矮丛蓝莓再生体系的建立

落叶果树２０１３，４５（６）：２０—２２　Ｄｅｃｉｄｕｏｕｓ　Ｆｒｕｉｎ　

蓝莓组培育苗的程序　

赵子刚　，张冉　，李加奎　，王玲玲　，李勃。　

（１．上海青浦现代农业园区，２０１７１７；２．青浦区练塘镇农业综合服务中心；３．山东省果树研究所）　

摘要：回顾了近年来蓝莓组培育苗的研究情况，介绍了在组培育苗过程中无菌系的建立、不定芽再生及　增殖、生根、炼苗和移栽的操作流程，并展望了发展前景。　关键词：蓝莓；组织培养；研究进展　中图分类号：￥６６３．９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２—２９１０（２０１３）０６—００２０—０３　

蓝莓栽培始于２Ｏ世纪初，源于美国。中国２０世纪８Ｏ年代才开始引进栽培，９Ｏ年代开始推广，目　前国内已大面积栽植。蓝莓的常规育苗方法是用扦插法，但因受取材及繁育时节的限制繁殖速度很　慢，难以满足生产需求。且扦插苗在生长势、抗逆性及果实品质等方面均不如组培苗…，所以组培育苗　

法得到了推广和发展。在蓝莓栽培中，利用组织培养法育苗始于１９７６年　，中国２Ｏ世纪８０年代末着　手进行蓝莓组织培养　引，目前已取得了丰硕成果。现就蓝莓组培育苗的程序进行综述，以供工厂化育　

苗者参考。　

１　蓝莓组培育苗的程序　

１．１　无菌系的建立及初代诱导　在蓝莓组培育苗中，往往选择带腋芽的茎段或顶芽为外植体，取材最好在晴天正午，选取树冠上部　木质化较轻、长势较好、无病虫危害的当年生枝条。取材时间不当（如阴雨天）则难以取得良好的消毒　

效果。准备好作为外植体的茎段后，按以下程序处理：将茎段置于饱和洗衣粉水中浸泡ｌ０分钟一自来　水冲冼干净一在超净台上用７５％酒精浸泡３Ｏ～６０秒一无菌水冲洗２—３次—加．１％升汞浸泡８～ｌ０分　

钟　无菌水冲洗４—５次一用无菌纸吸干水分　将幼茎切割成０．５—１．０ｅｍ长、至少带有１个芽的切段　

一接种于培养基上　Ｉ６］。培养７—１０天后不定芽萌动，经大约３Ｏ天的伸长生长后即转入下一阶段的　

增殖。　影响蓝莓初代诱导成败的关键是植物生长调节剂的种类和浓度，虽有少数报道称用ＭＳ或别种培　

蓝莓渊Blueberry冤又名越橘袁属杜鹃花科越桔属多年生浆果类灌木遥喜土质通气尧疏松尧有机质含量高尧湿润的酸性沙壤土尧沙土或草炭土[1-3]遥蓝莓常规繁殖的速度较慢袁品种容易退化袁利用组培快繁技术袁既可加快繁殖速度袁又能保持品种种性[4-6]袁因此本试验对南高丛蓝莓的组培快繁技术进行了研究遥1材料与方法1.1试验材料供试材料为南高丛蓝莓品种遥1.2试验方法1.2.1不同灭菌剂对灭菌效果的影响试验遥设6个处理袁分别为院0.1%升汞浸泡5min渊A1冤尧10min渊A2冤尧15min渊A3冤曰5%次氯酸钠浸泡10min渊A4冤尧20min渊A5冤尧30min渊A6冤遥试验以当年生的南高丛蓝莓绿枝枝条作为外植体袁流水冲洗2h后备用遥每个处理在升汞浸泡前用75%酒精浸泡30s袁升汞浸泡后用无菌水冲洗5次遥1.2.2培养条件遥以WPM为基本培养基袁附加不同激素袁蔗糖20g/L袁琼脂粉6.0g/L袁pH值5.2~5.4袁培养基在121益尧131kPa的条件下灭菌20min遥培养室温度25益袁光照强度2000~3000lx袁光周期为16h光照/8h黑暗遥1.2.3不同激素及浓度对蓝莓芽诱导的影响试验遥设7个处理袁分别为院6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L渊B1冤曰ZT1mg/L渊B2冤尧2mg/L渊B3冤尧3mg/L渊B4冤曰6-BA1mg/L渊B5冤尧2mg/L渊B6冤尧3mg/L渊B7冤遥按照各试验设计处理蓝莓茎段袁培养45d后观察正常芽增殖倍数和萌芽外植体数遥1.2.4不同IBA浓度对试管苗生根诱导的影响试验遥设3个处理袁分别为院IBA0.1mg/L渊C1冤尧0.3mg/L渊C2冤尧0.5mg/L渊C3冤遥在1/2WPM培养基上添加试验设计的不同浓度的IBA袁接入试管苗嫩茎的新梢和中段袁先遮光培养7d袁后转入光培养28d后观察根的生长情况遥1.2.5不同基质处理对试管苗驯化的影响试验遥试管苗的驯化选择3种基质院进口泥炭渊D1冤尧泥炭颐黄泥=3颐2渊D2冤尧苔藓渊D3冤袁观察试管苗驯化苗生长情况遥1.2.6组培苗试管外生根试验遥由于蓝莓组培试管苗培养时生根慢且生根率低袁可采用试管外组培苗生根的方法节约生产成本袁以拓展蓝莓试管苗生根途径遥在瓶外生根前将继代45d左右的组培苗移到与驯化相似环境中炼苗7d左右遥扦插前洗净组培苗根部附着的培养基袁将组培苗剪成1.5~2.0cm的茎段袁在绿维康系列强力生根A号稀释液中浸5s后捞出袁扦插于苔藓基质苗床上袁并立即扣拱棚保湿袁20d后逐渐揭膜通风袁40d后统计生根成活率遥2结果与分析2.1不同灭菌剂对灭菌效果的影响由表1可知袁处理A1尧处理A4尧处理A5灭菌不充分袁污染数超过85%曰处理A3尧处理A6灭菌过度袁尽管污染数少袁但已经影响到苗的正常生长曰处理A2污染率为20.0%袁同时萌发的正常芽率也达67.5%袁为适宜的灭菌方法遥2.2不同激素及浓度对蓝莓芽诱导的影响由表2尧图1可知袁处理B2效果较好袁培养10d后在外植体基部产生黄绿色愈伤组织袁在节处有丛芽生长袁培养30d后袁增殖芽数可达5.86倍袁且主枝芽多袁丛芽粗壮袁利于作为生根苗培养曰而处理B3尽管增殖芽倍数高袁但侧枝芽偏细袁以侧枝芽增殖为主袁且基部愈伤块大袁为褐色曰若以处理B2与处理B3交替使用较为理想袁既保证增殖苗的质量袁又可达到较大的增殖效果曰处理B4产生透明状愈伤组织袁易形成玻璃苗曰处理B5尧处理B6尧处理B7培养45d后观察袁外植体生长处于停滞状袁既不萌芽生长袁也未褐化死亡遥2.3不同IBA浓度对试管苗生根诱导的影响由表3可知袁IBA可有效地促进蓝莓试管苗的生根袁其中处理C2有效生根率最佳袁新梢生根率可达59%袁合计生根率达55.38%袁且上部叶片绿色袁植株生长健壮袁根粗壮而长曰随着激素浓度的升高袁试管苗基部愈伤组织团越明显袁表1不同灭菌剂的灭菌效果处理接种数椅个污染数椅个污染率椅%出芽数椅个出芽率椅%A1403997.512.5A240820.02767.5A34012.51025.0A44040100.000A5403587.537.5A640717.5922.5

蓝莓栽培技术研究进展

蓝莓是杜鹃花科越橘属植物，多年生常绿或落叶灌木，果实成熟时呈深蓝色，表面被白粉。蓝莓果肉酸甜，种子极小，可食率高达100%。原产于俄罗斯、北美和苏格兰，是一种具有极高营养和经济价值的新兴世界性水果。蓝莓营养丰富，多食用蓝莓可以提高人体免疫力。果实中富含花青苷色素、维生素、矿物质、纤维元素、抗氧化剂等多种营养成分，另外，有研究发现蓝莓中含有的营养物质对中早期癌症具有显著的抑制作用。

蓝莓的栽培历史最早始于美国，到如今也不过百年。我国的蓝莓栽培起步较晚，从1979年开始对野生蓝莓资源进行调查；1983年吉林农业大学才率先在国内开展蓝莓国外引种栽培；1999年进行商业化栽培，栽培面积从2001年的24hm2,发展到2005年的198hm2；2006年以后进入快速发展阶段，栽培面积不断扩大，品种也不断增多，2013年已有20000hm2的规模，蓝莓现已成为我国目前发展最快的果树。目前，我国栽培的蓝莓主要有矮丛蓝莓、高丛蓝莓和兔眼蓝莓三类。不同的蓝莓种类有不同的形态特征和生长需求，适宜在我国不同的地区种植。

1.我国主要蓝莓品种

1.1矮丛蓝莓

矮丛蓝莓为加拿大引进的品种，株型矮小，高约 30～50 cm，具极强的抗寒能力，适合在我国东北高寒山区种植。

1.2高丛蓝莓

高丛蓝莓为美国引进的品种，包括北高丛蓝莓和南高丛蓝莓两大类。北高丛蓝莓适宜冷凉气候，抗寒力较强，适宜在我国偏北方沿海湿润地区及寒地种植。南高丛蓝莓喜温暖、湿润的气候条件，我国黄河以南地区如华中、华南地区是适宜的种植区，且种植面积较大。

1.3兔眼蓝莓

兔眼蓝莓也为美国引进的品种，植株高大，最高可达 3 m 以上，寿命长，抗湿热，对土壤条件要求不严，抗旱能力强，栽培范围广。但与此同时，兔眼蓝莓的抗寒能力差前两种差，-27℃低温可使其受冻，所以适于我国长江流域以南、华南等地区的丘陵地带栽培。现已成为我国栽培面积最大的蓝莓品种。

蓝莓（Vaccinium corymbosum）属杜鹃花科，越橘属植物。起源于北美，多年生灌木小浆果果树。因果实呈蓝色，故称为蓝莓国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。

本试验以蓝莓半木质化茎段为外植体，并通过瓶外生根技术，建立起植株再生体系。

1 材料与方法

1.1 外植体材料及培养条件

1.1.1 外植体选择

高灌蓝莓半木质化茎段。

1.1.2 外植体预处理及灭菌

剪取蓝莓半木质化枝条，立即去掉上部叶片带回室内，剪成带有一个叶芽2-3厘米长茎段，在流动自来水中冲洗20-30分钟，在超净工作台上用75%酒精消毒2-3分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水后在0.1%升汞中消毒5-8分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水分，剪去茎段两端约0.5-1厘米，立即接种到初代培养基中。

1.1.3 培养条件

诱导培养基：改良WPM + ZT 1.0mg/L

增殖培养基：改良WPM + IAA 0.1mg/L + ZT 2.0mg/L

复壮培养基：改良WPM + IBA 0.1mg/L

WPM具体改良为：以硝酸钙 684mg/L、硝酸钾 190mg/L、EDTA铁钠 73.4mg/L和盐酸硫胺素0.1mg/L代替原WPM培养基中的硫酸钾、氯化钙、硫酸亚铁和乙二胺四乙酸钠。

以上培养基均加蔗糖3%，琼脂0.7%，pH值5.2。

培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时长为12-16时/天。

2 结果与分析

2.1 初代诱导培养

将处理好的外植体立即接种到诱导培养基中，5-6天叶芽开始萌动，10天开始展叶，20天腋芽长到1厘米长，30天腋芽长到1.5-2.5厘米长。

2.2 继代增殖培养

将初代培养长出的茎剪成1.5-2厘米长茎段转接到增殖培养基中。30-35天增殖5-7倍，增殖苗生长健壮。

2.3 复壮培养

将继代苗剪成1-1.5厘米茎段，转接到壮苗培养基，复壮培养30-40天，复壮苗高5-6厘米且粗壮。

2.4 瓶外生根培养 2.4.1 苗床准备