鸡新城疫抗体水平检测

鸡新城疫抗体（NDV-Ab）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中新城疫抗体（NDV-Ab）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）水平。

用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入新城疫抗体（NDV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的新城疫抗体（NDV-Ab）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

一
６ ０一
中国动物检 疫 ２ １ 年 第２ ０１ ８卷第 ６期
门源县 泉湾养鸡场 新城疫 抗体水 平监 测
童海 龙
（ 青海省 门源县青石嘴兽 医站 ， 青海 门源
摘
８ ０ ０） １ ３１
要 ： 过抽取 鸡血清作血凝 （ Ａ 实验来进行新城疫检疫 ， 通 Ｈ ） 作血凝抑制 （ Ｉ实验进行 抗体 水平的监 测， 以 了解养鸡场 的 Ｈ） 可
出现 。
被 引格 式 ：
童海 龙． 门源县泉 湾养鸡场 新城疫 抗体水平 监测 ［ ． Ｊ 中国动物 ］ 检疫 ，０ １２ （） ６ ．１ ２ １ ， ８６ ：０６ ．
４ 根据 试验 结果 对该 鸡场 新城 疫 防治 的建 议 ４ １ 由试验 结果可 知新城疫抗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 效价 ５ｏ２的仅 为 ． １ｇ
的 鸡 只死 亡 的情 况 出现 ， 过 病 理表 现 及 （ ） 验 通 ＨＡ 实 检 疫 ， 发病 鸡 为 新城 疫 感 染 ， 虑 到 该场 已作 过 新 所 考
单 位 的稀释 度 为 １１８ 将 １ ： ， ２ ｍＬ抗 原 加 入 １７ｍＬ生 ２
理 盐水 ， 即为 ４单位 抗 原【 ３ ］ 。 ２ ４ 配制 １ ． ％的红细 胞 悬浮 液
中国动物检 疫 ２ １ 年第２ ０１ ８卷第 ６期
一６ １一
细胞应 该 明显 呈纽 扣状 。 定 血凝 滴度 ： 判 将板 倾斜 ， 观
分 依赖 疫 苗接 种 。今 年 来 的研 究 表 明 ， 要 Ｎ 只 ＤＶ 强
察红细胞有无蹭泪珠状流淌 ， 完全血凝 的最高稀释倍
数 代表 一个 血凝 单位 。 ２５ ２ 血凝 抑制 试验 （ ） ．． ＨＩ 微 量 反 应 板 每 孔 加 入 ０００ｍＬ 理 盐 水 。第 １ ． 生 ５ 孔 加入 ００ ０ｍＬ 品血 清 。将 血清 做 ００ ０ｍＬ 积 ．１ 样 ．１ 体 作倍 比稀 释 。倍 比稀 释至 最后 １ ， 出 ０００ｍＬ 孔 吸 ．１ 液 体弃 去 。弃去 之后 ， 每孔 加 入含 有 ４个单 位 的病 毒 抗

实验二家禽具血凝性病毒病的免疫监测一、实验目的1.掌握血凝性病毒病免疫监测的基本方法。

2.学会根据血凝性病毒病免疫监测的结果指导鸡群血凝性病毒病免疫接种。

二、实验内容1.红细胞凝集试验－检测抗原的HA效价及4个血凝单位抗原的配制。

2.红细胞凝集抑制试验－检测免疫禽只的HI抗体。

3.根据血凝性病毒病免疫监测的结果指导鸡群相应病毒病的免疫接种。

三、实验仪器、设备及材料1.抗原原液：购自标准厂家，根据监测抗体的种类而确定抗原的种类。

ND免疫监测―ND抗原；AI H5免疫监测―H5抗原；AI H9免疫监测―H9抗原；EDS－76免疫监测―EDS抗原。

2.被检血清：随机采取被检禽群的血液（抽样比例约为1％～2％，或每个禽群抽取20～40只），取血液自然凝固后析出的血清作为被检血清。

3.灭菌PBS生理盐水，PH7.0，按常规配制。

4.红细胞悬浮液：采取健康公禽（被检测血清为鸡血清时，应采用公鸡，被检血清为鸭、鹅血清时，应采用公鸭）血液（每次可采5～10mL），抗凝，加灭菌PBS生理盐水离心洗涤3～5次（每次离心的速度和时间为3000转/分钟，15分钟，将血浆、白细胞等充分洗去，将沉淀的红细胞用灭菌PBS生理盐水稀释成1％悬浮液。

该红细胞悬浮液在4℃存放，可用3～5天。

注意悬浮液颜色变暗应予弃去。

5.其他材料：25uL移液器，96孔V型反应板，普通离心机等。

（以下内容主要以ND的免疫监测为例，同学们可依此类推探讨其他血凝性病毒病免疫监测的相关技术）四、实验原理鸡群ND免疫后，体内可产生抗ND中和抗体及红细胞凝集抑制抗体（HI抗体）。

后者在体外可抑制NDV凝集红细胞的能力。

在一系列试管中，将被检鸡血清作连续稀释，血清中HI抗体越高，则能使ND 病毒凝集红细胞能力完全抑制的血清稀释度就越高。

由于HI抗体与中和抗体的消长是基本一致的，故通过HI抗体水平的检测可以达到ND免疫监测的目的。

五、实验步骤(一) 红细胞凝集试验（微量法检测ND抗原原液HA效价及配制4个血凝单位ND抗原）1.分装生理盐水：用移液器在96孔V型反应板的一排孔上的1—12孔，每孔加入PBS生理盐水25uL，换滴头；2.添加抗原：吸取标准ND抗原原液25uL加入第1孔，换滴头；3.稀释抗原：用25uL移液器将第1孔中的抗原与PBS生理盐水吹打2-3次混合均匀并吸取25uL至第2孔；用移液器将第2孔中的抗原与PBS生理盐水吹打2-3次混合均匀并吸取25uL至第3孔．．．．．．，如此，直至第11孔，从11孔吸取25uL溶液弃去，换滴头；4.加入PBS生理盐水：向1-12孔加入PBS生理盐水，每孔25uL；5.加入红细胞悬浮液：向1-12孔加入红细胞悬浮液，每孔25uL；6.静置感作20-30分钟，然后判定结果；7.判定结果（观察、判定、记录反应结果的相关概念与方法）①“凝集”的概念：观察反应孔，当一层红细胞凝集颗粒均匀覆盖于整个孔底，判定为“凝集”（将反应板倾斜，无红细胞流淌现象），记录为“+”。

鸡新城疫的诊断与防治鸡新城疫（Newcastle disease，ND）是一种重要的急性和高度传染的禽类疾病。

该疾病主要影响家禽，特别是鸡、火鸡和鸽子。

鸡新城疫由鸡新城疫病毒（NDV）引起，病毒为单股负链RNA病毒，属于禽病副黏病毒科。

鸡新城疫主要通过患禽病毒的禽类传播。

鸡新城疫的症状包括呼吸道症状、神经系统症状和消化道症状。

患禽可能表现为呼吸困难、喘鸣、鼻和眼部分泌物增多、粪便变浓、瘫痪和死亡。

为了及时诊断和控制鸡新城疫，下面将介绍鸡新城疫的诊断和防治措施。

1. 临床表现2. 实验室检测（1）病毒分离和鉴定：采集患禽的呼吸道分泌物和组织标本，通过病毒分离方法将病原体鉴定为鸡新城疫病毒。

（2）鸡新城疫病毒抗体检测：使用适当的血清学试验检测患禽中鸡新城疫病毒的抗体水平。

1. 疫苗接种疫苗接种是预防鸡新城疫的最有效手段之一。

目前主要有灭活疫苗和活疫苗两种类型。

在疫情流行地区和高风险地区，可以选择合适的疫苗进行接种，提高鸡群的免疫力。

2. 卫生管理加强禽舍卫生管理，保持仔禽舍的清洁卫生，严格执行生物安全措施，防止病原体通过人员、工具和设备等途径传播。

3. 隔离管理发现疑似病例时，应立即进行隔离，防止疫情扩散。

隔离管理也包括对患禽的处理和处置，防止病原体传播。

4. 综合防控除了疫苗接种、卫生管理和隔离管理外，还应加强对野生鸟类和其他动物的监测和管控，防止进一步传播鸡新城疫病毒。

建立健全的监测系统，及时发现和报告疫情，加强对鸡群的日常监测和管理。

鸡新城疫是一种重要的禽类疾病，对禽类行业造成了严重的经济损失。

及时诊断和防治鸡新城疫是保障禽类健康和禽类产品质量的重要举措。

通过加强疫苗接种、卫生管理、隔离管理和综合防控，可以有效预防和控制鸡新城疫的传播。

希望禽类养殖企业和相关部门能够加强合作，共同做好鸡新城疫的防治工作，保障禽类产业的健康发展。