第七章肠道致病菌的检验与鉴定

45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
ห้องสมุดไป่ตู้
肠道致病菌检验简述学习资 料
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒

外毒素（A群Ⅰ、Ⅱ型） 志贺毒素 ST(VT) 有3种毒性，与内毒素协同作用，加重局部和全身症状
全身
所致疾病
急性细菌性痢疾 •急性典型：发热、腹痛、脓血粘液便、里急后重 •急性非典型：易误诊，导致带菌和慢性 •中毒性痢疾：小儿 慢性细菌性痢疾：病程迁移两个月以上
带菌者
三、微生物学检查
标本：新鲜脓血便/肛拭
小肠上部粘膜
固有层淋巴结
肠系膜淋巴结
进入血液
再次进入血液
第一次菌血症
第二次菌血症
3、免疫性
细胞免疫：胞内寄生菌，抗体不能发挥 作用，仅能杀伤细胞外的沙门菌，故沙 门菌主要依靠细胞免疫。 肠热症后可获得牢固的免疫力
微生物学检查
1.查病原
标本 伤寒和付伤寒 第1周取静脉血 第1-3周取骨髓液 第2周起取粪、尿 食物中毒 可疑食物 呕吐物 粪 败血症 血
防治原则
加强卫生监督管理 抗生素治疗 口服减毒活疫苗（Ty21a）
带菌者检查
分离病原菌 查Vi抗体 TYPHOID MARY
其他肠道杆菌
克雷伯菌属--------医源性感染的重要细菌
变形杆菌-----条件致病菌 食物中毒 多形性 迁徙生长现象 分解尿素 外斐试验
复习思考题
1.简述肠道杆菌的共同生物学特性 2.简述引起腹泻的大肠埃希菌的种类和所 致疾病 3.简述痢疾杆菌的致病性 4.简述伤寒沙门菌引起的肠热症的主要致 病过程 5.试述肥达试验结果分析及其意义
及时送检/暂用30%甘油缓冲盐水保存
快速诊断
分离培养 SS平板（无色透明小菌落）
荧光菌球试验 协同凝集试验
生化反应
血清学反应
最后诊断
四、防治原则
预防：控制传染源，切断传播途径

• V-P -、PAD -：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌 属、枸橼酸菌属、爱德华菌属
• V-P +、PAD -：克雷伯属、肠杆菌属、哈夫尼 亚菌属、泛菌属、沙雷菌属、耶尔森菌属
• V-P -、PAD +：变形杆菌属、摩根菌属、普罗 维登斯属
鉴定步骤
• 属： KIA、MIU、IMViC等 • 种：血清学试验等
致病因素
肠毒素：使肠道细胞中cAMP的水平升 高，引起肠液大量分泌而导致腹泻
➢不耐热肠毒素（heat labile toxin，LT）： 加热 65℃、30分钟即被破坏
➢蛋白质，分子量大，有免疫原性
致病因素
肠毒素
➢耐热肠毒素（heat stable toxin，ST) ➢对热稳定，100℃经20分钟仍不被破坏 ➢分子量小，免疫原性弱 ➢有些菌株只产生一种肠毒素，有些则两种
• 条件致病菌：又称机会致病菌，在某种特定条件下可致 病的细菌。当人体的正常菌群其集聚部位改变、机体抵 抗力降低或菌群失调时则可致病， 在一定的条件下，能 引起机会感染或二重感染。
四、微生物学检验
• 标本采集
• 肠外标本：依据感染部位而定,如血液、体液、呼 吸道、伤口、尿液及其他各种标本
• 肠道标本疾病早期留取新鲜粪便，最好带脓血或粘 液，应在2h内进行，以利志贺菌等检出。如不能及 时培养应冷藏待检。
抗体检测
• 用已知抗原检测血清中的抗体，可用于感 染性疾病的辅助诊断
用已知伤寒菌的H和O抗原以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的抗原与病人血 清做凝集试验
第二节 埃希菌属 (Escherichia)
一、分类
1. 大肠埃希菌（E. coli）：最常见的临床分 离菌，也是肠道中G-杆菌的主要成员，常 引起各种肠内外的感染，是腹泻和泌尿道 感染的主要病原菌。

实验十粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定实验目的和要求1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方法2、掌握药物敏感试验3、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤4、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应实验内容一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定一、标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板涂片、染色、镜检挑取可疑菌落生化反应测定纯培养致病性测定（甘露醇、凝固酶等）标本血液脑脊液肉汤增菌培养涂片染色镜检二、标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基玻片凝集试验SS平板,EMB平板设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%H2O2、（兔血浆）、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等3.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等脓拭子分离培养革兰染色（血平板）革兰染色触酶实验甘露醇实验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：浓汁标本，用分离划线方法接种血平板，37℃培养18-24h以后观察结果。

重点：色素和溶血现象•2、革兰染色、观察形态学特征：取可疑菌落少许涂片，革兰染色、镜检。

结果观察•1、菌落观察•2、形态学观察（二）生化反应•触酶试验：(-) (+)H 2o 2H 2o o 2氧化氢酶+菌种：可疑菌落试剂：3%过氧化氢方法：见右图结果：见右图甘露醇实验•甘露醇生化反应管药敏实验浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果观察形态学特征血平板生长现象触酶试验甘露醇试验结论：现象与论点、论据浓汁标本可疑菌药敏实验结果药品名称抑菌圈直径结论：咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）？粪便标本SS平板克氏双糖铁斜面培养基动力-半固体培养基生化反应管观察结果糖发酵试验玻片凝集试验革兰染色H2S试验尿液离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：粪便标本，用分离划线方法接种SS平板培养基37℃培养18-24h以后观察结果。