金线莲总黄酮测定

种苗级别对金线莲生长发育及产量和品质的影响作者：邵清松周爱存胡润淮张雨韵刘堂梅李明焱来源：《中国中药杂志》2014年第05期[摘要] 对金线莲种苗的株高、地径、叶片数、全株鲜重和高径比5个形态指标进行检测，并进行主成分分析确定分级指标，采用逐步聚类分析方法聚类分级；进行不同等级种苗盆栽试验，对植株生长指标，药材产量和品质指标进行测定。

结果表明可以选用株高和地径为种苗分级的质量指标，并初步制定了金线莲种苗质量分级标准；不同级别金线莲种苗对植株生长发育，药材产量有影响，Ⅰ级苗的株高和地径要比Ⅱ级、Ⅲ级苗高，且药材产量也显著高于Ⅱ级、Ⅲ级苗药材产量，而对药材内在品质无明显影响，为金线莲规范化栽培提供依据。

[关键词] 金线莲；种苗分级；生长发育；产量；品质[收稿日期] 2013-08-27[基金项目] 国家自然科学基金项目（81303167）；浙江省自然科学基金项目（LY13H280010）[通信作者] *邵清松，博士，副教授，主要从事药用植物栽培与育种研究，Tel：（0571）63741273，E-mail：sqszjfc@金线莲Anoectochilus roxburghii又名金线兰、金丝草，为兰科开唇兰属多年生草本植物，主要分布在福建、浙江、台湾、江西、贵州等地，在民间享有“药王”的美称[1-2]。

金线莲全草入药，主要含有多糖、黄酮、甾体化合物、萜类、生物碱等化学成分，具有清热凉血、除湿解毒等功效，主要用于治疗糖尿病、急慢性肝炎等[3-5]。

近年来，国内外对于金线莲的种苗繁育、规范化栽培、化学成分、药理作用的研究较多[6]。

由于市场需求量增加，金线莲栽培面积不断扩大，种苗需求量日益增加。

优质的种苗是实现中药材规范化生产的物质基础和源头，也是确保中药资源可持续发展和产业化的前提。

实行中药材种苗标准化有利于中药材种苗的优化筛选，为中药材生产提供高质量的种子种苗，从而提高中药材的产量和质量[7]。

为此，有必要对金线莲种苗进行质量分级，制定金线莲的种苗质量参数标准，使金线莲中药材的生产更加规范化。

闽东野生金线莲有效成分含量的比较施满容;龚林光;陆志平;雷忠涌;周三女【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2016(031)009【摘要】为探究闽东野生金线莲有效成分含量的差异,采用紫外分光光度法测定闽东4个县、福安5个海拔高度野生金线莲有效成分的含量。

研究结果：多糖含量在5．60％~6．20％,总氨基酸含量在3．48％~3．95％,总黄酮含量在0．55％~0．82％,总生物碱含量在0．062％~0．098％。

方差分析及多重比较的结果表明,闽东不同县以及不同海拔野生金线莲有效成分含量有显著差异。

多糖、总生物碱含量以周宁县最高,总氨基酸、总黄酮含量以寿宁县最高,与福安、柘荣金线莲比较,达到极显著差异或显著差异水平。

多糖含量随着海拔高度增加而增加,差异显著,海拔730、840 m金线莲多糖含量与海拔420、530 m 金线莲比较,达到极显著或显著差异水平；总氨基酸含量随着海拔高度升高有增加趋势,但差异不显著；总黄酮、总生物碱含量在海拔420~730 m随着海拔高度增加而增加,海拔730、840m金线莲总黄酮、总生物碱含量与420、530 m金线莲比较达到极显著差异水平。

总之,多糖、黄酮、生物碱含量在650 m以上海拔与650 m以下海拔之间有显著差异,650 m以上3种海拔之间有效成分差异不显著。

结果表明,植物组织培养种质资源可以优先选择寿宁、周宁产地野生金线莲,人工栽培金线莲可以选择在650 m以上的区域地带,可能更有利于有效成分的积累。

【总页数】7页(P950-956)【作者】施满容;龚林光;陆志平;雷忠涌;周三女【作者单位】宁德职业技术学院，福建福安 355000;福安市质量监督检验所，福建福安 355000;宁德职业技术学院，福建福安 355000;宁德职业技术学院，福建福安 355000;宁德职业技术学院，福建福安 355000【正文语种】中文【相关文献】1.不同海拔阔叶林林下仿野生栽培金线莲效果比较研究 [J], 陈伟2.不同地区野生金线莲有效成分含量的比较 [J], 施满容;龚林光;陆志平;雷忠涌3.闽东野生金线莲资源调查研究 [J], 施满容;陆志平;钟幼雄;龚路生;周三女4.山西23个产地野生黄芩有效成分含量比较 [J], 陆子芳;郝建平;王秋宝5.不同月龄林下仿野生栽培金线莲有效成分含量研究 [J], 孙加焱; 余红伟; 方锡平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同肥料对林下种植金线莲生长的影响发布时间：2022-09-14T02:50:08.868Z 来源：《科学与技术》2022年第30卷9期作者：李莉[导读] 通过多年的林下栽培实践，对金线莲的生长习性进行了分析和总结，制定了试验方案，并着重探讨了不同施肥措施对其生长李莉龙门县斛金缘生态农业发展有限公司广东惠州 516820摘要：通过多年的林下栽培实践，对金线莲的生长习性进行了分析和总结，制定了试验方案，并着重探讨了不同施肥措施对其生长、成活率、成活率和质量的影响。

为实现林下金线莲高产优质高效栽培提供了技术保证。

关键词：化肥；林下栽培；黄花；生长效应前言金线莲是兰科开唇兰属的一种多年生珍贵的草本植物，主要分布在福建，台湾，云南，广西，越南，缅甸等亚热带和热带地区。

金线莲是闽台民间常用的一种药材，用以治疗多种病症，是“神药”，台湾人有“中药之王”的美誉。

金线莲是一种很有价值的药材，但是由于长期的过度开采，使得它的天然资源逐渐减少，福建政府于1990年将其列入了濒临绝种的药材名单。

金线莲林下栽培因其生长特点、生长特点、林地选择、林地选择、林下栽培模式、水份管理等方面的技术问题，着重探讨了不同施肥方式对金线莲林下栽培的成活率、生长量和质量，为实现林下栽培的高产、优质、高效提供技术保证。

1金线莲的栽培特性从2012年开始，本公司在林下栽培金线莲，经9年的生产实践，现已形成以下几点：1.1金线莲对气温有很好的适应能力在20~25℃的环境中，最高气温不能超过30℃，在高温、低温条件下，要采取人工保温或降温措施[1]。

1.2含水量金线莲性喜湿，耐旱，对其生长有很大的影响。

金线莲生长于干旱、土壤缺水的地区，适宜于湿润的生态林中或小溪旁栽培，并保证土壤的相对湿度在80%以上。

1.3照明金线莲属喜荫，其光合作用的饱和度较低，最怕日光照射，适合在3000lx左右。

在天然条件下，以70%~80%的上部和40%为下层的森林为适宜的生长环境[2]。

保健食品总黄酮测定方法
保健食品是指具有保健功能的食品，其中总黄酮是一种常见的保健成分。

总黄酮是指一类具有黄酮骨架结构的化合物，包括黄酮类、异黄酮类、花青素类等多种物质。

总黄酮具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种保健作用，因此被广泛应用于保健食品中。

为了保证保健食品中总黄酮的含量符合标准，需要进行总黄酮测定。

总黄酮测定方法主要有两种：分光光度法和高效液相色谱法。

其中，分光光度法是一种简单、快速、经济的测定方法，适用于大批量样品的测定。

该方法的原理是利用总黄酮与铝离子形成络合物，使样品溶液的吸光度增加，从而测定总黄酮的含量。

该方法的操作简单，但对样品的前处理要求较高，需要去除干扰物质，否则会影响测定结果的准确性。

高效液相色谱法是一种准确、灵敏、选择性好的测定方法，适用于复杂样品的测定。

该方法的原理是利用高效液相色谱仪对样品中的总黄酮进行分离和检测。

该方法的优点是测定结果准确可靠，但需要较长的分析时间和较高的仪器成本。

总黄酮测定方法的选择应根据实际情况进行，以保证测定结果的准确性和可靠性。

同时，保健食品生产企业应严格按照国家标准进行总黄酮含量的测定，确保产品质量符合标准，保障消费者的健康。

总黄酮含量测定标准曲线总黄酮含量是衡量植物中抗氧化活性的重要指标，也是评价植物药材质量的重要参数之一。

因此，建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线对于保证植物药材质量的稳定性和可靠性具有重要意义。

本文将介绍总黄酮含量测定标准曲线的建立方法及相关注意事项。

首先，建立总黄酮含量测定标准曲线需要准备一定浓度范围内的标准溶液。

通常可以选择相对纯净的总黄酮标准品，按照一定的比例配制成不同浓度的标准溶液。

在配制标准溶液的过程中，需要注意溶解度、稳定性等因素，以确保标准溶液的准确性和可靠性。

其次，建立总黄酮含量测定标准曲线需要选择合适的测定方法。

常用的方法包括分光光度法、高效液相色谱法等。

在选择测定方法时，需要考虑样品的特性、仪器设备的可用性、实验操作的便捷性等因素，以确保测定结果的准确性和可靠性。

在进行总黄酮含量测定标准曲线的建立过程中，需要注意以下几点：1. 标准曲线的线性范围，需要选择合适的标准溶液浓度范围，确保在该范围内标准曲线呈现良好的线性关系。

2. 标准曲线的斜率和截距，通过线性回归分析，计算标准曲线的斜率和截距，以确定总黄酮含量与测定数值之间的关系。

3. 标准曲线的相关系数，通过计算标准曲线的相关系数，评估标准曲线的拟合度，以确保标准曲线的可靠性和准确性。

4. 标准曲线的验证，建立标准曲线后，需要进行验证实验，验证标准曲线的准确性和可靠性，以确保标准曲线的适用性和稳定性。

总之，建立总黄酮含量测定标准曲线是保证植物药材质量稳定性和可靠性的重要步骤。

在建立标准曲线的过程中，需要选择合适的标准溶液、测定方法，注意标准曲线的线性范围、斜率和截距、相关系数等参数，以确保标准曲线的准确性和可靠性。

建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线，对于推动植物药材质量控制和质量评价具有重要意义。

总黄酮含量测试试剂盒（C002-96T 分光光度计法）一、测定原理黄酮中处于相邻位的羰基、羟基可以共同络合金属而显色。

在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯和物，加入碱溶液后显红橙色，在510nm处有最大吸收峰。

芦丁是公认的黄酮类化合物，常被用作标准品。

二、试剂组成试剂一：无色液体50mL ×1瓶试剂二：无色液体50mL ×1瓶试剂三：显色液 200mL ×1瓶试剂四：1.0mg/mL芦丁标准溶液 5mL×1瓶三、储存条件及有效期试剂一、试剂二4℃保存，试剂三-20℃保存，可保存3个月。

四、试剂的配制试剂四应用液：取2mL试剂四，加入18mL双蒸水，稀释至20mL，得到100μg/mL的芦丁标准液，分别采用移液管移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL试剂四于空试管中，加入4.0，3.0，2.0，1.0，0mL双蒸水，得到20，40，60，80，100 μg/mL芦丁标准液。

五、操作步骤充分混匀，室温静置6min。

充分混匀，室温静置6min。

充分混匀，室温静置15min，以试剂空白调零，分光光度计510nm处测吸光值。

1必须做标准管，以绘制标准曲线；2一般样品建议做空白管，以消除误差；3试剂三有腐蚀性，请务必戴手套操作，如不慎接触皮肤，参照碱烧伤的方法用流水冲洗，如有条件可用硼酸处理。

六、计算方法1.绘制标准曲线以芦丁应用液浓度0，20，40，60，80，100μg/mL为横坐标，以分光光度计测得的吸光值为纵坐标，在坐标纸上或利用EXCEL绘制标准曲线。

2.计算样品浓度对于坐标纸上绘制的标准曲线，请直接根据坐标求得样品浓度。

对于采用EXCEL计算的，根据方程求得样品浓度。

样品浓度表示为μg/mL总黄酮，也可根据测试溶液浓度计算出样品粉末中含量，表示为mg/g。

七、注意事项1. 试剂可能会有沉淀，请放置至室温后摇匀使用；八、应用举例小明提取得到了一种中草药的粗提物，并将其冻干得到粉末，配制成5mg/mL的溶液，分析其总黄酮含量。

标曲：用分度值0.01mg天平精密称取在120℃条件下烘干至恒重的芦丁对照品50mg，置于25ml容量瓶中，加无水甲醇至刻度，用10ml移液管量取10ml置100ml容量瓶中，加水至刻度。

量取对照溶液0 ml，1 ml，2 ml，3 ml，4 ml，5 ml，6ml分别置于20ml试管中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀后放置6min，10%亚硝酸铝溶液1ml，混匀后放置6min，加4%NaOH溶液10ml, 混匀后放置15min，加无水甲醇至刻度，按照紫外可见分光光度法在508nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标。

测定:取样品溶液6ml置于20ml试管中，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀后放置6min，10%亚硝酸铝溶液1ml，混匀后放置6min，加4%NaOH溶液10ml, 混匀后放置15min，加无水甲醇至刻度。

以相应的试剂为空白，按照紫外可见分光光度法在508nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标。

并通过标准曲线方程计算成浓度C（mg/ml），计算得率，其计算公式如下：黄酮的率=C×V1×V2m×1000×100%式中：C—黄酮浓度（mg/ml）V1—提取液定容体积（ml）V1—粗黄酮溶液体积（ml）m—花椒原料质量（mg）精密度实验：准确吸取同一样品提取液1ml，分别置于3只10 ml刻度试管中，分别测定其吸光值,计算相对标准差（RSD）。

重复性实验：准确称取质量相同的原料3份，在相同条件下提取，分别测定其吸光值，计算相对标准差（RSD）。

稳定性实验：准确吸取样品提取液1ml，置于10 ml刻度试管中，每隔10min重复3次测定吸光度。

回收率实验：准确称取己知含量的同一样品液1ml于6支10 ml刻度试管中，分别加入已配好的芦丁标液0 ml，1 ml，1.5 ml，2 ml，2.5 ml，3 ml，测定其加入后的吸光值，计算相对标准差（RSD）。

名贵中药材——金线莲开发与加工项目建设地点：安远县版石镇建设内容：新建金线莲温室大棚300亩，引进金线莲萃取加工生产线，建设厂房及配套设施。

建设条件：安远县地处江西省南部，属中亚热带季风气候，气候温和湿润，水资源丰富，自然环境适合金线莲生长。

项目投资：总投资6000万元，其中固定资产投资4000万元，铺底流动资金2000万元。

市场预测：金线莲，又叫金线草，学名花叶开唇兰，性喜阴凉潮湿的环境，常生于山涧林下，全草均可入药，是珍稀药用植物。

其性平味甘，具有滋补、清热、止痛、镇咳等功效，常用于治疗小儿惊风高热、糖尿病、肝炎、膀胱炎、咯血、毒蛇咬伤等。

近年来，金线莲在福建、台湾一带备受青睐，大量收购，价格逐年攀升，野生种苗被大量采集、破坏，资源日益枯竭，其价格逐年攀升。

效益预测：投产后可实现年销售收入9500万元，实现利润1700万元，4年可收回全部投资。

合作方式：独资由于金线莲对生态环境要求严格，加之近年自然环境破坏严重，野生金线莲越来越少，安远乡现每年农民在山上采摘野生金线莲10公斤左右，因而市场需求非常旺盛，供不应求，商品价格居高不下，有巨大的发展前景。

目前人工栽培技术已进入推广阶段。

安远乡地处闽西丘陵山区，年平均气温16.8℃，海拔较高的耕地，坡地达2万亩以上，全年气候温和，雨量充沛，四季分明，光照适当，山地立体气候明显，地理、气候等条件都非常适宜发展珍稀中草药金线莲种植。

2．2成分含糖类成分（多糖13.326%，低聚糖11.243%，还原糖9.73%）、牛磺酸、强心甙类、酯类、生物碱、甾体，多种氨基酸，微量元素及无机元素等。

建立了金线莲总生物碱的提取和测定方法.将金线莲全草粉末用pH=2的水溶液提取,以阳离子交换树脂吸附后,经酸化,用氯仿/甲醇(体积比2∶1)对其进行索氏提取,蒸发有机溶剂.冷冻干燥即得金线莲总生物碱.以盐酸麻黄碱为对照品,酸性染料比色法测定总生物碱,折算为盐酸麻黄碱获得总生物碱含量.测得金线莲总生物碱含量是0.079 4%,线性回归方程A=0.009 2 C-0.001 6(r=0.999 9),回收率103.13%.本提取及含量测定方法操作简单,总生物碱的提取率较高.本发明公开了一种分离中药总生物碱的方法，尤其是一种从中药金线莲提取液中分离总生物碱的方法，属中药领域。

黄酮类含量测定方法
黄酮类是一种常见的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，测定黄酮类的含量对于研究植物的生物活性和药用价值具有重要意义。

以下是测定植物中黄酮类含量的常用方法：
1. 酸水解法
通过酸水解将黄酮骨架中的糖部分裂解，然后用紫外光谱法（UV）或高效液相色谱法（HPLC）等方法测定莽草中黄酮类的总含量。

但是，该方法会破坏一部分黄酮类化合物的结构、消耗大量的试剂和时间。

2. 高效液相色谱法（HPLC）法
由于黄酮类化合物的分子结构复杂，所以HPLC法是测定黄酮类含量的有效方法之一。

通过将样品在特定条件下分离、纯化，利用紫外或荧光探测器分析检测出样品中的黄酮类含量并计算。

该法具有分离效率高、检测灵敏度、可靠度高等优点。

3. 毛细管电泳法（CE）法
毛细管电泳法是利用毛细管对混合物进行分离，将混合物分离为单独的组分的方法，实现其含量分析。

该方法抗干扰性强、检测速度快，适用于对样品含量分析较低且复杂的情况。

综上所述，不同的样品或应用领域需要不同的黄酮类含量测定方法，研究者可以
根据自己的需要选用不同的方法进行研究。

两种金线莲不同生长期主要活性成分动态变化金线莲在民间应用广泛，享有“药王”的美称，其化学成分和药理活性已被人们逐步认识。

由于过度采挖其野生资源现已濒临灭绝，目前主要运用生物技术手段对金线莲进行繁育，然而利用组织培养技术得到的金线莲其活性成分与野生金线莲的差异如何，是否能否代替野生品种现在还没有定论。

因此，本课题拟通过对金线莲主要活性成分动态变化的研究，了解人工培育金线莲活性成分的累积规律，并与野生福建金线莲进行比较，以便为生产上金线莲质量的控制和最佳的生长期的确定，提供一些参考依据。

现研究结果主要如下：1.建立了福建金线莲和台湾金线莲其黄酮苷元类物质的HPLC快速检测方法，其色谱条件：Agilent色谱柱，（TC-C18(2)4.6×250mm,5μm）；流动相为甲醇-水-磷酸（59:41:0.3%），流速为1.0mL/min；柱温为30℃；紫外检测波长为370nm，进样量50μL，此法可同时检测2种金线莲黄酮苷元类物质，分离度高并且出峰时间早。

2.福建金线莲和台湾金线莲均富含多糖和黄酮类物质，其含量动态变化规律主要如下：两种金线莲从生根壮苗培养阶段到大棚移栽阶段其总多糖和总黄酮含量增长方式都呈“双峰曲线”模式，并且不同部位（茎段和叶片）其成分含量动态变化趋势基本保持同步。

槲皮素、山萘酚、异鼠李素3种黄酮苷元含量增长呈“单峰曲线”模式。

台湾金线莲除了异鼠李素呈“双峰曲线”增长模式外另外两黄酮苷元变化趋势与福建金线莲相似。

3.两种金线莲生根壮苗培养5个月的多糖含量高于4个月的；另外福建金线莲全草多糖含量略高于台湾金线莲。

大棚移栽阶段，移栽5个月时（8月上旬），福建金线莲多糖累积量达最高值，而台湾金线莲移栽4个月（7月上旬）时达最高值。

4.两种金线莲生根壮苗培养5个月，其总黄酮含量均高于生根壮苗培养4个月的，移栽4个月后（7月上旬）两种金线莲总黄酮含量均达最高值。

5.两种金线莲生根壮苗培养5个月，3种黄酮苷元的含量比较分别是从槲皮素＞异鼠李素＞山萘酚；生根壮苗培养5个月黄酮苷元总含量均高于生根壮苗培养培养4个月的。

1.总黄酮含量测定（回流）对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。

精密量取20ml，置50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外一可见分光光度法，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取样品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。

取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

精密量取2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。

本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H3006)计，不得少于7.0%。

2.总黄酮含量测定（天南星）对照品溶液的制备取芹菜素对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每1ml含12ug的溶液，即得。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液Iml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，各加60%乙醇至5ml，加1%三乙胺溶液至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光光度法，在400nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品粉末（过四号筛）约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

总黄酮的提取和测定实验原理黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。

黄酮类化合物的定量方法常用的有 HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。

在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在500nm波长处有最大吸收峰。

标准品选用芦丁。

试剂和器材一、试剂芦丁标准品。

5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。

二、材料新鲜银杏叶。

三、器材容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管 0.5ml（×2），1ml（×2），2ml（×1），5ml（×1）；分光光度计。

操作方法一、制作标准曲线精密称取芦丁标准品5mg，用70％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0．2mg／mL的标准溶液。

精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入 5％NaNO2 0.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1 (NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。

以试剂空白作为参比溶液。

用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。

二、总黄酮的提取把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉。

精确称取干粉1．0g，置于 100mL容量瓶中，加入70％乙醇30mL，浸泡24h。

超声波提取30min，过滤，滤液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中，得到黄酮提取液，待用。

三、测定吸取黄酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。

金线莲的研究进展作者：李付惠来源：《云南中医中药杂志》2016年第11期摘要：金线莲是我国重要珍稀中药，研究发现金线莲具有很好的保肝、抗HBV、降血糖、抗癌等药理作用，现代使用非常广泛，本文对金线莲植物形体、组织培养、化学成分、药理作用等方面进行了详细的综述，以期在标准化栽培、规模化生产方面提供一定的参考依据，也为金线莲的在化学成分和药理作用的深入研究奠定基础。

关键词：金线莲；植物形体；组织培养；化学成分；药理作用中图分类号：R28文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）11-0083-04金线莲为兰科植物花叶开唇兰（Anoectochilus roxburghii-（will.）Lind.）的干燥全草。

别名金蚕、金线兰、金石松、金线入骨消等。

素有“药王”“金草”“神草”“乌人参”等美称[1]。

其味平、甘，具有清热凉血、祛风利湿、解毒、止痛、镇咳等功效，主治咯血、支气管炎、肾炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、风湿性关节炎、肿瘤等症[2]。

现代研究发现，金线莲还有滋补强壮之功，还可治疗体虚、急慢性肝炎、高血压、肿瘤、心脏病、化脓性骨髓炎、口疮、性病等，且无毒副作用，使用安全[3]。

又因金线莲株型小巧，叶片金黄色，叶脉呈网状方式排列，是观赏价值极高的室内珍品[4]。

所以近年越来越受到消费者的青睐，本文对金线莲的各项研究进行综述，以期为金线莲的合理开发利用提供参考依据。

1植物形态金线莲为兰科花叶开唇兰（Anoectochilus roxburghii-（will.）Lind.）多年生草本植物，高4～16 cm。

根茎匍匐伸长，呈圆柱形，长1～5cm，茎节明显，表面棕褐色，下部聚生2～4片叶，叶互生，为宽卵形，上表面黑棕色，下表面暗红色，部分叶脉紫红色，叶柄基部鞘状抱茎，总状花序顶生，具3～6朵疏散的花，花暗棕色，蒴果矩圆形，香气特异，味淡[5]。

主要分布在我国广东、广西、浙江、江西、海南、四川、云南等[6]。

不同品种金线莲活性成分和产量的比较庞静;李娅;景跃波;赵永红;师春娟【摘要】[目的]比较云南省3个主要金线莲栽培品种在云南省的生长状况和主要药用成分.[方法]使用K4基质在林下种植培育5个月后,通过对3个金线莲品种的粗多糖、总黄酮和氨基酸含量等内含物的测定和植株干重、鲜重、折干率等形态指标的测定,分析3个品种的生长状态.[结果]3个品种的粗多糖含量、总黄酮含量、氨基酸含量、干重、鲜重和折干率等指标均表现出显著的差异.滇越金线兰是云南本地种,植株形态高大、产量高,总黄酮和氨基酸总量显著高于2个福建品种.[结论]滇越金线兰是云南省人工种植首选的栽培品种.%[Objective] The research aimed to compare the growth status and the main medicinal ingredients of three main cultivated varieties Anoectochilus roxburghii in Yunnan Province.[Method] Cultivated with K4 substrate in the forest for 5 months,the growth status of three cultivars was analyzed through the determination of the contents of crude polysaccharides,total flavonoids and amino acids and the determination of the dry weight,fresh weight and drying rate of the three cultivars.[Result] The crude polysaccharide content,total flavonoid content,amino acid content,dry weight,fresh weight and drying rate and other indicators showed significantdifferences.Anoectochilus chapaensis Gagnep.was a native of Yunnan,plant height,yield,total flavonoids and amino acids were significantly higher than the two Fujian varieties.[Conclusion]Anoectochilus chapaensis Gagnep.is the preferred cultivation of artificial cultivation in Yunnan Province.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)010【总页数】3页(P104-105,144)【关键词】金线莲;生长状况;有效成分;产量【作者】庞静;李娅;景跃波;赵永红;师春娟【作者单位】云南省林业科学院,云南省森林植物培育与开发利用重点实验室/国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室,云南昆明650201;云南省林业科学院,云南省森林植物培育与开发利用重点实验室/国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室,云南昆明650201;云南省林业科学院,云南省森林植物培育与开发利用重点实验室/国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室,云南昆明650201;云南省林业科学院,云南省森林植物培育与开发利用重点实验室/国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室,云南昆明650201;云南省林业科学院,云南省森林植物培育与开发利用重点实验室/国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室,云南昆明650201【正文语种】中文【中图分类】S567.23金线莲[Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl]为兰科(Orchidaceae)开唇兰属(Anoectochilus)多年生草本植物，别名花叶开唇兰、金丝草、金线兰等，是一种珍稀中草药，民间称之为“药王”[1]。

一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。

二、矿质元素的测定每份需0.2g。

荞麦黄酮含量测定
准备：把样品用无菌水洗干净，在室温下晾干后，放入烘箱中105℃杀青，杀青后样品放到60℃恒温干燥箱至恒重。

将处理好的样品研磨成粉末，放入干燥器中保存备用。

黄酮的测定参考(刘娜，2006)紫外分光光度法。

1.标准曲线的绘制
①芦丁标准品56㎎于50ml容量瓶中；
②用70%甲醇溶液溶解，并定容至刻度线（标准溶液）；
③用移液枪分别吸取芦丁标准溶液0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml、3ml置于25ml容量瓶中；
④加入三氯化铝2ml，乙酸甲溶液3ml，用70%的甲醇溶液定容至刻度，摇匀，得到芦丁对照品浓度梯度溶液；
⑤静置30min后用试剂空白作背景；
⑥分别对上述芦丁对照品浓度梯度进行测定，用吸光度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。

2.样品的测定
①准确称取研磨后的样品粉末1g，加入30ml75%的甲醇，置于60℃恒温水浴锅中水浴4h；
②趁热过滤于50ml的容量瓶中，用75%的甲醇溶液清洗滤纸和残渣，合并滤液，冷却至室温，加甲醇溶液定容至刻度，摇匀，为待测液。

③准确吸取1.0ml待测液置于25ml容量瓶中，分别后加入三氯化铝2ml，乙酸甲3ml，用75%的甲醇定容至刻度，摇匀，室温下放置30min，于波长420nm处测定吸光值。

荆楚大地长出的“药王”金线莲作者：暂无来源：《民生周刊》 2016年第4期《民生周刊》记者于海军杨丽萍妙莲天香坚持以人为本、诚信经商，以高科技、高品质、高效益为目标，走出了一条稳健可持续发展的专业品牌之路。

原本只有在台湾、福建等地野生并种植的珍稀中草药金线莲，素有“药王”“神草”之称，目前已在湖北神农架山脉竹山县的大山深处启动规模种植，神奇神秘的神农架山脉，将崛起一条全新的绿色产业链。

权威检验数据表明，在竹山县实验性种植的金线莲品质、保健功效及药效优于福建、台湾等东南沿海地域种植的金线莲，其中总黄酮和多糖含量高于市面销售的金线莲。

业内专家对金线莲营养成分和对人体的作用也给予了极大的肯定。

湖北妙莲天香生物科技有限公司董事长冯忠文表示，将神奇的金线莲带到湖北，希望不仅让湖北人乐享“神草”的奇效，更要将这株“药王”扎根荆楚大地，在“药王神”的采药尝草之地大规模生长。

近日，《民生周刊》记者前往湖北妙莲天香生产种植基地进行了实地探访。

因地制宜造靓丽名片野生金线莲十分稀少，又被称为“南方的冬虫夏草”。

金线莲属多年生草本植物，生长在闽台地区的广袤山林中，根据李时珍《本草纲目》记载，金线莲能入肝、脾、肾三经，起到养血、凉血、护肝、清热解毒之功效，是历代皇室宫廷的养生御品。

《中药辞海》记载：“金线莲主治肺结核咳血，糖尿病，膀胱炎，重症肌无力，风湿性及类风湿性关节炎，毒蛇咬伤。

”1990年福建省将金线莲列为濒危药用植物。

湖北妙莲天香生物科技有限公司监事长魏东称，专家实地考察发现，湖北省竹山县南接药库神农架，森林植被良好，腐殖土资源丰富，且降雨充沛、湿度较高，适合金线莲的生长。

2014年，竹山县政府与湖北妙莲天香生物科技有限公司合作，引进了金线莲种植项目，在短短一年间完成了金线莲在竹山的林下实验性种植成功。

同时开展规模种植，首批金线莲产品已推向市场。

荆楚药材研究院院长、华中农业大学教授王沫表示，湖北妙莲天香生物科技有限公司在竹山生产的产品样品，和市场购买的福建生产的金线莲产品样品，通过对总黄酮和多糖两种主要成分的检测发现：“神农妙莲”金线莲样品中总黄酮含量是每百克0.61克，而市售福建产金线莲样品中总黄酮含量是每百克0.30克；“神农妙莲”金线莲样品中多糖含量是每百克47.42克，而市售福建产金线莲样品中多糖含量是每百克45.10克。