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常用细胞培养基配方及缓冲液

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1640细胞培养基 成分（mg/L） MD800 MD801 MD802 MD803 四水硝酸钙 100 100 100 100 氯化钾 400 400 400 400 无水硫酸镁 48.84 48.84 48.84 48.84 氯化钠 6000 6000 6000 5850 磷酸氢二钠 800 800 — 800 L-精氨酸 200 200 200 200 L-天门冬酰胺 50 50 50 50 L-天门冬氨酸 20 20 20 20 L-胱氨酸盐酸盐 65.15 65.15 65.15 65.15 L-谷氨酸 20 20 20 20 L-谷氨酰胺 300 300 300 300 甘氨酸 10 10 10 10 L-组氨酸 15 15 15 15 L-羟脯氨酸 20 20 20 20 L-异亮氨酸 50 50 50 50 L-亮氨酸 50 50 50 50 L-赖氨酸盐酸盐 40 40 40 40 L-蛋氨酸 15 15 15 15 L-苯丙氨酸 15 15 15 15 L-脯氨酸 20 20 20 20 L-丝氨酸 30 30 30 30 L-苏氨酸 20 20 20 20 L-色氨酸 5 5 5 5 L-酪氨酸 20 20 20 20 L-缬氨酸 20 20 20 20 D-葡萄糖 2000 2000 2000 2000 谷胱甘肽（还原型） 1 1 1 1

HEPES — — — 5957.5 酚红 5 — — 5 维生素H 0.2 0.2 0.2 0.2 D-泛酸钙 0.25 0.25 0.25 0.25 氯化胆碱 3 3 3 3 叶酸 1 1 1 1 i-肌醇 35 35 35 35 烟酰胺 1 1 1 1 对氨基苯甲酸 1 1 1 1 盐酸吡哆醇 1 1 1 1 核黄素 0.2 0.2 0.2 0.2 盐酸硫胺 1 1 1 1 维生素B12 0.005 0.005 0.005 0.005

pH（无碳酸氢钠） 7.5±0.3 7.5±0.3 8.0±0.3 6.7±0.3 pH（加碳酸氢钠） 7.8±0.3 7.8±0.3 8.2±0.3 7.0±0.3 渗透压（无碳酸氢钠） 237±5% 235±5% 235±5% 260±5%

渗透压（加碳酸氢钠） 279±5% 280±5% 280±5% 292±5%

以上数据仅为参考，以产品说明书为准。 MEM细胞培养基 成分（mg/L） MD600 MD601 MD602 MD603 MD604 MD605 MD606 MD607 MD608 氯化钙 200 140 — 200 140 200 — 200 200 氯化钾 400 400 400 400 400 400 400 400 400 无水硫酸镁 97.67 97.67 97.67 97.67 97.67 97.67 97.67 97.67 97.67 磷酸二氢钾 — 60 — — 60 — — — — 氯化钠 6800 8000 6800 6800 8000 6800 6800 6800 6800

无水磷酸二氢钠 121.74 — 121.74 121.74 — 121.74 121.74 121.74 — 磷酸氢二钠 — 47.88 — — 47.88 — — — — L-丙氨酸 — — — 8.9 8.9 — — — — L-精氨酸盐酸盐 126 126 126 126 126 126 126 126 126 L-天门冬酰胺 — — — 13.2 13.2 — — — — L-天门冬氨酸 — — — 13.2 13.2 — — — — L-胱氨酸盐酸盐 31.29 31.29 31.29 31.29 31.29 31 31 31.29 31.29 L-谷氨酸 — — — 14.7 14.7 — — — — L-谷氨酰胺 292 292 292 292 292 — — 292 292 甘氨酸 — — — 7.5 7.5 — — — — L-组氨酸盐酸盐 42 42 42 42 42 42 42 42 42 L-异亮氨酸 52 52 52 52 52 52 52 52 52 L-亮氨酸 52 52 52 52 52 52 52 — 52 L-赖氨酸盐酸盐 72.5 72.5 72.5 72.5 72.5 72.5 72.5 — 72.5 L-蛋氨酸 15 15 15 15 15 15 15 — 15 L-苯丙氨酸 32 32 32 32 32 32 32 32 32 L-脯氨酸 — — — 11.5 11.5 — — — — L-丝氨酸 — — — 10.5 10.5 — — — — L-苏氨酸 48 48 48 48 48 48 48 48 48 L-色氨酸 10 10 10 10 10 10 10 10 10 L-酪氨酸 36 36 36 36 36 36 36 36 36 L-缬氨酸 46 46 46 46 46 46 46 46 46 D-葡萄糖 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 酚红 10 10 10 10 10 6 6 10 10 丁二酸钠 — — — — — 100 100 — — 丁二酸 — — — — — 75 75 — — D-泛酸钙 1 1 1 1 1 1 1 1 1 重酒石酸胆碱 — — — — — 1.8 1.8 — — 氯化胆碱 1 1 1 1 1 — — 1 1 叶酸 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i-肌醇 2 2 2 2 2 2 2 2 2 烟酰胺 1 1 1 1 1 1 1 1 1 盐酸吡哆醛 1 1 1 1 1 1 1 1 1 核黄素 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 盐酸硫胺 1 1 1 1 1 1 1 1 1

pH（无碳酸氢钠） 5.9±0.3 6.2±0.3 5.1±0.3 5.1±0.3 6.3±0.3 4.2±0.3 4.3±0.3 5.9±0.3 6.6±0.3 pH（加碳酸氢钠） 7.6±0.3 7.1±0.3 6.8±0.3 7.5±0.3 7.2±0.3 7.3±0.3 6.7±0.3 7.5±0.3 7.8±0.3

渗透压（无碳酸氢钠） 250±5％ 282±5％ 265±5％ 250±5％ 287±5％ 251±5％ 267±5％ 250±5％ 240±5％

渗透压（加碳酸氢钠） 295±5％ 285±5％ 300±5％ 294±5％ 300±5％ 289±5％ 299±5％ 290±5％ 281±5％

以上数据仅为参考，以产品说明书为准。 DMEM/F12细胞培养基 成分（mg/L） MD206 MD207 成分（mg/L） MD206 MD207 无水氯化钙 116.6 116.6 L-色氨酸 9.02 9.02 五水硫酸铜 0.0013 0.0013 L-酪氨酸 38.4 38.4 九水硝酸铁 0.05 0.05 L-缬氨酸 52.85 52.85 七水硫酸亚铁 0.417 0.417 D-葡萄糖 3151 3151 氯化钾 311.8 311.8 HEPES 3574.5 — 氯化镁 28.64 28.64 次黄嘌呤 2 2 无水硫酸镁 48.84 48.84 亚油酸 0.042 0.042 氯化钠 6999.5 6999.5 硫辛酸 0.105 0.105 无水磷酸二氢钠 54.35 54.35 酚红 8.1 8.1

磷酸氢二钠 71.02 71.02 1,4-丁二胺二盐酸盐 0.081 0.081 七水硫酸锌 0.432 0.432 丙酮酸钠 55 55 L-精氨酸盐酸盐 147.5 147.5 维生素H 0.0035 0.0035

L-胱氨酸盐酸盐 31.29 31.29 D-泛酸钙 2.24 2.24

L-谷氨酰胺 365 365 氯化胆碱 8.98 8.98 甘氨酸 18.75 18.75 叶酸 2.65 2.65 L-组氨酸盐酸盐 31.48 31.48 i-肌醇 12.6 12.6

L-异亮氨酸 54.47 54.47 烟酰胺 2.02 2.02 L-亮氨酸 59.05 59.05 盐酸吡哆醛 2 2 L-赖氨酸盐酸盐 91.25 91.25 盐酸吡哆醇 0.031 0.031

L-蛋氨酸 17.24 17.24 核黄素 0.219 0.219 L-苯丙氨酸 35.48 35.48 盐酸硫胺 2.17 2.17 L-丝氨酸 26.25 26.25 胸苷 0.365 0.365 L-苏氨酸 53.45 53.45 维生素B12 0.68 0.68 L-丙氨酸 4.45 4.45

L-天门冬酰胺 7.5 7.5 pH（无碳酸氢钠） 5.8±0.3 5.8±0.3 L-天门冬氨酸 6.65 6.65 pH（加碳酸氢钠） 6.8±0.3 6.9±0.3 L-半胱氨酸盐酸盐 17.56 17.56 渗透压（无碳酸氢钠） 279±5% 277±5%

L-谷氨酸 7.35 7.35 渗透压（加碳酸氢钠） 299±5% 300±5% L-脯氨酸 17.25 17.25 以上数据仅为参考，以产品说明书为准。

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霉菌培养基配方

霉菌培养基配方

霉菌培养基配方
霉菌培养基的配方有很多种，不同种类的霉菌可能需要不同的培养基配方。

以下是一种常用的霉菌培养基配方：
成分：
- 葡萄糖10g
- 酵母提取物10g
- 蛋白胨5g
- 氯化钠5g
- 镁硫酸盐1.2g
- 磷酸盐缓冲液9 mL
- 琼脂15g
- 蒸馏水1000 mL（pH 调节至6.5）
制备方法：
1. 将葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨、氯化钠和镁硫酸盐加入蒸馏水中，加热并不断搅拌，直到完全溶解。

2. 用磷酸盐缓冲液调节pH 值至6.5。

3. 加入琼脂并继续加热搅拌，直到琼脂完全溶解。

4. 待培养基稍微降温后，将培养基灌入培养皿中，保持无菌状态。

此外，还有一些针对特定类别的霉菌所使用的培养基配方，如马尔凯姆培养基、地高辛培养基等。

常用培养基的配制

常用培养基的配制


在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
4. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 5. 量取10 ml 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加5 N NaOH溶液（约0.2 ml)，调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1 L。 8. 高温高压灭菌后，4℃保存。 9. 使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl2溶液。
组份浓度
配制量 配制方法
1L
1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
பைடு நூலகம்
组份浓度
配制量 配制方法
1L 1. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml)，调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。 组份浓度
配制方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。 组份浓度
组份浓度
配制量 配制方法
1L 1. 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml)，调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g Agar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。 6. 加入1 ml Ampicillin（100 mg/ml)、1 ml IPTG（24 mg/ml)、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均 匀混合。
实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表

实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表

实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1MTri-HCl□组份浓度1MTri-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1.称量121.1gTri置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tri溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTri-HCl□组份浓度1.5MTri-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTri置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tri溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10某TEBuffer□组份浓度100mMTri-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTri-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L 后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1.称取40.8gNaOAc3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer□组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4□配制量1L□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

brdu细胞染色实验步骤

brdu细胞染色实验步骤

brdu细胞染色实验步骤BRDU细胞染色实验是一种常用的细胞周期研究方法，用于检测细胞的DNA合成。

下面是BRDU细胞染色实验的详细步骤。

实验材料和试剂准备：1.细胞培养基：根据实验需要选择合适的培养基，例如DMEM、RPMI-1640等，并添加适当浓度的胎牛血清或其他所需的血清。

2. BRDU标记试剂：购买商业提供的BRDU标记试剂，如BRDU胸腺嘧啶标记试剂盒。

3.磷酸缓冲液（PBS）：配制pH 7.4的PBS溶液。

4. 75%乙醇。

实验步骤：1.细胞培养和分组：a.选择合适的细胞系，将其接种在培养基中的培养瓶或培养皿中，并放入37℃的恒温培养箱中。

b.根据实验需求将细胞分为实验组和对照组，每组设立至少三个重复样本。

2.处理细胞：a.在实验组中加入BRDU标记试剂，在对照组中不加入BRDU标记试剂。

b.根据细胞的生长情况，选择合适的处理时间和剂量。

一般情况下，处理时间为2-24小时，剂量为10-100umol/L。

3.收集细胞：a.处理时间到后，将培养皿或培养瓶从恒温箱中取出。

b.用PBS缓冲液三次冲洗细胞，每次冲洗10分钟。

c.倒掉PBS缓冲液，用5 ml PBS缓冲液分别冲洗各个培养皿或培养瓶中的细胞。

4.固定细胞：a.在处理后的细胞上加入到预冷的75%乙醇中固定细胞，保持4℃，固定时间一般为2-24小时。

b.倒掉75%乙醇，用PBS缓冲液两次冲洗细胞，每次冲洗10分钟。

5.细胞染色：a.将固定的细胞孵育在含有抗BRDU抗体的试剂中，放置在4℃下孵育一定的时间（一般为2-24小时）。

b.冲洗细胞，去除未结合的抗体。

6.检测和分析：a.将细胞用PBS缓冲液洗涤两次。

b.加入荧光素检测方法所需的染料，如荧光素同位素染料（FITC）。

c.进行显微镜下观察和计数，或使用流式细胞术分析仪测量荧光信号。

总结：BRDU细胞染色实验是一种常用的细胞周期研究方法，能够检测细胞的DNA合成。

该实验的步骤包括细胞培养和分组、处理细胞、收集细胞、固定细胞、细胞染色和检测与分析。