友射免疫学杂志２０１２年第２５卷第３期Ｊ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２０１２，２５（３
３讨论
ＴＲＡｂ是自身免疫性甲状腺疾病（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｙｒｏｉｄ ｄｉｓ—
ｅａｓｅ，ＡＩＴＤ）患者体内常见并在其发病机制中起重要作用的
一种异质性多克隆自身抗体，被认为是Ｇｒａｖｅｓ病的主要致病
因子 ｊ。它与ＴＳＨ一样可促进甲状腺激素的合成与释放，
从而引起甲状腺增生和功能增强。ＴＲＡｂ对ＧＤ的诊断有较
强的特异性 Ｊ。
本文结果显示，治疗前２１５例Ｇｒａｖｅｓ病患者ＴＲＡｂ的阳
性率约为８８．３％，这与文献报道相符。结果还显示，在治疗
后３个月ＴＲＡｂ明显升高，并于治疗后（３～６）个月达到最高
值，此后开始下降，于治疗后１８个月接近正常水平。ＴＲＡｂ
的这一变化说明虽然” Ｉ治疗后３个月反映甲状腺功能的指
标如兀 、Ｆｒ４、ＴＳＨ等均大多缓解，但甲状腺免疫反应缓解需
要较长的过程。治愈组ＴＲＡｂ阳性率较治疗前明显降低，说
明ＴＲＡｂ与” Ｉ治疗Ｇｒａｖｅｓ病预后密切相关，只有治疗至
ＴＲＡｂ转阴，Ｇｒａｖｅｓ病才有可能被治愈。
” Ｉ治疗Ｇｒａｖｅｓ病产生的甲减按治疗后发生的时间分为
早发甲减和晚发甲减。早发甲减发生于治疗后１年内，且大 部分发生于”。Ｉ治疗后（２—６）个月 Ｊ，其机制尚不清楚，可
能与” Ｉ的剂量、对辐射的敏感性及治疗后产生的抗甲状腺
自身免疫反应有关。甲状腺球蛋白（ＴＧ）和甲状腺微粒体蛋
白（ＴＭ）都是甲状腺细胞的正常成分，存在于甲状腺细胞内，
不分泌或者外溢到血液，即使有少量外溢，也不会产生抗体。
在自身免疫性疾病中，两者可诱发产生ＴＧＡ和ＴＭＡ，他们为
甲状腺抑制性抗体，高浓度时能与甲状腺发生作用，破坏甲
状腺细胞，产生淋巴细胞和浆细胞浸润，使 、Ｔ４合成减少，
导致甲减 Ｊ。
Ｂｒｉｎｇｍｍｍ等人发现，ＴＧＡ与ＴＭＡ两种抗体的滴度阳性 ３０７－——
是ＧＤ患者”。Ｉ治疗后发生甲减的主要预示因子，阳性预告率
SELDI蛋白质芯片技术
传统蛋白质研究的方法如色谱分离纯化技术、二维电泳、质谱等方法因操作过程繁锁、耗时冗长、重复性差、检测样本量小等缺点而不适合对蛋白质开展大规模的筛选研究，蛋白质组学研究迫切需要一种高通量、快速、全自动化的用于对批苗蛋白质进行快速研究的仪器。
SELDI蛋白质芯片技术，又称为表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface-enhanced
laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)。自2002年日本科学家田中耕一因发明该技术而荣获诺贝尔化学奖后。该技术发展十分迅速，目前已经广泛应用于生物技术、药学、基因学、临床诊断、生物信息等诸多领域。其在临床实验诊断学中的主要工作原理是利用蛋白质芯片(proteinchip)和表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪对体液中各种蛋白质．包括疾病早期最微小基因表达产物如低分子量蛋白质、多肽等。进行动态、全景的分析。获得待检标本中各种蛋白的含量及其分子量等信息，绘制成蛋白质指纹图谱。再通过计算机软件将正常人、亚健康状态人群、良性疾病和癌症病人的指纹图谱库对照。比较分析差异。就能快速、敏感和特异地发现和捕获新的与疾病相关的蛋白。目前发现通过SELDI蛋白质芯片技术所获得的生物标记物．大多是特异性肿瘤微环境所产生的低分子量的蛋白质，通过对多种肿瘤的检测表明。其敏感性和特异性均优于传统的肿瘤标记物．对某些肿瘤的敏感性已达到100％。特异性也超过95％。因而该技术能在肿瘤早期诊断中具有很重要的临床应用价值。
1 SELDI-TOF-MS系统的组成
1.1蛋白质芯片 又称蛋白质微阵列(protein mieroarray)。把制备好的蛋白质样品固定于经化学修饰的玻片或硅片等载体上。蛋白质与载体表面结合。同时仍保留蛋白质的理化性质和生物活性，可以高效地大规模获取生物体中蛋白质的信息。蛋白质芯片技术主要包括四个基本要点：芯片阵列的构建、样品的制备、芯片上的生物分子反应、芯片信号检测及分析。制备蛋白质芯片时由于蛋白质分子的活性依赖于不同的折叠方式。因此对芯片的表面修饰至关重要。要保证被点在芯片上的蛋白质不失活而又能牢固的固定在芯片上。SELDI蛋白质芯片的制备比普通的蛋白质芯片更复杂，首先制备生物原始样品，把制备好的蛋白质经过亲和作用结合到芯片的化学 或生物位点上，再洗去非特异结合的蛋白质和缓冲液中的杂质以消除干扰，待芯片干燥后，每个位点上加能量吸收分子(energy absorb molecule，EAM)，使之与蛋白质结合为混合晶体．以促进蛋白质在SELDI-TOF-MS检测中解吸附和离子化。根据定位于芯片表面的物质性质不同，芯片分为化学型和生物型两类：化学型芯片是基于经典的层析原理，通过疏水力、静电力、共价键等结合样本中的蛋白质；生物型芯片则是把生物活性分子结合到芯片表面，利用抗原和抗体、受体和配体、酶和底物、蛋白质和DNA之间的相互作用捕获样本中的蛋白质，用以研究这些蛋白质分子之间的相互作用。
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SELDI蛋白质芯片筛选差异蛋白分子的二级鉴定
摘要 精品资料
仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除 谢谢3 目的探讨以SELDI蛋白质芯片筛选后的细胞差异表达蛋白的分离和鉴定方法及其意义。方法以经体外培养及10JAM褪黑素药物干预的内皮祖细胞差异表达蛋白质为研究对象，分别采用Tricine—SDS—PAGE和双向凝胶电泳方法进行差异蛋自分离及结果比较，以FTICR—MS二级质谱鉴定。结果经Tricine—SDS—PAGE分离后，选取的分子量为53kDa左右的趋势性的差异表达蛋白进行FTICR—MS分析，质谱鉴定为微管蛋白一a3(吻合度评分为87)。经双向凝胶电泳分离后，于凝胶近酸性端、分子量在72—95kD之间区域，选取蛋白表达量较高的一点，质谱鉴定其为人热休克蛋白90一Q(吻合度评分为91)。结论在本文结果中，Tricine—SDS—PAGE对于大致35—70kDa范围的蛋白分离较清晰、重复性好，且样品用量少。2-DE对最低上样量有较严格要求，但它能提供分子量、等电点双重参数来更准确定位所感兴趣蛋自点，且对较大分子量蛋白的分离效果更佳。电喷雾傅立叶变换离子回旋共振高分辨质谱分辨率高且质量稳定性较好。
关键词：SELDI；Tricine—SDS—PAGE；双向凝胶电泳；质谱
SELDI蛋白质芯片技术，即表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface—enhanced laser desorption／ionization—time of flight—massspectromet巧)，是蛋白质组学研究中的一项新兴技术，在识别特定蛋白质表达物、蛋自质差异分析、测定血清中小分子物质含量方面提供了新的思路与方法。该技术已经逐渐应用与临床，目前已见其应用于传染病、肿瘤等疾病诊断筛选的临床报道【1,2】。本课题组前文‘3，41研究建立了SELDI蛋白质芯片技术检测体外培养细胞蛋白质差异表达方法，发现与传统方法比较，SELDI技术对于5kDa以下的低分子量差异蛋白和低丰度的差异蛋白质的检出效果较佳，而且该技术具有高通量、上精品资料
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仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除 谢谢3 目的探讨以SELDI蛋白质芯片筛选后的细胞差异表达蛋白的分离和鉴定方法及其意义。方法以经体外培养及10JAM褪黑素药物干预的内皮祖细胞差异表达蛋白质为研究对象，分别采用Tricine—SDS—PAGE和双向凝胶电泳方法进行差异蛋自分离及结果比较，以FTICR—MS二级质谱鉴定。结果经Tricine—SDS—PAGE分离后，选取的分子量为53kDa左右的趋势性的差异表达蛋白进行FTICR—MS分析，质谱鉴定为微管蛋白一a3(吻合度评分为87)。经双向凝胶电泳分离后，于凝胶近酸性端、分子量在72—95kD之间区域，选取蛋白表达量较高的一点，质谱鉴定其为人热休克蛋白90一Q(吻合度评分为91)。结论在本文结果中，Tricine—SDS—PAGE对于大致35—70kDa范围的蛋白分离较清晰、重复性好，且样品用量少。2-DE对最低上样量有较严格要求，但它能提供分子量、等电点双重参数来更准确定位所感兴趣蛋自点，且对较大分子量蛋白的分离效果更佳。电喷雾傅立叶变换离子回旋共振高分辨质谱分辨率高且质量稳定性较好。
关键词：SELDI；Tricine—SDS—PAGE；双向凝胶电泳；质谱
SELDI蛋白质芯片技术，即表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface—enhanced laser desorption／ionization—time of flight—massspectromet巧)，是蛋白质组学研究中的一项新兴技术，在识别特定蛋白质表达物、蛋自质差异分析、测定血清中小分子物质含量方面提供了新的思路与方法。该技术已经逐渐应用与临床，目前已见其应用于传染病、肿瘤等疾病诊断筛选的临床报道【1,2】。本课题组前文‘3，41研究建立了SELDI蛋白质芯片技术检测体外培养细胞蛋白质差异表达方法，发现与传统方法比较，SELDI技术对于5kDa以下的低分子量差异蛋白和低丰度的差异蛋白质的检出效果较佳，而且该技术具有高通量、上精品好文档，推荐学习交流
