SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制

1mM EDTA, pH8.0。
实验步骤：
1、准备 SDS-PAGE 凝胶 [1]. 按产品说明将制胶玻璃板装配到制胶器上。 [2]. 装配好后，可加水检查是否密封，防止漏胶。 [3]. 确定凝胶浓度体积，按表12-2配制分离胶溶液。按表中成分顺序加入烧杯配制。 [4]. 小心将分离胶注入准备好的玻璃板间隙中，灌到足够高度。 注意：为浓缩胶留有足够空间（分离胶面距加样孔底1cm，即梳齿长再加1 cm。）。 [5]. 轻轻在顶层加入几毫升覆盖物（无水乙醇、去离子水或正丁醇），以阻止空气氧对凝 胶聚合的抑制作用。 [6]. 凝胶充分聚合。时间约30~60min, 聚合后在覆盖层和凝胶的界面间有一清晰的折光线。 [7]. 倒掉覆盖层，用无离子水洗凝胶上部数次，尽可能用吸水纸吸干凝胶顶端的残存的液 体。 [8]. 按表12-3配制浓缩胶，并注入分离胶上端。插入梳子。插入梳子子应小心避免梳子顶 端留有气泡。
[4]. 10 % SDS（十二烷基硫酸钠）(电泳级)：10g SDS，用双蒸水溶解并定容至 100ml，室
温保存。 [5]. 10% 过硫酸铵：0.1 g 过硫酸铵溶解于 1ml 双蒸水中。过硫酸铵会缓慢分解，应每周
新鲜配制。 [6]. TEMED（N，N，N′，N′-四甲基乙二胺）： 原液使用。应使用电泳级 TEMED。 [7]. 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：125mM Tris，1.25M 甘氨酸，0.1% (m/v) SDS，pH8.3。
聚丙烯酰胺（polyacrylamide，PAA）凝胶是丙烯酰胺（acrylamide，Acr），在交联剂甲叉双 丙烯酰胺（bisacrylamide，Bis）的作用下经聚合而形成的一种大分子化合物（图 12-1）。
图 12-1 丙烯酰胺的聚合作用只有在自由基存在时才能发生，需要一个催化诱发剂系统产生自由基， 过硫酸铵（ammonium persulfate，APS）和 N，N，N′，N′-四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine， TEMED）就是这样的催化诱发系统。聚丙烯酰胺的聚合反应是通过加入过硫酸铵启动的，添加 TEMED 加速聚合反应。过硫酸铵提供引发丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合的自由基。诱发剂 TEMED 能加速过硫酸铵形成自由基，使丙烯酰胺单体转变为自由基态。被激活的单体和未被激活的单 体开始了多聚链的延伸，正在延伸的多聚链也可以随机地接上双丙烯酰胺，使多聚链交叉互连 成为网状立体结构，最终多聚链聚合成凝胶状。溶液的 pH 对聚合作用是重要的，因为过低 pH 没有足够的碱基加速催化反应，同样过多的氧分子存在，会使聚合作用很快停止。所以制备凝 胶时，在加过硫酸胺之前，混合物必须抽去空气。 在 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，由于 SDS 和巯基乙醇作用，使得蛋白质分子中二硫键还 原，氨键、疏水键打开，SDS 按 l.4g SDS/1g 蛋白质的比例结合到蛋白质多肽链分子上，形成 SDS-多肽复合物。因十二烷基磺酸根带负电，使各种 SDS-多肽复合物都带有相同密度的负电荷。

12% SDS-PAGE 凝胶超快速配制试剂盒产品简介：碧云天生产的12% SDS-PAGE 凝胶超快速配制试剂盒(12% SDS-PAGE Gel SuperQuick Preparation Kit)提供了简单而又超快速地配制12% SDS-PAGE 凝胶(即SDS 聚丙烯酰胺凝胶)所需的所有试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制12% SDS-PAGE 凝胶。

碧云天生产的SDS-PAGE 凝胶超快速配制试剂盒系列产品有6%、8%、10%、12%和15%共5种常见浓度供您选择，也可以考虑选购可以配制各种不同浓度SDS-PAGE 凝胶的P0012AC SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒。

本试剂盒把SDS-PAGE 凝胶配制所需的Tris-HCl 、Acr-Bis(29:1)、SDS 等预混合成下层胶预混液和上层胶预混液，使用前仅需加入适量10%凝胶聚合催化剂和TEMED 即可简单快速地完成下层胶(分离胶)和上层胶(堆积胶)的配制。

本试剂盒约可配制30-50块常规大小的12% SDS-PAGE 凝胶。

具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

保存条件：4ºC 保存，一年有效。

两种预混液及TEMED 均需4ºC 避光保存。

凝胶聚合催化剂更宜室温保存，4ºC 保存时需拧紧瓶盖注意防潮，受潮后会很快失效。

凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后，分装成小管-20ºC 保存，通常半年内有效。

注意事项：凝胶聚合催化剂用水配制成10%水溶液后，应当-20ºC 保存。

同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。

推荐凝胶聚合催化剂每次均少量配制，并尽量使用较新鲜配制的10%凝胶聚合催化剂溶液。

下层胶预混液和上层胶预混液中含有Acr-Bis ，对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。

SDS的性质与作用
十二烷基磺酸钠(SDS) Sodium dodecyl sulphate CH3-(CH2)10-CH2OSO3--Na+
SDS的性质与作用
Protein Strand
Denature
-
SDS Molecules
-
SDS的性质与作用
蛋白质变性
0.1-1% SDS 0.1 M 2-巯基乙醇 蛋白质变与SDS分子按比例结合 1 ：1.4
插入样品梳加入电极缓冲加入电极缓冲液液ph83ph83浓缩胶浓缩胶ph86ph86通电通电分离胶分离胶ph88ph88加入样品加入样品上样及电泳开始电流恒定在开始电流恒定在10ma10ma当进入分离胶后改为当进入分离胶后改为20ma20ma溴酚蓝距凝胶边缘约溴酚蓝距凝胶边缘约5mm5mm时停止电泳
SDS-聚丙烯酰胺
制备浓缩胶
加入浓缩胶溶 液 pH 8.6
分离胶 pH 8.8
通电
加入电极缓冲 液pH 8.3
上样及电泳
加入样品
浓缩胶 pH 8.6
开始电流恒定在10mA，当进入分离胶后改为20mA， 溴酚蓝距凝胶边缘约5mm时，停止电泳。
分离胶
pH 8.8
凝胶板剥离与染色
电泳结束后，撬开玻璃板，将凝胶板
凝胶电泳
生化社团 吕炎
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
测定蛋白质分子量
一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果分析 五、注意事项

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测 定蛋白质分子量的原理。 掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的 操作技术。

二、实验原理
SDS的性质与作用 聚丙烯酰胺凝胶的性质

sds聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线概述及解释说明1. 引言1.1 概述在生物化学研究领域中，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的技术。

它被广泛应用于蛋白质分子量测定、鉴定和纯化等方面。

准确绘制和使用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线对于确定样品中蛋白质的相对分子量非常重要。

1.2 文章结构本文将围绕SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线展开详细阐述与解释，主要包括以下几个部分：引言、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线概述、SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳方法与步骤解释、建立SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线的实验步骤和要点解说明、结论与展望。

1.3 目的本文的目的是全面介绍和解释SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线的概念、意义和用途。

同时，还将详细阐述如何进行样品制备与处理、凝胶制备与电泳条件的解释以及凝胶图谱分析方法的说明。

此外，本文还会详细描述实验步骤和要点，帮助读者建立SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线，并对结果进行分析和解读。

最后，结论部分将总结研究目的、讨论研究结果的启示和展望未来的研究方向。

通过本文的阐述，读者将能够全面了解SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线并正确应用于相关实验中。

2. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线概述2.1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳简介SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术。

其基本原理是根据蛋白质的分子量差异，利用SDS（十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的作用，将蛋白质样品分离成不同迁移距离的条带。

2.2 标准曲线意义与用途标准曲线是根据已知浓度的标准样品制备的一系列溶液，通过测定这些溶液在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移距离和色谱峰面积得到。

标准曲线可以在定量分析时用于确定未知蛋白质样品的浓度。

2.3 研究背景与重要性在生物学、医学和生化等领域中，了解蛋白质样品的浓度是很重要的。

使用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线可以帮助我们准确计算样品中的蛋白质浓度。

这对于研究蛋白质功能、进行药物研发以及诊断和治疗疾病等具有重要意义。