杜仲叶中绿原酸的提取纯化研究

时珍国医国药２００７年第ｌ８卷第２期ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００７ＶＯＬ．１８　ＮＯ．２　

杜仲叶中绿原酸的提取纯化研究　

袁华，邓　良，杨小俊，闰志国，吴元欣　

（武汉工程大学化工与制药学院，湖北武汉４３００７３）　

摘要：目的研究杜仲叶中绿原酸的提取纯化方法。方法采用水提、絮凝脱色、树脂吸附、重结晶工艺提取纯化。结果　

杜仲叶的水浸提液浓缩后用ｌ％壳聚糖絮凝去杂、活性碳脱色得到进样液，进样液用ＮＫＡ一９树脂吸附，５０％乙醇解吸，　

洗脱液浓缩后的粗品经甲醇重结晶得到纯度ｔ＞９７％的绿原酸，提取率ｔ＞６５％。结论优化完善了杜仲叶中绿原酸的提取　

纯化方法，为杜仲资源的充分综合利用和产业化开发提供了参考。　

关键词：绿原酸；提取；纯化；杜仲叶　

中图分类号：Ｒ２８４．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－０８０５（２００７）０２－０４４６－０２　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉＯｎ　Ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　Ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｏｌｉｖ．　

Ｌｅａｖｅｓ　

ＹＵＡＮ　Ｈｕａ，ＤＥＮＧ　Ｌｉａｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｊｕｎ，ＹＡＮ　Ｚｈｉ－ｇｕｏ，ｗｕ　Ｙｕａｎ。ｘｉｎ　

（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｗｕｈａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００７３，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｌｌｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｅ￣ｏｍｍｍ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｏｌｉｖ．　Ｌｅａｖｅｓ．Ｍｅｔｌｌｏｔｉｓ　Ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｂｙ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，１％ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ，ａｃｔｉｖｅｄ　ｃｈａｒ　ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ．ＮＫＡ．　９　ｒｅｓｉｎ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ．５０％ｅ山ａｎｏｌ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｒｅｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　６８％ｗｉｔｈ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　９７％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ａｎ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　

ｉｎ　Ｅ￣ｏｍｍｍ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｏｌｉｖ．Ｌｅａｖｅｓ　ＷａＳ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｉｔ　ｉｓ　ｈｅｌｐｆｕｌ　ｔｏ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ；　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；　Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｏｌｉｖ．　

杜仲Ｅ￣ｏｍｍｍ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｏｌｉｖ．是我国特有的经济树种，其药　用价值历来受到人们关注。杜仲中主要有效成分绿原酸具有抗　

菌、抗病毒、利胆、保肝、降压、清除自由基等作用。２０００多年前　

我国的《神农本草经》就将之列为中药上品。近年来研究表明杜　仲叶中的主要化学成分和杜仲皮基本一致，且杜仲叶中绿原酸含　

量更为丰富，达到干叶重的１％～５％，因此从原材料丰富且价廉　

的杜仲叶中提取绿原酸成为研究热点ｕ　。其中钱骅　、刘军　

海等　提出的大孔吸附树脂提取纯化法展示了一定的工业化前　

景，但报道的树脂分离效果不一致，且均未见有关终产品纯度及　

收率的报道。　杜仲叶提取物中除含绿原酸外，还含有鞣质、蛋白质、多糖等　

物质。为了得到纯度较高的绿原酸，必须对提取液进行多步分离　

纯化。本文在文献工作的基础上，围绕产业化目标，改进完善了　

提取制备工艺，采用水提、絮凝脱色、树脂吸附、重结晶工艺提取　

制备了纯度与收率较高的绿原酸。　

１材料与方法　

１．１　材料与仪器杜仲叶采自湖北五峰（风干、粉碎）；主要试剂　

乙醇、甲醇、稀盐酸等均为分析纯；壳聚糖为生化试剂；ＮＫＡ－９，　

ＡＢ－８，ＮＫＡ－ＩＩ型树脂（南开大学化工厂）；绿原酸（中国药品生物　

制品检定所）。ｚＦ．Ｉ型紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；Ａｇｉ．　

１ｅｎｔ　１　１００型高效液相色谱仪。　１．２　提取纯化工艺准确称取１０．０　ｇ杜仲叶，用去离子水２×　

１２０　ｍｌ在８０℃下动态提取１５０　ｍｉｎ，过滤，提取液减压浓缩至１００　

ｍ１，浓缩液中加入１％壳聚糖溶液４　ｍｌ絮凝，过滤，滤液用活性碳　

脱色，得进样清液，用ＮＫＡ－９树脂吸附进样清液，用５０％乙醇溶　

液洗脱，洗脱液减压浓缩，得绿原酸粗品，经甲醇重结晶得绿原酸　

纯品。提取率９６５％（以杜仲叶中绿原酸含量计），纯度ｔ＞９７％。　１．３　绿原酸的含量检测绿原酸的含量测定参照文献　进行。　

收稿日期：２００６－０８－０１；修订日期：２００６—１２—３０　作者简介：袁华（１９６５－），男（汉族），湖北蕲春人，现任武汉工程大学化　工与制药学院副教授，硕士学位，主要从事有机合成及天然产物化学的研　究工作．　

・４４６・　２　结果　２．１提取条件　

２．１．１　提取溶剂的选择杜仲叶中绿原酸的提取一般选用４０％　

乙醇水溶液，使用乙醇水溶液提取除增加溶剂成本以外，提取液　中的脂溶性成分增加，造成后续处理困难，绿原酸在热水中溶解　

度较大，本文选用水为提取溶剂　２．１．２提取温度的选择随着提取温度的升高，绿原酸得率不断　

增加，当温度高于８０℃时，绿原酸得率开始下降。随着温度的升　高，杜仲叶中其它成分的溶出也不断增加，同时考虑到绿原酸的　

热不稳定性，提取温度控制在８０℃以下。　

２．１．３提取时间的影响随着时间的延长，绿原酸得率逐渐升　

高，尤其是在５０～１５０　ｍｉｎ内，二者几乎呈现良好的线性关系，随　后逐渐达到提取平衡状态。　

２．１．４浸提液ｐｒｉ值的影响在温度、料液比、提取时间一致的　

条件下，用稀盐酸调节提取溶剂的ｐＨ值，当ｐＨ值为４时，绿原　

酸得率较高。因此，绿原酸的最佳提取工艺条件为：每１０．０　ｇ杜　

仲叶，用２×１２０　ｍｌ去离子水在ｐＨ＝４及温度８０℃下动态提取　

１５０　ｍｉｎ。　２．２　絮凝脱色传统中药提取工艺中常常采用水提醇沉法，目的　

是除去提取液中的淀粉、树胶、蛋白质、粘液质、果胶、多糖、无机　

盐等无效成分。实验发现，水提醇沉法中醇的浓度越高越有利于　

除去杂质，但有效成分由于醇沉包夹损失也随之增大。另外水提　

醇沉工艺还存在乙醇消耗量大、生产成本高、生产安全系数低等　

缺点，因此需要改进工艺。　

絮凝澄清法是在中药提取液或提取浓缩液中加入一种絮凝　

剂以吸附架桥及电中和方式除去溶液中的某些物质，以达到分离　纯化的目的　。实验通过絮凝剂种类、浓度及絮凝温度、酸度的　

选择比较，确定优化的絮凝脱色工艺为：每１００　ｍｌ浓缩液中加入　１％壳聚糖溶液４　ｍｌ，搅拌，在６０￣（２静置６０　ｍｉｎ，过滤，滤液用１ｇ　

活性碳脱色，得进样清液。　２．３大孔吸附树脂的选择结合杜仲叶浸提物的特性，本文对　

ＮＫＡ一９，ＡＢ一８，ＮＫＡ—ＩＩ　３种极性的大孔吸附树脂进行选择比　较。树脂根据文献　经预处理、再生后，进行静态吸附与解吸　

实验，３种不同型号的大孔吸附树脂对绿原酸溶液（４．８　ｍｇ・

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ＩｌｌＩ～，ｌ０　ＩｌｌＩ）得到的吸附量、吸附率和解吸率如表１所示。　

表１　３种树脂对绿原酸的吸附和解吸情况　

由表ｌ知，３种大孔吸附树脂对绿原酸均具有较高的吸附量　

和吸附率，但是ＡＢ一８型树脂吸附的绿原酸很难被解吸下来，不　

宜用作分离绿原酸的树脂，只有ＮＫＡ一９，ＮＫＡ—Ｕ型树脂较为　

适合。比较可知，ＮＫＡ一９型树脂在静态吸附时具有较高的吸附　

量和吸附率，而且易解吸，对绿原酸具有较好的富集效果。　

２．４　ＮＫＡ一９树脂对绿原酸的吸附实验　

２．４．１　动态吸附曲线将浓度为３．０　ｍｇ・ｍｌ　的绿原酸溶液加　

入装有２００ｇＮＫＡ一９型大孔树脂的玻璃层析柱中，在流速为２．０　色散力作用时，吸附力较弱，易于洗脱；而当吸附剂与吸附质以偶　极间作用力或氢键作用时，吸附力强，不易于洗脱。ＮＫＡ－９大孔　

树脂极性较强，同时绿原酸是含有酚羟基化合物，容易与树脂形成　

氢键，对绿原酸洗脱需要用对它有更强的溶解能力的溶剂。本实　

验中选用不同浓度的乙醇水溶液作为洗脱剂，结果见图４所示。　

８０　

７０　

６０　；　译５０　

釜４Ｏ　

３０　

２０　ｍｌ・ｍｉｎ　时（可用ＢＶ／ｈ表示，即每小时流过床层的流动相的体　。　

积为树脂床体积Ｂｅｄ　Ｖｏｌｕｍｅ的倍数），测定流出液中绿原酸的　

浓度，绘制吸附曲线（见图１）。结果表明，该树脂可处理７～８倍　树脂床体积的进样液。　。。　

０　２　４　６　８　１　０　Ｉ２　１　４　昧体积／Ｂｖ　图１　ＮＫＡ一９树脂对绿原酸的吸附曲线　

２．４．２进样液流速对吸附的影响为了进行有效的吸附，在树脂　吸附过程中有必要使固液两相有充分的接触时问。进样流速过　

大，树脂对绿原酸来不及吸附，导致吸附率下降；进样流速过小，　

虽然吸附较充分，但是吸附时问长，效率较低。将浓度为３．０　ｍｇ　

・ｍｌ　的绿原酸溶液过柱，考察单位时间内树脂的吸附量与不同　进样流速的关系，结果表明，在流速为２．０　ｍｌ・ｍｉｎ　时，吸附效　

果最好。见图２。　

妻ｚｏ　一　

１　５　０．５　１　０　１　５　２．０　２　５　３　０　３　５　吸附流速／ｍｌ・Ｉｌｌｉ　ｎ　图２进样液流速对吸附的影响　

２．４．３进样液ｐＨ值对吸附的影响在不同ｐＨ值下进行吸附实　

验，结果表明，绿原酸作为多羟基酚酸，在酸性条件下易被吸附。　

因为在酸性条件下，绿原酸以分子形式存在，树脂对其吸附作用　

增强；在强酸条件下，以内酯形式存在的绿原酸容易水解；在碱性　条件下，以离子形式存在的绿原酸则不易被吸附。由图３可知，　

ｐＨ值为３时，吸附效果最好。　

２．５　ＮＫＡ一９树脂对绿原酸的脱附实验　

２．５．１洗脱液的选择化合物经树脂吸附后，根据吸附力的强弱　不同而选用不同的洗脱剂。一般来说，吸附剂与吸附质以分子问　８０　芝　＊　鍪　蕞６ｏ　图３进样液ｐＨ值对吸附的影响　

４０　６Ｏ　８Ｏ　ＩＯ０　洗脱剂乙醇浓度／％　洗脱剂乙醇浓度与解吸率的关系　

实验中分别用不同浓度的乙醇溶液进行洗脱，测定洗脱液中　

绿原酸的含量并计算解吸率。其中５０％和７０％的乙醇溶液可将　

树脂吸附的绿原酸基本洗脱下来。对洗脱液进行薄层分析发现，　

７０％的乙醇溶液解吸率虽然较高，但是洗脱液中杂质含量也较　

高，达不到有效成分分离的效果，所以实验中选择５０％的乙醇溶　

液作为洗脱液。　

２．５．２　洗脱曲线的绘制进样清液吸附后，采用５０％乙醇溶液　洗脱，洗脱流速控制为１．０ＢＶ／ｈ，收集洗脱液并测定洗脱液中绿