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1 / 4 实验报告
学院：第二临床医学院 专业：临床医学 年级：2013级 班级：1班
姓名： 学号： 日期：2014,3,8 得分：
实验课程：生物化学实验
实验名称：蛋白质的定量测定（五）——考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度
【实验目的】
掌握考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量的原理和方法。
【实验原理】
考马斯亮蓝G-250（Coomassie G-250）是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质—考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595n处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质—考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定，适合于蛋白质类的定量分析尤其适合于稀有蛋白质的微量分析。考马斯亮蓝G-250试剂呈色反应颜色稳定、灵敏度高，最低测试蛋白质量在1ug左右。
【试剂与器材】
试剂： 真诚为您提供优质参考资料，若有不当之处，请指正。
2 / 4 考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml质量浓度为0.85g/ml的磷酸，用蒸馏水稀释到1000ml。
标准蛋白质溶液：结晶牛血清清蛋白，预先经微量凯氏定氮法标定该蛋白质的百分含量，然后根据该蛋白的纯度用0.15mol/LNacl配制成1.0mg/ml蛋白溶液。
器材：
试管和试管架
722型分光光度计
吸量管
移液枪
【实验步骤】
一、 制作标准曲线
管号 0 1 2 3 4 5 6
标准蛋白质溶液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0
XX届高考化学总复习 专题一 化学实验基础 课时5物质的
量浓度检测与评估
课时 5 物质的量浓度
一、单项选择题
1.已知某饱和溶液的①体积、②密度、③溶质和溶剂的质量比、 ④溶质的摩尔质量 , 要根据溶质
的溶解度计算该溶液的物质的量浓度 , 上述条件中必不可少的是
( )
A. ②④ B. ①④ C. ①②③ D. ①②③④
-12.(xx •广州模拟)质量分数为a%,物质的量浓度为cmol • L的
KOH溶液,蒸发溶剂,恢复到原来温
度,若质量分数变为2a%则物质的量浓度变为()
A. 等于 2cmol • L
C.小于 2cmol • L -1-1B.大于 2cmol • L-1 D.在 c2cmol • L 之间
-1-13. 配制100mL0.1mol・ LNa2CO溶液，下列操作正确的是()
A. 称取1.06g无水碳酸钠，加入100mL容量瓶中，加水溶解、定容
B. 称取1.06g无水碳酸钠，加入100mL蒸馏水，搅拌、溶解
C. 转移Na2CO溶液时,未用玻璃棒引流，直接倒入容量瓶中
D. 定容后, 塞好瓶塞 , 反复倒转 , 摇匀
4. (xx •广州模拟 ) 由硫酸钾、硫酸铝和硫酸组成的混合溶液的 pH=1,
其中 c(Al)=0.4mol • L,c(S
-13+-1）=0.8mol •_,则 c（K）为（）-1 -1+A.0.15mol •_ B.0.2mol ・L
C.0.3mol - L D.0.4mol - L-1-1
5. 标准状况下,VL氨气溶解在1L水中（水的密度近似为1g - mL）, 所得溶液的密度为P g - mL，质量
分数为3 ,物质的量浓度为cmol - L,则下列关系中不正确的是（）
-1-1-1
17V?22 400
A. P =22.4?22.4V
17c
B. 3 =1000?
17V
C. 3 =17V?22400 1 V?
D. c=17V?22400
分析化学实验指导目录
分析化学实验目的P2
分析化学实验要求P2
实验1 酸碱标准溶液的比较滴定（半微量分析法）P3
实验3 铵盐中氮含量的测定（甲醛法）（半微量分析法）P5
实验4 滴定分析技能考核P7
实验5 EDTA标准溶液的标定（半微量分析法）P8
实验6 天然水中总硬度的测定（半微量分析法）P9
实验7 NaOH标准溶液的标定（半微量分析法）P11
实验8 食醋中总酸度的测定（半微量分析法）P12
实验9 混合碱组成的分析及各组分含量的测定P13
实验10 高锰酸钾溶液的标定（半微量分析法）P15
实验11 过氧化氢含量的测定（半微量分析法）P16
实验12 硫代硫酸钠标准溶液的标定（半微量分析法）P17
实验13 胆矾中铜含量的测定（半微量分析法）P19
实验14 亚铁盐中铁的测定含量（半微量分析法）P20
分析化学实验目的 .
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分析化学是一门实践性很强的学科，实验课约占总学时的1/2～2/3。为此，分析化学实验单独设课。分析化学实验课的任务是巩固、扩大和加深对分析化学基本理论的学习和理解；熟悉各种分析方法，尤其应掌握基础的化学分析法；熟练掌握分析化学基本操作技术；使学生具有初步进行科学实验的能力。为学习后续课程和将来从事与化学有关的科学研究工作打下良好的基础。为完成上述任务，提出以下要求：
通过分析化学实验课的教学，使学生能掌握化学分析的基本知识，如常见离子的基本性质和鉴定，常见基准物质的使用。滴定分析的基本操作方法和指示剂的选择，学会查阅分析化学手册和参考资料，能正确、熟练地使用分析天平，会使用分光光度计和酸度计等仪器。
在分析化学实验教学过程中，要注意培养学生严谨的学习态度，科学的思想方法，良好的实验操作习惯，爱公物、守纪律的优良品德和实事求是的工作作风。
实 验 报 告
姓名：
班级：
同组人：
项目 硫酸铜含量测定 课程： 分析化学 学号：
一、实验目的
1．学习碘量法的基本原理、溶液的配制和标定的方法。
2．熟悉间接碘量法的操作方法。
3．了解间接碘量法测定铜盐的原理。
二、实验原理
固体试剂Na2S2O3•5H2O通常含有一些杂质，且易风化和潮解，因此，Na2S2O3标准溶液采用标定法配制。
通常采用K2Cr2O3作为基准物，以淀粉为指示剂，用间接碘量法标定Na2S2O3溶液，因为K2Cr2O7与Na2S2O3的反应物有多种，不能按确定的反应式进行，故不能用K2Cr2O7直接滴定Na2S2O3，而应先使K2Cr2O7与过量的KI反应，析出与K2Cr2O7计量相当的I2，再用Na2S2O3溶液滴定I2，反应议程式如下：
Cr2O72-+6I-+14H+=2Cr3++3 I2+7H2O
2S2O32-+ I2=2I-+S4O62-
Cr2O72-与I-的反应速度较慢，为了加快反应速度，可控制溶液酸度为0.2~0.4mol/L，同时加入过量的KI，并在暗处放置一定时间。
在弱酸性溶液中，Cu2+可与过量的I-作用析出I2并生成难溶物CuI，析出的I2可用Na2 S203滴定液滴定，其反应式为：
2Cu2+ + 4I- = 2CuI ↓ + 12 12 + 2 S2032- = 2I- + S4062-
三、仪器和药品
仪器：50mL碱式滴定管、10、20、25、50 mL移液管、台秤、称量纸、250mL锥形瓶（3个）、5mL刻度吸管（2个）、250mL 碘量瓶、电子天平、称量瓶
药品： 醋酸溶液、0.1mol／L Na2S2O3滴定液、KI固体
