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白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分的提取实验白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分是一种常见的药用植物，其具有广泛的药理作用和丰富的营养价值。
为了有效地利用这些化学成分，需要进行提取实验，以获取高纯度的化合物。
本文将介绍白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分的提取实验步骤和注意事项。
1.实验流程步骤一：样品预处理。
将鲜白鲜皮或柠檬苦素类植物样品洗净，晾干或鲜用。
步骤二：化学品准备。
准备乙醇、乙醇-水混合溶剂和二氯甲烷等有机溶剂，以及盐酸等化学试剂。
步骤三：提取方法。
将干燥的样品粉碎后，取适量放入袋中。
加入乙醇-水混合溶剂或二氯甲烷，室温下浸泡，振荡后超声处理，离心沉淀，收集溶液。
步骤四：干燥和纯化。
将收集的溶液通过旋转蒸发器浓缩，得到化合物混合物，再用C18柱层析分离和纯化目标化合物。
步骤五：测定纯度。
使用高效液相色谱仪对纯化的目标化合物进行定量分析，确定其纯度和含量。
2.注意事项第一，选择试剂时要注意其纯度和质量。
试剂的纯度直接影响到提取过程的效率和化合物的纯度。
第二，保持实验环境的洁净和无尘。
空气中的灰尘或杂质会污染样品，从而影响提取效果。
第三，操作过程中要注意安全。
如遇到有害气体，应及时进行通风换气。
同时，对于易燃、易爆等化学品要格外小心。
第四，需要合理调节提取条件和时间，以达到最优的提取效果和化合物纯度。
综上所述，白鲜皮生物碱和柠檬苦素类化学成分的提取实验需要仔细的操作和严谨的实验流程，从而保证提取得到高纯度的目标化合物，为后续的研究和应用提供有力的支持。
柑桔柠檬苦素类化合物的研究：一个综述摘要：柑橘中柠檬苦素类似物是一种罕见的天然化合物。
现已深入研究了其生物化学性质，生物功能，在食品中的应用，在植物生理学中的重要性，在不同植物物种和栽培品种的关系，副产品回收，和商业应用。
柠檬苦素类似物作为在食品中存在的潜在预防癌症的化合物，有着很大的意义。
本章总结了前人对柑橘中柠檬苦素类似物的化学和生物化学研究，以及探讨了以柠檬苦素类似物在人类和植物健康中发挥着的作用为研究方向的进一步研究项目。
柑橘类水果是世界上最受欢迎的食品之一，每年全球农业产量超过1亿吨。
作为一种被消耗的新鲜水果，柑橘的数量十分可观，越来越多的消耗来自于柑橘的加工产品，比如果汁、浓缩果汁、柑橘类饮料、其他食品等，都会消耗很多的水果。
除了是一种受喜欢的水果外，柑橘类水果已被证明具有许多对人体健康有重要影响的成分：维生素C、类胡萝卜素、叶酸、黄酮类化合物、类柠檬苦素、钾、优质水溶性纤维等等。
然而，在处理柑橘产品中有一个长期存在的问题，即苦味，尤其是橙汁和柚子汁中苦味更为明显。
在不同的栽培品种中苦的程度各不相同。
果汁中存在的苦味使其有着较低的市场价值，有时用吸附树脂处理，与其他无苦味的果汁混合，或丢弃。
在柑橘类果汁中苦味是由两种化合物导致：二氢黄酮新橙皮，如在柚子相关品种中发现的柚皮苷，和类柠檬苦素（1,2）。
柠檬苦素类似物是于芸香科、楝科家族的植物中出现的高含氧的三萜化合物。
柠檬苦素作为这组植物化学物质中的第一大化合物，从1841年以来已经被认为是柑橘的组成部分（3）。
1938年从脐橙果汁中得到分离（4），并在1949年（5）证明了脐橙果汁中的苦味原理。
柠檬苦素结构却是在发现该种物质的120年后才发现。
其结构是通过组合化学的方法和X-射线晶体学在20世纪60年代确定（6，7）。
柠檬苦素的化学成分是C26H30O8，分子质量是470。
柠檬苦素类化合物是柑桔类水果中已被证明具有生物活性的重要的质量成分。
胃癌是一种严重威胁人类生命的致死性疾病，全球每年约723000人死于胃癌[1]。
由于胃癌早期一般没有明显症状，胃癌被确诊时通常已是晚期，并伴有肝、肺、腹膜和淋巴结的转移。
一旦形成远处转移灶，患者5年生存率下降到10%以下，中位生存期为9~10个月[2]。
目前，手术、放疗以及化疗是治疗胃癌的主要手段，但由于晚期胃癌患者术后会出现肿瘤转移和复发，提高患者总体生存率仍然是一个巨大的挑战[1]。
因此，开发有效抗肿瘤转移的药物显得尤为迫切。
有研究证实[3]，源于中草药的单体和提取物不仅毒性小，且具有显著的抗肿瘤效果，已成为目前抗癌药物研究的热点。
2017年欧洲科学家调查发现，柑橘属水果，对消化系统和上呼吸道癌症有很好的预防作用[4]。
随着柑橘综合利用的深入，各种有效成分逐步被提取和分离出来，尤其以存在于桔皮及柚皮中柠檬苦素（limonin ）在预防和控制肿瘤方面显示良好的效果[5]。
因其药理作用强，毒性低，不良反应轻而受到越来越多学者的重视与青睐，但其对于胃癌细胞转移的抑制作用及相关信号通路和靶点的研究，国内外鲜见报道。
信号转导和转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）作为一种已知与癌细胞增殖和转移相关的致癌转录因子，磷酸化后与STAT 家族的其他成员形成同源二聚体或异二聚体。
随后，活化的STAT3复合物易位到细胞核中，启动STAT3靶基因的转录，其中就包括基质金属蛋白酶9（MMP-9）[6]，而MMP-9的表达与胃癌的恶性程度呈正相关[7]，提示MMP-9是胃癌转移过程中的一个重要因素。
因此，本研究旨在初步探讨柠檬苦素抑制胃癌细胞体内外转移的作用以及与STAT3/MMP-9信号通路的相关性，以便为阐明柠檬苦素的抗癌新功能和抗肿瘤新机制以及研发具有我国自主知识产权的肿瘤生物治疗柠檬苦素抑制胃癌细胞转移的作用及机制研究刘伯霞1，2，申琴1，2，焦海燕1，2，李涛3，陈静1，2（1.宁夏医科大学基础医学院，银川750004；2.宁夏回族自治区生育力保持教育部重点实验室，银川750004；3.宁夏医科大学总医院肿瘤外科，银川750004）文章编号：1674-6309（2020）04-0340-06·论著·收稿日期：2019-09-27基金项目：国家自然科学基金（816660500；81560485；81260339）；宁夏基础医学“西部一流”学科人才培养项目（NXYLXK2017B07；NXYLXK2017A05）；宁夏自然科学基金（NZ16142）作者简介：刘伯霞（1995-），女，宁夏人，在读硕士研究生，研究方向：肿瘤药物靶向治疗。
柑橘酒苦味物质及其控制技术研究我国柑橘栽培面积和产量已连年全球第一,但国内柑橘的深加工量却不足总产量的5%。
为了延长柑橘产业链,促进柑橘产业的健康发展,开发柑橘酒是一条有效途径,但柑橘酒特有的苦味却严重制约着其市场接受度。
本研究以降低柑橘酒苦味为目标,在建立柑橘中主要苦味物质检测方法的基础上,以脐橙为原料,通过试验室小试和现代测试技术,了解柑橘、柑橘汁及柑橘酒中苦味物质的变化规律,从原料处理、酿造工艺的优化和柑橘蒸馏酒工艺的完善等方面进行研究,以期为低苦柑橘酒的产业化生产提供技术支持和理论依据。
主要研究结果如下:（1）选定了紫外分光光度法（Ultra Violet spectrophotometry,UV）和超高效液相色谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC）的关键参数,分别用于检测柠檬苦素类似物以及柠檬苦素、诺米林和柚皮苷。
其中,UV检测柠檬苦素类似物的最大吸收波长为491 nm,最佳显色时间为20 min。
UPLC检测柠檬苦素和诺米林,流动相:乙腈:水（45:55）,等度洗脱;流速:0.3mL/min;色谱柱检测温度:30℃;检测波长:215 nm;进样量:1.0μL。
UPLC检测柚皮苷,流动相:甲醇:水（40:60）,等度洗脱;流速:0.3mL/min;色谱柱检测温度:30℃;检测波长:283 nm;进样量:0.3μL。
（2）研究了柑橘中柠檬苦素、诺米林、柚皮苷和柠檬苦素类似物的变化规律。
在柑橘果实生长发育过程中,外果皮、内果皮、囊衣层和汁胞中柠檬苦素、诺米林和柚皮苷三种主要苦味物质含量的变化均呈现先升高后下降,再趋于平稳的趋势;在柑橘酒酿造过程中,柠檬苦素类似物含量呈现波动性变化,在第8 d达到最低值,发酵结束时又恢复较高水平;柑橘酒在4℃陈酿过程中,柠檬苦素类似物含量呈现下降趋势。
（3）对柑橘中柠檬苦素、诺米林和柚皮苷三种主要苦味物质进行了评价。
柑橘果实苦味物质研究进展目录1. 内容概括 (2)1.1 研究的背景与重要性 (3)1.2 柑橘果实苦味物质类型与特点 (4)1.3 研究目的与意义 (5)2. 柑橘果实中的苦味物质 (6)2.1 苦味物质的分类与特性 (7)2.2 柑橘果实苦味物质的主要化合物 (8)2.3 苦味物质的生物合成途径 (9)3. 苦味物质的检测与分析方法 (10)3.1 化学分析方法 (11)3.2 生物技术方法 (12)3.3 高通量筛选技术 (14)4. 苦味物质的生物合成与调控 (16)4.1 基因调控网络 (17)4.2 酶促合成途径 (18)4.3 环境因素对苦味物质合成的影响 (19)5. 苦味物质对柑橘品质的影响 (21)5.1 果实风味 (22)5.2 果实安全性 (23)5.3 消费者接受度 (24)6. 苦味物质的抑制与改良 (25)6.1 基因工程技术 (27)6.2 分子标记辅助选择 (28)6.3 栽培管理措施 (29)7. 苦味物质与柑橘产品的开发 (30)7.1 食品调味品的开发 (31)7.2 药用价值的研究 (32)7.3 新产品与市场应用 (34)8. 总结与展望 (35)8.1 研究进展总结 (36)8.2 存在问题与挑战 (37)8.3 未来研究方向 (38)1. 内容概括柑橘果实中的苦味物质主要来源于果皮、果肉和种子，这些苦味物质对于柑橘果实的口感和风味有着重要影响。
随着科学技术的发展，对柑橘果实苦味物质的研究取得了显著的进展。
本文将对柑橘果实苦味物质的种类、生物活性及其在农业生产中的应用等方面进行简要概述。
柑橘果实中的苦味物质主要包括黄酮类化合物、柠檬苦素类化合物和氨基酸衍生物等。
这些化合物具有不同的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗癌等。
黄酮类化合物是柑橘果实中最为丰富的苦味物质之一，具有很强的抗氧化能力和抗菌活性。
在生物活性方面，柑橘果实中的苦味物质具有多种生理功能。
柠檬苦素类化合物具有抑制肿瘤细胞生长的作用，同时还具有抗病毒和抗真菌活性。
高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素
徐旭耀;黄秋儿;黄惠玲
【期刊名称】《理化检验-化学分册》
【年(卷),期】2012(048)006
【摘要】提出了高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素含量的方法。
样品用体积
分数为70％乙醇溶液于50C超声提取75min。
以Sinochrom ODS-BP
（250min×4．6mm，10μm）为分离柱，以乙腈-水（45＋55）溶液作为流动相，用紫外检测器在波长210nm处进行测定。
柠檬苦素的质量浓度在12．0-
384mg·L^-1范围内与其峰面积呈线性关系，方法的平均回收率为99．9％，相
对标准偏差（n=5）为1．8％。
【总页数】4页(P696-698,704)
【作者】徐旭耀;黄秋儿;黄惠玲
【作者单位】湛江师范学院化学科学与技术学院,湛江524048;湛江师范学院化学
科学与技术学院,湛江524048;湛江师范学院化学科学与技术学院,湛江524048【正文语种】中文
【中图分类】O657
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定柑橘中的柠檬苦素类似物 [J], 刘亮;戚向阳;董绪燕;李蕙蕙;
刘传菊
2.响应面法优化柑橘皮柠檬苦素提取工艺 [J], 王菁;郑俊霞;蒲彪
3.高效液相色谱法测定柑橘皮中新橙皮苷 [J], 徐旭耀;苏欣;汪秋安
4.柑橘皮中柠檬苦素的提取工艺 [J], 叶沙滨
5.高效液相色谱法测定柑橘汁中的柠檬苦素和柚皮苷 [J], 陈静;高彦祥;吴伟莉;李绍振
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中药橘核质量标准研究赵胜斌(汝州市人民医院药械科ꎬ河南汝州４６７５００)摘要:目的㊀建立中药橘核中柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮高效液相色谱含量测定方法ꎮ方法㊀采用高效液相色谱法ꎬ色谱柱:ＡｇｉｌｅｎｔＳＢ－Ｃ１８(４.５ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬ流动相乙腈－水(６４ʒ３６)等度洗脱ꎬ柱温:３０ħꎬ检测波长:２１０ｎｍꎬ流速:１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ进样量:１０μＬꎮ结果㊀柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮分别在０.３９６~３.９６０㊁０.４０４~４.０４０㊁０ ３９２~３.９２０μｇꎻ柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮定量限分别为１.０７㊁１.３４㊁１.４８ｎｇꎻ检测限分别为０.３９㊁０.２２㊁０.３５ｎｇꎮ柠檬苦素平均加样回收率为１００.２３％ꎬＲＳＤ为０.２１％ꎻ诺米林平均加样回收率为９９.８９％ꎬＲＳＤ为０.８９％ꎻ黄柏酮平均加样回收率为１００.６８％ꎬＲＳＤ为１.１３％ꎮ结论㊀本研究开发的中药橘核中柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮高效液相色谱含量测定方法ꎬ操作简便ꎬ重复性高ꎬ稳定性㊁精密性良好ꎬ可用于橘核的质量控制ꎮ关键词:橘核ꎻ高效液相色谱法ꎻ含量测定ꎻ质量标准中图分类号:Ｒ２８４.１㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２０)０７－０３９４－００４ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２０.０７.００６ＳｔｕｄｙｏｎｑｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄｏｆＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｔａｎｇｅｒｉｎｅｓｅｅｄＺＨＡＯＳｈｅｎｇｂｉｎ(ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＭａｃｈｉｎｅｒｙꎬＲｕｚｈｏｕＰｅｏｐｌｅᶄｓＨｏｓｐｉｔａｌꎬＲｕｚｈｏｕ４６７５００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｌｉｍｏｎｉｎꎬｎｏｍｉｌｉｎａｎｄｏｂａｃｕｎｏｎｅｉｎｔｈｅｔａｎｇｅｒｉｎｅｓｅｅｄｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎ:ＡｇｉｌｅｎｔＳＢ－Ｃ１８(４.５ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ(６４ʒ３６)ｉｓｏｃｒａｔｉｃｅｌｕｔｉｏｎꎬｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ:３０ħꎬｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ:２１０ｎｍꎬｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅ:１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎａｍｏｕｎｔ:１０μＬ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｉｍｉｔｓｏｆｌｉｍｏｎｉｎꎬｎｏｍｉｌｉｎａｎｄｏｂａｃｕｎｏｎｅｗｅｒｅ０.３９６~３.９６０ꎬ０.４０４~４.０４０ａｎｄ０.３９２~３.９２０μｇꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎻＴｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｉｍｉｔｓｏｆｌｉｍｏｎｉｎꎬｎｏｍｉｌｉｎａｎｄｏｂａｃｕｎｏｎｅｗｅｒｅ１.０７ꎬ１.３４ａｎｄ１.４８ｎｇꎬａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｓｗｅｒｅ０.３９ꎬ０.２２ａｎｄ０.３５ｎｇꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｌｉｍｏｎｉｎｗａｓ１００.２３％ꎬＲＳＤｗａｓ０.２１％ꎬｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｎｏｍｉｌｉｎｗａｓ９９.８９％ꎬＲＳＤｗａｓ０.８９％ꎬａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｏｂａｃｕｎｏｎｅｗａｓ１００.６８％ꎬＲＳＤｗａｓ１.１３％.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｌｉｍｏｎｉｎꎬｎｏｍｉ￣ｌｉｎａｎｄｏｂａｃｕｎｏｎｅｉｎｔｈｅｏｒａｎｇｅｎｕｃｌｅｕｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｂｙｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｗａｓｓｉｍｐｌｅꎬｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅꎬｓｔａｂｌｅａｎｄｐｒｅｃｉｓｅ.Ｉｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔａｎｇｅｒｉｎｅｓｅｅｄ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＴａｎｇｅｒｉｎｅｓｅｅｄꎻＨＰＬＣꎻＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎꎻＱｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄ㊀㊀橘核为芸香科植物橘及其栽培变种干燥成熟种子ꎬ在我国有悠久的药用历史ꎬ早在五代时期的本草专著«日华子本草»中就有其应用的相关记载[１]ꎮ该药物味苦ꎬ平ꎬ无毒ꎬ主要用于治疗膀胱气痛㊁肾冷等ꎬ现代药理学研究结果显示橘核具有较强的镇痛抗炎㊁抗肿瘤等作用[２－３]ꎮ对于橘核的质量标准从«中国药典»１９６３年版至２０１５年版均有相关的记载ꎬ但目前橘核的质量标准仍以性状及显微鉴别为主ꎬ对其薄层色谱鉴别及含量测定等现代鉴别手段并无相关要求ꎬ已不能适应目前的用药要求ꎬ因此有必要对其质量标准进行提高以进一步提高质量控制水平ꎬ规范其质量[４]ꎮ经过多年研究发现ꎬ橘核内生物活性成分以柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮为主ꎬ本研究拟采用高效液相色谱法对橘核中上述成分进行定量分析ꎬ以期为橘核的质量控制提供参考依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀仪器㊀采用美国安捷伦公司生产的１２００型高效液相色谱仪(检测器:ＤＡＤ二极管阵列检测器ꎬ色㊀作者简介:赵胜斌ꎬ男ꎬ主管药师ꎬ研究方向:药物信息ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｈｕａｎｑｅａｎ２８４２８＠１６３.ｃｏｍ谱工作站为安捷伦公司专用工作站ꎬ四元梯度泵㊁柱温箱㊁自动进样器)ꎮＡＵＷ２２０Ｄ型十万分之一天平(日本岛津公司)ꎻＢＰ１２１Ｓ万分之一天平(德国赛多利斯公司)ꎮ１.２㊀试药㊀柠檬苦素对照品(中国食品药品检定研究院ꎬ批号:１１０８００－２０１７０７)ꎻ诺米林(赫澎生物上海科技有限公司ꎬ批号:１０６３－７７－０)ꎻ黄柏酮(中国食品药品检定研究院ꎬ批号:１１１９２３－２０１６０４)ꎻ乙腈㊁甲醇为色谱纯购自德国默克化工技术有限公司ꎬ试验用水为自制纯化水ꎮ石油醚(６０~９０ħ)㊁乙醚㊁乙醇㊁甲醇为分析纯均购自天津四友精细化学品有限公司ꎮ橘核分别购自安徽亳州药材市场㊁广州清平药材市场㊁广西玉林药材市场及河北安国药材市场ꎬ均经汝州市药品检验所弓西方副主任中药师鉴定为芸香科植物橘(ＣｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａＢｌａｎｃｏ)及其栽培变种的干燥成熟种子ꎬ详见表１ꎮ表１㊀橘核药材来源样品号购买地产地购买日期１安徽亳州药材市场广东２０１７.１２.０９２安徽亳州药材市场江西２０１７.１２.２８３安徽亳州药材市场四川２０１８.１.２４４广州清平药材市场广东２０１８.２.２５５广州清平药材市场江西２０１８.３.２７６广州清平药材市场浙江３０１８.３.２７７广西玉林药材市场四川２０１８.４.１８８广西玉林药材市场广东２０１８.４.１８９广西玉林药材市场江西２０１８.５.２３１０河北安国药材市场四川２０１８.５.２７１１河北安国药材市场江西２０１８.６.１２１.３㊀色谱条件㊀色谱柱:ＡｇｉｌｅｎｔＳＢ－Ｃ１８(４.５ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬ流动相乙腈－水(６４ʒ３６)等度洗脱ꎬ柱温:３０ħꎬ检测波长:２１０ｎｍꎬ流速:１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ进样量:１０μＬꎮ１.４㊀溶液的制备１.４.１㊀混合对照品溶液㊀精密称取柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮对照品适量ꎬ分别置１０ｍＬ量瓶ꎬ加入甲醇溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ得到含柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮对照品分别为０.９９㊁１.０１㊁０.９８ｍｇ Ｌ－１的对照品储备液ꎬ分别精密量取上述对照品储备液各２ｍＬ置入同一１０ｍＬ量瓶中并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ以０.４５μｍ微孔滤膜滤过ꎬ得到柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮浓度分别为０.１９８㊁０.２０２㊁０.１９６ｍｇ Ｌ－１的混合对照品溶液ꎮ１.４.２㊀供试品溶液的制备精密称取本品粉末０.５ｇ(过三号筛)ꎬ精密加入无水乙醇２５ｍＬꎬ超声提取３０ｍｉｎꎬ滤过㊁滤液蒸干ꎬ残渣加甲醇溶解ꎬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ以０.４５μｍ微孔滤膜滤过ꎬ得到供试品溶液ꎮ２ 结果２.１㊀方法学考察２.１.１㊀标准曲线的绘制㊀精密吸取 １.４.１ 项下混合对照品溶液２㊁５㊁１０㊁１５㊁２０μＬꎬ分别按 １.３ 项下色谱条件进行测定ꎬ记录峰面积ꎬ以峰面积为Ｙ轴ꎬ对照品进样量为Ｘ轴进行线性回归ꎬ得到柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮回归方程ꎬ结果见表２ꎮ２.１.２㊀精密度试验㊀精密吸取 １.４.１ 项下混合对照品溶液１０μＬꎬ按 １ ３ 项下色谱条件连续进行６次测定ꎬ记录柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮峰面积ꎬ计算相对标准偏差(ＲＳＤ)ꎬ柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮分别为０.６５％㊁０.６２％㊁０.３７％ꎮ表２㊀各对照品回归方程及相关系数对照品线性范围μｇ回归方程ｒ柠檬苦素０.３９６~３.９６０Ｙ＝１５７.２９Ｘ－４５.０９２０.９９９５诺米林０.４０４~４.０４０Ｙ＝１２４.６３Ｘ－３３.９０５０.９９９２黄柏酮０.３９２~３.９２０Ｙ＝４４３.８１Ｘ＋４.９２７０.９９９３２.１.３㊀重复性试验㊀取６份３号样品粉末ꎬ每份约０.５ｇꎬ精密称定ꎬ按 １.４.２ 项下供试品溶液制备方法制备成供试品溶液ꎬ以 １.３ 项下条件进行含量测定ꎬ记录柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮峰面积ꎬ计算ＲＳＤ值分别为１.２６％㊁１.０９％和１.３３％ꎮ２.１.４㊀稳定性试验㊀取３号样品粉末约０.５ｇꎬ精密称定ꎬ按 １.４.２ 项下供试品溶液制备方法制备成供试品溶液ꎬ在配置后０㊁２㊁４㊁８㊁１２㊁２４ｈ后分别按 １.３ 项下色谱条件进行含量测定ꎬ记录柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮峰面积ꎬ计算ＲＳＤ值分别为０.８９％㊁１.２７％㊁１.０３％ꎬ提示２４ｈ内供试品溶液稳定性良好ꎮ２.１.５㊀定量限与检测限考察㊀取 １.４.１ 项下混合对照品溶液适量进行倍比稀释ꎬ再 １.３ 项下色谱条件连续进行６次进样检测ꎬ记录峰记录柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮峰面积ꎮ分别对定量限及检测限进行计算ꎬ以信噪比为１０ʒ１时为定量限ꎬ信噪比为３ʒ１时为检测限ꎬ柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮定量限分别为１.０７㊁１.３４㊁１.４８ｎｇꎻ柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮检测限分别为０.３９㊁０.２２㊁０.３５ｎｇꎮ２.１.６㊀加样回收率试验㊀取已知含量的供试品(３号样品)６份ꎬ各０.２５ｇꎬ精密称定ꎬ分别加入一定量的柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮对照品ꎬ分别按 １ ４ ２ 项下供试品溶液制备方法制备成供试品溶液ꎬ以 １.３ 项下条件进行含量测定ꎬ计算回收率ꎬ结果见表３ꎮ２.２㊀样品含量测定结果㊀取１１批样品ꎬ １.４.２ 项下供试品溶液制备方法制备成供试品溶液ꎬ以 １.３ 项下条件进行含量测定ꎬ分别计算各批次柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮质量分数(以干燥品计)ꎬ结果见表４ꎮ１１批样品中柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮平均质量分数分别为０.７０２％㊁０.４１２％㊁０ ０７２％ꎬ以均值－２０％为其限度标准ꎬ暂定为橘核中柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮含量不得低于０.５６％㊁０ ３３％㊁０.０６％ꎮ表３㊀加样回收率试验结果成分取样量/ｇ样品含量/ｍｇ加入量/ｍｇ测得量/ｍｇ回收率(％)平均回收率(％)ＲＳＤ(％)柠檬苦素０.３５０６２.１７５２.１５４.３２１９９.８１１００.２３０.２１０.３４７７２.１５７２.１５４.３５２１０２.０９０.３５１９２.１８３２.１５４.３２３９９.５３０.３４６９２.１５２２.１５４.２９５９９.６７０.３５０３２.１７３２.１５４.２６０９７.０７０.３４９５２.１６８２.１５４.３８７１０３.２１诺米林０.３５０６１.３３１１.３２２.６５３１００.１５９９.８９０.８９０.３４７７１.３２０１.３２２.６５１１００.８３０.３５１９１.３３５１.３２２.６３９９８.７９０.３４６９１.３１６１.３２２.６４４１００.６１０.３５０３１.３２９１.３２２.６３３９８.７９０.３４９５１.３２６１.３２２.６４８１００.１５黄柏酮０.３５０６０.３２４０.３２０.６４６１００.６２１００.６８１.１３０.３４７７０.３２１０.３２０.６４８１０２.１９０.３５１９０.３２５０.３２０.６４４９９.６９０.３４６９０.３２１０.３２０.６４２１００.３１０.３５０３０.３２４０.３２０.６４２９９.３８０.３４９５０.３２３０.３２０.６４９１０１.８８表４㊀样品含量测定结果样品号柠檬苦素(％)诺米林(％)黄柏酮(％)１０.４７０５０.１４５８０.０７９２２０.５８１３０.２７９４０.０８８３３０.６２０４０.３７９５０.０９２４４０.８３２５０.２２０６０.０２８７５０.６６５４０.５０２３０.０４５８６０.７７２３０.６３１７０.０４６２７０.８４１９０.６１２５０.０７１９８０.７８０３０.６０９２０.１２０３９０.８４１１０.４０３９０.０９１４１００.５８９２０.２６７７０.０５６９１１０.７２９５０.４８３２０.０６９７３ 讨论３.１㊀供试品制备工艺的考察㊀制备工艺方面因橘核为种子类药材ꎬ含有大量的脂肪油ꎬ因此考虑先对药材进行脱脂处理ꎬ本研究先后对不脱脂无水乙醇超声提取３０ｍｉｎ㊁以石油醚(６０~９０ħ)超声脱脂处理３０ｍｉｎ后弃去石油醚液再乙醇超声３０ｍｉｎ及乙醚超声脱脂处理３０ｍｉｎ后弃去乙醚液再乙醇超声３０ｍｉｎꎬ发现３种提取方法所提取的柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮得率ＲＳＤ在３％以内ꎬ加上节能㊁减排的考虑ꎬ在提取前不做脱脂处理[５－６]ꎮ在提取方法上ꎬ本研究考察了超声㊁回流及高速匀浆３种提取方法ꎬ发现超声与回流提取所提取的柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮得率ＲＳＤ在３％以内ꎬ故选择超声操作更为简便ꎬ另外高速匀浆法虽然目标物得率有所提高ꎬ但因该方法所使用的高速匀浆仪目前国内实验室普及率不高ꎬ考虑到标准的普适性暂未将该提取方法纳入本标准中ꎬ将来待该仪器在国内实验室普及率较高时可考虑使用高速匀浆法进行提取ꎬ该方法提取效率高㊁操作时间短ꎬ具有较明显的优势[７]ꎮ另外本研究还对提取时间㊁提取溶剂及料液比进行考察ꎬ提取时间方面考察了提取１０㊁２０㊁３０㊁４０㊁６０ｍｉｎꎬ发现在提取３０ｍｉｎ后各目标成分含量并无明显上升ꎬ因此选择３０ｍｉｎ作为提取时间ꎮ提取溶剂方面考察了二氯甲烷㊁无水乙醇㊁甲醇ꎬ发现无水乙醇提取效率高且毒性小ꎬ料液比方面在１ʒ５０时提取效率最高ꎬ随后料液比升高目标物得率并无明显上升ꎮ３.２㊀检测波长的确定㊀取柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮对照品溶液ꎬ以ＤＡＤ检测器进行全波长扫描结果发现柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮最大吸收峰波长分别为２１０㊁２１１㊁２１４ｎｍꎬ分别选择上述波长下色谱图分析发现在２１０ｎｍ时各色谱峰分离效果最佳ꎬ理论塔板数较高ꎬ故选作本次研究的测定波长ꎮ３.３㊀流动相的选择㊀流动相方面在查阅文献[８－９]的基础上本研究先对甲醇－水(６２ʒ３８)㊁乙腈－水(６２ʒ３８)进行对比发现乙腈－水系统色谱峰峰形更尖锐ꎬ理论塔板数更高ꎬ故选择该系统进行优化ꎬ在乙腈－水(６４ʒ３６)时分离效果最佳ꎬ对照品及供试品均可在１５ｍｉｎ完成检测ꎮ另外本研究还对不同品牌液相色谱仪及色谱柱进行分析ꎬ结果显示具有较高的重现性ꎮ橘核具有理气㊁散结㊁止痛的功效ꎬ临床上常用于治疗疝气疼痛㊁睾丸疼痛等疾病ꎬ临床应用较多[１０]ꎮ但目前现行的«中国药典»２０１５年版中橘核的指标标准仅收载性状及显微鉴别方法ꎬ对其含量并未作要求ꎮ本研究开发的中药橘核中柠檬苦素㊁诺米林㊁黄柏酮高效液相色谱含量测定方法ꎬ操作简便ꎬ重复性高ꎬ稳定性㊁精密性良好ꎬ可用于提高橘核质量评价ꎮ参考文献:[１]㊀彭智祥.中药橘核和橘络的质量标准提高研究[Ｄ].昆明:云南中医学院ꎬ２０１７.[２]ＳＵＮＴＨꎬＺＨＯＵＦꎬＬＩＵＣＪꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＤｎａＪ－ｌｉｋｅｚｉｎｃｆｉｎｇｅｒｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎＯＲＡＮＧＥｌｏｃａｌｉｚｅｓｔｏｔｈｅｎｕｃｌｅｕｓｉｎｅｔｉｏｌａｔｅｄｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ[Ｊ].Ｐｒｏｔｏｐｌａｓ￣ｍａꎬ２０１６ꎬ２５３(６):１５９９－１６０４.[３]王黎ꎬ罗静ꎬ裴瑾ꎬ等.橘核柠檬苦素类化合物积累与功能基因表达的灰色关联度分析[Ｊ].中草药ꎬ２０１７ꎬ４８(２):３４５－３５０.[４]国家药典委员会.中华人民共和国药典２０１５年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０１５:１０２－１０４. [５]杨凡ꎬ杜静ꎬ周舒ꎬ等.超声波辅助提取橘核油工艺及脂肪酸组成研究[Ｊ].中国油脂ꎬ２０１６ꎬ４１(８):１－４.[６]橘核质量及柠檬苦素类似物纯化工艺的研究[Ｄ].成都:成都中医药大学ꎬ２０１２.[７]ＥＧＧＥＮＲＥＩＣＨＢꎬＲＡＪＡＭＡＮＩＣＫＡＭＶꎬＷＵＲＭＤＪꎬｅｔａｌ.ＡｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＨＰＬＣａｎｄａｕｔｏｍａｔｅｄｄａｔａａｎａｌｙｓｉｓｆｏｒｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｈｉｇｈ－ｐｒｅｓｓｕｒｅｈｏｍｏｇｅｎｉｚａ￣ｔｉｏｎ[Ｊ].ＭｉｃｒｏｂＣｅｌｌＦａｃｔꎬ２０１７ꎬ１６(１):１３４.[８]黄天山ꎬ王晓清ꎬ罗嘉琪ꎬ等.橘核质量标准的优化研究[Ｊ].广东药科大学学报ꎬ２０１５ꎬ３１(５):６０７－６１１. [９]周滢ꎬ舒承倩ꎬ段恒.橘核盐制工艺的正交设计法优选[Ｊ].时珍国医国药ꎬ２０１６ꎬ２７(２):３６１－３６２.[１０]橘核柠檬苦素类化合物生物合成功能基因的克隆㊁表达及成分积累研究[Ｄ].成都:成都中医药大学ꎬ２０１５.(上接第３８９页)３ 讨论３.１㊀现行版«中国药典»收录的原子吸收法(ＡＡＳ法)㊁电感耦合等离子光谱法(ＩＣＰ－ＯＥＳ法)㊁电感耦合等离子质谱法(ＩＣＰ－ＭＳ法)均可用于元素的测定ꎮ在实际应用过程中ꎬ因ＩＣＰ－ＭＳ法具有灵敏度高ꎬ可同时测定多种元素等特点ꎬ实现金属元素的高通量快速检测ꎬ其与ＨＰＬＣ联用更可用于元素价态的分析ꎬ其应用前景最为广泛ꎮ３.２㊀考虑到矿物药其本身的结构特性ꎬ仅少量可被胃液溶解吸收ꎬ大部分随粪便被排出体外ꎬ虽然骨折挫伤胶囊中含有自然铜㊁土鳖虫等矿物㊁动物药ꎬ其重金属含量较植物药更高ꎬ但其可被人体吸收的量可能很少ꎮ本研究采用的方法更接近于人体真实用药情况ꎬ可以更加客观的评价药品的安全性ꎮ«中国药典»２０１５年版中并未限定中成药中重金属的残留限量ꎬ随着药物安全性要求的不断提高ꎬ重金属元素的残留限量也成为关注的热点ꎬ建议在其限量标准的制定过程中ꎬ充分考虑处方组成㊁制备工艺㊁剂型㊁服用方式等影响因素ꎬ制定更加科学㊁合理的限度标准ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０１５年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０１５:１１８８. [２]贺小龙ꎬ白卫国.带锁髓内钉联合骨折挫伤胶囊治疗胫骨骨折的疗效分析[Ｊ].西南国防医药ꎬ２０１７ꎬ２７(７):６６８－６７０.[３]池雷霆ꎬ裴福兴ꎬ杨天府ꎬ等.骨折挫伤胶囊促骨折愈合的临床研究[Ｊ].华西医学ꎬ２００１ꎬ１６(１):２５－２６. [４]蒋燕萍ꎬ甘彦雄ꎬ严鑫ꎬ等.自然铜的研究进展[Ｊ].中药与临床ꎬ２０１６ꎬ７(４):６２－６４.[５]李梓澜ꎬ陈文清ꎬ陈依妮ꎬ等.自然铜中有害重金属的含量检测分析[Ｊ].广东化工ꎬ２０１５ꎬ４２(１５):４１－４２. [６]谭朝阳ꎬ王建华ꎬ郑宇ꎬ等.市售自然铜药材中有害元素铅㊁砷㊁镉㊁汞㊁铜的测定[Ｊ].中医药导报ꎬ２０１２ꎬ１８(７):７１－７３.[７]严宝飞ꎬ富莹雪ꎬ宿树兰ꎬ等.不同产地黄芩茎叶无机元素的ＩＣＰ－ＭＳ分析与评价[Ｊ].中草药ꎬ２０１８ꎬ４９(２２):５４１８－５４２５.[８]钱保勇ꎬ蔡鹏ꎬ袁华峰.ＩＣＰ－ＭＳ法测定薄荷脑中的５种重金属元素[Ｊ].华西药学杂志ꎬ２０１５ꎬ３０(４):５２１－５２２.[９]毛睿ꎬ陈永君.微波消解ＩＣＰ－ＭＳ法测定寒水石二十一味散重金属含量[Ｊ].中国药业ꎬ２０２０ꎬ２９(３):６３－６６. [１０]张玉伟ꎬ田方园ꎬ姚元成ꎬ等.ＩＣＰ－ＭＳ法测定前列欣胶囊中铅㊁镉㊁铜㊁汞㊁砷的残留量[Ｊ].中国药物评价ꎬ２０１９ꎬ３６(６):４３０－４３４.[１１]梁佳ꎬ王章伟ꎬ邓双炳ꎬ等.ＩＣＰ－ＭＳ法测定喜炎平注射液中重金属及有害元素[Ｊ].中草药ꎬ２０１９ꎬ５０(２４):６００２－６００８.[１２]关智博ꎬ王灿灿ꎬ赵尚锋ꎬ等.ＩＣＰ－ＭＳ法检测四君子汤中１０种金属元素[Ｊ].沈阳药科大学学报ꎬ２０１８ꎬ３５(１):３８－４２.。
香柚中类柠檬苦素和柚皮苷提取纯化及二氢查尔酮合成的开题报告一、研究背景柚子是一种常见的柑橘类水果，其含有丰富的生物活性成分，如类柠檬苦素和柚皮苷等，具有多种药用价值。
类柠檬苦素是一种多环酮类化合物，具有抗癌、抗炎、降低胆固醇等作用，是一种重要的天然产物。
柚皮苷则是一种黄酮类化合物，具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等作用，也是一种重要的天然产物。
因此，对于香柚中类柠檬苦素和柚皮苷的提取纯化以及二氢查尔酮的合成具有很高的研究价值和应用前景。
二、研究目的本研究旨在通过对香柚进行提取纯化，获得高纯度的类柠檬苦素和柚皮苷，并通过化学合成方法合成二氢查尔酮，探索香柚中生物活性成分的提取、纯化和合成方法，为其进一步的药用和工业应用提供参考。
三、研究方法1. 香柚中类柠檬苦素和柚皮苷的提取与纯化采用超声波法将香柚粉末与乙醇混合后浸泡，筛选出溶液中悬浮的物质，得到含有类柠檬苦素和柚皮苷的乙醇提取物。
利用硅胶柱层析对提取物进行纯化，收集不同颜色的组分，并通过紫外可见光谱、红外光谱和质谱等手段对组分进行鉴定和分析。
2. 二氢查尔酮的合成将2-丙酮基-1,3-丁二醇和85%磷酸在无水环境下反应，经酸化处理后得到二氢查尔酮产物。
通过质谱、红外光谱等手段对产物进行鉴定分析。
四、研究意义本研究可以为香柚中生物活性成分的提取、纯化和化学合成提供新的研究思路和方法，为其在药用和生物工业领域的应用提供参考。
同时，对于开发和利用天然产物具有重要的理论和实践意义。
五、研究进展目前，我们已经完成了对香柚中类柠檬苦素和柚皮苷的提取和纯化工作，并通过质谱、红外光谱等手段对其进行了鉴定和分析；在二氢查尔酮的化学合成方面，我们已经完成了反应条件的优化和产物的纯化工作，并通过质谱、红外光谱等手段对产物进行了鉴定和分析。
六、研究计划在接下来的研究中，我们将进一步深入探究香柚中类柠檬苦素和柚皮苷的提取纯化方法，优化二氢查尔酮的合成工艺，并对其生物活性进行进一步的研究和验证。
柠檬营养成分与综合利用研究进展一、本文概述柠檬，作为一种广受欢迎的柑橘类水果，因其独特的酸甜口感和丰富的营养价值而受到广泛关注。
随着人们对健康饮食的追求和对食品营养成分的深入研究，柠檬的营养成分及其综合利用价值逐渐显现。
本文旨在综述柠檬的营养成分，包括维生素、矿物质、膳食纤维以及多种生物活性物质，并探讨这些成分对人体健康的影响。
本文还将关注柠檬的综合利用研究进展，包括其在食品、饮料、化妆品以及医药等领域的应用，以期为柠檬产业的可持续发展提供理论支持和实践指导。
通过本文的综述，我们期望能够更全面、深入地了解柠檬的营养价值及其综合利用前景，为推动柠檬产业的健康发展提供参考。
二、柠檬营养成分的研究进展柠檬作为一种广受欢迎的水果，其营养成分丰富多样，包括维生素C、矿物质、膳食纤维以及多种生物活性物质。
近年来，随着人们对健康饮食的日益关注，柠檬的营养价值受到了广泛的关注和研究。
在维生素C的研究方面，柠檬被公认为是维生素C的优质来源。
多项研究表明，柠檬中的维生素C含量不仅丰富，而且具有较高的生物利用率。
维生素C在人体内发挥着多种重要作用，包括增强免疫力、促进铁的吸收、抗氧化等。
柠檬中还含有其他多种维生素，如维生素A、维生素E等，这些维生素也对人体健康有着积极的贡献。
除了维生素，柠檬还是多种矿物质的良好来源，尤其是钾和钙。
钾是人体内重要的电解质，对于维持心脏功能、血压稳定以及水分平衡等方面具有重要作用。
而钙则是构成骨骼和牙齿的主要成分，对于维持骨骼健康至关重要。
研究表明，柠檬中的钾和钙含量适中，且易于被人体吸收利用。
柠檬中还含有丰富的膳食纤维，这对于促进消化道健康、预防便秘等方面具有积极意义。
膳食纤维可以增加食物在肠道中的体积，促进肠道蠕动，帮助排便。
同时，膳食纤维还可以与肠道中的胆固醇结合，降低血液中胆固醇水平，从而有助于预防心血管疾病。
近年来，随着对柠檬研究的深入，人们还发现了柠檬中含有多种具有生物活性的物质，如黄酮类化合物、柠檬苦素等。
柠檬苦素的色谱检测方法研究进展 摘要：赣南脐橙主要以鲜食为主，脐橙加工业落后，其主要原因为脐橙等柑橘类汁具严重
的后苦作用，影响产品风味。其中柠檬苦素为加工中主要苦味来源。本文就柠檬苦素的色谱检测方法作简要的概述，旨在为脐橙的深加工中控制产品的质量提供一些参考。 关键词：脐橙；柠檬苦素；检测；色谱
前言 赣南是我国著名的脐橙生产基地，素有“中国脐橙之乡”之称。赣南脐橙年产量已经突破150万吨，但目前国内对脐橙的开发利用率较低，95％以上产品仍依赖鲜销；且赣州以纽荷尔脐橙为主栽品种，占种植品种的90%以上，上市集中，常常出现“丰产不丰收”，脐橙滞销，果农“卖果难”等问题。解决赣南脐橙滞销问题，最可行的办法就是大力发展脐橙深加工，而脐橙原料在深加工过程中变苦，是困扰脐橙果酒生产的难题。脐橙鲜食或其鲜榨果汁并无苦味，但压榨的橙汁在室温中存放几个小时或在冰箱中冷藏过夜，会变苦。这种脐橙果汁中的延迟苦味源于无苦味的前体物生成了柠檬苦素。据报道，脐橙等柑橘类汁出现延迟苦味的原因主要是在酸性、加热、冰冻或机械损伤等逆境环境条件下，果实中所存在的非苦味的柠檬苦素A环内酯转变成了具有强烈苦味的柠檬苦素[1]。脐橙苦味主要来自柠檬苦素类 (limonin)的变化。柠檬苦素含量的高低直接影响脐橙及其产品的品质，测定柠檬苦素的含量可用于控制脐橙及其相关产品的质量。 随着仪器分析技术的广泛应用和检测技术的发展，研究者建立了多种检测柠檬苦素类似物的方法，主要有分光光度法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)等。 1.薄层层析法 薄层色谱法的优点是简便快捷，缺点是由于是目测，结果误差较大，所以分析重现性一直束缚着其的发展。Dreyer 在最初的柠檬苦素检测方面做出了重要贡献，1965 年，Dreyer 首次使用薄层层析法( TLC) 对柠檬苦素类似物甙元进行了定量分析，用核磁共振技术（NMR）对柠檬苦素结构的解析[2]。随后Hasegawa 和 Bennett 利用这两种方法分离、鉴定 30 种柠檬苦素苷配基和 20 种柠檬苦素配糖体[3]。 我国研究学者将参照Maier等的方法并加以改进，薄板规格为150mm×100mm，展开剂为二氯甲烷：乙酸乙醋=4:7，显色剂为二甲氨基卞亚基罗丹宁：硫酸：乙醇=1：2：97(W/W)，展距为13.5cm，对柑橘果实提取样品中的柠檬苦素和诺米林进行定性，结果表明二者的R值分别为0.25和0.37，分离度较好[4]。为进一步揭示常山胡柚活性成分的药理作用，对胡柚皮进行综合开发利用，赵雪梅等对其有效成分的药理活性进行了研究，利用柱层析和薄层层析及现代波谱法(IR、NMR、MS)分离鉴定了常山胡柚果皮中3种化学成分的结构，试验方法为胡柚鲜皮，分别用95％和70％的乙醇回流提取后。合并提取液，减压浓缩致无醇，依次用氯仿、丙酮、乙醇和70％乙醇萃取。氯仿部位和丙酮部位反复用硅胶柱层析，Sephadex LH20凝胶层析，C 18反相柱层析，以高效薄层层析(TLC)展开，硫酸—香兰素及碘显色检测纯度，以石油醚—丙酮、氯仿—甲醇、甲醇—水等体系进行梯度洗脱，分离鉴定了30多种化合物结构，首次将柚皮素、柚皮甙、柠檬苦素这3种化学成分从该种植物中分离[5]。 2.高效液相色谱法 近年来，HPLC法广泛应用于定性定量分析的检测，由于其具有准确、高效、灵敏、时间短、重现性好、样品前处理简单等优点，所以发展很迅速。HPLC是柠檬苦素的主要测定及定量分析方法，该方法最初由Fisher创建[6]。 Soleiman 等人利用 HPLC 技术，对伊朗马赞德兰省柑橘果汁中柠檬苦素进行了定量分析，柑橘果汁中柠檬苦素的平均含量为 18.5±3.6ppm[7]。Amit Vikram 等人利用 C18 反向柱、二元溶剂梯度体系、二极管检测器，同步定量检测了柠檬苦素、诺米林等 7 种柠檬苦素苷配基和柠檬苦素配糖体，并且发现柠檬苦素和柠檬苦素葡糖苷分别是柠檬苦素苷配体和柠檬苦素配糖基的主要成分[8]。 我国利用高效液相研究柠檬苦素方面，具有大量成果。Shaojie Li和Zhuang Wang采用HPLC检测温州蜜柑中三类主要苦味物质——柠檬苦素、诺米林、柚皮苷在生长过程中含量的变化，测定柠檬苦素和诺米林时，以二氯甲烷萃取，使用 C18色谱柱，根据Manners等的方法，使用流动相配比为乙腈：10%甲醇=40:60，以 1ml/min的速度等度洗脱，210nm波长下检测；检测柚皮苷时，以纯乙腈为流动相A，10%的乙腈为流动相B，参照Ribeiro等人的洗脱方法，在285 nm波长下检测。结果表明，柠檬苦素、诺米林、柚皮苷分离效果好，检测精确度高[9]。刘亮，戚向阳等人利用 HPLC 技术对国产红葡萄柚、锦橙、酸橙和脐橙进行分析，同步分离检测柠檬苦素和诺米林两种化合物，使用 C18 反向柱，45%乙腈作为流动相，检测波长为 210nm。样品的回收率、精密度和重现性都比较好[10]。陈静等采用高效液相色谱法在KR100-5C18(4.6mm .i d.×250mm,5μm)上，分别以乙腈-四氢呋喃-水(体积比为17.5∶17.5∶65)和甲醇-冰醋酸-水(体积比为40∶1∶59)为流动相(流速均为1mL /m in)，在207nm和283nm检测波长下分别测定了柠檬苦素和柚皮苷。实验结果表明，柠檬苦素在1.00～50.00mg /L时线性关系良好(r=0.999 2)，检出限为0.07μg，平均加标回收率为98.69%，相对标准偏差(RSD)为2.5%，用该法检测柑橘汁样品中的柠檬苦素，方法简便、快速、准确[11]。刘棠等用高效液相色谱法测定柠檬苦素含量，以柚子果汁为对象研究柚苷酶处理、果
汁浓缩和低温贮藏等工序对柑橘果汁中柠檬苦素含量的影响，采用的高效液相色谱条件为：进样量20 HL，柱温35℃，流动相为水(A)和乙腈(B)，以0.5 mL/min流速进行梯度洗脱，梯度条件：0～4 min，95％A：4～14 min，60％A：14～16 min，保持60％A；16～24 min，30％A：24～28 min，95％A：28～32 rnin，保持95％A；检测波长为210nm。最终实现柠檬苦素、普鲁宁、袖皮苷和柚皮素完全分离，柠檬苦素检出限为0，95 ppm/mL，定量限为3.17 ppm/mL，样品回收率为102.6％～104.2％，相对标准偏差为0.34％～1.04％[12]。 3.超高效液相 超高效液相色谱(UPLC)是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。国内对UPLC在柠檬苦素的检测运用方面有较多研究，建立了金柑中柠檬苦素和诺米林的UPLC检测体系，该检测体系中柠檬苦素和诺米林在1μg/mL~1780μg/mL和1μg/mL~1720 μg/mL浓度范围内呈现出良好的线性关系，R2均为0.9999，加标回收率分别为97. 19%~100. 06%和95. 35%~99. 83%，相对标准偏差(RSD)分别为0.74%~2.25%和0.80%~3.36%，检出限分别为1.65μg/g和1.28μg/g，也可用于柑橘、柚子、橙等植物中柠檬苦素类化合物的检测[13]。将UPLC与质谱联用，检测柑橘组织中的柠檬苦素含量，具体工作条件为：色谱柱waters ACQUITY BEH C18(50mm×2.5mm,1.9μm)；流动相：A为乙腈，B为纯水，采用梯度洗脱：A10%(0min)—50%(3min) —10%(4min) —10%(5min)，流速0.3mL/min，柱温40℃，进样量5μL，检测时间5min，正离子模式（ESI+）离子检测器：柠檬苦素母离子m/z=471.1，子离子m/z=425.3，m/z=161.1[14]。 4.高效液相色谱串联技术 Manners和 Hasegawa提出的HPLC-MS法，并使用微球硅胶柱和环己烷、四氢呋喃的二元体系分离柠檬苦素类似物甙元，该方法的高选择性已经达到商业标准[15]。Gary 等人分别利用高效液相-电子轰击电离-质谱联用法（HPLC-EI/MS）和高效液相-常压化学电离-质谱联用法（HPLC-APCI/MS），对 17 种已知的中性柑橘柠檬苦素苷配基化合物进行了鉴定。已知的柠檬苦素类似物 HPLC-MS 数据提供了色谱特征信息，常压化学电离分子量数据和电子电击碎片数据。电子电击碎片模型与柠檬苦素的结构特征有关。因此，电子电击碎片模型结合常压化学电离分子量数据可能会预测未知的柑橘柠檬苦素类似物[16]。国内早在2000年，无锡轻工大学食品学院便建立了液相色谱— 电喷雾质谱联用技术分析柑桔中的柠檬苦素类似物成分的方法，从我国浙江产的柚皮中测出两种柠檬苦素类似物配糖体奥巴叩酮配糖体和诺米林配糖体，为从复杂混合物中筛选生理活性成分提供了一个简便的方法[17]。 5.分光光度法 分光光度法的优点是快速、简单。分光光度法测量柑桔中的类柠檬苦素化合物主要是根据柠檬苦素和艾利希Ehrlich试剂的反应呈红色，可粗略的测量样品中的类柠檬苦素化合物的总量，而且快速方便，可用于类柠檬苦素的提取研究。Breksa等建立了一种简单和快速测定柑橘汁中总柠檬苦素类似物苷元和配糖体含量的比色方法。方法定量是基于待测物与4-苯甲醛反应会形成红色至橙色衍生物。实验研究了4-苯甲醛浓度、反应时间、试剂组成对颜色的生成和敏感性的影响，并在实验条件进行了优化[18]。刘君研究建立了紫外分光光度法快速测定类柠檬苦素的方法，以DMAB作为指示剂，进行比色分析，确定柠檬苦素标准品扫描最大波长为470nm，建立吸光度与浓度的线性回归方程为y=0.0028x+0.0047，R2=0.9945，其平均回收率在91.30%到94.48%之间。此法不需要昂贵的设备，操作简单，具有较高的灵敏度，可快速准确的检测出柑桔种子中类柠檬苦素的总量[19]。 6.结语 以上方法中，分光光度法仅适用于对柠檬苦素类化合物总量的测定，TLC法因依靠目测进行定量，测试结果误差较大，高效液相色谱法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等优点，目前检测柠檬苦素类似物最常用的是HPLC。且高效液相色谱联用技术也得到了不断的发展，采用HPLC法及其联用技术检测柠檬苦素类化合物将日益受到研究学者的青睐。
参考文献： [1] Maier, V. P., Beverly, G. D.Citrus Limonin Research[J]. Food Sci, 1968, 33:488-492. [2] Dreyer, D. L.Citrus bitter principles—II : Application of NMR to structural and stereochemical problems[J]. Tetrahedron, 1965. 21: 75-87. [3] Hasegawa S, Bennett R.D., Herman Z,et al. Limonoid glucosides in Citrusf[J].Phytochemistry, 1989, 28(6): 1717-1720.
