当前位置：文档之家 › 幽门螺杆菌细胞毒素相关基因_空泡_省略_达产物与儿童胃十二指肠疾病的关系_陈肖肖

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因_空泡_省略_达产物与儿童胃十二指肠疾病的关系_陈肖肖

  • 格式：pdf
  • 大小：261.31 KB
  • 文档页数：4

·论著·(消化系统专栏)浙江省科委基金资助项目(项目编号:991110390)作者单位:浙江大学医学院附属儿童医院,杭州310003作者简介:陈肖肖(1944-),女,主任医师,研究方向为消化系统疾病。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因、空泡毒素基因及其表达产物与儿童胃十二指肠疾病的关系

陈肖肖,尚世强,欧弼悠,曲一平 【摘要】　目的　研究幽门螺杆菌(Hp)的细胞毒素相关基因(cagA基因)、空泡毒素基因(vacA基因)及其表达产物cagA蛋白、vacA抗体与儿童消化性溃疡(PU)、慢性胃炎(CG)之间的关系。方法　对152例Hp感染患儿(PU31例,CG121例)的胃黏膜应用4对不同引物,通过聚合酶链反应(PCR)技术检测cagA、vacA基因;用免疫印迹法测定139例血清cagA、vacA抗体。结果　152例胃黏膜100%具有vacA基因(152/152),cagA基因经用3对不同引物检测,其总阳性率为78%(118/152),其中PU71%(22/31),CG79%(96/121),两组间差异无显著性(χ2=0.996　P>0.05)。139例血清vacA抗体阳性率92.1%(128/139),PU86.7%(26/30),CG94.5

%(103/109)(χ2=1.146　P>0.5);cagA抗体阳性率91.4%(127/139),PU83.3%(25/30),CG93.6%(102/109)(χ2=3.130　P>0.5),以上两组间差异均无显著性。结论　1.浙江地区儿童感染的Hp绝大多数为具有

cagA基因的毒力菌株。2.亚洲地区与西方人群中感染的Hp菌株可能存在等位基因的多态性、变异性。实用儿科临床杂志,2003,18(11):881～883【关键词】　幽门螺杆菌;vacA基因;cagA基因【中图分类号】　R725.7 【文献标识码】　A 【文章编号】　1003-515X(2003)11-0881-03

Cytotoxinassociatedproteingene,vacuolatingcytoxingeneandexpressionproductionofhelicobacterpyloricor-relativewithgastroduodenaldiseaseinchildrenCHENXiao-xiao,SHANGShi-qiang,OUBi-you,etal.Children′sHospital,theAffiliatedMedicalCollegeofZhejiangUniversity,Hangzhou310003,P.R.ChinaAbstract:　Objective　TostudytherelationshipbetweenexpressionproductsofCytotoxinassociatedprotein(cagA)gene,Vac-uolatingcytoxin(vacA)geneandpepticulcerdisease(PU),chronicgastritis(CG).Methods　Gastricbiopsyspecimenswereobtainedfrom152childrenwithhelicobacterpylori(Hp)infection,including31withPU,121withCG.ThegeneofcagAandvacAwereex-aminedbypolymerasechainreaction(PCR)using4differentprimersetsin152specimens.cagAandvacAantibodywasdetectedbywesternblotanalysisin139serumof152children.Results　Among152children,thepositiverateofvacAgenewas100%Theposi-tiverateofcagAgenewith3pairsofprimerswas78%(118/152).TherewasnosignificantdifferencebetweenPU(71%,22/31)andCG(79%,96/121)(P>0.05).Among139serum,thepositiverateofvacAantibodywas92.1%(128/139)(P>0.05),TherewasnosignificantdifferencebetweenPU(86.7%,26/30)andCG(94.5%,103/109).ThepositiverateofcagAantibodywas91.4%(127/139);TherewasalsonosignificantdifferencebetweenPU(83.3%,25/30)andCG(93.6%,102/109),(P>0.5).Conclusions　1.MostoftheHpinfectedchildrencarriedcagAgeneinZhejiangregion.2.ComparedwithCG,thepositiveratesofthegeneandtheproteinofcagAandvacAinPUarenotsignificantlydifferent.JApplClinPediatr,2003,18(11):881～883Keywords:　helicobacterpylor;Cytotoxinassociatedproteingene;Vacuolatingcytoxingene

流行病学资料显示成人幽门螺杆菌(Hp)感染相关性疾病中50%是在儿童期感染了Hp,儿童Hp感染的免疫应答、发病机制、病理改变特点及转归等有着与成人难以比拟的独特性[1]。国内对儿童感染Hp菌株的基因研究较少。本文通

过检测浙江地区儿童感染的Hp菌株的细胞毒素相关基因(cagA基因)和空泡毒素基因(vacA基因)及其表达的细胞毒

素相关蛋白和空泡毒素抗体,研究Hp菌株的基因型与儿童消化性溃疡(PU)和慢性胃炎(CG)的相关性。现将结果报告如下。

资料与方法一、一般资料　收集我院2000年4月～2002年4月经胃镜检查、组织活检证实为Hp感染患儿152例,男95例,女57例;年龄8.9±2.51岁;PU31例,CG121例。两组性别、年龄均无显著性差异。二、胃黏膜标本　取距幽门孔3cm内胃窦黏膜3～4块,分别进行病理切片;快速尿素酶试验(RUT),试剂由福

·881·实用儿科临床杂志2003年11月第18卷第11期　JApplClinPediatr,November2003,Vol.18No.11建三强生物制品公司提供;荧光定量PCR法检测HpUreA-DNA(试剂盒由中山医科大学达安基因股份有限公司提供),严格按说明书操作。胃镜检查后即抽取静脉血2ml,24h内分离血清,置-20℃保存待检。三、Hp感染诊断标准　病理切片Giemsa染色、RUT、PCR-UreA-DNA三项检测均阳性者为Hp感染[2]。四、DNA模板提取　Hp标准菌株经冻融2次,用生理盐水冲冼2次,离心(10000转/min)5min,弃上清液;胃黏膜组织经生理盐水洗涤2次,在无菌条件下轻碾成匀浆;两者均直接加入PCR-DNA提取液(中山医科大学达安公司提供)50μl,煮沸10min,10000转/min离心5min,取上清液用于PCR扩增。五、PCR技术　1.引物设计与合成:在vacA、cagA基因序列内,参照参考文献[3,4]设计引物(引物序列　见表1),由上海申友生物技术有限公司合成。2.PCR扩增反应:扩增反应总体积为50μl,其中10倍浓度缓冲液5μl,dNTPs(10mmol/L)1μl,TaqDNA多聚酶(5U/μl)0.3μl,氧化镁(25mmol/L)3μl,双蒸水34.7μl。上游引物和下游引物(25pmol/L)各1μl,模板DNA4μl,以50μl石腊油覆盖,瞬时离心后待用。所有PCR反应扩增参数设定为:94℃变性5min,后94℃变性30s,48℃退火30s,72℃延伸60s共35个循环,最后72℃延伸5min。PCR扩增反应在PTC-200型PCR扩增仪(美国MJ公司产品)上进行。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,观察结果。每次PCR扩增均设阳性、阴性及空白对照。标准菌株SSⅠ[cagA(+)、vacA(+)]由澳大利亚新南威尔逊大学微生物免疫学院LeeA教授惠赠。六、免疫印迹试验　实验原理及方法:Hp混合抗原采用SOS-聚丙烯硅胺凝胶电泳,按相对分子量大小不同分开,再将其转移到硝酸纤维膜上。按相对1:100稀释的被检血清直接加入有硝酸膜的反应槽内,孵育反应后加入酶联抗体,进行免疫吸附反应,显色后在抗原相应位置出现显色带(ca-gA112kD,128kD;vacA95kD、91kD;Ure66kD、30kD),与标准带对照,判断结果。试剂由深圳市伯特生物制品有限公司提供。七、统计学处理　采用χ2检验。结 果一、vacA与cagA基因表述　见图1。扩增vacA基因600bpDNA片段,阳性率100%(152/152),应用3对引物扩增cagA基因404、349、298bpDNA片段,总阳性率78%(118/152),其中PU71%(22/31),CG79%(96/121),两组间无显著性差异(χ2=0.996　P>0.05)。二、vacA、cagA抗体检测结果　免疫印迹试验检测139例血清,vagA抗体95、91kD带显色128例,阳性率92.1%(128/139),其中PU86.7%(26/30),CG94.5%(103/109)(χ2=1.146　P>0.5);cagA抗体128、112kD带显色127例,阳性率91.4%(127/139),其中PU83.3%(25/30),CG93.6%(102/109),(χ2=3.130　P>0.5),两组差异无显著性。讨 论对Hp感染中参与疾病发生机制相关因子的研究仍然是国内外研究的热点,尤其对Hp菌株cagA、vacA基因及cagA、vacA蛋白研究,西方国家诸多报道所有Hp菌株均具有vacA基因,而并非所有的vacA基因均表达vacA蛋白,vacA蛋白是使上皮细胞产生空泡变性的毒素蛋白,仅50%菌株能产生有活性的毒素[1,5,6]。有报道成人感染Hp菌株中约60%

具有cagA基因,为毒力菌株,儿童中约40%,cagA+毒力菌株表达cagA蛋白,其调节vacA蛋白的产生与分泌,vacA和cagA与PU密切相关,可作为标志性的毒力因子预测PU。而近期亚洲地区研究显示不同的结果:中国、日本、韩国成人群体中HpcagA+毒力菌株的感染率显著高于西方欧美国家,分别为98.8%、98.3%、100%,且cagA+毒力菌株检出率在Hp相关胃、十二指肠疾病之间差异无显著性[3,7,8]。认为

合集下载

幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病患儿MMP-7基因多态性研究

幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病患儿MMP-7基因多态性研究

幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病患儿MMP-7基因多态性研究单庆文;经承学;王琳琳;吕自力;唐清;云翔;连淑君【期刊名称】《临床儿科杂志》【年(卷),期】2010(28)10【摘要】目的研究基质金属蛋白酶-7(MMP-7)基因启动子多态性与儿童幽门螺杆菌(H-pylori)相关性慢性胃炎、十二指肠溃疡的易感性和临床特征的关系.方法提取100例慢性胃炎、32例十二指肠溃疡和102例健康对照组儿童的外周血或胃黏膜基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)和测序方法检测其MMP-7基因-181A/G多态性位点的基因型,分析该基因的基因型和等位基因频率在病例组和对照组人群中的分布及基因型分布与临床病理特征的关系,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组胃黏膜MMP-7 mRNA的表达.结果 MMP-7基因-181A/G多态性位点的基因型和等位基因频率在病例组和对照组人群中的分布差别无统计学意义,亦与H.pylori易感性无关.MMP-7基因-181A/G多态性不影响MMP-7 mRNA在胃黏膜中的表达,且与胃窦黏膜慢性炎症程度无相关性.结论 MMP-7基因-181A/G多态性与儿童慢性胃炎和十二指肠溃疡发生的易感性无关.【总页数】6页(P916-921)【作者】单庆文;经承学;王琳琳;吕自力;唐清;云翔;连淑君【作者单位】广西医科大学第一附属医院,儿科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院,病理科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R725【相关文献】1.TNF基因多态性与胃十二指肠疾病幽门螺杆菌感染的相关性研究 [J], 李春;夏冰;杨艺;李瑾;夏华向2.IL-1基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系 [J], 叶荻庆;向瑜;张莉萍;陈瀑;闫伟3.肿瘤坏死因子基因多态性及幽门螺杆菌感染与胃十二指肠疾病及胃癌的相关性研究 [J], 王美丽;杨力4.cagⅡ在胃十二指肠疾病患者幽门螺杆菌中的检出率及其与幽门螺杆菌相关性疾病的关系 [J], 刘炯;许国铭;龚燕芳;屠振兴;李兆申;纪徐淮5.白介素-1和肿瘤坏死因子-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系 [J], 向瑜;杨致邦;陈瀑;范贵荣;郭丽媛;成凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素的PCR检测

幽门螺杆菌细胞空泡毒素的PCR检测

幽门螺杆菌细胞空泡毒素的PCR检测杨毓华【期刊名称】《东南大学学报（医学版）》【年(卷),期】1997(000)004【摘要】目的：建立幽门螺杆菌（ＨＰ）细胞空泡毒素（ＶＣ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。

方法：根据ＨＰＶＣ基因图谱，设计了两对顺序特异性引物，分别扩增包括信号肽顺序（４０６－１５１６）和不含此顺序（８１１－１５１６）的基因片段。

对１４株经形态学和生化鉴定证实为ＨＰ的菌株提取其基因组ＤＮＡ，以上述引物进行ＰＣＲ。

结果：已知ＶＣ阳性的ＨＰ标准株（ＮＣＴＣ１１６３８）、临床分离株ＮＺ７、ＮＺ８、ＨＰ２３、ＨＰ３５、ＨＰ５７、ＨＰ６５、ＨＰ６６、ＨＰ６７和ＨＰ７０共１０株为ＶＣ阳性。

扩增产物中均检出ＶＣ特异的１１００ｂｐ、７０５ｂｐ、５４３ｂｐ片段，敏感性约为０．６ｎｇ基因组ＤＮＡ。

结论：所设计的引物和ＰＣＲ检测方法正确，可应用于临床检测。

【总页数】1页(P289)【作者】杨毓华【作者单位】南京军区南京总医院全军医学检验中心;南京铁道医学院医学科学研究所【正文语种】中文【中图分类】R32【相关文献】1.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A基因型与上消化道疾病的关系 [J], 蒋闵仁;黄英;宋佳鸿;叶圆圆2.检测血清幽门螺杆菌细胞空泡毒素抗体的间接ELISA法初步建立 [J], 刘淼;沈继龙;汪学龙;江宝玲3.幽门螺杆菌空泡毒素基因的PCR分型与上消化道疾病的关系 [J], 方莹;王天叫;张长弓;颜江华;李东辉4.幽门螺杆菌细胞空泡毒素和细胞毒素相关蛋白研究进展 [J], 杨斐5.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、热休克蛋白60和细胞空泡毒素与慢性胃炎患者胃粘膜病理变化的关系 [J], 杨波;杜利君;魏剑林;郭运芬;赵佳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

硕士毕业论文浅谈幽门螺旋杆菌的危害和预防措施

硕士毕业论文浅谈幽门螺旋杆菌的危害和预防措施

浅谈幽门螺旋杆菌的危害和预防措施幽门螺杆菌或幽门螺旋菌，英文名Helicobacterpylori，简称Hp。

是革兰氏阴性、微需氧的细菌，生存于胃部及十二指肠的各区域内。

它会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，甚或导致胃及十二指肠溃疡与胃癌。

由巴里・马歇尔(BarryJ.Marshall)和罗宾・沃伦(J.RobinWarren)二人发现，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。

长2.5～4.0 μm，宽0.5～1.0 μm。

幽门螺杆菌是微需氧菌，环境氧要求5～8%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长[1-4]。

幽门螺杆菌在人群中的感染率非常高，达40%～90%，通常在儿童期感染，而且一经感染，若不根除治疗，将终生携带，携带者是幽门螺杆菌的传染源。

幽门螺杆菌感染的诊断有侵入性方法如细菌培养、快速脲酶试验等，亦有非侵入性方法如脲呼吸试验、抗体检测等。

幽门螺杆菌感染引起胃-十二指肠疾病的机制涉及细菌本身毒力因子、细菌黏附与定植、宿主炎症/免疫反应、氧化应激、细胞的增殖与凋亡等，情况复杂。

幽门螺杆菌相关疾病的治疗普遍采用根除细菌的抗菌疗法。

预防幽门螺杆菌感染以及治疗幽门螺杆菌相关疾病的疫苗正在研究中。

一、幽门螺杆菌的危害幽门螺旋杆菌(HP)感染越来越受到人们的重视，因为幽门螺旋杆菌往往是导致胃肠道疾病的元凶.大量研究结果表明：幽门螺旋杆菌(HP)感染可导致急慢性胃炎、消化性溃疡、MALT淋巴瘤和胃癌，部分功能性消化不良的患者根除HP后症状可获得较显着改善。

据全国HP科研协作组的成员单位负责人叶教授介绍，长期HP感染可触发一系列胃黏膜的改变，导致慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生，加上宿主自身的因素，有些人最终可导致胃癌的发生[5]。

二、幽门螺杆菌的检查方法2.1呼气检测仪检查这是幽门螺杆菌检测的最先进设备之一，不需插管，只须轻轻吹一口气，就能查出胃病致病"元凶"幽门螺旋杆菌(HP)的感染例。

幽门螺杆菌毒素相关基因的克隆、测序及表达

幽门螺杆菌毒素相关基因的克隆、测序及表达

幽门螺杆菌毒素相关基因的克隆、测序及表达李姁君;韩锋产;闫小君;苏成芝【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2002(023)005【摘要】目的分段扩增、克隆幽门螺杆菌毒素相关基因cagA中间区cag1,cag2,并利用大肠杆菌系统表达. 方法 PCR法扩增cagA基因,双脱氧中止法测序正确后,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220, 受控于PRPL启动子, 转化大肠杆菌DH5α,42℃进行温度诱导. 结果 PCR分段扩增出cagA中间区基因cag1, cag2, 分别为975,755 bp, 克隆入pUC19质粒,测序正确;在pBV中构建cag1, cag2的重组表达载体pBVcagA1, pBVcagA2, 工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带, Mr: Cag1 36×103, Cag2 27.9×103,均与预期的cagA蛋白Mr一致,约占菌体总蛋白的36%和24%. 结论成功克隆分段扩增的cagA中间区基因,并可在大肠杆菌DH5α中高效表达.【总页数】4页(P429-432)【作者】李姁君;韩锋产;闫小君;苏成芝【作者单位】第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西,西安,710033;第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西,西安,710033;第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西,西安,710033;第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】Q78;R735【相关文献】1.幽门螺杆菌NCTC11637、NCTC11639毒素相关基因A的克隆、序列分析及真核表达载体的构建 [J], 汪苏;周建奖;单可人;赵燕;谢渊2.幽门螺杆菌细胞毒素相关基因、空泡毒素基因及其表达产物与儿童胃十二指肠疾病的关系 [J], 陈肖肖;尚世强;欧弼悠;曲一平3.新型肠毒素蛋白SElK编码基因的克隆测序、生物信息学分析和表达载体构建[J], 刘骥;潘洁;田万帆;唐俊妮;赵燕英;陈娟4.罗非鱼微囊藻毒素去毒相关基因克隆与活体表达研究 [J], 王琳;梁旭方;廖婉琴;雷腊梅;韩博平5.慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白(CagA)的表达 [J], 唐晓红;任敏;谭世桥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。