菌种毒力试验方法

不同真菌菌株对蛴螬的毒力测定作者：章骏来源：《安徽农学通报》2014年第13期摘要：选择几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定。

结果表明，绿僵菌Ma1较其它菌株校正累积死亡率最高，致死速度最快，平均累计校正死亡率达62.50%，LT50为10.31d，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

关键词：绿僵菌；蛴螬；防治；毒力测定中图分类号S476.1文献标识码A文章编号1007-7731（2014）13-29-02蛴螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龟甲幼虫的总称，是我国地下害虫分布最广、为害最重的一类害虫，主要为害花生、大豆、麦类、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多种大田作物，以及一些中药材等，其中以为害花生较为严重，严重时造成作物颗粒无收［1］。

长期以来，主要依赖化学农药防治该害虫，易使其产生抗性，并且造成土壤中农药残留，导致作物产品农药含量超标，使花生有异味，影响到出口创汇及人体健康。

为此，笔者选用几种真菌的不同菌株及其混合物，分别对蛴螬进行毒力测定，以期筛选出对蛴螬具有高毒力的菌株。

1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 供试虫源蛴螬幼虫是5月上旬从安徽省庐江县采集的越冬幼虫，室内饲养数天，挑选大小均匀且健康的个体备用。

1.1.2 供试菌种菌种为安徽农业大学植保学院生防研究室储存菌种，编号分别为Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 试验方法1.2.1 菌剂的制备培养采用萨氏葡萄糖酵母浸膏培养基（SDAY）、蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PPDA）和察氏琼脂培养基培养（Czapek），置于光照培养箱内26℃下恒温培养15d后，放入冰箱低温（4℃）保存备用。

用无菌的塑料药匙将真菌的分生孢子粉刮到一个干净的盛有10mL0.05%Tween-80润湿剂的三角瓶中，在涡旋振荡器上充分振荡（10min左右），然后按比例稀释，经血球计数板测定每mL孢子数，通过计算把各菌的孢子悬浮液浓度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以测定致死中时（LT50），比较各菌种间的毒力［2］。

百日咳菌苗原液毒性试验方法
1 选用体重14～16g健康小白鼠，每批原液不少于10只（同性或雌雄性各半）。

2 以灭菌生理盐水或pH7.3±0.1磷酸盐缓冲生理盐水（含成品菌苗相同量的防腐剂），将百日咳原液稀释至成品菌苗浓度的1/2。

3 每只小白鼠腹腔注射稀释的原液0.5ml。

另取同数量同体重的小白鼠（同性或雌雄性各半），腹腔注射稀释用生理盐水或pH7.3±0.1磷酸盐缓冲生理盐水0.5ml作为对照。

4 注射后的小白鼠应逐日观察，并于喂食后2小时进行称重。

5 于注射前、注射后72小时及7天，分别称试验组及时对照组小白鼠的体重。

6 试验组小白鼠注射后72小时的总体重不少于注射前的总体重；7天小白鼠平均增加的体重不少于对照组平均增加体重的60%，并不得有死亡，该批原液毒性试验判为合格。

7 试验结果若达不到上述要求，可进行复试，仍达不到上述要求，原液可放置2～8℃保存3～4个月再进行复试，如仍达不到上述要求，该批原液的毒性判为不合格。

十种杀菌剂对当归根腐病菌的室内毒力测定随着当归栽培技术的不断提高和盆栽种植规模的扩大，当归根腐病菌所引起的根系腐烂病害已成为制约当归产量和品质的主要因素。

为了有效控制当归根腐病菌，研究人员提出了一系列杀菌剂对腐病菌的室内毒力测定方法，以期通过对不同杀菌剂的筛选和配比，达到最佳的防治效果。

本文将重点介绍十种常见的杀菌剂对当归根腐病菌的室内毒力测定实验，以期为当归栽培提供有效的病害防治方法。

实验材料和方法实验材料：1. 当归根腐病菌：采集自感染当归根部的病原菌培养物；2. 十种常见杀菌剂：包括环鲨灵、霉多灵、氯硝柳胺、多菌灵、敌草枯、腐霉灵、红霉素、代森锰锌、硫酰脲、叠氮琥胺；3. 培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

实验方法：1. 菌种孢子的制备：将感染当归根的病原菌培养物涂布在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，培养4-5天后，取下表面的孢子悬液备用；2. 杀菌剂浓度的选择：根据杀菌剂的标准浓度，制备不同浓度的杀菌剂溶液；3. 注意实验中的消毒措施，确保实验的纯净性；4. 实验组设置：取一定浓度的病原孢子悬液，分别与十种杀菌剂溶液混合，装入培养皿，设立空白对照组和对照组；5. 培养条件：在25-28℃、湿度80%-90%的条件下培养7-10天；6. 实验结果的观察和记录：观察培养皿上病原菌的生长情况，记录每种杀菌剂对病原菌的抑制效果。

结果与分析实验结果显示，十种杀菌剂对当归根腐病菌的抑制效果存在差异。

多菌灵和敌草枯的抑菌效果最好，病原菌的生长受到了明显的抑制；硫酰脲也具有一定的抑制效果，病原菌的生长速度较慢；其他杀菌剂对病原菌的抑制效果相对较弱，部分杀菌剂甚至无法有效抑制病原菌的生长。

根据实验结果，可将十种杀菌剂按照其抑制效果和毒力大小分为三个等级：优秀类（多菌灵、敌草枯）、一般类（硫酰脲）、较弱类（其余七种杀菌剂）。

在实际的防治过程中，应该根据病情的轻重程度和杀菌剂的毒力大小，选择合适的杀菌剂进行配比和使用，以期达到最佳的防治效果。

菌肥毒理六项实验
菌肥毒理六项实验包括菌种毒理学试验和产品毒理学试验。

菌种毒理学试验分为四个等级，第一级为免做毒理学试验的菌种，第二级为需做急性经口毒性试验的菌种，第三级为需做致病性试验的菌种，第四级为禁用菌种。

产品毒理学试验则以半数致死量（LD50）为重要参考指标。

此外，针对不同的微生物肥料产品及其类型，检验机构还需要进行不同的安全性评价策略。

例如，农用微生物菌剂又可细分为九类产品，主要为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂等，要求检验机构需针对不同的产品进行特定的安全性评价。

菌肥毒理六项实验的结果对产品的安全性评价和后续应用有重要影响。

通过毒理学试验，可以评估菌肥对生物体的毒害程度，确定其是否会对人体或环境造成危害。

如果实验结果显示菌肥具有一定的毒性，那么就需要对其使用量和使用范围进行严格限制，以保障公共卫生安全。

此外，实验结果还可以为菌肥的合理应用提供科学依据。

如果某种菌肥的毒理学试验结果表明其具有较高的安全性和有效性，那么就可以在适当的条件下推广应用。

总之，菌肥毒理六项实验的结果对于保障公共卫生安全、促进农业可持续发展以及提高农产品质量等方面都具有重要意义。

多菌灵室内毒力生物测定实验方案实验目的：评估多菌灵（或其他杀菌剂）在室内环境中的毒力，以确定其对人体和环境的潜在风险。

实验材料：1. 多菌灵样品2. 细菌培养基（适合所选的毒力指标菌种）3. 培养基平板4. 培养皿或培养瓶5. 可调节的溶液稀释器或移液器6. 培养箱或恒温培养箱7. 实验室安全设备（手套、护目镜等）实验步骤：1. 准备多菌灵溶液：a. 根据所需浓度，将多菌灵样品溶解在适量的溶剂中，制备一系列浓度的多菌灵溶液。

b. 使用可调节的溶液稀释器或移液器，将多菌灵溶液按比例稀释成不同的浓度。

2. 培养菌种：a. 根据实验要求，选择适合的毒力指标菌种。

常用的菌种可包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。

b. 在无菌条件下，将菌种接种到培养基平板上，均匀涂抹或滴菌。

3. 添加多菌灵溶液：a. 在培养基固化前，使用移液器或吸管，在培养基平板上加入一定体积的多菌灵溶液。

b. 确保多菌灵溶液均匀分布在培养基表面。

4. 孵育培养基平板：a. 将培养基平板置于恒温培养箱中，以适当的温度（例如37摄氏度）孵育一定时间（例如24小时）。

b. 恒温培养箱提供适宜的温度和湿度，促使菌落生长。

5. 观察和记录：a. 在培养箱中观察培养基平板上的菌落生长情况。

b. 记录菌落数量、形态、颜色等信息。

6. 数据分析：a. 使用适当的统计方法，对实验结果进行分析和比较。

b. 根据实验数据，评估多菌灵溶液的毒力，比较不同浓度的毒力。

注意事项：1. 在实验过程中，遵守实验室安全规定，佩戴适当的个人防护装备。

2. 使用无菌技术操作，以防止外部污染。

3. 实验设备和用品要经过彻底清洁和消毒，以确保实验的准确性和可靠性。

4. 实验结果应仅用于毒力评估和参考，不能作为决定多菌灵使用的唯一依据。