菌种毒力试验方法

ａ ｄ Ｍ ａ ｓｒ ｒ ｓ ｉａ （ ．Ｔｈ ａ ｕ ｓ ｏ ． ０ ｗａ ． １ １ ｃ ｎｄ ａ・ｍｌ ｎ ｍｅ ｔ ａ ｂ ａ ｓｔ ｅ Ｉ） ‘ ｅ ｖ ｌ ｅ ｆＩ ｓ ８ ７ × ０ ｏ ｉ ｉ Ｃ５ ’ａ ａ ｎ ｔｔ ｅ ｐ ａ ｈ ａ ｈ ｄ ａ ｄ ｗａ ． ｇ ｉ ｓ ｈ ｅ ｃ ｐ ｉ ｎ ｓ ９ ６× １ ０
ｃ ｉ ａ ・ｍ ｌ ｏｎｄｉ ：’ａ ｄ ．８１× １ ｃ ｉ ｉ ・ ｍ Ｉ ｎ １ ０ ｏｎ ｄａ ：’ａ ａｉｓ ｔ ａ ａ ａｔｒ ｌａ ｎ ２～ ３ ａ ｖａ ． ｇ ｎ ｔ ｈｅ ｃ ｂｂ ｇｅｃ ｅ ｐｉｌｒｉ ｌｒ ｅ
Ｋｅ ｒ ｓ ｙｗｏ ｄ ：Ｐａ ｃｌｍｙ ｅ ｕ ｓｒ ｓｕ ９ ０ ｅ ｉｏ ｃｓｆ ｍｏ ｏ ｏｅ ｓＰＦ ６ ６；Ｖｉｕｅ ｃ ；Ｇｒｅ ｅｃ ｐ ｉ；Ｃａ ｂ ｇ ａｅｐｌ ｒ ｒ ｌｎ ｅ ｅｎ ｐ ａｈ ａ ｈｄ ｂ ａ ｅｃ ｔｒ ｉａ ｌ
器搅 拌 均 匀 ，纱 布 滤 去 菌 丝 ，制 成 孢 子 悬 浮 液 ，并 用 血 球 计 数 板 测 定 孢 子 浓 度 。作 为 生 测 供 试 菌 液 ， 浓 度 控 制 在 ２×
张 仙 红 ，嵇 能 焕
（ ． 山西 农 业 大 学 农 学 院 ， 山西 太 谷 ０ ０ ０ ；２ 山 西 省 泽 州 县 农 业 局 ， ｔａ １ ３８ １ ． ｈ ｉ泽 州 ０ ８ ０ ） ４ ０ ０
摘 要 ： 采 用 喷 雾 法 和 浸 蘸 法 ，进 行 了玫烟 色拟 青 霉 Ｐ ９０ Ｆ ６ ６菌株 对 桃 蚜 和 菜 青 虫的 毒 力 测 定 。 结 果 表 明 ：玫 烟 色 拟 青 霉 Ｐ ９０ Ｆ ６ ６菌株 对 桃 蚜 和 菜青 虫 ２ 、３龄 幼 虫有 较 强 的致 病 力 ， 在 ２ ０ ～ ２ １。孢 子 ・ｍＬ’ 度 范 围 内， 随 着 浓 度 的 ×１ × ０ 浓

不同真菌菌株对蛴螬的毒力测定作者：章骏来源：《安徽农学通报》2014年第13期摘要：选择几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定。

结果表明，绿僵菌Ma1较其它菌株校正累积死亡率最高，致死速度最快，平均累计校正死亡率达62.50%，LT50为10.31d，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

关键词：绿僵菌；蛴螬；防治；毒力测定中图分类号S476.1文献标识码A文章编号1007-7731（2014）13-29-02蛴螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龟甲幼虫的总称，是我国地下害虫分布最广、为害最重的一类害虫，主要为害花生、大豆、麦类、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多种大田作物，以及一些中药材等，其中以为害花生较为严重，严重时造成作物颗粒无收［1］。

长期以来，主要依赖化学农药防治该害虫，易使其产生抗性，并且造成土壤中农药残留，导致作物产品农药含量超标，使花生有异味，影响到出口创汇及人体健康。

为此，笔者选用几种真菌的不同菌株及其混合物，分别对蛴螬进行毒力测定，以期筛选出对蛴螬具有高毒力的菌株。

1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 供试虫源蛴螬幼虫是5月上旬从安徽省庐江县采集的越冬幼虫，室内饲养数天，挑选大小均匀且健康的个体备用。

1.1.2 供试菌种菌种为安徽农业大学植保学院生防研究室储存菌种，编号分别为Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 试验方法1.2.1 菌剂的制备培养采用萨氏葡萄糖酵母浸膏培养基（SDAY）、蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PPDA）和察氏琼脂培养基培养（Czapek），置于光照培养箱内26℃下恒温培养15d后，放入冰箱低温（4℃）保存备用。

用无菌的塑料药匙将真菌的分生孢子粉刮到一个干净的盛有10mL0.05%Tween-80润湿剂的三角瓶中，在涡旋振荡器上充分振荡（10min左右），然后按比例稀释，经血球计数板测定每mL孢子数，通过计算把各菌的孢子悬浮液浓度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以测定致死中时（LT50），比较各菌种间的毒力［2］。

生长速率测定法注意事项：
1）带毒培养基的制作
应先加药液再加培养基（1：9）； 对一些受热易分解的药剂则要待培养基 冷却到50度左右时再加入。
2）接种病原菌
如果是菌丝接种，打孔制作菌饼时 取材要从种菌皿的外缘开始，避免使用 中心区的菌丝。
如果是孢子液接种，用接种针蘸取 孢子液后，在带药培养基上划一直线。
6 扩散法
原理：在已接种的培养基上加少量的 抗菌物质，使其接触培养基和病原菌，经 一定时间培养后，接触部分的周围由于抗 菌物质的扩散，而产生抑菌圈（或抑菌 带），其大小与药剂浓度有关系，以此来 比较杀菌剂的毒力大小。
此法主要用于抗生素的效价测定。
农用抗生素的效价
效价是衡量抗生素有效成份和质量好坏的 一个指标。
药剂抗菌力也即药剂毒力。
5 气体效力测定
原理：有些杀菌剂具有挥发性，且有杀 菌特性，在测定这类杀菌剂毒力时，可将麦 芽汁-琼脂培养基置于皿底内，冷凝后接种病 原菌孢子，然后盖上皿盖并倒过来使底成 “盖”，使盖成“底”，并将杀剂菌剂置于 “底”内，放到适于病菌孢子发芽生长的环 境中培养一定时间后观察。
如：嘧啶胺类化合物在室内，以 100ug/ml对灰霉病菌孢子没有抑制作用； 300ug/ml对菌丝生长也不能抑制； 1ug/ml的浓度在田间使用时，却能很好 的防治灰霉病。
药剂与病菌的作用关系
传统的：以其“毒力”抑制或杀死病菌。一 般是一致的。
病菌
药剂
环境
新类型的杀菌剂：
影响病菌的致病过程； 影响寄主的抗病性；
即在各处理组的调查孢子总数中增加调查 孢子数量，增加的数量根据对照组孢子萌发 率换算出来。
如：CK孢子萌发率达98%时，在调查处理 组时，拟定调查数量为100时，此时就要调查 102个，并对其不萌发孢子数减去2，然后计 算孢子萌发率。

三、操作步骤 (一) 孢子悬浮液配制
(二) 带菌培养板制作
水浴加热融化 44-45℃
加孢子悬浮液 混匀,迅速倒入培养皿中
带菌培养板
(三) 带药滤纸条放置
将4 条滤纸条放入药液（单剂或混剂）中浸泡一定时间后沥去多 余的药液，垂直交叉放入带菌平板，置于一定温度下培养，观察 菌落抑制区域的生长形状，并测定大小。
实验十五 杀菌剂混合毒力测定
一、试验目的 学习滤纸条交叉放药法判定杀菌剂混用对生物的影响 了解杀菌剂混合后的生物效应
二、试验原理相加源自药剂 A + 药剂 B
增效
拮抗
本实验通过滤纸条交叉放药法，来简易地判别任何 两种不同药剂混合对病菌生长的影响。
相加
增效
滤纸条交叉放药法对生物的影响
拮抗 互不干扰

百日咳菌苗原液毒性试验方法
1 选用体重14～16g健康小白鼠，每批原液不少于10只（同性或雌雄性各半）。

2 以灭菌生理盐水或pH7.3±0.1磷酸盐缓冲生理盐水（含成品菌苗相同量的防腐剂），将百日咳原液稀释至成品菌苗浓度的1/2。

3 每只小白鼠腹腔注射稀释的原液0.5ml。

另取同数量同体重的小白鼠（同性或雌雄性各半），腹腔注射稀释用生理盐水或pH7.3±0.1磷酸盐缓冲生理盐水0.5ml作为对照。

4 注射后的小白鼠应逐日观察，并于喂食后2小时进行称重。

5 于注射前、注射后72小时及7天，分别称试验组及时对照组小白鼠的体重。

6 试验组小白鼠注射后72小时的总体重不少于注射前的总体重；7天小白鼠平均增加的体重不少于对照组平均增加体重的60%，并不得有死亡，该批原液毒性试验判为合格。

7 试验结果若达不到上述要求，可进行复试，仍达不到上述要求，原液可放置2～8℃保存3～4个月再进行复试，如仍达不到上述要求，该批原液的毒性判为不合格。

［ 关键 词 ］ 布 鲁 氏菌 ； 强毒株 ； 力 毒
Ｄｅ ｅ ｔｏ ｆ Ｖｉ ｕ ｅ ｅ ｆＢ． ｂ ｒｕ ３ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｒ ｌ ｎｃ ｓ ｏ ａ ｏ ｔ ｓ ２ ０８， ｍ ｅ ｔ ｎ ｉ ２ ｎ ｓ ｉ ３ ０ Ｂ． Ｋ ｅ ｓｓ Ｍ ８ ａ ｄ Ｂ． ｕ ｓ Ｓ１ ３
ＣＨＥ ＮＧ ｕ Ｊ ｎ—ｓｅ ｇ， Ｅ ａ ｈ ｎ Ｐ ＮＧ Ｘｉｏ—ｂｎ ， ｉｇ ＭＡＯ Ｋ ｉ ｏ ｇ，Ｉ ＮＧ ａ —ｒｎ ＪＡ Ｙｕ—ｗｅ ＸＩ ｅ—ｃ ｉＤＩ ｉ ｎ， Ａ Ｙ ａ ， ＮＧ Ｊａ—ｂ ｏ
（ ｈｎ ｎｔｕｅｏ ｅ ｒ ａｙＤ ｕ ｏｔ ｌ Ｂ ｌｎ ００ １ Ｃ ｉａ Ｃ ｉ Ｉｓｉ ｔ ｆＶｔ ｉ ｒ ｒｇ Ｃｎｒ ， ｅ ｇ １０ ８ ；ｈｎ ） ａ ｔ ｅｎ ｏ ｉ ｔ
［ 摘 要 ］ 为 了测 定 牛 、 、 三株 不 同种 布 鲁 氏菌参 考 强毒 株 的毒力 ， 择 了牛种 ２ ０ 、 种 羊 猪 选 ３８ 羊 Ｍ ８和猪 种 Ｓ ３ ０株 ， 别用 雌 性豚 鼠（ ａｔ ｙ 和雌 性 小 鼠（ ａｂ ｃ 对 其毒 力进 行 测定 。 豚 鼠 ２ １３ 分 Ｈ ｒｅ ） ｌ Ｂ ｌ／ ） 测 毒试验 中， 含 不 同菌数 的菌 液腹 股 沟 皮 下注 射 ５只豚 鼠， 定 ２ ０ 、 ２ 、 １３ 用 测 ３ ８ Ｍ ８ Ｓ ３ ０菌 株 的豚 鼠
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ｔｏ ｉ ｖ ｓｉａ ｅ ｔ ｅ ｖｒ ｌｎ ｅ ｆ３ ｄ ｆｅ ｅ ｔｒｆ ｒ ｎ ｅ ｓｒ ｉ ｓ，ｗｈｉｈ ｗｅ ｅ Ｂ．ａ ｏ ｔ ｓ２ ０ ｎ ｅ ｔｇ ｔ ｈ ｉｕｅ ｃ ｓ ｏ ｉｆｒ ｎ ｅ ｅｅ ｅ ｔａｎ ｃ ｒ ｂ ｒｕ ３ ８，Ｂ． ｌｔｎ ｉ ｍｅｉ ｓｓ ｅ

十种杀菌剂对当归根腐病菌的室内毒力测定随着当归栽培技术的不断提高和盆栽种植规模的扩大，当归根腐病菌所引起的根系腐烂病害已成为制约当归产量和品质的主要因素。

为了有效控制当归根腐病菌，研究人员提出了一系列杀菌剂对腐病菌的室内毒力测定方法，以期通过对不同杀菌剂的筛选和配比，达到最佳的防治效果。

本文将重点介绍十种常见的杀菌剂对当归根腐病菌的室内毒力测定实验，以期为当归栽培提供有效的病害防治方法。

实验材料和方法实验材料：1. 当归根腐病菌：采集自感染当归根部的病原菌培养物；2. 十种常见杀菌剂：包括环鲨灵、霉多灵、氯硝柳胺、多菌灵、敌草枯、腐霉灵、红霉素、代森锰锌、硫酰脲、叠氮琥胺；3. 培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

实验方法：1. 菌种孢子的制备：将感染当归根的病原菌培养物涂布在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，培养4-5天后，取下表面的孢子悬液备用；2. 杀菌剂浓度的选择：根据杀菌剂的标准浓度，制备不同浓度的杀菌剂溶液；3. 注意实验中的消毒措施，确保实验的纯净性；4. 实验组设置：取一定浓度的病原孢子悬液，分别与十种杀菌剂溶液混合，装入培养皿，设立空白对照组和对照组；5. 培养条件：在25-28℃、湿度80%-90%的条件下培养7-10天；6. 实验结果的观察和记录：观察培养皿上病原菌的生长情况，记录每种杀菌剂对病原菌的抑制效果。

结果与分析实验结果显示，十种杀菌剂对当归根腐病菌的抑制效果存在差异。

多菌灵和敌草枯的抑菌效果最好，病原菌的生长受到了明显的抑制；硫酰脲也具有一定的抑制效果，病原菌的生长速度较慢；其他杀菌剂对病原菌的抑制效果相对较弱，部分杀菌剂甚至无法有效抑制病原菌的生长。

根据实验结果，可将十种杀菌剂按照其抑制效果和毒力大小分为三个等级：优秀类（多菌灵、敌草枯）、一般类（硫酰脲）、较弱类（其余七种杀菌剂）。

在实际的防治过程中，应该根据病情的轻重程度和杀菌剂的毒力大小，选择合适的杀菌剂进行配比和使用，以期达到最佳的防治效果。

菌肥毒理六项实验
菌肥毒理六项实验包括菌种毒理学试验和产品毒理学试验。

菌种毒理学试验分为四个等级，第一级为免做毒理学试验的菌种，第二级为需做急性经口毒性试验的菌种，第三级为需做致病性试验的菌种，第四级为禁用菌种。

产品毒理学试验则以半数致死量（LD50）为重要参考指标。

此外，针对不同的微生物肥料产品及其类型，检验机构还需要进行不同的安全性评价策略。

例如，农用微生物菌剂又可细分为九类产品，主要为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂等，要求检验机构需针对不同的产品进行特定的安全性评价。

菌肥毒理六项实验的结果对产品的安全性评价和后续应用有重要影响。

通过毒理学试验，可以评估菌肥对生物体的毒害程度，确定其是否会对人体或环境造成危害。

如果实验结果显示菌肥具有一定的毒性，那么就需要对其使用量和使用范围进行严格限制，以保障公共卫生安全。

此外，实验结果还可以为菌肥的合理应用提供科学依据。

如果某种菌肥的毒理学试验结果表明其具有较高的安全性和有效性，那么就可以在适当的条件下推广应用。

总之，菌肥毒理六项实验的结果对于保障公共卫生安全、促进农业可持续发展以及提高农产品质量等方面都具有重要意义。

多菌灵室内毒力生物测定实验方案实验目的：评估多菌灵（或其他杀菌剂）在室内环境中的毒力，以确定其对人体和环境的潜在风险。

实验材料：1. 多菌灵样品2. 细菌培养基（适合所选的毒力指标菌种）3. 培养基平板4. 培养皿或培养瓶5. 可调节的溶液稀释器或移液器6. 培养箱或恒温培养箱7. 实验室安全设备（手套、护目镜等）实验步骤：1. 准备多菌灵溶液：a. 根据所需浓度，将多菌灵样品溶解在适量的溶剂中，制备一系列浓度的多菌灵溶液。

b. 使用可调节的溶液稀释器或移液器，将多菌灵溶液按比例稀释成不同的浓度。

2. 培养菌种：a. 根据实验要求，选择适合的毒力指标菌种。

常用的菌种可包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。

b. 在无菌条件下，将菌种接种到培养基平板上，均匀涂抹或滴菌。

3. 添加多菌灵溶液：a. 在培养基固化前，使用移液器或吸管，在培养基平板上加入一定体积的多菌灵溶液。

b. 确保多菌灵溶液均匀分布在培养基表面。

4. 孵育培养基平板：a. 将培养基平板置于恒温培养箱中，以适当的温度（例如37摄氏度）孵育一定时间（例如24小时）。

b. 恒温培养箱提供适宜的温度和湿度，促使菌落生长。

5. 观察和记录：a. 在培养箱中观察培养基平板上的菌落生长情况。

b. 记录菌落数量、形态、颜色等信息。

6. 数据分析：a. 使用适当的统计方法，对实验结果进行分析和比较。

b. 根据实验数据，评估多菌灵溶液的毒力，比较不同浓度的毒力。

注意事项：1. 在实验过程中，遵守实验室安全规定，佩戴适当的个人防护装备。

2. 使用无菌技术操作，以防止外部污染。

3. 实验设备和用品要经过彻底清洁和消毒，以确保实验的准确性和可靠性。

4. 实验结果应仅用于毒力评估和参考，不能作为决定多菌灵使用的唯一依据。

成 破坏 。
分生 孢 子 液 的 制 备 ： ５ 无 菌 水 混 合 用 ０ ｍＩ 的分 生孢子 ， 以双 层 丝 网过 滤 。用 血球 记 数 板在 并
不断引 发食 品安 全 问题 ， 时对 果 园生 态 系 统也 造 ０ ０ 吐温 一０作 为润 湿 剂 ， 荡 脱 溶 固体 培 养 上 同 ．５ ８ 振
摘要
以桔小实蝇成虫 、 幼虫和蛹为 目标昆虫 ， 利用 不 同分生孢 子浓度 的球 孢 白僵菌 ＭＺ ４ ０ ６菌株对其 ０１１
进行室 内毒力测定 。结果 表明 ， 供试菌株在 室内对桔小实蝇成 虫、 幼虫 和蛹具有较 强的毒力 。菌株 分生孢子浓 度为 ３６ ０个／ ． ×１ ｍＬ时 ， 可造 成 桔 小实 蝇 各虫 态 大量 死 亡 ， ３ ６ ０ 个／ 在 ． ×１ ｍＬ孢子 浓 度下 成 虫 死亡 率达 ９． ５ ， ５ ４ 致死中时间（ 丁 。为 ３ ５ ２ｄ 第 ８天的致死 中浓度 （ Ｃ。 为 ２ １ ×１ ｍＬ； ３ ６ ０ 个／ Ｌ ５） ．６ ， Ｌ ５ ） ． ４ Ｏ 个／ 在 ． ×ｉ ｍＬ 孢子浓度下幼虫死亡率达 ９ ． ４ ， 。 ４ ９ ６ｄ 第 ８ 的 Ｌ 为 ３ ０ ×１ ｍＬ；３６ ０ 个／ ５９ Ｌ 为 ． ２ ， 天 Ｇ０ ． ３ ０ 个／ ． ×１ ｍＬ孢子
吐温一Ｏ混合无 菌 水 作对 照 。每 个 重 复取 ３ 蛹 ， ８ Ｏ头 采用浸 渍法 接 种［ 。将 蛹 浸 入 盛 有 ２ ～ ３ ４ ］ ０ ＯｍＬ孢 子液 中 ， １ｍｉ 浸 ｎ后迅 速取 出 ， 放进 装有 沙子 的玻 璃 瓶中， 用纱 布封 口后 置 于人 工 气候 培 养 箱 中 。连续
用Ｐ ＤＡ 培 养 基 大 量 扩 繁球 孢 白僵 菌 ， 直 径 在
果实危 害 ， 果实 腐 烂 和落 果 ， 成 巨大 经 济损 失 。 ９ 使 造 ０ｍｍ 的培养 皿 中倒 入 ２ ＯｍＩ培养 基 ， 接种针将 用 长期 以来 ， 在果 园对桔 小 实蝇 的防治 ， 主要依靠 化学 菌种 接种 于培养皿 中 ， 培养 ８ｄ后 供试 。 农 药 ， 其是 在果实 成熟期 大量使 用化 学农药 ， 尤 由此

第一单元：农药生物测定与田间药效试验1.杀菌剂生物测定（Bioassay of fungicides）利用病原菌或感菌生物体对杀菌剂的反应，来确定杀菌剂效力（毒力，药效）的农药生物测定。

2.杀菌剂的毒力测定方法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法（2）活体测定法（3）组织筛选测定法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法①孢子萌发测定法原理：在载玻片或平板上，通过滴加、喷施等方法将药液施于其上，然后滴加一定浓度的孢子悬浮液，经过一定时间培育后在显微镜下观察孢子的萌发率。

一般在低倍镜下，每处理随机检查200个孢子。

毒力越大的药剂，孢子萌发抑制率也越大。

%100⨯=检查孢子数萌发孢子数孢子萌发率%100-⨯=对照萌发率处理萌发率对照萌发率孢子萌发抑制率（1）基于离体平板培养的毒力测定方法②抑菌圈法此法先将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与培养基混匀，待混合物冷却后，在培养基表面利用各种方法（管碟法、滤纸片法、孔碟法）使药液和培养基接触，培养一定时间后，由于药剂的渗透扩散作用，施药部位周围的病原菌被杀死或生长受到抑制，从而产生抑菌圈。

毒力越大的药剂，抑菌圈也越大。

该方法所用药剂需有较好的水溶性。

（1）基于离体平板培养的毒力测定方法③生长速率测定法此法的原理是趁热在培养基中加入药液，混合均匀后冷却，然后在无菌条件下将病原菌接入装有培养基的培养皿中央，经过一定时间培育后观察病原菌菌丝的生长情况。

毒力越大的药剂，菌丝的生长越缓慢。

此法多用于不产孢子或产孢子量少而菌丝较密的真菌。

病原菌生长速率的表示方法有2种：①菌落达到一定大小所需的时间；②单位时间内菌落的直径大小。

该方法的优点是操作简便，适用范围广，重复性好。

但对病原菌要求严格，病菌易于培养，生长较快且边缘整齐，产孢子缓慢；供试药剂遇热不易分解。

（1）基于离体平板培养的毒力测定方法④对峙培养法将天然提取物及病原菌同时放在同一个有培养基的培养皿的两边，经过一定时间培育后观察菌丝生长的情况。

霉病，甘薯黑疤病，水稻胡麻叶斑病， 玉米大斑病。
一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制 真菌在一定条件下才产生孢子，一般
来说，生殖生长的条件比较严格。 A、改变培养基成分：先在高浓度养
分的培养基上培养，再移到营养成分 较低的培养基中，可促进孢子的产生。
一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制 B、选用不同培养基： 植物质培养基或利用植物的组织或它
一、杀菌剂毒力测定方法
3 滤纸片附着法(adsorption technique)
此法是将真菌孢子悬浮液用适当方法 附着在灭菌的滤纸片上，使其接触一 系列不同浓度的药剂，放在一定条件 下培养一定时间后，观察菌丝生长情 况。
一、杀菌剂毒力测定方法
3 滤纸片附着法 定性滤纸灭菌（130℃，1h），70-
作为抗菌素效能的衡量单位，即1µg 相当于于1个单位。例如，纯净的1mg 链霉素含有1000个单位。
一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法： 滤纸片法：药剂加于一定大小的
圆形滤纸片上。 孔碟法：在培养基上打孔或留孔，
药液加于此孔内。 滴下法：利用注射器、毛细管、
移液管等将药液直接滴加于培养 基上。
第三章 杀菌剂毒力测定
室内测定与田间试验有一定的差异 杀菌剂田间药效试验受寄主(作物)、
环境、以及发病阶段的影响较大。
第三章 杀菌剂毒力测定
多菌灵对镰刀菌及由镰刀菌引起的赤 霉病、恶苗病的室内毒力测定和田间 药效比较一致。
但多菌灵在室内测定对由镰刀菌引起 的棉花枯萎病效果较好，而田间多菌 灵对棉花枯萎病效果较差。
可），形成均匀的药膜，再滴加孢子 液。 许多有机溶剂（丙酮、乙醚）表面张 力小，不易形成均匀的药膜，因此， 应采用凹玻片。防尘条件下干燥。

出口食品中主要产毒真菌检验方法出口食品中主要产毒真菌检验方法，是对食品中潜在产毒真菌的检测和识别，是合格食品生产过程检测环节的重要内容。

一般可采用培养瓶试验、生物多态参数技术（Biolog）和PCR方法来确定可能产毒或具有毒力作用的真菌。

（一）、培养瓶试验培养瓶试验是常用的检出真菌的方法，其主要流程是离心悬液、萃取、分离、培养、鉴定等步骤。

离心悬液过程中，可通过调节溶剂的酸碱度，和选择不同抗酒精等不同的培养基，来限制已知或不可知会产毒真菌的生长，以提高检测效果。

然后，在培养瓶中培养、分离和鉴定，以确定试样中是否含有可能产毒的真菌，具体步骤如下：1. 获取培养基：从市场或生产厂家购买中毒食物中主要潜在产毒真菌的培养基，例如常用的培养基有肉汁拉希德（L-R），拉希德汤（LR），Czapek-Dox，以及胡罗木斯（Lec）等。

2. 在培养瓶中培养：将培养基灌入培养瓶，将食品样品加入瓶内，加热无菌房中瓶口，并登记培养基情况，使单菌株剥离和萌发，然后在适当温度和湿度下，培养24-48小时，使菌落萌发后活化，反映真菌情况。

3. 分离筛选：将菌落取下，用清洗液（0.1%乳酸钠乳或胡罗木斯，一般为80%酒精）擦拭瓶内，对每组分离的真菌进行挑选，将记录分离的真菌的菌种和数量。

4. 鉴定：使用生物多态参数技术（Biolog）、分子生物学技术（PCR）或其他鉴定技术，对分离的菌进行检测，记录筛选的菌株具有毒力或不具有毒力的污染物。

（二）、生物多态参数技术（Biolog）生物多态参数技术（Biolog）是利用多孔玻璃片进行检测和辨认真菌类属的一种新技术，它能够通过测定真菌菌株对不同抗原的反应，来评价真菌的毒性和强度。

1. 使用多孔玻璃片：取液体样品，将其倒入多孔玻璃片上，使其落在玻璃片上并完整地充满玻璃片上所有多孔者，形成一个真菌抗原库，然后在质谱仪（Mass spectrometer）上测定。

2. 鉴定：将培养基样品和抗原库混合，发现培养基存在可能产毒真菌，然后根据生物多态参数技术（Biolog）系统，结合多孔玻璃片上生长的抗原，记录在玻璃片上的生长特征，以识别可能存在的真菌类属和活性。

细菌毒力的测定方法细菌毒力测定是用来评估细菌细胞或拷贝的毒力程度的一种技术。

根据应用的用途，细菌毒力测定可以分为医学毒力测定和工业毒力测定。

细菌毒力测定既可以采用实验室测试，也可以采用动物模型，也可以采用计算机模型。

一、医学毒力测定医学毒力测定是根据用药效果来评估细菌毒力水平的方法，它通常是利用体外实验，如体外抗菌实验和耐用性实验对待测细菌的毒力程度进行评估的。

体外抗菌实验中，将细菌放入带有特定抗生素的培养基中，并测定细菌抗药性，以评估其毒力，耐用性实验通常是将细菌放入有药力和没有药力的培养基中，并观察其增殖率或抗药性来评估其毒力程度。

工业毒力测定是测试待测细菌对产品质量和保质期有多大影响，也就是检测勾稽质毒力的方法。

这种方法常使用在食品、农业、工程等工业当中，主要采用的试验方法是热害性实验、中和实验、酵催实验，它们可以检测细菌的抗性，从而获得它们的毒力水平。

热害性实验是在特定温度下把待测细菌放入热水中，观察其活性的降低或消失，以此来评估其毒力水平；中和实验也是将细菌放入有抗生素和无抗生素的环境中，从而来测试抗性，来评估其毒力；酵催实验是将细菌放入某种有化学胁迫的条件下，观察其繁殖，也可以测试其毒力水平。

三、计算机模型测试计算机模型测试是根据抗性分析，通过使用数学模型来评估细菌毒力水平，常用的方法有回归分析、时顶分析以及模拟细菌的凋亡和繁殖的方法等。

它们可以准确测试细菌毒力，并借此来开展新药物的研究和开发。

总之，细菌毒力测定有多种方法，如实验室测试、动物模型和计算机模型测试等，它们可以准确地测试细菌毒力。

一般来说，实验室测试和动物模型测试是最常用的细菌毒力测定方法，而计算机模型测试可以更准确地测试细菌毒力，因此有助于新药物的开发。

各种细菌的毒力评估研究细菌是微生物中最广泛分布的一类生物，有着广泛的功能和作用，但它们也能引起各种人类疾病并对环境产生危害。

针对不同的细菌菌株，评估其毒力是非常重要的，以预测其对人类健康和环境的影响，并提供治疗和防止措施的基础。

一、何谓细菌毒力？细菌毒力是指细菌对生物体的危害程度。

不同的细菌菌株对生物体的危害程度不同，如肠道致病性大肠杆菌可以引起胃肠道疾病，而获得性黏液水肿细菌可以引起肺炎和败血症等疾病。

在细菌毒力研究中，科学家们通常会对菌株进行多个方面的评估，包括细菌的基因组，细胞壁，代谢途径，表面分子等特征。

二、细菌毒力的评估方法1、细菌基因组研究细菌基因组是毒力评估的重要依据。

通过研究细菌基因组中的相关基因和途径，可以确定细菌能否产生毒素、侵入细胞、逃避免疫系统等因素，并进一步预测其对人类或动物的危害性。

近年来，基于高通量测序技术的基因组分析已成为了毒力评估的一个主要手段。

2、细菌毒素研究某些细菌通过分泌特定的毒素来引起疾病，比如炭疽杆菌会产生致死的荚膜杆菌毒素。

因此，研究毒素是评估细菌毒力的另一个重要方面。

通常离体细胞或动物模型用于检测毒素的产生和作用机制，这些研究可用于评估不同毒素对不同细胞类型、不同动物种类、不同器官的影响。

3、动物感染模型动物感染模型是评估细菌毒力的传统工具，通常用于确定细菌菌株的致病能力，并评估治疗和防止疾病的措施。

例如使用小鼠或者兔子作为感染模型，通过检测动物的存活率、临床症状、组织病理学等方面的变化，来评估细菌毒力。

4、分子细胞学研究通过了解某些细菌实体的构造，人们可以判断它们的毒性。

但是肉眼或简单的光学显微镜并不足以对此进行检测。

因此，通过使用高级显微镜和配有相关技术的分析工具，进行分子细胞研究，这对细菌毒性的评估有很大的帮助。

三、毒性评估的意义评估细菌毒力对预测人类病原细菌的传播和疫情控制至关重要。

通过对细菌的毒性评估可以判断细菌是否具有传播疾病的能力，为制定预防和控制计划提供重要的信息。

菌种毒力试验方法一、产毒液体培养基的制备1.马铃薯-酵母膏-蔗糖培养基取去皮马铃薯200-300g，切成小块，加水1000mL，煮沸20min，纱布过滤，制成马铃薯汁并补充水分至1000mL，加入10g酵母膏，100g蔗糖，分装后121℃高压灭菌15min。

2.麦芽汁-酵母膏培养基1000mL麦芽汁中加入10g酵母膏，分装后121℃高压灭菌15min。

3.麦芽汁-蛋白胨培养基1000mL麦芽汁中加入1g蛋白胨，分装后121℃高压灭菌15min。

4.葡萄糖天门冬素培养基葡萄糖10.0 g天门冬素0.5 gK2HPO4 0.5 g蒸馏水1000.0 mL调pH 7.2-7.4，分装后121℃高压灭菌15min。

5.高氏合成1号培养基可溶性淀粉20.0 gKNO3 1.0 gK2HPO40.5 gMgSO4·7H2O 0.5 gNaCl 0.5 gFeSO4·7H2O 0.01 g蒸馏水1000.0 mL调pH 7.2-7.4，分装后121℃高压灭菌15min。

6.麦芽汁培养基200 mL麦芽汁分装后，121℃高压灭菌15min。

7.0.5%蛋白胨培养基取2.0g葡萄糖，0.6g酵母膏，1.0g蛋白胨，4.0g琼脂，加蒸馏水至200mL，分装后121℃高压灭菌15min。

二、培养物制备将送检菌种或转种的纯培养物（适宜的培养基斜面，28±1℃培养5-7d），确证为纯培养物后，分别接种于适宜的产毒培养基中，一般菌种接种于麦芽汁-酵母膏、麦芽汁-蛋白胨及马铃薯-酵母膏-蔗糖三种产毒培养基中，放线菌接种于葡萄糖天门冬素培养基和高氏合成1号培养基中，红发夫酵母接种于麦芽汁培养基和0.5%蛋白胨培养基中，置28±1℃培养14d。

将培养物经流动蒸汽1h后，过滤，所得滤液部分于80℃恒温下浓缩2.5倍备用，余者直接供实验用。

三、小鼠毒力实验每种产毒液体培养基需小鼠80只，雌雄各半，分别随机分为4组，每组10只。