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磁性多孔微球固定化假丝酵母脂肪酶的研究肖志红;吴红;李昌珠;张爱华;刘汝宽;吴晓芙【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2013(028)012【摘要】通过悬浮聚合法制备了含环氧基团的聚合物载体高分子磁性多孔微球(GHD),用TEM、SEM和Micromeritics ASAP 2010等对聚合物载体进行了表征.考察了载体中交联剂含量、固定化时间、给酶量等因素对固定化脂肪酶催化活性的影响.结果表明,Fe3O4纳米粒子粒径20 nm,分布均匀,磁性多孔微球粒径从几十微米到一百多微米,粒子大小大体呈正态分布且分布较窄,平均粒径为110 μm,直径在区间80～150μm范围内的粒子占90％以上.微球表面呈皱褶态且呈现多孔性,孔径从几个纳米到几十纳米,为闭孔,且孔间互相贯穿.固定化酶最适条件为给酶量125 mg/g,固定化时间7h,此时酶的吸附量为118.5 mg/g,比酶活7.56×105 U/g,酶的活力回收率95％.以GHD为载体制备的固定化脂肪酶最佳反应温度从37℃上升到42℃,最适反应pH从7.2提高到7.5,固定化后酶对温度和pH的敏感性降低,重复使用12次,固定化酶的活力都能保持在92％以上.【总页数】6页(P68-73)【作者】肖志红;吴红;李昌珠;张爱华;刘汝宽;吴晓芙【作者单位】中南林业科技大学生命科学与技术学院,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;中南林业科技大学生命科学与技术学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;中南林业科技大学生命科学与技术学院,长沙410004【正文语种】中文【中图分类】TQ424.19【相关文献】1.交联剂固定化假丝酵母脂肪酶及其催化反应研究 [J], 杨学昊;张增伟2.214型离子交换树脂固定化假丝酵母脂肪酶的研究 [J], 钱俊青;蒋盛蓝;秦德怀;郭辉;凌春英3.固定化南极假丝酵母脂肪酶B催化合成乳酸乙酯的研究 [J], 苑保国;李素暖;高静4.固定化生物印迹假丝酵母脂肪酶的制备研究 [J], 俞明;钱俊青;龚峰;唐弋奥5.新型磁性高分子多孔微球固定化木瓜蛋白酶活性与稳定性研究 [J], 曾力希;刘琳琳;杨旭;邓乐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体的制备及应用研究海藻酸钠-壳聚糖固定化载体是一种新型的生物材料，在生物医学、制药和工业生产等领域具有广泛的应用前景。
本文主要介绍了海藻酸钠-壳聚糖固定化载体的制备方法及其在生物材料领域中的应用研究进展。
一、海藻酸钠-壳聚糖固定化载体的制备。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体是通过将海藻酸钠和壳聚糖两种生物大分子进行交联反应得到的。
交联反应的方法有很多种，如化学交联、生物交联和自组装交联等。
1.化学交联法。
化学交联法是将含有活性基团的交联剂与海藻酸钠及壳聚糖反应形成交联结构。
典型的交联剂有双酚A、多巴胺、低分子量多酚等。
2.生物交联法。
生物交联法是利用一些天然的交联酶如过氧化氢酶、过氧化物酶等，在生物体系中催化分子间交联反应，完成固定化载体的制备。
3.自组装交联法。
自组装交联法是以静电交互作用为基础，利用多元酸和多胺之间的静电相互作用形成交联结构。
典型的多元酸有海藻酸等，多胺有聚丙烯胺等。
二、海藻酸钠-壳聚糖固定化载体在生物材料领域中的应用。
1.细胞培养支架。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体可以作为细胞培养支架，可支持细胞生长和增殖，同时增强细胞与载体之间的交互作用，提高细胞在载体上的生长和分化能力。
2.制药领域。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体可用作药物输送系统的载体，提高药物的稳定性和生物利用度，同时降低药物的毒副作用。
3.工业生产领域。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体在工业生产领域中作为酶的载体，在反应中发挥催化作用，并能保持酶的活性和稳定性，提高反应效率和产量。
总之，海藻酸钠-壳聚糖固定化载体是一种具有广泛应用前景的生物材料，在生物医学、制药和工业生产等领域有着重要的应用价值。
它的制备及应用研究将是未来的一个重要研究方向。
微球形固定化α-葡萄糖苷酶的制备
微球形固定化α-葡萄糖苷酶的制备
将粉末状壳聚糖制备成微球形多孔载体,采用吸附-交联的方法将TGL固定化.研究表明,制备微球形多孔壳聚糖载体的取决于壳聚糖原料的分子量分布、壳聚糖的稀酸溶液浓度以及凝结液的组成等因素;当壳聚糖的相对分子质量为3.0×105左右,壳聚糖溶液浓度为2.5%,凝结液组成为2 mol/L NaOH∶40%甲醛=3∶2(体积比)或2 mol/L NaOH∶甲醇=3∶1(体积比)时,可制得微球形多孔壳聚糖载体.最佳固定化条件研究表明,对于脱乙酰度为88%的壳聚糖载体,加酶量为3×105 Unit/g 时,在pH 6.0条件下,室温吸附8 h,然后用2.0%的戊二醛在45 ℃交联9 h,可得到固定化酶的活力为2.342×105 Unit/g,酶活力回收率为78.1%,并具有较好的强度.
作者：彭志英岳振峰张学兵徐建祥赵谋明作者单位：华南理工大学生物科学与工程研究中心, 刊名：华南理工大学学报(自然科学版) ISTIC EI PKU 英文刊名：JOURNAL OF SOUTH CHINA UVIVERSITY OF TECHNOLOGY 年，卷(期)： 2001 29(6) 分类号：Q556 关键词：α-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20) 固定化壳聚糖微球形。
生物柴油生产技术的研究进展赖红星;万霞;江木兰【摘要】生物柴油作为一种新兴的生物能源,以其可降解性、可再生性等优良品性受到人们极大的关注.生物柴油生产技术从最初的直接使用法、稀释混合法等到后来的酸/碱催化法、生物酶法、超临界法,经历了漫长的发展过程.综述了国内外生物柴油生产技术的优缺点及其研究进展.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2010(027)005【总页数】6页(P11-15,20)【关键词】生物柴油;生产技术;物理法;化学法;生物酶法;超临界法【作者】赖红星;万霞;江木兰【作者单位】中国农业科学院油料作物研究所,湖北,武汉,430062;中国农业科学院研究生院,北京,100062;中国农业科学院油料作物研究所,湖北,武汉,430062;湖北省能源油料作物与生物柴油研究中心,湖北,武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,湖北,武汉,430062;湖北省能源油料作物与生物柴油研究中心,湖北,武汉,430062【正文语种】中文【中图分类】TQ914.3生物柴油是指动植物油脂、餐饮废油等与低碳醇反应所得的脂肪酸甲酯(或乙酯)。
近年来，由于石油价格持续飚升和生物柴油的环境友好性，生物柴油的价值日益凸显。
制备生物柴油的方法可以归为四类：物理法、化学法、生物酶法以及超临界法。
作者在此简要概述了国内外生物柴油生产技术的优缺点及其研究进展。
1 物理法物理法是指通过物理机械的作用，将动植物油脂与石化柴油按比例混合，得到的油品因掺入了一定的动植物油脂而被称为生物柴油。
根据混合方式的不同，物理法分为直接使用法、稀释混合法和微乳化法三种。
1.1 直接使用法直接使用法迄今已有100多年的历史，柴油机的发明者Rudolph Diesel当初就是用花生油为燃料做测试的[1]。
1981年，Bartholomew提出了用食物作燃料的概念，并且指出植物油和酒精必将取代石油，可再生能源一定会取代不可再生能源。
壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶一、 实验目的（1） 掌握共价交联法制备固定化酶的一般过程。
（2） 会计算固定化酶的活力回收率。
二、 实验原理壳聚糖（chitosan ，CTS ）)是甲壳素的脱乙酰化产物，是一种氨基多糖，具有生物相容性好、无毒、易得等优点，采用壳聚糖为载体，以戊二醛为交联剂，可实现酶的固定化。
壳聚糖分子及固定化反应：OOnHONH 2OH2(CH 2)3H 2C=N-酶戊二醛、酶三、 实验材料及仪器：壳聚糖、pH7.8磷酸盐缓冲液、5g/L 木瓜蛋白酶（磷酸缓冲液配制）、10%戊二醛溶液、2%的醋酸溶液、20%NaOH 、30%甲醇、10%三氯乙酸、1%酪蛋白（磷酸缓冲液配制）、0.4mol/L 碳酸钠溶液、1N folin-酚试剂。
100ml 烧杯、玻棒、注射器、50ml 具塞三角瓶、三角漏斗、中速定性滤纸、试管、10mL 具塞刻度试管、移液管、紫外-可见分光光度计、恒温振荡器、真空干燥箱。
四、 实验方法1、 壳聚糖微球载体的制备取1.0g 壳聚糖缓慢加于20ml 2%的醋酸溶液中，配制成5%的溶液，用注射器取15 mL 壳聚糖溶液缓缓滴入20%NaOH/30%甲醇溶液中(V/V=1∶1)中，保持注射器针头位于液面上方约20cm 。
2、 固定化酶的制备将全部CTS 微球水洗至中性，吸干表面水分，装入50mL 具塞三角瓶中，加入10mL 乙醇和10mL 戊二醛溶液（10mmol ），60℃反应2h ，水洗，干燥后平均分成4份（每份湿重约2.0-2.5g ），记作A 、A 对照、B 、B对照。
将每份干燥的醛化微球加入50mL 具塞三角瓶中，加入pH7.5磷酸缓冲液浸泡过夜，抽干，加入10mLpH7.8缓冲液和1.0mL 蛋白酶液，室温振荡固定化18h ，收集上清液，再用缓冲液充分洗涤微球三次，吸干水分，即得固定化酶。
3、 固定化酶的活力回收率测定 3.1游离酶（或固定化上清液）活力测定依次加入1 mL 木瓜蛋白酶液（或固定化上清液）、10 mL 酪蛋白溶液(先40℃预热3分钟)，摇匀，在40℃水浴摇床中精确反应 10min ，立刻加入 10 mL 三氯醋酸溶液，摇动，过滤，放置 10min 。
２０１３年１２月 第２８卷第１２期 中国粮油学报
Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ ｔ｝ｌｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｒｅａｌｓ ａｎｄ Ｏｉｌｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．１２
Ｄｅｃ．２０１３
磁性多孔微球固定化假丝酵母脂肪酶的研究 肖志红 吴 红 李昌珠 张爱华 刘汝宽 吴晓芙 （中南林业科技大学生命科学与技术学院 ，长沙４１０００４） （湖南省林业科学院 ，长沙４１０００４） （湖南省生物柴油工程技术研究中心 ，长沙４１０００４）
摘要通过悬浮聚合法制备了含环氧基团的聚合物载体高分子磁性多孔微球（ＧＨＤ），用ＴＥＭ、ＳＥＭ和 Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ ＡＳＡＰ ２０１０等对聚合物载体进行了表征。考察了载体中交联剂含量、固定化时间、给酶量等因素 对固定化脂肪酶催化活性的影响。结果表明，Ｆｅ ０ 纳米粒子粒径２０ ｎｍ，分布均匀，磁性多孔微球粒径从 几十微米到一百多微米，粒子大小大体呈正态分布且分布较窄，平均粒径为１１０ ｍ，直径在区间８０—１５０ ｍ范围内的粒子占９０％以上。微球表面呈皱褶态且呈现多孔性，孔径从几个纳米到几十纳米，为闭孔，且 孔间互相贯穿。固定化酶最适条件为给酶量１２５ ｍｇ／ｇ，固定化时间７ ｈ，此时酶的吸附量为１１８．５ ｍｇ／ｇ，比 酶活７．５６×１０ Ｕ／ｇ，酶的活力回收率９５％。以ＧＨＤ为载体制备的固定化脂肪酶最佳反应温度从３７℃上升到 ４２℃，最适反应ｐＨ从７．２提高到７．５，固定化后酶对温度和ｐＨ的敏感性降低，重复使用１２次，固定化酶的活 力都能保持在９２％以上。 关键词 高分子磁性多孔微球假丝酵母脂肪酶 固定化催化活性 中图分类号：ＴＱ４２４．１９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００３—０１７４（２０１３）１２—００６８—０６ 网络出版时间：２０１３—０９—２４ １ｌ：０７ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／１１．２８６４．ＴＳ．２０１３０９２４．１１０７．００１．ｈｔｍｌ
酶的固定化的方案一、材料和方法1.实验材料及试剂酶，25%戊二醛溶液，带氨基的载体，考马斯亮蓝，牛血清白蛋白。
2. 主要实验仪器紫外可见光分光光度计Uv-1800，THZ一C恒温振荡器，MD200一3型电子天平PHS一3C酸度计3.酶的固定化方法1）载体的活化a 对所得的载体表面带有大量的氨基，对其进行活化处理可用于酶蛋白的共价结合。
采用戊二醛为活化试剂，使凝胶表面连接上游离的醛基。
具体方法为:将lg带氨基的载体颗粒臵于3ml、10%的戊二醛溶液中振荡24h，然后真空过滤。
所得固体用去离子水洗涤多次，干燥后即为戊二醛活化的树脂颗粒。
b大孔树脂预处理方法：称取10g树脂于锥形瓶中，用95%的乙醇浸泡24h，真空抽滤，用1L蒸馏水冲洗。
树脂依次用25mL的5%HCl和5%NaOH溶液浸泡4h后抽滤，用蒸馏水洗至中性。
抽滤后臵于4℃冰箱中干燥4h，室温保存备用。
举例：称取适量经预处理的大孔树脂于50mL锥形瓶中，加入适量磷酸缓冲液（pH7.5，0.05mol/L）和适量的酶，臵于恒温水浴振荡器中吸附一定时间后（37℃，150r/min）真空抽滤，并用100mL缓冲液冲洗载体，抽干后臵于4℃冰箱中干燥4h，并于4℃冰箱中密封保存。
2）固定化方法a 共价结合法准确称量20g戊二醛活化的树脂颗粒臵于50ml的离心管中，向其中加入体积为2ml的一定浓度的酶液(酶粉溶于pH7.0、0.03M的磷酸缓冲液)。
然后于冰浴中缓慢振荡24h。
之后离心收集固体，用相同的磷酸缓冲液洗涤固体5次以上。
b 酶聚集体包被法准确称量20g戊二醛活化的树脂颗粒臵于50ml的离心管中，向其中加入体积为2ml的一定浓度的酶液(酶粉溶于pH7.0、0.03M的磷酸缓冲液)。
然后于冰浴中缓慢振荡24h。
之后向混合液中加入0.5ml、2%的戊二醛溶液，继续振荡10h，离心收集固体。
最后用相同的磷酸缓冲液洗涤固体5次以上。
c.酶活性的测定d. 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度固定化时溶液中的蛋白质含量采用考马斯亮蓝染色法测定：考马斯亮蓝试剂的配制：将考马斯亮蓝 G-250 100mg 溶于 50mL 95%乙醇中，加入100mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至 1000mL。
