HPLC-多菌灵等残留量

高效液相色谱法同时检测荔枝果肉中甲基硫菌灵及其代谢物残留量王思威;刘艳萍;王潇楠;徐能莉;孙海滨【摘要】[目的]建立甲基硫菌灵和多菌灵在荔枝果肉中的高效液相色谱(HPLC)检测分析方法.[方法]样品采用甲酸-乙腈作为提取溶剂、乙二胺N-丙基硅烷吸附剂(PSA)进行净化,高效液相色谱检测分析荔枝果肉基质中的甲基硫菌灵和多菌灵残留量.[结果]甲基硫菌灵和多菌灵在为0.01～1.00 mg/kg添加水平下的添加回收率分别为78.9％～97.6％、79.8％～94.6％,相对标准偏差分别为2.08％～3.95％、3.04％～5.27％;最低检出量均为0.1 ng,最小检出浓度均为0.01 mg/kg.[结论]该前处理方法简便、有机溶剂用量少,准确度、精密度等均符合农药残留检测分析要求.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)035【总页数】3页(P174-176)【关键词】甲基硫菌灵;多菌灵;荔枝果肉;高效液相色谱法;代谢物;残留量【作者】王思威;刘艳萍;王潇楠;徐能莉;孙海滨【作者单位】广东省农业科学院植物保护研究所,广东省植物保护新技术重点试验室,广东广州510640;广东省农业科学院植物保护研究所,广东省植物保护新技术重点试验室,广东广州510640;广东省农业科学院植物保护研究所,广东省植物保护新技术重点试验室,广东广州510640;广东省农业科学院植物保护研究所,广东省植物保护新技术重点试验室,广东广州510640;广东省农业科学院植物保护研究所,广东省植物保护新技术重点试验室,广东广州510640【正文语种】中文【中图分类】TS207.5+3甲基硫菌灵(thiophanate-methyl)是具有高效低毒的广谱性内吸杀菌剂，具有保护和治疗作用，广泛用于粮食、棉花、蔬菜、果树等多种作物上的病害防治，甲基硫菌灵在作物和土壤中使用后易转化为多菌灵[1-3]，我国规定甲基硫菌灵残留定义为甲基硫菌灵和多菌灵之和，以多菌灵表示。

多菌灵原药标准
一、外观
多菌灵原药的外观应为白色至灰黄色的结晶粉末，无可见杂质，无异味。

二、含量
多菌灵原药的含量应符合以下要求：
1.多菌灵含量不少于95.0%；
2.其他有机杂质的含量不超过5.0%。

三、熔点
多菌灵原药的熔点应不低于140℃。

四、溶解度
多菌灵原药易溶于有机溶剂，如甲醇、乙醇等，但在水中溶解度较小。

在常温下，多菌灵原药在水中最大溶解度不超过4.0%。

五、密度
多菌灵原药的密度应不低于1.20g/cm³。

六、稳定性
多菌灵原药应稳定，在常温下不易氧化变质，在正常贮存条件下，其贮存期应不少于两年。

七、无菌
多菌灵原药应无菌，在无菌条件下，多菌灵原药应无微生物生长。

八、酸碱度
多菌灵原药的酸碱度应用pH试纸或pH计测定，pH值应在5.0～7.5之间。

九、水分
多菌灵原药的水分应不超过0.5%。

十、重金属
多菌灵原药中的重金属应符合相关标准，如汞、铅、砷等重金属的含量均应不超过0.001%。

高效液相色谱法测定食用菌中福美双残留量摘要：建立食用菌中福美双残留量的高效液相色谱(HPLC)检测方法。

新鲜食用菌子实体样品粉碎后经二氯甲烷超声（53 Hz）提取20 min，离心（3320 g、5 min）, 二氯甲烷经氮气吹干，甲醇定容后用HPLC测定。

以等体积甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相，1 mL/min等度洗脱，在0.05～10 μg/mL范围内，福美双的峰面积与其浓度呈线性相关，R≥0.999，方法检出限为0.02 mg/kg，添加回收率为79.4%～90.2%，变异系数为1.15% ～7.51%%。

关键词：福美双；食用菌；子实体; 高效液相色谱福美双（Thiram）是一种脊椎动物趋避剂、杀菌剂,对葡萄孢菌、黑星病菌、疫霉菌等都有活性，在我国是在蔬菜和食用菌中登记使用的农药。

福美双防治食用菌病害效果显著，因此被广大菇农使用［1］。

福美双对水生物和野生鸟类及哺乳动物存在危险，因此其残留危害不容忽视。

对于福美双的测定，主要有液相色谱法［2-7］，气相色谱法［8］，紫外分光光度法［9］。

气相色谱法的分析原理是将福美双经过酸分解产生二硫化碳，然后通过测定二硫化碳来计算福美双的含量，该测定方法的检出限能达到0.01 mg/kg ，但是有机硫杀菌剂，例如代森锌、代森锰、福美锌等均可被无机酸分解生成二硫化碳，无法区分实际使用的是哪种农药; 紫外分光光度法，其仪器测定的灵敏度和定性的准确度较差,较难满足目前对于农产品检测的苛刻要求; 本研究旨在建立食用菌中福美双残留量的高效液相色谱测定方法，给相关部门对于福美双残留量的监测提供参考。

1 材料与方法1.1材料香菇(Lentinus edodes)、柱状田头菇(Agrocybe cylindracea)、金针菇(Flammulina velutipes)、草菇(V olvariella volvacea)、双孢蘑菇(Agaricus bisporus)和刺芹侧耳(Pleurotus eryngii), 来源于上海市农业科学院食用菌研究所。

桃果实中多菌灵残留量的高效液相色谱-串联质谱结合QuEchERS检测方法李晓辉;程卫【摘要】为分析桃果实中多菌灵残留量,采用QuEchERS方法对样品进行前处理,建立了快速检测桃果实中多菌灵残留量的高效液相-串联质谱法.样品经乙腈提取、QuEchERS方法脱水盐析和萃取净化,采用Inertsil ODS-2(5mm,150mm×2.1mm)色谱柱进行分离,梯度洗脱,在多反应检测模式下测定.经方法学验证,在添加不同浓度的标准溶液时,多菌灵残留量的平均回收率为89.5％～94.4％,RSD为1.95％.该方法简单、快速,准确度高,能够满足多菌灵残留分析的要求.【期刊名称】《河北林业科技》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】3页(P18-20)【关键词】桃果实;多菌灵残留量;QuEchERS【作者】李晓辉;程卫【作者单位】河北省林果桑花质量监督检验管理中心,河北石家庄050081;河北省林果桑花质量监督检验管理中心,河北石家庄050081【正文语种】中文【中图分类】TS272.7桃果实味道鲜美，营养丰富，是人们最喜爱的鲜果之一。

我国的桃产量位居世界第一位，但桃的出口额仅占世界出口额的1.38%，出口贸易不容乐观，最主要的原因是部分农残超标[1]。

苯并咪唑类药物作为广谱性内吸杀菌剂被广泛用于水果生产，而多菌灵是苯并咪唑类农药的主要种类之一[2]，因此桃病害的防治会使用大量的多菌灵。

由于多菌灵化学性质稳定，在自然环境中降解较慢，并对人体有一定的毒性[3-4]，因此，农产品中多菌灵残留量的测定越来越受到重视[5]。

目前，国内外多为关于多菌灵在苹果、柑桔、油菜等果蔬上残留的研究，而对于桃果实上多菌灵残留的研究则鲜有报道。

高效液相色谱-串联质谱技术具有检测灵敏度高、选择性好、适用范围广等优点而广泛应用于农药残留分析中。

QuEchERS方法具有快速、简单、便宜、有效、可靠和安全等优势，因此本研究利用高效液相色谱-串联质谱结合QuEchERS方法对桃果实中的多菌灵残留量进行测定，旨在为更好地研究桃果实中多菌灵的残留水平提供检测依据。

UHPLC与AxION 2TOF质谱联用快速定量分析橙汁中多菌灵进口橙汁中杀菌剂残留一直受到广泛关注，需要建立简单快速的分析方法。

一家私人公司向FDA报警称，从巴西进口的橙汁中含有杀菌剂即多菌灵。

在美国果汁中含有该物质是违法的，故该机构扩大了对进口产品中残留物的检测。

为了应对日益增加的关注，我们已经建立了一种快速的、简单的定量分析方法，该方法可以测定多菌灵浓度低至10ppb。

我们建立的方法既能够检测目标分析物如多菌灵，同时也可以检测非目标的化合物，该方法依靠带有UltrasprayTM 2离子源的AxION？2时间飞行（TOF）质谱仪（MS）提供全范围，高质量精度的数据，该离子源在飞行校准过程中具有质量锁定功能。

与三重四级杆仪器需要预先设定目标物不同，TOF可以通过不降低分析灵敏度的全范围扫描方式采集精确质量和高分辨率的数据，该数据可鉴定无限制数量化合物的结构。

任何感兴趣的目标化合物可以通过简单检索该分析物的精确质量而被检测到，且通过保留时间的匹配度进行快速确认。

利用一根表面多孔颗粒（SPP）的色谱柱，使得稀释-上样的样品前处理方式成为可能同时可以保证分离度且缩短传统UHPLC色谱柱的分析时间。

试验目标分析物：多灵菌；液相色谱条件：泵类柱：FlexarTM FX-15；色谱柱：PerkinElmer BrownleeTM SPP，C-18（2.1mm*100mm，2.7μm）流动相：A：含有5mM甲酸和5mM甲酸铵的水溶液；B：含有5mM甲酸和5mM甲酸铵的甲醇溶液；流速：0.3mL/min；梯度条件：进样体积：10μLMS条件：PERKINELMER AxION 2 TOF MS；离子源：UltraysprayTM 2 Dual ESI源；扫描范围捕及脉冲模式：100～400mz（D7：66，D8：80）；毛细管出口电压：+90V；干燥器温度和流速：350℃，12L/min；锁定质量校准流速和离子：35μL/min，利用m/z 322.04812和622.02896。

高效液相色谱法测定环境水中多菌灵和噻菌灵高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析技术，可用于测定环境水中的多菌灵和噻菌灵等农药。

本文将介绍HPLC的原理和操作步骤，并说明该方法在环境水中多菌灵和噻菌灵的测定中的应用。

高效液相色谱法基本原理是利用样品中化合物与固定相之间的相互作用，通过溶剂的流动将化合物分离出来。

HPLC系统由溶剂系统、进样装置、色谱柱、检测器和记录器等部分组成。

首先，需要准备一个合适的HPLC柱，HPLC柱是由一种特殊的固体填料填充在一根装有两端的大或小直管中。

填料根据不同分离物质的性质而选择不同类型的固定相。

然后，根据样品的孔隙度、溶解度等性质，选择合适的流动相，溶解要测量的化合物。

流动相通过色谱柱，测定物质顺着柱向下流动，并与固定相发生相互作用。

化合物通过相互作用的差异来分离。

噻菌灵和多菌灵在HPLC中属于有机物，一般使用反相色谱柱进行分析。

反相色谱柱的固定相为亲水性较小的非极性固体，通常是碳链较长的疏水性膜。

噻菌灵和多菌灵的分离是通过控制人工溶液中固定相的物质来进行的。

操作步骤如下：1. 准备HPLC系统：首先，根据色谱柱的要求准备合适的溶液，并将其置于进样器中。

然后，根据需要设置流速和检测器的参数。

2. 样品制备：将环境水样采集，过滤掉固体颗粒物，并加入一定的溶剂进行溶解。

3. 进样和分离：将样品通过进样装置注入HPLC系统中，样品在色谱柱中分离，并移动至检测器中。

4. 检测与分析：HPLC系统将样品分离成峰，每个峰对应一个化合物。

根据峰的面积或峰的高度来定量分析样品中化合物的浓度。

5. 结果处理：根据标准曲线，将样品的峰面积或峰高度与化合物的浓度关联起来，计算出环境水中多菌灵和噻菌灵的浓度。

高效液相色谱法在环境水中多菌灵和噻菌灵的测定中具有很高的选择性和灵敏度。

它可以同时分析多个目标化合物，准确测定它们的浓度，为环境监测和食品安全提供重要的支持。

农残检测标准中国已制定了79种农药在32种（类）农副产品中197项农药最高残留限量（MR1）的国家标准，其中有关果树上的农药残留最高限量标准如下（注：mg∕kg二毫克/干克）：1、百菌清≤1mg∕kg;2、倍硫磷≤0.05mg∕kg;3、苯丁锡≤5mg∕kg;4、草甘瞬≤O.1mg∕kg;5、除虫眠≤1mg∕kg;6、代森铳锌≤3mg∕kg（梨果）；7、代森镒锌≤5mg∕kg（小粒水果）;8、滴滴涕≤O.1mg∕kg;9、敌百虫≤O.1mg∕kg;10、毒死婢≤1mg∕kg（梨果）;11、对硫磷为不得检出；12、多菌灵≤0.5mg∕kg;13、二嗪磷≤0.5mg∕kg14、氟氟戊菊酯≤0∙5mg∕kg;15、甲拌磷为不得检出16、甲蔡威≤2.5mg∕kg;17、甲霜灵≤1mg∕kg（小粒水果）18、抗蛇威w2.5mg∕kg;19、克菌丹≤15mg∕kg;20、乐果≤1mg∕kg;21、六六六≤0.2mg∕kg22、氯氟富菊酯≤0∙2mg∕kg（梨果）;23、氯菊酯≤2mg∕kg;24、马拉硫磷为不得检出；25、鼠戊菊酯≤0.2mg∕kg;26、快螭特≤5mg∕kg（梨果）；27、IS螭酮≤0∙5mg∕kg（梨果）；28、三嘤酮≤0.2mg∕kg29、三嘤锡≤2mg∕kg（梨果）；30、杀螟硫磷≤0.5mg∕kg;31、双甲眯≤0.5mg∕kg（梨果）；32、四螭嗪≤1mg;33、辛硫磷≤0.05mg∕kg;34、浸螭酯≤5mg∕kg（犁果）；35、漠露菊酯≤0.1mg∕kg（皮可食）;36、亚胺硫磷≤0∙5mg∕kg;37、乙酰甲胺磷≤0.5mg/kg;38、异菌腺≤10mg∕kg（梨果）;39、敌敌畏≤0.2mg∕kg.∕kg（梨果）;下面是国家农残标准的主要要求:1规范农药使用：生产者应按照农药的合理使用和控制使用农药种类、用量、使用期和农药间隔期。

农药必须符合国家规定的安全标准。

2,规范农产品采收和加工：农产品采收和加工过程中应符合规范，避免或减少危害物质的残留，并采取必要的措施降低危害物质超标的风险。

白术中多菌灵农药残留量分析王瑶;富徐燕;王霞;白岩;杨赛赛;潘兰英;田薇【期刊名称】《浙江师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(033)002【摘要】建立了测定中药材白术中多菌灵农药残留量的方法:反相高效液相色谱法(RP-HPLC),色谱柱为ODS不锈钢柱,流动相为甲醇-水(体积比为35 : 65),检测波长为281 nm.结果显示:多菌灵在0.45～108 ng进样量与峰面积有良好的线性关系,最低检出量为3.6×10-10 g,最低检测质量浓度为0.022 5 μg/mL.该方法简便、快速,适合同类中药材中多菌灵农药残留量的测定.【总页数】4页(P189-192)【作者】王瑶;富徐燕;王霞;白岩;杨赛赛;潘兰英;田薇【作者单位】浙江农林大学,林业与生物技术学院,浙江,临安,311300;浙江农林大学,林业与生物技术学院,浙江,临安,311300;山东省分析测试中心,山东,济南,250000;浙江农林大学,林业与生物技术学院,浙江,临安,311300;浙江农林大学,林业与生物技术学院,浙江,临安,311300;浙江农林大学,林业与生物技术学院,浙江,临安,311300;浙江农林大学,林业与生物技术学院,浙江,临安,311300【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.烟叶中多菌灵农药残留的降解规律和影响因素 [J], 李义强;周杨全;徐金丽;徐光军;韦建玉;苏赞;胡亚杰;张纪利2.超高效液相色谱-紫外法测定火龙果中多菌灵农药残留 [J], 刘铭扬;冯敏铃;邹学仁;张定煌;张益文3.金标检测卡对蔬菜上多菌灵和啶虫脒农药残留快速检测的效果 [J], 施诚愿; 张俊聪4.蔬菜水果中多菌灵等4种苯并咪唑类农药残留量的测定 [J], 豆志培5.高效液相色谱法同时测定人参中多菌灵和甲基硫菌灵农药残留的含量 [J], 张念洁;吴信子;姜旭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

金线莲栽培中多菌灵残留动态及安全使用标准研究作者：邵清松刘洪波张雨韵张爱莲李明焱来源：《中国中药杂志》2014年第09期[摘要]采用甲醇提取，液液分配净化，高效液相色谱分析多菌灵在金线莲根、茎、叶及栽培基质中的残留消解动态，并对其安全使用标准进行讨论。

结果表明不同多菌灵添加浓度下的回收率为82.9%～95.7%，RSD为2.0%～6.3%，满足农药残留检测要求。

田间试验分别采用推荐剂量（1.0 kg·hm-2）和1.5倍推荐剂量（1.5 kg·hm-2）进行处理，2年连续实验结果表明，多菌灵在金线莲栽培基质中的半衰期为7.01～8.51 d，在根中残留趋势为先升后降，半衰期为4.93～5.71 d，在茎和叶中的消解半衰期分别为3.58～4.27，3.50～3.91 d。

若多菌灵在金线莲植株中的最高残留限量推荐值为0.5 mg·kg-1，每年以1.0 kg·hm-2的剂量喷施4次，最后一次施药和收获时间的安全间隔期可推荐为28 d。

[关键词]金线莲；多菌灵；消解动态；安全间隔期金线莲又名金线兰、金丝草，为兰科开唇兰属多年生名贵中药材，具有清热凉血、除湿解毒等功效，用于治疗糖尿病、肾炎、急慢性肝炎等症，在民间享有“药王”的美称[1-2]。

由于金线莲自然繁殖率低，对生态环境要求严格，适应性较差，加之人工过度采挖，使得野生资源锐减。

近年来许多学者对金线莲人工栽培进行研究，在种苗培育、组培苗移栽、设施栽培等关键技术取得突破性进展[3-5]。

金线莲种植期间，茎腐病和软腐病危害严重，种植者常采用多菌灵进行病害防治。

多菌灵是一种广谱内吸性杀菌剂，但残效期较长，并且对动植物及人体有一定的危害，目前已有研究表明，多菌灵能够影响哺乳动物精母细胞的减数分裂[6]。

目前已有关于多菌灵在大青叶、白术、人参以及浙麦冬等中药材降解残留动态的相关报道[7-10]，但多菌灵在金线莲上的残留动态还未见报道。

安徽农业大学硕士学位论文多菌灵和甲基硫菌灵在平菇中残留动态研究姓名：牛玉宏申请学位级别：硕士专业：环境科学指导教师：汤锋20090601摘要本文建立了平菇及培养料中多菌灵、甲基硫菌灵残留量检测方法，研究了多菌灵和甲基硫菌灵在平菇中的残留消解动态及最终残留量。

主要研究结果如下：１．样品中多菌灵、甲基硫菌灵以乙酸乙酯作为提取溶剂，采用高效液相色谱紫外检测器检测。

在Ｏ．１～１．Ｏｍｇ／ｋｇ的添加浓度范围内，多菌灵的平均回收率在８４．０７～９５．７２％之间，相对标准偏差为２．２１－－－＇１６．３４％，最小检测浓度为０．Ｏｌｍｇ／ｋｇ。

在０．１～１．Ｏｍｇ／ｋｇ的添加浓度范围内，甲基硫菌灵的平均回收率在７８．８３－－－＇９２．４９％之间，相对标准偏差为４．３３～１６．３２％，最小检测浓度为０．Ｏｌｍｇ／ｋｇ。

方法的灵敏度与准确度符合农药残留分析要求。

２．在添加０．１％和０．１５％（培养料干重）的使用剂量下，多菌灵在培养料中的消解符合一级动力学模型。

消解方程分别为Ｃ＝８８．６６２ｅ吨０２０轧，Ｃ＝１０１．５３ｅ吨们眦。

半衰期为３０．１３ｄ和４１．７５ｄ。

培养料经湿热灭菌，甲基硫菌灵迅速降解、转化，在０．１％和０．１５％（培养料干重）的使用剂量下，甲基硫菌灵的降解率分别为９９．３９和９９．９２％。

转化产物多菌灵在培养料中的消解符合一级动力学模型。

消解方程分别为Ｃ＝５０．１２８ｍ０２拍‘，Ｃ＝５７．２４９ｅ吨０３４札。

半衰期为２４．２３ｄ和２０．１５ｄ。

４．在０．１％的用量下，平菇中未检出多菌灵和甲基硫菌灵残留。

在０．１５％的用量下，多菌灵在平菇中的最终残留量为０．３９ｍｇ／ｋｇ。

关键词：高效液相色谱；平菇；培养料；多菌灵；甲基硫菌灵百度优化织里童装/ /seo/独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

高效液相色谱法测定水稻及土壤中甲基硫菌灵和多菌灵摘要:建立了一种同时测定甲基硫菌灵和多菌灵在水稻(Oryza sativa L.)及土壤中残留量的高效液相色谱分析方法｡样品用丙酮与水混合液提取,经弗罗里硅土柱净化后,采用SunFireTM C18色谱柱,甲醇-水(50∶50,V/V)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温30 ℃,进样量5 μL,在270 nm波长下测定｡甲基硫菌灵和多菌灵在0.10~10.00 mg/L间回归方程分别为:y=1.216 3+4.909 7x､y=3.351 2+8.770 0x,相关系数分别为0.998 8､0.998 4;水稻中甲基硫菌灵和多菌灵平均回收率分别为79.31%~93.26%､86.87%~95.17%,相对标准偏差分别为 3.08%~7.71%､3.49%~7.86%;土壤中甲基硫菌灵和多菌灵平均回收率分别为89.48%~92.60%､96.50%~101.30%,相对标准偏差分别为5.25%~7.72%､4.05%~7.15%｡该分析方法简单､快速､灵敏,具有良好的准确度和精密度,适用于常规分析｡关键词:水稻(Oryza sativa L.);土壤;甲基硫菌灵;多菌灵;HPLCAnalysis of Thiophanate-Methyl and Carbendazim in Rice and Soil by High Performance Liquid ChromatographyAbstract: A method for the analysis of thiophanate-methyl and carbendazim residues in rice(Oryza sativa L.) plant and soil was established by high performance liquid chromatography (HPLC). Samples were ultrasonically extracted with the mixture of acetone and water, purified on the florisil SPE column. The SunFireTM C18 column was used as chromatography column, the mobile phase was the mixture of methanol-water(50∶50, V/V) at a flow rate of 1.0 mL/min, the column temperature was 30 ℃, injection volume was 5.0 μL and detection wavelength was 270 nm. The linear range was 0.10~10.00 mg/L, the regression equations of thiophanate-methyl and carbendazim were y=1.216 3+4.909 7 x and y=3.351 2+8.770 0 x, respectively, coefficient of correlations were 0.998 8 and 0.998 4. The recoveries of thiophanate-methyl and carbendazim were 79.31%~93.26% and 86.87%~95.17%, respectively, relative standard devirations(RSD) were 3.08%~7.71% and 3.49%~7.86% for rice. And the recoveries were 89.48%~92.60% and 96.50%~101.30%, RSD were 5.25%~7.72% and 4.05%~7.15% for soil, respectively. The method could be used for conventional analysis, which was simple, rapid, accurate and sensitive.Key words: rice(Oryza sativa L.); soil; thiophanate-methyl; carbendazim; HPLC甲基硫菌灵和多菌灵均属于苯并咪唑类杀菌剂,对蔬菜､水果､麦类､水稻等真菌病害有良好的防治效果[1]｡甲基硫菌灵和多菌灵是目前全球使用量最大的广谱杀菌剂,具有低毒､低残留等优点｡20世纪80年代,贵州省黔东南杂交水稻产区由于稻瘟病､纹枯病等大面积发生,导致甲基硫菌灵等农药大量使用,10年累计用药量达12 590 t,年均用药1 260 t[2]｡由于甲基硫菌灵在生物和环境中存在不稳定性,容易代谢为多菌灵,多菌灵具有较强的杀菌活性[3-5],从而增加了甲基硫菌灵的测定难度[6]｡目前关于单独测定甲基硫菌灵和多菌灵的液相色谱法已有报道,但这些方法的样品前处理繁琐,有机溶剂用量多,分析时间长[7-10],而且关于采用液相色谱法同时检测甲基硫菌灵和多菌灵在水稻及土壤中的残留分析方法未见报道｡为了评价甲基硫菌灵和多菌灵在水稻及土壤中的安全性,采用液相色谱法同时对甲基硫菌灵和多菌灵在水稻及土壤中的残留进行测定,建立了准确､灵敏的农药残留检测方法｡1 材料与方法1.1 仪器与试剂Waters 600E高效液相色谱仪(美国Waters公司),配备Waters 2487紫外检测器;AL104电子分析天平(瑞士梅特勒公司);SHZ-82恒温振荡器(常州澳华仪器有限公司);HIS10260D超声波清洗器(天津恒奥科技发展有限公司);RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);DFT-250手提式高速中药粉碎机(温岭市林大机械有限公司);JLGJ4.5砻谷机(浙江台州市粮仪厂);甲基硫菌灵原药(97%,上海临空化工贸易有限公司);多菌灵原药(99.5%,陕西恒润化学工业有限公司);甲醇(色谱纯,天津市瑞金特化学品有限公司);甲醇､丙酮､二氯甲烷､氯化钠等(均为分析纯,重庆江川化工有限公司)｡1.2 分析方法1.2.1 样品采集在水稻生育期,从开阳县禾丰乡､桐梓县官仓镇和黄平县旧州镇的供试水稻田中用5点法采集土壤及水稻植株各约1 000 g｡稻杆用粉碎机粉碎,混匀;稻谷谷粒先用小型出糙机脱壳,然后用粉碎机分别把谷壳和糙米粉碎成米糠和糙米粉,混匀｡采集0~15 cm表层土壤,自然风干,将风干的土样粉碎,过40目筛,于-20 ℃低温保存备用｡1.2.2 样品的提取称取10 g土壤样品,5 g水稻植株样品,分别放入250 mL具塞三角瓶中,加入100 mL丙酮/水(50∶50,V/V)提取液｡浸泡0.5 h后振荡提取1 h,抽滤｡量取滤液转入250 mL分液漏斗中,加入20 mL饱和氯化钠溶液､50 mL二氯甲烷,振荡萃取 1 min,静置分层,下层有机相过无水硫酸钠,水相再用二氯甲烷50 mL萃取2次,合并3次萃取液,用旋转蒸发器(水浴温度40 ℃)浓缩至1 mL｡土壤样品提取液用甲醇定容至5 mL,过0.45 μm的有机滤膜,待测｡水稻植株样品待进一步净化,用30 cm×1.2 cm玻璃层析柱,依次加入少许脱脂棉,2 cm厚无水硫酸钠,5 g弗罗里硅土和0.2 g活性炭的混合吸附剂,2 cm厚无水硫酸钠,先用20 mL二氯甲烷预淋洗柱子,待液面下至无水硫酸钠时加入样品(1 mL二氯甲烷提取液),再用200 mL丙酮/二氯甲烷(6∶4,V/V)淋洗并收集,浓缩至l mL,氮气吹干,用甲醇定容5 mL,过0.45 μm的有机滤膜,待测｡1.2.3 检测条件色谱柱:SunFireTM C18 (5 μm,150 mm×4.6 mm);流动相为甲醇∶水(50∶50,V/V),使用前过0.45 μm滤膜孔;流速1.0 mL/min;柱温30 ℃;检测波长为270 nm;进样量5 μL;保留时间:多菌灵约为4.1 min,甲基硫菌灵约为6.9 min;外标法定量｡2 结果与分析2.1 标准曲线绘制称取甲基硫菌灵原药0.05 g､多菌灵原药0.05 g(精确至0.000 2 g)于100 mL 容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀备用｡将甲基硫菌灵和多菌灵的标准品用甲醇稀释至0.10､0.50､1.00､5.00､10.00 mg/L等5个不同的浓度,待仪器稳定后分别进样,色谱图见图1,分别以色谱峰面积为纵坐标,以进样浓度为横坐标作图,甲基硫菌灵和多菌灵的标准曲线如图2所示,回归方程分别为y=1.216 3+4.909 7 x､y=3.351 2+8.770 0 x,相关系数分别为0.998 8､0.998 4,表明甲基硫菌灵､多菌灵在0.10~10.00 mg/L范围内的仪器响应值与浓度呈良好线性关系｡2.2 添加回收试验结果称取10.0 g土壤､5.0 g水稻植株样品,分别添加浓度为0.5､1.0､2.0 mg/L甲基硫菌灵和多菌灵标准液,按照上述分析方法提取､净化,并根据上述色谱条件检测,测定结果如表1所示,甲基硫菌灵和多菌灵在糙米中平均添加回收率分别为79.31%~87.21%､86.87%~91.60%,相对标准偏差分别为 3.85%~5.82%､3.56%~7.86%;甲基硫菌灵和多菌灵在谷壳中平均添加回收率分别为87.94%~90.23%､87.20%~89.40%,相对标准偏差分别为 4.97%~7.07%､3.49%~5.65%;甲基硫菌灵和多菌灵在稻秆中平均添加回收率分别为89.54%~93.26%､93.40%~95.17%,相对标准偏差分别为 3.08%~7.71%､4.47%~6.41%;甲基硫菌灵和多菌灵在土壤中平均添加回收率分别为89.48%~92.60%､96.50%~101.30%,相对标准偏差分别为 5.25%~7.72%､4.05%~7.15%｡符合农药残留量分析的技术要求[11]｡3 小结与讨论本研究建立了一种同时测定甲基硫菌灵和多菌灵在水稻及土壤中残留量的高效液相色谱分析法｡结果表明,水稻中甲基硫菌灵和多菌灵平均回收率分别为79.31%~93.26%､86.87%~95.17%,相对标准偏差分别为 3.08%~7.71%､3.49%~7.86%;土壤中甲基硫菌灵和多菌灵平均回收率分别为89.48%~92.60%､96.50%~101.30%,相对标准偏差分别为5.25%~7.72%､4.05%~7.15%｡该方法对甲基硫菌灵和多菌灵在水稻和土壤中的检测具有操作简单､快速､灵敏的特点,且具有良好的准确度和精密度,适用于水稻及土壤中甲基硫菌灵和多菌灵的残留量测定｡致谢:本实验是在贵州大学农产品质量与安全实验室完成的,在此对该实验室全体人员表示衷心的感谢｡参考文献:[1] 刘乾开,朱国念.新编农药使用手册[M].第二版.上海:上海科学技术出版社,2000.243.[2] 杨洵.黔东南州农药使用现状与安全用药对策[J].贵州农业科学,2003(S1):63-64.[3] 杨红,邢月华,蒋木庚.甲基硫菌灵的高效液相色谱分析[J].农药,1988,27(1):28-29.[4] 向月琴,高春明,庞国辉,等.土壤中多菌灵的降解动态及其土壤微生物群落多样性的影响[J].土壤学报,2008,45(4):699-704.[5] 冯明祥,陈振德,袁玉伟,等.几种农药在露地黄瓜上的残留降解动态检测研究[J].农药科学与管理,2007,28(5):17-20.[6] 钱传范,单国民.甲基布托津残留的高效液相色谱法[J].环境化学,1991,10(5):76-80.[7] 马严明,王梅,张勇,等.甲基硫菌灵防治番茄叶霉病及在果实中残留量分析[A].食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[M].合肥:安徽省科学技术协会学会部,2005.305-307.[8] 曹爱华,李义强,徐光军,等.高效液相色谱法同时测定烟草中吡虫啉､多菌灵､甲基硫菌灵的残留量[J].中国烟草科学,2009, 30(1):31-34.[9] 牛玉宏,汤锋.平菇中多菌灵·甲基硫菌灵残留分析研究方法[J].安徽农业科学,2009,37(30):14573-14575,14580.[10] 单国民,钱传范.甲基托布津在小麦和土壤中的降解与残留研究[J].植物保护学报,1992,19(1):91-96.[11] 樊德方.农药残留量分析与检测[M].上海:上海科技出版社,1982,116-139.。