘、香蕉、芒果、荔枝等多种农作物及森林、草原。
苏云金杆菌杀虫谱较广泛,主要用于防治鳞翅目害虫幼虫,如菜青虫、小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、甘蓝夜蛾、烟青虫、玉米螟、稻纵卷叶螟、二化螟、松毛虫、茶毛虫、茶尺蠖、玉米粘虫、豆荚螟、银纹夜蛾等多种害虫幼虫,部分亚种或菌株对根结线虫、蚊幼虫、韭蛆、甲虫等害虫也有一定防治作用。
注意事项
1.苏云金杆菌在气温较高时(20℃以上)才能充分发挥作用,所以在7~9月份应用效果最好;施药适期一般比使用化学农药提前2~3天为宜。
2.对稻纵卷叶螟、玉米螟、造桥虫、松毛虫和茶毛虫等都有效,但对大螟等效果较差。
3.对蜜蜂低毒,但对家蚕和蓖麻蚕有剧毒,应严格控制,不可在养蚕的地区使用。
若桑叶沾上菌粉时,要用0.2%漂白粉杀菌,洗净、晾干后再喂用。
4.不可与杀菌剂混用。
5.宜密封、遮光,在阴凉、干燥处保存,并且要防鼠咬。
快速筛选苏云金杆菌高毒力菌株的有效方法
蔡峻;王飞;任改新
【期刊名称】《中国生物防治学报》
【年(卷),期】2003(019)004
【摘要】对7株苏云金芽孢杆菌菌株进行了cry1基因检测、晶体形态观察、晶体蛋白SDS-PAGE以及杀虫活性检测.结果表明,综合菌株的PCR结果、晶体形态和晶体蛋白图谱结果可以预测其杀虫特性.根据菌株预测的杀虫特性进行有目的的生物测定,可以快速、准确地筛选到对特异害虫具高毒力的菌株.
【总页数】4页(P185-188)
【作者】蔡峻;王飞;任改新
【作者单位】南开大学生命科学学院微生物系,天津,300071;南开大学生命科学学院微生物系,天津,300071;南开大学生命科学学院微生物系,天津,300071;天津市农业生物技术中心
【正文语种】中文
【中图分类】S476.11
【相关文献】
1.对甜菜夜蛾高杀虫毒力苏云金杆菌菌株的筛选及cry2Ah5的克隆表达 [J], 张雅昆;赵丹;郭巍;王伟;陆秀君;李瑞军
2.对甜菜夜蛾高杀虫毒力苏云金杆菌菌株的筛选及cry2Ah5的克隆表达 [J], 张雅昆;赵丹;郭巍;王伟;陆秀君;李瑞军;
3.对草地贪夜蛾高毒力的苏云金杆菌菌株筛选 [J], 刘华梅; 李青; 胡虓; 王应龙; 杨
普云; 束长龙; 朱晓明; 张杰; 孙刚忠; 张晓明
4.对草地贪夜蛾高毒力的苏云金杆菌菌株筛选 [J], 刘华梅; 胡虓; 王应龙; 杨普云; 束长龙; 朱晓明; 张杰; 孙刚忠; 张晓明; 李青
5.对草地贪夜蛾高毒力的苏云金杆菌菌株筛选 [J], 刘华梅;胡虓;王应龙;杨普云;束长龙;朱晓明;张杰;孙刚忠;张晓明;李青
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江苏农业科学2001年第5期文章编号:1002—1302(2001)05一0038一03苏云金杆菌菌株的毒力比较及筛选
徐健1,苏建坤1,朱锦磊1,许秋香2,胡春霞2(1.江苏里下河地区农业科学研究所,扬州225002}2.扬州大学农学院)
摘要:苏云金杆菌生产菌株对小菜蛾毒力差异显著,采用分离筛选、接种复壮等方法筛选的粉3—20、虫1—61、虫1—63、虫2—23等4个菌种较生产菌种Yz一3毒力提高了3%~35%。关键词:苏云金杆菌;毒力筛选;菌株中图分类号:¥482.3+9文献标识码:B
苏云金杆菌(Bacfflusthuringiensis)属细菌性生物杀虫剂,广泛应用于农业、林业、卫生等害虫防治[1]。其杀虫效果主要依赖生产菌种的毒力和发酵控制[2]。筛选高毒力菌株、提高杀虫作用成为苏云金杆菌深入研究的主要目标。本试验就16种苏云金杆菌生产菌株进行了毒力比较,并采用菌株分离、提纯、复壮等方法,选育对蔬菜重要害虫小菜蛾高毒力的菌株。1材料与方法1.1试验材料1.1.1菌种Yz一3等16种毒力比较菌株,为江苏里下河地区农科所筛选的生产菌株。分离筛选的苏云金杆菌来源于广州的菌土和病虫。1.1.2试虫生测昆虫为采自广州菜田的小菜蛾,在27±0.5℃、相对湿度80%、光照强度20001x的恒温昆虫饲养室内繁殖2~3代后,选3龄初期的幼虫待测。1.1.3培养基斜面培养基:牛肉膏5%,蛋白胨lo%,氯化钠0.3%,琼脂1.8%;摇收稿日期:2001—06—12基金项目:江苏省农业科学院基金(6219706)。作者简介:徐健(1968一),男,江苏扬州人,助理研究员,主要从事生物农药应用研究。瓶及发酵罐培养基:豆饼粉4.5%,淀粉2%,玉米粉2.0%,硫酸镁0.1%,碳酸钙0.1%,磷酸二氢钾0.1%。1.2试验方法1.2.1菌株毒力的比较以小菜蛾为靶标试虫,采马生物测定的方法[3],测定16种不同生产菌株的LC。。,比较不同菌株间的毒力水平差异。1.2.2新菌株的选育采用平板划线法分
离菌土和病虫内的苏云金杆菌菌株,通过抗性小菜蛾接种感染等方法复壮,初筛优势单菌落,多代摇瓶观测菌株生长情况,并以广州抗性小菜蛾为测试昆虫,测定摇瓶毒力、,与生产菌株毒力比较,确定菌株毒力水平。i.2.3中试发酵试验选用lOt发酵装置进行中试发酵试验,进一步验证筛选新菌株发酵毒力水平。
2结果与分析2.1生产菌株的毒力对不同生产菌株的毒力测定结果表明,苏云金杆菌不同生产菌株对小菜蛾的毒力大小差异显著。其中毒力最低的为89—14,LC。。高达11009tA/ml,毒力指数为0.25(表
1)。根据测定结果,初步明确以毒力较高的菌株Yz一3作为新筛选的参照相,确定筛选菌株的毒力水平。
万方数据徐健等:苏云金杆菌菌株的毒力比较及筛选~39—2.2新菌种的筛选2.2.1F。代初筛结果经过分离、感染复壮后,平面划线,挑选出生长整齐、菌落厚实光滑的单菌落66个。摇瓶观测生长情况,并以摇瓶样稀释200倍、500倍测定对小菜蛾的毒杀效果,从中选择500倍死亡率50%以上的菌株有5株。分别为Yz一0—8、粉3—20、虫1—61、虫1—63、虫2—23。并以Yz一3菌株为对照,进一步测定LC∽测定结果列于表2。表25株新菌株F-代初筛毒力及生长特点
从表2可以看出,初筛的5个菌株对小菜蛾都有较好的毒杀效果,与生产菌种Yz一3相比,Yz一0—8毒力提高达30%,粉3~20提高24%。2.2.2菌株稳定性测定对初步筛选的5个菌株仍以Yz~3菌种为对照,进行F。代稳定性摇瓶试验,毒力测定结果列于表3。裹35株初筛菌株Fz代摇瓶稳定性菌株Yz一3Yz一0—8粉3—20虫2—23虫1—61虫1—63LCso(t-d/m1)184627461368173115961785毒力指数10.671.351.071.161.03较F1增(%)一938.12.819.712.4测定结果表明,Yz一0—8菌株F。代毒力显著下降,毒力指数变化达~93%,毒素蛋白F。代呈棱形大晶体,F。代突变为不规则小晶体蛋白,说明Yz一0—8菌株毒素遗传不稳定,变异性较大。而另外4株筛选菌株F。代与F,代毒力指数变化不大,在2.8%~19.7%之间,遗传稳定性好,且较对照菌种Yz一3毒力提高了3%~35%,确定为新菌种进行中试验证。对这4种新菌种的进一步观察发现,菌种的生长适应性较好,在常规细菌培养条件下,适宜pH值范围为6.8~8.0,最适温度为31~33℃。2.3中试发酵选择新筛选菌株粉3—20作为中试发酵菌种,以Yz一3为中试对照菌种。同期连续各4批发酵水平生测结果列于表4。中试结果表明,粉3—20发酵水平稳定,毒力高,毒力指数较对照菌种Yz一3高21%,是生产苏云金杆菌制剂的理想菌株。
万方数据一40一江苏农业科学2001年第5期
3讨论苏云金杆菌各基因编码的杀虫特异性及菌种的分离、变异形成不同菌株或同一菌种不同菌株间杀虫毒力差异变化[2]。运用细菌遗传突变原理,可以定向筛选高毒力、多效性的Bt特异性菌株。通过分离培养、接种复壮等手段,可以筛选高毒力的苏云金杆菌菌株,有效提高菌种生产水平。虽然运用现代生物技术,进行不同亚种毒蛋白基因的杂种基因的构建,为新型Bt工程菌的筛选提供了可能,但通过分离筛选、理化生物诱变等手段培养高毒力、广谱性Bt菌株仍作为微生物菌种筛选的主要方法被广泛运用。
参考文献:[1]喻子牛主编.苏云金杆菌[M].jE京:科学出版社,1990.[2]陈涛.有害生物的微生物防治原理和技术[M].武汉:湖北科学技术出版社,1995.[3]陈涛,等.生物农药检测及其原理[M].北京:农业出版社,1993.
(上接第37页)对照泰山1号分别为15.7%、36.6%和93.3%,抗性对照丰产3号分别为0、13.3%和28.6%,表明镇麦3号中抗穗发芽。3.2.3耐寒性及抗倒性镇麦3号春性较强,耐寒性弱。植株矮,茎秆粗,茎壁厚,抗倒性强。3.3品质经南京经济学院检测中心检测,镇麦3号出粉率65.0%,粗蛋白(干基)含量13.9%,湿面筋含量37.2%,沉降值47ml,降落值343s,面团稳定时间3.Imin。符合1993年原商业部颁布的馒头专用小麦粉质量标准。3.4适宜种植区域镇麦3号适宜在我省淮南麦区的中南部、中高产、无梭条花叶病地区种植。4栽培技术要点4.1适期迟播,防冻害该品种春性偏强,耐寒性弱,切忌早播,应适期迟播。适宜播期为10月25日至11月上旬,最佳播期为10月底至立冬前。4.2酌增播量,争足穗该品种高产栽培每亩基本苗以15±(2~3)万苗为宜,其中高肥地区以12~13万苗,中低肥地区以17--一18万苗为佳。4.3足肥运筹,确保优质高产该品种每亩施用纯氮可在20kg左右,并搭配施用磷钾肥。高产优质栽培的肥料运筹在注重基苗肥的基础上,还必须重视拔节肥和孕穗肥的施用。一般亩用40~50kg复合肥加10kg尿素作基肥;用10"--15kg尿素在1叶1心时早施苗肥;基部第一节间定长时,用8~lOkg尿素搭配适量钾肥施好拔节肥;剑叶露尖时用3~5kg尿素施好孕穗肥。4.4适时防治病虫草害播种出苗后抢时抢墒做好化学除草工作;对赤霉病和纹枯病要树立以防为主、以治为辅的思想,而对白粉病应立足于治,切实做好病虫草害的防治工作。
万方数据苏云金杆菌菌株的毒力比较及筛选作者:徐健, 苏建坤, 朱锦磊, 许秋香, 胡春霞作者单位:徐健,苏建坤,朱锦磊(江苏里下河地区农业科学研究所,扬州,225002), 许秋香,胡春霞(扬州大学农学院)刊名:江苏农业科学
英文刊名:JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES年,卷(期):2001(5)被引用次数:3次
1.喻子牛 苏云金杆菌 19902.陈涛 有害生物的微生物防治原理和技术 19953.陈涛 生物农药检测及其原理 1993
1. 李秀丽.王立安.贾银锁.马春红 玉米小斑病菌C小种复壮培养基的筛选及检测[会议论文]-20082. 张红燕 平菇孢子分离复壮技术[期刊论文]-食用菌2003,25(3)3. 刘仲汇.周万里.毕春元.冯德荣.徐英普.霍新国 发酵在线pH温度智能控制系统在发酵工业中的应用[期刊论文]-食品与发酵工业2004,30(9)4. 简易菇类菌种复壮法[期刊论文]-内江科技2001(6)5. 张志焱.徐海燕.吕明霞.杨军方.曹斌 产纤维素酶黑曲霉菌种的复壮[期刊论文]-饲料博览2006(5)6. 刘衍芬.高学军.张明辉.葛增广 DVS乳酸菌种菌株保存过程中遗传稳定性分析[期刊论文]-中国乳品工业2005,33(1)7. 王莉莉 谈药品检验中实验菌种的保存与管理[期刊论文]-国际医药卫生导报(综合版)2005(17)8. 韩丽丽.赵秦.涂振东.叶凯.刘敏 酵母菌种的复壮研究[会议论文]-20089. 朱天辉.杨佐忠 枯草芽孢杆菌菌种退化及其控制[期刊论文]-西南林学院学报2000,20(1)10. 柏芳青.BAI Fang-qing 曲霉菌株的保藏与复壮[期刊论文]-中国调味品2007(9)
1.李今煜.黄天培.潘洁茹.洪永聪.黄志鹏.关雄 苏云金芽胞杆菌不同分化发育时期总RNA的有效分离[期刊论文]-中国农学通报 2008(2)2.白和盛.刘琴.陆玉荣.苏建坤.张春梅.吉春明 防治水稻纵卷叶螟高毒力Bt新菌株的选育与应用[期刊论文]-江苏农业科学 2009(2)3.徐健.刘琴.殷向东.祁建杭.秦启联 新型生物农药病毒增强Bt的研制与应用效果[期刊论文]-江苏农业科学2006(3)
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