当前位置：文档之家 › 1.紫外分光光度法测定未知样含量-方案+公式+图

1.紫外分光光度法测定未知样含量-方案+公式+图

  • 格式：doc
  • 大小：81.00 KB
  • 文档页数：5

紫外分光光度法测定未知样含量
(含方案、公式、标准误吸收光谱图)
1.仪器
1.1紫外可见分光光度计(T6型)；
1.2石英吸收池(1cm)：2只；
1.3比色管（50mL）10支；
1.4吸量管5mL：2支。
2.试剂
2.1苯甲酸标准溶液(0.1mg/mL)；
2.2未知液：浓度约为40～60ug/mL。
3.实验操作
3.1吸收曲线的绘制
3.1.1标准苯甲酸吸收曲线绘制
在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，
并摇匀。于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近
间隔5 nm测定一次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光
度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：苯甲酸的吸收曲线。
3.1.2标准水杨酸吸收曲线绘制
在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，
并摇匀。于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近
间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔1 nm测定一次吸光度，
绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：水杨酸吸收曲线。
3.1.3未知液吸收曲线的绘制
准确吸取含苯甲酸的未知液若干体积（5mL）于一支50mL比色管中，以水定容并
摇匀。以蒸馏水为参比，于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最
大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测
定一次吸光度，绘制吸收曲线。（观察3.1.1和3.1.2各自所得吸收曲线有什么相同之处？
这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？）
附图：未知液的吸收曲线。
3.2吸收池配套性检查
石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一
吸收池的吸光度（其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，否则更换）作为校正值。
3.3校准曲线的绘制及未知样含量的测定
准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积于50mL比色管中，以水定容，
制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液（0～10ug/mL），在最大吸收波长处，以水为
参比，测定各自吸光度。由实验数据计算回归方程及相关系数，以浓度（ρ/ ug·mL-1） 为
横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线。
在相同条件下，测定样品稀释液（配制方法同3.1.2）的吸光度，代入回归方程计算
出样品稀释液的浓度。试样平行测定三份。
4.结果计算
根据未知液的稀释倍数，求出未知溶液中水杨酸的含量。
【相关计算及公式】
1.校准曲线
由试验点经最小二乘法对试验数据进行回归计算，得出一元一次线性回归方程，并
计算出该方程的相关系数。然后在坐标纸上画出该回归方程的直线。回归方程为：

;/)()(;/))((;/)()(其中：222222






nyyyyL
nyxxyyyxxL
nxxxxL
xbya
L
L
b

bxay

iyy
iixy
ixx
xx
xy

2.相关系数
yyxx
xy
LL

L

3.相对标准偏差：按照未知稀释液的A校正计算相对标准偏差
RSD

%1001)(%1002xnxxxSRSD
i

4.未知稀释液含量：稀释后未知溶液中待测组分的浓度应由回归方程计算而得。

baAb

ay
x1111

baAbayx2222
baAbayx3333
则：

3

321

xxx
x

5.未知溶液中待测组分的含量：根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液中待测组
分的含量。
维生素C吸收曲线(10ug/mL)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4

200205210215220225230235240245250255260265270275280285290295300305310315320325330335340345350
波长

吸
光
度

附图1 维生素C吸收曲线
苯甲酸吸收曲线(10ug/mL)

0.000
0.200
0.400
0.600
0.800
1.000
1.200
1.400
1.600

200205210215220225230235240245250255260265270275280285290295300305310315320325330335340345350
波长

吸
光
度

附图2 苯甲酸吸收曲线
附图-3
附图3 水杨酸吸收曲线

水杨酸吸收曲线(10ug/mL)
0.000
0.200
0.400
0.600
0.800
1.000
1.200
1.400
1.600
1.800
2.000

200205210215220225230235240245250255260265270275280285290295300305310315320325330335340345350
波长

吸
光
度

合集下载

高中生物 实验五、核酸定量测定

高中生物 实验五、核酸定量测定

按样品各自的分析规程植被样品溶液 及背景溶液 ↓
设波长，置空白，调零，置“吸光度”，读出样品吸光度 ↓
重复上步读出各标准溶液吸光度 ↓
以各样品中已知含量及读得吸光度绘制坐标图，并画出相关 最佳的曲线
↓ 读未知样品的吸光度，在曲线表上找出对应浓度
标准曲线的制作 表5-1
试管
1
标准DNA溶液（mL） 0
蒸馏水（mL）
5
DNA浓度(ug/ml) 0
A260
0
2 3 4 5 67 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4
混匀后以1号试管为空白在260nm处测定光吸收值A，以标准DNA 溶液的浓度为横坐标、A为纵坐标在坐标纸上绘制出标准曲线，
它是一条直线。
2、核酸最大紫外吸收波长（λｍ）的确定：
以上5-1表中的７号试管为测定对象，以1号试管 为空白，在240～290nm范围内每隔10nm分别 测定光吸收值A。注意，每次换了波长之后都需 要用空白重新调校“0％T”和 “100％T”。以A 为纵坐标、λ（nm）为横坐标作一条平滑曲线， 找出最高峰处所对应的波长λｍ。
3、样品测定
取一支试管，编号8，加入6mL左右待测的DNA 溶液，仍以1号试管为空白，分别在260nm和 280nm处测定其光吸收A，用A260在标准曲线上 查出DNA溶液浓度C1
根据公式计算出待测DNA溶液的浓度C2 （g/mL）。
根据A260/A280的值来判断该待测的DNA样品是否 纯净。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
如果已知待测的核酸样品不含酸溶性 核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，即可将 样品配制成一定浓度的溶液(20～ 50ug/mL)，在紫外分光光度计上直接测定。
紫外分光光度法阿司匹林的含量测定

紫外分光光度法阿司匹林的含量测定

紫外分光光度法对阿司匹林的含量测定紫外分光光度法对阿司匹林的含量测定紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。

操作简单、准确度高、重现性好。

波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大。

分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。

描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而变的函数关系曲线，称为吸收光谱或吸收曲线。

紫外-可见吸收光谱通常由一个或几个宽吸收谱带组成。

最大吸收波长（λmax）表示物质对辐射的特征吸收或选择吸收，它与分子中外层电子或价电子的结构（或成键、非键和反键电子）有关。

朗伯-比尔定律是分光光度法和比色法的基础。

即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。

A= lg1/T = εcl (Lambert-Beer定律)紫外-可见分光光度计由5个部件组成：①辐射源。

必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。

②单色器。

它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。

③试样容器，又称吸收池。

供盛放试液进行吸光度测量之用，分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。

容器的光程一般为0.5～10厘米。

④检测器，又称光电转换器。

常用的有光电管或光电倍增管，后者较前者更灵敏，特别适用于检测较弱的辐射。

近年来还使用光导摄像管或光电二极管矩阵作检测器，具有快速扫描的特点。

⑤显示装置。

这部分装置发展较快。

较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。

仪器类型有：单波长单光束直读式分光光度计，单波长双光束自动记录式分光光度计和双波长双光束分光光度计。

紫外分光光度法

紫外分光光度法


二.鉴别及检查: 按各该品种项下的规定，测定供试品
溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有 的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收 与最小吸收的比值，均应符合规定。
三.含量测定:
1.对照品比较法 : 按各该品种项下规定的方法，分别配制供
试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被 测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量 的（100士10）％以内，用同一溶剂，在规定的 波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度。
供试品溶液配制：取本品20片，精密称定，研细， 精密称取约相当于多潘立酮10mg的量，置50ml量 瓶中，加水5ml，振摇，加异丙醇25 ml，置水浴上 加热10分钟并时时振摇使溶解，放冷，加异丙醇稀 释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中， 加异丙醇至刻度, 振摇。
第七节 检验记录单内容
紫外－可见分光光度计的校正
波长校正－用汞灯、氘灯、钬玻璃 吸光度准确度－用重铬酸钾的硫酸溶液 杂散光检查－1%碘化钠溶液、5%亚硝
酸钠溶液
第四节 样品测定操作方法
一.吸收系数测定（性状项下）: 按各该品种项下规定的方法配制供试
品溶液，在规定的波长测定其吸收度，并 计算吸收系数，应符合规定范围。
7 .测定时除另有规定者外，应在规定的吸 收峰±2nm处，再多测几个点的吸光度， 以核对供试品的吸收峰位置是否正确， 并以吸光度最大的波长作为测定波长。 除另有规定外吸光度最大波长应在该品 种项下规定的波长±２nm以内，否则应 考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长 的准确度。
第七节 检验记录单内容
第五节 注意事项
1.试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗 净后使用。
2.使用的石英吸收池必须洁净。吸收池在测定样品 溶液前必须加以校正。 取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品 溶液以池体积的4／5为度。 使用挥发性溶液时应加盖。吸收池透光面要用擦 镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂。
紫外-可见分光光度法测定

紫外-可见分光光度法测定

紫外-可见分光光度法测定1. 引言1.1 引言紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学方法，通常用于测定物质的浓度或测定物质的吸光度。

该方法利用紫外-可见光谱仪测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而推断样品中所含物质的浓度或结构。

在化学分析实验中，紫外-可见分光光度法具有灵敏度高、准确性高和简便易行的优点，因此被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。

本实验旨在通过该方法测定样品中目标物质的浓度，并探讨影响测定结果的因素。

通过对仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素的详细讨论，我们将深入了解紫外-可见分光光度法的原理和应用，并为今后在相关领域的研究提供参考和借鉴。

希望本实验能够为我们提供更多关于分光光度法的实际操作经验，提升我们的实验技能和分析能力。

1.2 背景介绍紫外-可见分光光度法是一种广泛应用于化学分析领域的分析方法，通过测定物质在紫外-可见光区域的吸收特性，从而确定物质的浓度或者进行定性分析。

紫外-可见分光光度法具有操作简单、灵敏度高、选择性强的特点，被广泛应用于环境监测、食品安全检测、药品质量控制等领域。

随着科学技术的不断发展，紫外-可见分光光度法在实验室分析中扮演着越来越重要的角色。

通过测定物质在特定波长范围内的光吸收情况，我们可以获得关于物质性质的重要信息，如浓度、溶解度、稳定性等。

掌握紫外-可见分光光度法的原理和操作方法，对于提高实验准确性和效率具有重要意义。

在本文中，我们将介绍紫外-可见分光光度法的仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素，希望能够为读者提供一份系统全面的紫外-可见分光光度法测定指南。

通过总结和展望，我们也希望能够进一步探讨该方法在化学分析领域的应用前景。

1.3 研究目的紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学技术，可以用于测定物质的吸光度，从而推断物质的浓度。

本实验的研究目的主要分为以下几点：1. 研究紫外-可见分光光度法在测定物质浓度方面的应用。