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茶叶功能成分提取制备专题(六)茶黄素的提取制备技术(续)张建勇;江和源;崔宏春;袁新跃
【期刊名称】《中国茶叶》
【年(卷),期】2009(031)007
【摘要】@@ 3.柱层析法rn无论是采用溶剂浸提法从红茶中提取茶黄素,还是通过体外氧化制备法制取茶黄素,所得的茶黄素纯度仍然不高,限制了茶黄素类相关产品的应用和开发.
【总页数】3页(P7-9)
【作者】张建勇;江和源;崔宏春;袁新跃
【作者单位】中国农业科学院茶叶研究所,农业部茶及饮料植物产品加工与质量控制重点开放实验室,310008;中国农业科学院茶叶研究所,农业部茶及饮料植物产品加工与质量控制重点开放实验室,310008;中国农业科学院茶叶研究所,农业部茶及饮料植物产品加工与质量控制重点开放实验室,310008;中国农业科学院研究生院;中国农业科学院茶叶研究所,农业部茶及饮料植物产品加工与质量控制重点开放实验室,310008;中国农业科学院研究生院
【正文语种】中文
【相关文献】
1.茶叶功能成分提取制备专题(二)茶多酚的提取制备技术 [J], 尧渝;江和源;袁新跃
2.茶叶功能成分提取制备专题(三)茶氨酸的提取制备技术 [J], 袁新跃;江和源;张建勇
3.茶叶功能成分提取制备专题(四)茶皂素的提取制备技术 [J], 袁新跃;江和源;张建
勇
4.茶叶功能成分提取制备专题(九)茶叶咖啡碱提取制备技术 [J], 袁新跃;江和源;张建勇
5.茶叶功能成分提取制备专题(六) 茶黄素的提取制备技术 [J], 张建勇;江和源;崔宏春;袁新跃
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茶黄素是什么？茶黄素（Theaflavin）是存在于红茶中的一种金黄色色素，是茶叶发酵的产物。
包括茶黄素(TF)、茶黄素-3-没食子酸酯(TF3G)、茶黄素-3′-没食子酸酯(TF3′G)和茶黄素双没食子酸酯(TFDG)等4种主要成分。
在生物化学上，茶黄素是一类多酚羟基酚酮结构的物质。
茶黄素（Theaflavins；TFs）最早是由Roberts E.A.H.发现的，指红茶中溶于乙酸乙酯呈橙黄色的物质。
茶黄素是红茶的重要成分，它的含量对红茶的色、香、味及品质起着决定性作用，是红茶汤色亮度的主要成分，滋味强度和鲜爽度的重要成分，也是形成茶汤金圈的最主要物质。
茶黄素，金黄色的色素，占干茶重量的0.5%到2%，取决于红茶加工的方法。
茶黄素在茶汤中鲜亮的颜色和浓烈的口感方面，起到了一定的作用，是红茶的一个重要的质量指标。
绿茶中不存在茶黄素，在肝脏中部分EGCG能转化为茶黄素。
茶黄素有什么作用？在1999年中美科研人员对茶黄素的研究中，发现了其降血脂的独特功能，茶黄素不但能与肠道中的胆固醇结合减少食物中胆固醇的吸收，还能抑制人体自身胆固醇的合成，该研究按照国际最严格的临床试验标准开展了随机双盲的临床试验，对240位血脂不正常的受试者进行了为期12周的临床试验观察，经对比发现，总胆固醇降低11.3%，LDL（低密度脂蛋白）胆固醇平均降低16.4%。
这是全球首次通过严格的人体临床实验发现茶黄素的降血脂作用，而且是第一次从茶叶中找到具有确切药理作用的化合物——茶黄素。
2003年这项具革命性进展的研究报告在国际著名医学杂志JAMA上发表，并立即被多个国家的200多家媒体争相报道。
经过临床试验，验证了茶黄素具有调节血脂、预防心血管疾病的功效，有降血脂的独特功能，茶黄素不但能与肠道中的胆固醇结合减少食物中胆固醇的吸收，还能抑制人体自身胆固醇的合成，而且无毒副作用。
茶黄素的功效不仅仅是可以降血脂，它在清除脂肪肝、酒精肝、肝硬化也具有很大的功用。
一、实验目的1. 了解茶黄酮的提取方法和原理；2. 探究不同提取条件对茶黄酮提取率的影响；3. 分析茶黄酮的理化性质。
二、实验材料1. 茶叶：绿茶、红茶、乌龙茶；2. 试剂：无水乙醇、甲醇、氢氧化钠、硫酸铜、盐酸、氯化钠、硝酸钾、苯酚、福林酚；3. 仪器：电热恒温水浴锅、电子天平、分光光度计、超声波清洗器、高速离心机、磁力搅拌器。
三、实验方法1. 茶黄酮提取（1）绿茶、红茶、乌龙茶分别称取5g，加入50ml无水乙醇，超声提取30min；（2）提取液在室温下静置过夜；（3）用高速离心机以3000r/min离心10min，取上清液；（4）将上清液转移至50ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度。
2. 茶黄酮含量测定（1）绘制标准曲线：以不同浓度的福林酚溶液为标准品，测定其在765nm波长下的吸光度，绘制标准曲线；（2）样品测定：取一定量的茶黄酮提取液，按照福林酚法测定吸光度，代入标准曲线计算茶黄酮含量。
3. 茶黄酮理化性质分析（1）红外光谱分析：对茶黄酮提取液进行红外光谱分析，确定其官能团；（2）紫外光谱分析：对茶黄酮提取液进行紫外光谱分析，确定其最大吸收波长；（3）高效液相色谱分析：对茶黄酮提取液进行高效液相色谱分析，鉴定其化学成分。
四、实验结果与分析1. 茶黄酮提取率实验结果表明，绿茶、红茶、乌龙茶中茶黄酮的提取率分别为：2.5%、2.0%、1.8%。
其中，绿茶提取率最高，红茶次之，乌龙茶最低。
2. 不同提取条件对茶黄酮提取率的影响通过实验，我们发现超声波提取、室温下静置过夜、高速离心等步骤对茶黄酮提取率有显著影响。
其中，超声波提取能显著提高茶黄酮提取率，室温下静置过夜有助于提高提取率，高速离心有助于去除杂质。
3. 茶黄酮理化性质分析（1）红外光谱分析：茶黄酮提取液在红外光谱中表现出明显的特征峰，表明其含有羟基、羰基、芳环等官能团；（2）紫外光谱分析：茶黄酮提取液在紫外光谱中表现出最大吸收波长为280nm，表明其含有酚类化合物；（3）高效液相色谱分析：茶黄酮提取液经高效液相色谱分析，鉴定出其主要成分为儿茶素、黄酮等化合物。
茶叶中活性成分的提取与分析
茶是一种重要的饮料，而茶叶的主要成分就是茶多酚。
茶多酚是啡黄色物质，
具有抗氧化、抗衰老、抗菌等多种保健作用。
近年来，随着人们对健康饮食的追求，茶叶活性成分的提取和分析变得越来越重要。
茶叶中的活性成分主要有茶多酚、咖啡因、茶氨酸、茶黄素、叶绿素等。
其中
茶多酚占茶叶总量的70%以上。
因此，从茶叶中提取茶多酚成为目前最为重要的
工作之一。
茶叶中茶多酚的主要形式是原芽茶多酚和咖啡黄酸茶多酚。
单单提取茶多酚并
不能说明茶的品质和特性，因此对茶叶中不同成分的分析也变得非常重要。
首先要进行的是茶叶中茶多酚和咖啡黄酸茶多酚的分离。
传统的方法是利用聚
乙二醇作为萃取剂并进行高速离心。
但是目前研究证明，利用超声波辅助萃取的方法可以大大提高茶多酚和咖啡黄酸茶多酚的得率和纯度。
接下来就是化学分析。
通常采用高效液相色谱（HPLC）进行定量分析。
因为
茶叶中各种成分之间的关系复杂，因此在HPLC分析中也要进行一定的前处理。
比如利用酶处理去除茶叶中蛋白质和多糖，防止这些物质干扰分析。
除了茶多酚和咖啡黄酸茶多酚之外，茶叶中的其他成分也需要分析。
主要的方
法还是利用HPLC、UV-vis、质谱等技术进行定性和定量分析。
总的来说，茶叶中活性成分的提取和分析是一项非常重要的研究工作。
技术不
断发展，分析方法也在不断改进。
未来如何更好地利用茶叶中的保健成分，需要我们付出更多的努力。
茶皂素液相检测方法
茶皂素的液相检测方法通常采用高效液相色谱法进行定量和定性分析。
以下是大致步骤：
1.样品处理：
取适量茶叶样品，通过热水浸提、乙醇萃取等方法提取茶皂素。
提取液经过滤、浓缩，并用适当溶剂（如甲醇或乙腈）溶解，制备成待测溶液。
2.高效液相色谱条件设定：
色谱柱：选择适宜的反相色谱柱，如C18填料的色谱柱。
流动相：一般采用梯度洗脱的方式，流动相可能包括水和有机溶剂（如甲醇、乙腈等）以及一定比例的酸（如磷酸或醋酸）。
检测器：常用紫外检测器（UV）在特定波长下检测茶皂素，因为茶皂素具有一定的紫外吸收特性。
3.标准曲线制作：
准确配置一系列浓度的标准溶液，利用同样的HPLC条件进行测定，根据标准物质在色谱图上的峰面积或峰高与浓度的关系绘制标准曲线。
4.样品检测：
将待测样品溶液注入高效液相色谱仪，记录并分析得到的色谱图。
根据样品中茶皂素出峰位置及峰面积或峰高，在标准曲线上找
到对应的浓度值，从而实现茶皂素的定量分析。
以上为常规的茶皂素液相检测方法概述，具体操作需参照相关文献或国家标准方法，确保实验条件和参数设置的准确性和重现性。
茶黄素提取与功效的研究进展夏锐;刘德和;殷丽琼;肖星;夏丽飞【摘要】茶黄素是一种天然的产物.目前,对于茶黄素的研究主要是从茶黄素的提取、茶黄素与红茶的品质、茶黄素的生理作用、茶黄素的应用4个主要方面进行研究.从近几年对茶黄素在生理作用与提取2个方面的研究进展进行论述.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)020【总页数】3页(P6532-6533,6535)【关键词】茶黄素;功能;红茶;提取【作者】夏锐;刘德和;殷丽琼;肖星;夏丽飞【作者单位】云南省农业科学院茶叶研究所,云南勐海666201;云南省茶树种质资源创新与配套栽培技术工程研究中心,云南勐海666201;;;【正文语种】中文【中图分类】S571茶黄素是在红茶发酵过程中形成的主要色素物质。
这种物质不仅是红茶滋味和汤色最重要的影响因子，而且具有多种药理功效，是一类极具开发潜力的产物[1]。
所以，近年来对茶黄素的提取和分离研究得较广泛和深入。
对于茶黄素的提取方法，可以直接从红茶中提取茶黄素，或模拟茶黄素的氧化机理，通过儿茶素的氧化来提取茶黄素。
1 茶黄素的提取方法1.1 茶黄素的粗提1.1.1 直接提取法。
Collie法的直接提取法过程为：样品用热水浸提→过滤→浓缩→干燥→甲醇、水溶解→三氯甲烷萃取(除去杂质)→水相减压浓缩→乙酸乙酯反复萃取→硫酸镁脱水→蒸馏至干→茶黄素粗提物。
该方法工艺技术比较简单，但有机溶剂用量多[2]。
Ullah法的直接提取法过程为：样品用水浸提→过滤→滤液减压浓缩→三氯甲烷萃取(除去咖啡碱等杂质)→磷酸二氢钠和乙酸乙酯混合萃取→乙酸乙酯经减压浓缩干燥，得茶黄素粗提物[3]。
该方法简单，只需一次萃取，分离效果较好。
1.1.2 模拟氧化制备。
从红茶中直接提取茶黄素存在着很大的问题，首先就是在红茶中茶黄素的含量很少，且存在分离、纯化困难。
为了解决这些问题，人们从茶黄素的形成机理出发，按照儿茶素→醌类→茶色素反应进行，研究出一种高效的茶黄素制备方法。
茶叶中总黄酮含量测定方法的研究一、本文概述茶，作为世界上最受欢迎的饮品之一，其独特的口感和香气深受人们的喜爱。
然而，茶叶的魅力远不止于此，其内含的丰富物质也为人们提供了多种健康益处。
其中，总黄酮作为茶叶中的重要活性成分，具有显著的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性，成为了近年来研究的热点。
因此，建立一种准确、可靠的茶叶中总黄酮含量测定方法，对于评价茶叶品质、推动茶叶产业发展以及深入研究总黄酮的生物活性具有重要意义。
本文旨在探讨茶叶中总黄酮含量测定方法的研究现状与发展趋势，通过对不同测定方法的比较与分析，旨在找到一种更为准确、高效的总黄酮含量测定方法。
文章首先介绍了茶叶中总黄酮的种类与生物活性，随后综述了目前常用的总黄酮含量测定方法，包括比色法、高效液相色谱法、荧光光谱法等，并对各种方法的优缺点进行了详细的分析。
在此基础上，文章进一步探讨了新型测定方法的研究进展，如光谱法、电化学法等，旨在为茶叶中总黄酮含量的准确测定提供新的思路与方向。
文章总结了茶叶中总黄酮含量测定方法的研究现状，并展望了未来的发展趋势，以期为茶叶产业的可持续发展提供有益的参考。
二、材料与方法1 茶叶样品：选取市场上常见的多种茶叶，如龙井、铁观音、普洱等，确保样品来源广泛且具有代表性。
2 化学试剂：黄酮标准品、乙醇、甲醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯，购自国内知名试剂供应商。
3 仪器：紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机、超声波清洗器等。
1 样品处理：将茶叶样品粉碎至细粉，取一定量（约5g）加入50mL甲醇，在超声波辅助下提取30分钟，提取温度保持在40℃。
提取完成后，将溶液离心分离，取上清液备用。
2 标准曲线的绘制：精确称取黄酮标准品，用甲醇溶解并定容至不同浓度，以浓度为横坐标，以紫外可见分光光度计测定的吸光度为纵坐标，绘制黄酮标准曲线。
3 总黄酮含量的测定：取适量待测样品溶液，按照标准曲线的测定方法，测定其吸光度，根据标准曲线计算总黄酮含量。
茶黄素的提取与检测
一、试验样品
本次实验的原料是茶黄素。茶黄素是存在于红茶中的一种金黄
色色素，是茶叶发酵的产物。在生物化学上，茶黄素是一类多酚羟
基具茶骈酚酮结构的物质。茶黄素占干茶重量的0.5%到2%，取决于
红茶加工的方法。茶黄素在茶汤中鲜亮的颜色和浓烈的口感方面，起
到了一定的作用，是红茶的一个重要的质量指标。茶黄素是第一次从
茶叶中找到具有确切药理作用的化合物。
二、试验目的和意义
茶黄素是红茶的主要成分之一，是多酚类物质氧化聚合形成的一
类只有苯并卓酚酮结构的植物酚性色素的总称。迄今为止，已从红茶
及多酚类物质氧化聚合物中分离鉴定出25种茶黄素类物质。茶黄素
具有调节血脂、预防心血管疾病的功效，而且无毒副作用。被誉为
茶叶中“软黄金”的茶黄素有降血脂、抗氧化、抗病毒、抗癌的独特
功能，茶黄素不但能与肠道中的胆固醇结合减少食物中胆固醇的吸
收，还能抑制人体自身胆固醇的合成。在食品（着色剂等）、医药和
日用化工等方面具有广阔的应用前景。是一种极具开发潜力的茶叶天
然产物。研究开发茶黄素的提取制备技术意义重大。
三、色素结构特征和性质
茶黄素是以多酚类物质、儿茶素、氨基酸和咖啡碱为主要成分，
还含有氨基酸、维生索C、维生素E、维生素A原、黄酮及黄酮醇等。
其分子结构见下：
茶黄素耐热性，抗氧化性好。有人试验0.2%茶黄色素溶液，置
不同温度的水浴加热30分钟。温度升高85°C，色素溶液的色泽及
吸光度变化不大。高于85~100°C时，才发生变化，色泽变橙黄。用
酸败测定仪（Rancimat）测定其油脂氧化诱导期，来表示色素的抗氧
化性，测定结果表明：茶黄色素对猪油和菜籽色拉油都表现出较强的
抗氧化性。
茶黄色素随溶液的PH值变化，色泽有点变化。试验结果为，加
入1%的茶黄色素，在柠檬酸和42HPONa调PH，在暗处放置一小时，
溶液的色泽从pH=3~9依次为亮黄→橙黄→橙→橙红。说明茶黄色素
适用于偏酸性及中性环境中使用在碱性环境中易发生氧化褐变。
金属离子对茶黄色素也有影响，实验结果表明2Cu使色素液发
蓝；3Fe使溶液发褐；2Sn使溶液色泽变浅；2Mg和3Al对色素没影
响。
四、实验试剂、仪器和其他辅助材料
1.试剂：磷酸二氢钠、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙酸一乙酸钠缓冲液、
油酸、无水乙醇、IBMK溶液；
2.仪器：铁架台、铁环、分液漏斗、研钵、蒸发皿、石棉网、酒精
灯（或电热套）、烧杯、剪刀、滤纸、漏斗、布氏漏斗、玻璃棒、1cm
比色皿、Unicam sp 1800型分光光度计；
3.其他辅助材料：氧气
五、试验方法和步骤
1.茶黄素粗提物的制备：
方法一：体外酶促氧化制备法 —— 茶鲜叶匀浆悬浮发酵法
茶鲜叶匀浆悬浮发酵法的工艺流程为：茶鲜叶→破碎→发酵→过
滤→浓缩
称取0.2g茶鲜叶，用剪刀剪碎，在研钵中充分研磨后加入少量
蒸馏水，配成溶液后加两滴乙酸一乙酸钠缓冲液和两滴油酸（氧载体）
构成悬浮发酵体系进行发酵（发酵过程中采取先高温后逐步降低温
度、降低ｐＨ值和早期充分供氧），发酵56min后停止发酵。取出发
酵后的液体于烧杯中，过滤2~3次，收集过滤后滤纸上的物质于蒸
发皿中，用小火蒸到快干时停止，静置，自然晾干；或者用布氏漏斗
抽滤。
方法二：溶剂浸提法（Ullah）
用适量的磷酸二氢钠与乙酸乙酯混合萃取，茶红素能全部被固定
在水相中，而茶黄素被固定在有机相中，红茶用80°C水溶液浸提
5min，过滤，滤液经减压浓缩，再经三氯甲烷萃取，除去咖啡碱等
杂质，然后用磷酸二氢钠和乙酸乙酯混合萃取三次，乙酸乙酯层经减
压浓缩干燥，得茶黄素粗提物。该方法简单，只需一次萃取，但仍然
存在使用有机溶剂较多的问题。
2.茶黄素的精制：乙酸乙酯萃取→回收溶剂→茶黄素
将茶黄素的粗产品溶于蒸馏水中，在分液漏斗中加入适量的乙酸
乙酯，再将茶黄素的水溶液缓缓倒入分液漏斗中，静置分层，将下层
液体放出到小烧杯中，在分液漏斗中继续加入少量乙酸乙酯，再静置
取下层液体合并萃取液。
六、色素的检测
分光光度法：在一只具塞试管中加入萃取液并加入2倍于萃取液体
积的IBMK，一起剧烈震荡1min，分层后取清夜加到2%茶黄素乙
醇溶液和无水乙醇的混合溶液中。将绿色茶黄素—茶黄素试剂络合物
放置15min至反应完全。以IBMK—茶黄素试剂—乙醇混合液作空
白参比液用Unicam sp 1800型分光光度计，1cm比色皿及625波
长测定吸光度根据Beer定律方程式计算茶黄素含量：
)1(024.0
375
9
3fnAfnAdmmmolTF•
式中，n表示提取稀释因数，f=47.9，是n=1时的摩尔换算因数。
七、预测结果和分析
在供试的茶鲜叶中,苹云较好,槠叶齐次之,在以苹云冷冻叶为酶
源制取的茶黄素含量达33.737％,制率达42.22％,非冷冻叶的茶黄素
达14.5％,制率为72.22％.双液相试验研究表明,不同的酶源对双液相
体系的试验效果不同,就茶鲜叶而言,采用双液相效果明显比单液相
显著.在双液相系统中,非冷冻叶制取茶黄素其总含量达49.308％,制
率为59.44％.不同缓冲液试验研究表明,在利用茶鲜叶制取茶黄素时,
从茶黄素含量来看,乙酸一乙酸钠缓冲液要比柠檬酸一磷酸氢二钠缓
冲液好些,但从得率来看,前者比后者要低.预计此次试验提取出的茶
黄素含量应为42%~49%，即称量的0.2g茶鲜叶可提取出的茶黄素
为84~98mg，最终只有85%茶黄素与茶黄素试剂生成绿色络合物，
产量只有71.4~83.3mg。
八、参考文献
1.刘仲华,黄建安;茶黄素儿茶素生物制备酶促氧化单液相双液相[学
位论文]—硕士;2004
2. 夏涛,萧伟祥;茶鲜叶匀浆悬浮发酵工艺学研究[期刊论文];安徽农
业大学学报;2000年01期
3.刘晓霞,周国兰,何萍,郑文丽,赵华富;茶叶咖啡碱检测方法-紫外分
光光度法的改进与探讨;茶叶科学技术;2010年02期
4.Michael spiro,William E. Price;茶黄素试剂法测定茶浸提液中茶
黄素的含量
