小型猪专用复合麻醉剂及赛拉嗪对大鼠不同脑区c_jun蛋白表达的影响
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（东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 １５００３０）
摘 要：为研究小型猪专用复合麻醉剂（ＸＦＭ）及赛拉嗪对大鼠不同脑区ｃ－ｊｕｎ蛋 白 表 达 的 影 响，将 １１４ 只 健 康 ＳＤ 大鼠，随机分为空白对照组（Ｂ 组，ｎ＝６）、生理盐水对照组（Ｃ 组，ｎ＝３６）、ＸＦＭ 麻 醉 组（Ｈ 组，ｎ＝３６）和 赛 拉 嗪 组（Ｘ 组，ｎ＝３６），Ｂ 组不给药，Ｃ 组腹腔注射生理盐水，Ｈ 组腹腔注射 ＸＦＭ 麻醉，Ｘ 组腹腔注射与 ＸＦＭ 合 剂 中 相 同 用 量 的赛拉嗪。除 Ｂ 组外，Ｃ、Ｈ、Ｘ 组分为６个亚组：麻醉诱导期（Ⅰ期）、翻正反射消失（Ⅱ期）、翻 正 反 射 消 失 后 １５ ｍｉｎ （Ⅲ期）、翻正反射消失后３５ｍｉｎ（Ⅳ期）、翻正反射恢复（Ⅴ期）、恢复直线爬行（Ⅵ期）。各 组 大 鼠 在 对 应 的 时 间 点 断 头处死，分离大脑皮层、海马、小脑及脑干，并提取各 脑 组 织 蛋 白 质，用 免 疫 印 迹 法 检 测 各 脑 组 织 样 品 ｃ－ｊｕｎ蛋 白 含 量。结果表明：与 Ｂ 组相比，（１）Ｃ 组大鼠大脑皮层、海马、小脑及脑干ｃ－ｊｕｎ蛋白表达无 显 著 变 化（Ｐ＞０．０５）；（２）Ｈ 组上述脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表达量上升，Ⅵ期表达下降；（３）Ｘ 组上述脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表 达 量 也 上 升，后 期 表 达 量 下 降，且 与 Ｈ 组相比，Ｘ 组ｃ－ｊｕｎ蛋白表达量较低。各脑区间，ｃ－ｊｕｎ蛋白表达相比差 异 不 显 著（Ｐ＞０．０５）。 结 果 提 示：ＸＦＭ 和赛拉嗪麻醉过程中，大鼠大脑皮层、海马、小脑及 脑 干 ｃ－ｊｕｎ蛋 白 表 达 量 随 麻 醉 加 深 而 增 加，在 麻 醉 苏 醒 过 程 中， ｃ－ｊｕｎ蛋白表达量下降，提示 ＸＦＭ 和赛拉嗪可以诱导上述脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表达上调，这些脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表达的改变 可能是 ＸＦＭ 和赛拉嗪作用机制之一。 关 键 词 ：小 型 猪 专 用 复 合 麻 醉 剂 ；赛 拉 嗪 ；不 同 脑 区 ；ｃ－ｊｕｎ 中图分类号：Ｓ８５９．７９１ 文献标志码：Ａ 文章编号：０３６６－６９６４（２０１４）１１－１９０４－０７
临床研究显示，ＸＦＭ 麻醉平稳，镇痛、肌松和镇 静效果俱佳，且对动 物 呼 吸 循 环 系 统 及 基 本 生 理 状 态 无 不 良 影 响 ，可 以 满 足 外 科 手 术 、科 研 工 作 及 临 床 诊疗工 作 要 求 。 ［１－２］ 赛 拉 嗪 （ｘｙｌａｚｉｎｅ）又 名 隆 朋，作 为 ＸＦＭ 组成成分之 一，是 目 前 临 床 常 用 的 α２ 肾 上 腺 能 受 体 激 动 剂 ，具 有 良 好 的 镇 痛 和 镇 静 效 果 ，常 与 多种麻醉药物联合 用 于 多 种 动 物 全 身 麻 醉，如 赛 拉 嗪与氯胺酮复 合 麻 醉 马、猫 等 动 物［３－４］，在 动 物 麻 醉 领域越来越受到研究人员的关注。
畜 牧 兽 医 学 报 ２０１４，４５（１１）：１９０４－１９１０
Ａｃｔａ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ ｅｔ Ｚｏｏｔｅｃｈｎｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ
ｄｏｉ：１０．１１８４３／ｊ．ｉｓｓｎ．０３６６－６９６４．２０１４．１１．０２３
小型猪专用复合麻醉剂及赛拉嗪对大鼠不同脑区 ｃ－ｊｕｎ蛋白表达的影响
牛 栋 梁 ，王 会 英 ，杨 鹏 ，姜 胜 ，范 宏 刚 ，王 洪 斌 ＊
此前研究发现，ＸＦＭ 能影响中枢神经系统中β－ ａｒｒｅｓｔｉｎ２ｍＲＮＡ 的转 录［５］，中 枢 神 经 系 统 ｃ－ｊｕｎ 方 面的研究已广泛应 用 于 药 理 学 研 究，也 是 麻 醉 药 物 作用机制研究的 热 点 内 容。 本 试 验 从 ｃ－ｊｕｎ 蛋 白 表 达水平入 手，探 究 有 核 内 第 三 信 使 之 称 的 ｃ－ｊｕｎ 与 ＸＦＭ 麻 醉 过 程 及 赛 拉 嗪 作 用 的 关 系，结 合 前 期 ＸＦＭ 及赛拉嗪作用机制的研究基础，讨论其在中枢 神经元内调 控 过 程，进 一 步 探 讨 ＸＦＭ 及 赛 拉 嗪 在 中枢神经系统作用的 机 制。 通 过 对 ＸＦＭ 及 赛 拉 嗪 作用机制的探讨，为 麻 醉 药 物 临 床 应 用 和 研 制 新 型 安全高效的麻醉药 物 奠 定 理 论 基 础，也 可 为 动 物 全 麻机理的深入研究提供理论依据。
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｃ ｆｏｒ Ｍｉｎｉａｔｕｒｅ Ｐｉｇｓ ａｎｄ Ｘｙｌａｚｉｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ｃ－ｊｕｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ Ｒａｔｓ
ＮＩＵ Ｄｏｎｇ－ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｈｕｉ－ｙｉｎｇ，ＹＡＮＧ Ｐｅｎｇ，ＪＩＡＮＧ Ｓｈｅｎｇ，ＦＡＮ Ｈｏｎｇ－ｇａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｂｉｎ＊ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０，Ｃｈｉｎａ）
１ 材 料 与 方 法
１．１ 材 料 及 仪 器 ＸＦＭ 为东 北 农 业 大 学 外 科 教 研 室 配 制 （批 号
２０１１１００１），盐 酸 赛 拉 嗪 由 东 北 农 业 大 学 外 科 教 研 室 高利教授 惠 赠 （纯 度 ９９．５％）。β－ａｃｔｉｎ 多 克 隆 抗 体 （美 国 Ｓａｎｔａ公 司 ）、ｃ－ｊｕｎ 多 克 隆 抗 体 （美 国 Ｓａｎｔａ公
收 稿 日 期 ：２０１４－０３－２７ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 （３１２７２６１７；３１００１０９２） 作 者 简 介 ：牛 栋 梁 （１９８６－），男 ，河 南 林 州 人 ，硕 士 生 ，主 要 从 事 动 物 麻 醉 与 镇 痛 研 究 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｄｌ０４０１＠１６３．ｃｏｍ ＊ 通 信 作 者 ：王 洪 斌 ，教 授 ，博 士 生 导 师 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｂｗａｎｇ＠ｎｅａｕ，ｅｄｕ．ｃｎ
１１ 期
牛 栋 梁 等 ：小 型 猪 专 用 复 合 麻 醉 剂 及 赛 拉 嗪 对 大 鼠 不 同 脑 区 ｃ－ｊｕｎ 蛋 白 表 达 的 影 响
１９０５
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅｓｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔ－ ｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：（１）Ｉｎ Ｃ ｇｒｏｕｐ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｈａｎ－ ｇｅｓ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ａｎｄ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｏｆ ｒａｔｓ（Ｐ＞０．０５）ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｂ ｇｒｏｕｐ；（２）Ｉｎ Ｈ ｇｒｏｕｐ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ，ａｎｄ ｄｅ－ ｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｓｔａｇｅ Ⅵ （Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｂ ｇｒｏｕｐ；（３）Ｉｎ Ｘ ｇｒｏｕｐ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ（Ｐ＜０．０１），ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｌａｔｅ ｓｔａｇｅｓ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍ）、丙烯酰胺（上海伯奥 生 物科技有限公司）、甲 叉 双 丙 烯 酰 胺 （上 海 伯 奥 生 物 科技 有 限 公 司 ）、Ｘ 光 胶 片 （伊 士 曼 柯 达 公 司 ）、 ＰＶＤＦ 膜、ＲＩＰＡ 裂 解 液、ＰＭＳＦ、ＢＣＡ 蛋 白 浓 度 测 定试剂盒、预染蛋白 Ｍａｒｋｅｒ、ＥＣＬ 发光试剂盒、Ｔｒｉｓ 碱、十二烷基磺酸钠、吐温－２０、甘氨酸、丽春红染 液、 ＴＥＭＥＤ 均购于碧云天生物技术研究所。
ｗｉｔｈ Ｂ ｇｒｏｕｐ．Ａｎｄ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｘ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ Ｈ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）．（４）ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （Ｐ＞０．０５）．Ｄｕｒｉｎｇ ｒａｔｓ ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ＸＦＭ ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｉｎ－ ｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ａｎｄ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｔｉｓｓｕｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｅｐｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｗｈｅｎ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｆｒｏｍ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＸＦＭ ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｍａｙ ｂｅ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＸＦＭ；ｘｙｌａｚｉｎｅ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ；ｃ－ｊｕｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｐｉｇ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ａｎ－ ａｅｓｔｈｅｔｉｃ （ＸＦＭ）ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ ｏｎ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｒａｔ． Ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｆｏｕｒｔｅｅｎ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （Ｂ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝ ６），ｓａｌｉｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （Ｃ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝３６），ＸＦＭ ｇｒｏｕｐ （Ｈ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝３６）ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ ｇｒｏｕｐ （Ｘ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝３６）．Ｒａｔｓ ｉｎ Ｂ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒａｉｓｅｄ ｎｏｒｍａｌｌｙ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｎｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｒａｔｓ ｉｎ Ｃ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ，ａｎｄ ｒａｔｓ ｉｎ Ｈ ｇｒｏｕｐ，Ｘ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ＸＦＭ，Ｘｙｌａ－ ｚｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｉｘ ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ ｅｘｃｅｐｔ Ｂ ｇｒｏｕｐ：ａｎｅｓｔｈｅ－ ｓｉａ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｓｔａｇｅ（ｓｔａｇｅ Ⅰ），ｄｉｓａｐｐｅａｒ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ （ｓｔａｇｅ Ⅱ），１５ｍｉｎ ａｆｔｅｒ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ ｄｉｓａｐｐｅａｒ（ｓｔａｇｅ Ⅲ），３５ ｍｉｎ ａｆｔｅｒ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ ｄｉｓａｐｐｅａｒ （ｓｔａｇｅ Ⅳ ），ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ （ｓｔａｇｅ Ⅴ ）ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｌｉｎｅａｒ ｃｒａｗｌｉｎｇ （ｓｔａｇｅ Ⅵ ）．Ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｃａｐｉｔａｔｅｄ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ａｎｄ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ．
摘 要：为研究小型猪专用复合麻醉剂（ＸＦＭ）及赛拉嗪对大鼠不同脑区ｃ－ｊｕｎ蛋 白 表 达 的 影 响，将 １１４ 只 健 康 ＳＤ 大鼠，随机分为空白对照组（Ｂ 组，ｎ＝６）、生理盐水对照组（Ｃ 组，ｎ＝３６）、ＸＦＭ 麻 醉 组（Ｈ 组，ｎ＝３６）和 赛 拉 嗪 组（Ｘ 组，ｎ＝３６），Ｂ 组不给药，Ｃ 组腹腔注射生理盐水，Ｈ 组腹腔注射 ＸＦＭ 麻醉，Ｘ 组腹腔注射与 ＸＦＭ 合 剂 中 相 同 用 量 的赛拉嗪。除 Ｂ 组外，Ｃ、Ｈ、Ｘ 组分为６个亚组：麻醉诱导期（Ⅰ期）、翻正反射消失（Ⅱ期）、翻 正 反 射 消 失 后 １５ ｍｉｎ （Ⅲ期）、翻正反射消失后３５ｍｉｎ（Ⅳ期）、翻正反射恢复（Ⅴ期）、恢复直线爬行（Ⅵ期）。各 组 大 鼠 在 对 应 的 时 间 点 断 头处死，分离大脑皮层、海马、小脑及脑干，并提取各 脑 组 织 蛋 白 质，用 免 疫 印 迹 法 检 测 各 脑 组 织 样 品 ｃ－ｊｕｎ蛋 白 含 量。结果表明：与 Ｂ 组相比，（１）Ｃ 组大鼠大脑皮层、海马、小脑及脑干ｃ－ｊｕｎ蛋白表达无 显 著 变 化（Ｐ＞０．０５）；（２）Ｈ 组上述脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表达量上升，Ⅵ期表达下降；（３）Ｘ 组上述脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表 达 量 也 上 升，后 期 表 达 量 下 降，且 与 Ｈ 组相比，Ｘ 组ｃ－ｊｕｎ蛋白表达量较低。各脑区间，ｃ－ｊｕｎ蛋白表达相比差 异 不 显 著（Ｐ＞０．０５）。 结 果 提 示：ＸＦＭ 和赛拉嗪麻醉过程中，大鼠大脑皮层、海马、小脑及 脑 干 ｃ－ｊｕｎ蛋 白 表 达 量 随 麻 醉 加 深 而 增 加，在 麻 醉 苏 醒 过 程 中， ｃ－ｊｕｎ蛋白表达量下降，提示 ＸＦＭ 和赛拉嗪可以诱导上述脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表达上调，这些脑区ｃ－ｊｕｎ蛋白表达的改变 可能是 ＸＦＭ 和赛拉嗪作用机制之一。 关 键 词 ：小 型 猪 专 用 复 合 麻 醉 剂 ；赛 拉 嗪 ；不 同 脑 区 ；ｃ－ｊｕｎ 中图分类号：Ｓ８５９．７９１ 文献标志码：Ａ 文章编号：０３６６－６９６４（２０１４）１１－１９０４－０７
临床研究显示，ＸＦＭ 麻醉平稳，镇痛、肌松和镇 静效果俱佳，且对动 物 呼 吸 循 环 系 统 及 基 本 生 理 状 态 无 不 良 影 响 ，可 以 满 足 外 科 手 术 、科 研 工 作 及 临 床 诊疗工 作 要 求 。 ［１－２］ 赛 拉 嗪 （ｘｙｌａｚｉｎｅ）又 名 隆 朋，作 为 ＸＦＭ 组成成分之 一，是 目 前 临 床 常 用 的 α２ 肾 上 腺 能 受 体 激 动 剂 ，具 有 良 好 的 镇 痛 和 镇 静 效 果 ，常 与 多种麻醉药物联合 用 于 多 种 动 物 全 身 麻 醉，如 赛 拉 嗪与氯胺酮复 合 麻 醉 马、猫 等 动 物［３－４］，在 动 物 麻 醉 领域越来越受到研究人员的关注。
畜 牧 兽 医 学 报 ２０１４，４５（１１）：１９０４－１９１０
Ａｃｔａ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ ｅｔ Ｚｏｏｔｅｃｈｎｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ
ｄｏｉ：１０．１１８４３／ｊ．ｉｓｓｎ．０３６６－６９６４．２０１４．１１．０２３
小型猪专用复合麻醉剂及赛拉嗪对大鼠不同脑区 ｃ－ｊｕｎ蛋白表达的影响
牛 栋 梁 ，王 会 英 ，杨 鹏 ，姜 胜 ，范 宏 刚 ，王 洪 斌 ＊
此前研究发现，ＸＦＭ 能影响中枢神经系统中β－ ａｒｒｅｓｔｉｎ２ｍＲＮＡ 的转 录［５］，中 枢 神 经 系 统 ｃ－ｊｕｎ 方 面的研究已广泛应 用 于 药 理 学 研 究，也 是 麻 醉 药 物 作用机制研究的 热 点 内 容。 本 试 验 从 ｃ－ｊｕｎ 蛋 白 表 达水平入 手，探 究 有 核 内 第 三 信 使 之 称 的 ｃ－ｊｕｎ 与 ＸＦＭ 麻 醉 过 程 及 赛 拉 嗪 作 用 的 关 系，结 合 前 期 ＸＦＭ 及赛拉嗪作用机制的研究基础，讨论其在中枢 神经元内调 控 过 程，进 一 步 探 讨 ＸＦＭ 及 赛 拉 嗪 在 中枢神经系统作用的 机 制。 通 过 对 ＸＦＭ 及 赛 拉 嗪 作用机制的探讨，为 麻 醉 药 物 临 床 应 用 和 研 制 新 型 安全高效的麻醉药 物 奠 定 理 论 基 础，也 可 为 动 物 全 麻机理的深入研究提供理论依据。
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｃ ｆｏｒ Ｍｉｎｉａｔｕｒｅ Ｐｉｇｓ ａｎｄ Ｘｙｌａｚｉｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ｃ－ｊｕｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ Ｒａｔｓ
ＮＩＵ Ｄｏｎｇ－ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｈｕｉ－ｙｉｎｇ，ＹＡＮＧ Ｐｅｎｇ，ＪＩＡＮＧ Ｓｈｅｎｇ，ＦＡＮ Ｈｏｎｇ－ｇａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｂｉｎ＊ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０，Ｃｈｉｎａ）
１ 材 料 与 方 法
１．１ 材 料 及 仪 器 ＸＦＭ 为东 北 农 业 大 学 外 科 教 研 室 配 制 （批 号
２０１１１００１），盐 酸 赛 拉 嗪 由 东 北 农 业 大 学 外 科 教 研 室 高利教授 惠 赠 （纯 度 ９９．５％）。β－ａｃｔｉｎ 多 克 隆 抗 体 （美 国 Ｓａｎｔａ公 司 ）、ｃ－ｊｕｎ 多 克 隆 抗 体 （美 国 Ｓａｎｔａ公
收 稿 日 期 ：２０１４－０３－２７ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 （３１２７２６１７；３１００１０９２） 作 者 简 介 ：牛 栋 梁 （１９８６－），男 ，河 南 林 州 人 ，硕 士 生 ，主 要 从 事 动 物 麻 醉 与 镇 痛 研 究 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｄｌ０４０１＠１６３．ｃｏｍ ＊ 通 信 作 者 ：王 洪 斌 ，教 授 ，博 士 生 导 师 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｂｗａｎｇ＠ｎｅａｕ，ｅｄｕ．ｃｎ
１１ 期
牛 栋 梁 等 ：小 型 猪 专 用 复 合 麻 醉 剂 及 赛 拉 嗪 对 大 鼠 不 同 脑 区 ｃ－ｊｕｎ 蛋 白 表 达 的 影 响
１９０５
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅｓｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔ－ ｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：（１）Ｉｎ Ｃ ｇｒｏｕｐ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｈａｎ－ ｇｅｓ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ａｎｄ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｏｆ ｒａｔｓ（Ｐ＞０．０５）ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｂ ｇｒｏｕｐ；（２）Ｉｎ Ｈ ｇｒｏｕｐ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ，ａｎｄ ｄｅ－ ｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｓｔａｇｅ Ⅵ （Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｂ ｇｒｏｕｐ；（３）Ｉｎ Ｘ ｇｒｏｕｐ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ（Ｐ＜０．０１），ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｌａｔｅ ｓｔａｇｅｓ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍ）、丙烯酰胺（上海伯奥 生 物科技有限公司）、甲 叉 双 丙 烯 酰 胺 （上 海 伯 奥 生 物 科技 有 限 公 司 ）、Ｘ 光 胶 片 （伊 士 曼 柯 达 公 司 ）、 ＰＶＤＦ 膜、ＲＩＰＡ 裂 解 液、ＰＭＳＦ、ＢＣＡ 蛋 白 浓 度 测 定试剂盒、预染蛋白 Ｍａｒｋｅｒ、ＥＣＬ 发光试剂盒、Ｔｒｉｓ 碱、十二烷基磺酸钠、吐温－２０、甘氨酸、丽春红染 液、 ＴＥＭＥＤ 均购于碧云天生物技术研究所。
ｗｉｔｈ Ｂ ｇｒｏｕｐ．Ａｎｄ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｘ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ Ｈ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）．（４）ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （Ｐ＞０．０５）．Ｄｕｒｉｎｇ ｒａｔｓ ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ＸＦＭ ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ，ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｉｎ－ ｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ａｎｄ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｔｉｓｓｕｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｅｐｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｗｈｅｎ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｆｒｏｍ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＸＦＭ ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｍａｙ ｂｅ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＸＦＭ；ｘｙｌａｚｉｎｅ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ；ｃ－ｊｕｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｐｉｇ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ａｎ－ ａｅｓｔｈｅｔｉｃ （ＸＦＭ）ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ ｏｎ ｃ－ｊｕｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｒａｔ． Ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｆｏｕｒｔｅｅｎ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （Ｂ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝ ６），ｓａｌｉｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （Ｃ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝３６），ＸＦＭ ｇｒｏｕｐ （Ｈ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝３６）ａｎｄ ｘｙｌａｚｉｎｅ ｇｒｏｕｐ （Ｘ ｇｒｏｕｐ，ｎ＝３６）．Ｒａｔｓ ｉｎ Ｂ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒａｉｓｅｄ ｎｏｒｍａｌｌｙ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｎｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｒａｔｓ ｉｎ Ｃ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ，ａｎｄ ｒａｔｓ ｉｎ Ｈ ｇｒｏｕｐ，Ｘ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ＸＦＭ，Ｘｙｌａ－ ｚｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｉｘ ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ ｅｘｃｅｐｔ Ｂ ｇｒｏｕｐ：ａｎｅｓｔｈｅ－ ｓｉａ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｓｔａｇｅ（ｓｔａｇｅ Ⅰ），ｄｉｓａｐｐｅａｒ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ （ｓｔａｇｅ Ⅱ），１５ｍｉｎ ａｆｔｅｒ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ ｄｉｓａｐｐｅａｒ（ｓｔａｇｅ Ⅲ），３５ ｍｉｎ ａｆｔｅｒ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ ｄｉｓａｐｐｅａｒ （ｓｔａｇｅ Ⅳ ），ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ （ｓｔａｇｅ Ⅴ ）ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｌｉｎｅａｒ ｃｒａｗｌｉｎｇ （ｓｔａｇｅ Ⅵ ）．Ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｃａｐｉｔａｔｅｄ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｃｏｒｔｅｘ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ａｎｄ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ．
