【医学课件】蛋白质含量测定

性溶液发生双缩脲反应？
❖ 3、简述蛋白质含量测定在科研及临床疾病诊 断上的应用。
❖ 本实验用27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液稀释血清， 取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量，剩余 部分则用滤纸过滤，使析出的球蛋白与白蛋白分离， 取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与 白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白 之比即所谓的白/球比值。
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【实验材料】
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1．分光光度计
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2．试剂
❖ 3．将剩余的血清混悬液过滤（如滤液不清，可重复过滤，直 至澄清为止），用另一支1 ml刻度吸管取此液1 ml，置于管3 （白蛋白测定管）。
❖ 4．另用一支1 ml刻度吸管吸取标准血清1 ml，置管2中（标准 管）。
❖ 5．于上述4支试管中分别加入双缩脲试剂4 ml，混匀。 ❖ 6．在室温下放置10 min后，以管1（空白管）调零，在540
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❖ 蛋白质和双缩脲一样，在碱性溶液中能 与铜离子形成紫色络合物（双缩脲反应）， 且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此 可用于蛋白质的定量测定。
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❖ 但必须注意，此反应并非蛋白质所特有，凡分 子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内 有H2N—CH＝NH -CH2-NH2等结构化合物，双 缩脲反应也呈阳性。
nm的波长下进行比色，分别记录2、 3、 4管的吸光度读数。
❖ 【计算】 ❖ 血清总蛋白含量（g/100 ml）＝ D测 × C
D标
❖ 血清白蛋白含量（g/100 ml）＝
D测 D标
×C
❖ 血清球蛋白含量（g/100 ml）＝总蛋白含量 ﹣白蛋白含量
❖ 白/球比值＝白蛋白含量/球蛋白含量。
❖ 【注意事项】
【医学课件】蛋白质含量测定
❖ 目前测定蛋白质含量的方法有很多种， 下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋 白质测定方法：
❖ 物理性质：紫外分光光度法。
❖ 化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry 法等。
❖ 染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。
❖ 其他性质：荧光法。
蛋白质含量测定——双缩脲法
❖ 实验目的 ❖ 1、复习蛋白质的理化性质。 ❖ 2、熟悉双缩法测定蛋白质含量的原理及
❖ 1．硫酸钠的溶解度与温度有关，温度低于 30℃易结晶析出，故室温较低时应在37℃水 浴或恒温箱进行保温。
❖ 2．血清样品必须新鲜，如有细菌污染或溶血， 则不能得到正确的结果。
❖ 3．含脂类较多的血清，可用乙醚3 ml抽提一 次后再进行测定。
❖ 【思考题】
❖ 1、干扰本实验的因素有哪些？ ❖ 2、是否所有的肽和蛋白质都能和硫酸铜的碱
方法。
❖ 【实验原理】
❖ 利用半饱和硫酸铵或27.8％硫酸钠-亚硫 酸钠可使血清球蛋白沉淀下来，而此时血清 白蛋白仍处于溶解状态，因此可把两者分开， 这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法 称为盐析法。盐析分离蛋白质的方法不仅用 于临床医学，而且还广泛地用于生物化学研 究工作中，如一些特殊蛋白质-酶、蛋白激素 等的分离和纯化。
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（1）27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液
❖Байду номын сангаас
（2）双缩脲试剂：
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（3）标准血清：
❖ 【实验方法】
❖ 1．取中试管4支，分别标以1、 2 、3、 4，吸取27.8％硫酸钠 -亚硫酸钠1 ml，置1管中备用。
❖ 2．吸取血清0.2 ml于另一试管中，加27.8％硫酸钠-亚硫酸钠 4.8 ml，用拇指压住管口倒转混合5～6次，放置约15 s，用1 ml刻度吸管吸取1 ml置于管4中（总蛋白测定管）。