几种常见肠道致病菌多重PCR检测的效果评价

志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6~8h。

培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。

二、分离和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18~24h。

志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。

挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。

一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18~24h，分别观察结果。

下述培养物可以弃去：a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b. 在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d. 产气的培养物；e. 有动力的培养物；f. 产生硫化氢的培养物。

凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。

三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。

先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。

如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。

福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。

可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。

如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。

四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖铵西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶pH7.2尿素KCN生长水杨苷和七叶苷的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。

妇科炎症感染中几种微生物检验方法的效果评价摘要：目的研究和分析妇科炎症感染中几种微生物检验方法的效果评价。

方法选取我院 2015年 6 月至 2017年 6 月收治的80例妇科炎症感染的已婚妇女作为本次实验对象，使用三根无菌棉签对患者的阴道侧壁上1/3分泌物进行样品采集，同一个患者必须拥有三种相同样品，并运用三种相同的样品进行培养法、凝集法和镜检法的三种检查。

比较三种阴道念珠菌检测方法的阳性率。

结果培养法、凝集法和镜检法的三种检查的概率分别为90.00%、88.75%、87.50%，两两比较差异不大，没有统计学意义（P>0.05）。

结论在妇科炎症感染中运用培养法、凝集法和镜检法微生物检验具有重要的现实意义和作用，值得推广和运用。

关键词：妇科炎症感染；微生物检验方法；效果评价妇科炎症在妇科疾病中是处于比较常见的类型疾病，主要是指女性患者的阴道、宫颈、子宫体、卵巢、外阴等部位出现相应的生殖器官由于致病菌的侵害而出现相应的炎症[1]。

这些炎症严重影响患者的身心健康和生活质量。

在当下的快节奏生活中，由于环境因素、疾病因素、饮食因素、用药因素等因素的影响，导致妇科炎症的发生概率呈现出上升趋势。

对于妇科疾病的患者而言，妇科疾病容易导致患者内分泌失调，皮肤暗黄粗糙，严重影响患者的身心健康和生育健康，降低了患者的生活质量[2]。

在临床中，为了改变这种情况，注重对于妇科炎症感染程度的有效检测一直以来是临床研究的重点内容。

在现代化的医疗技术支撑下，提升妇科炎症感染程度的有效检测，对于妇科炎症的治疗和效果显得尤为重要[3]。

从临床实践中表明，存在于妇女阴道的的阴道念珠菌是比较常见的条件致病菌，与各种妇科疾病的产生有着紧密联系，黏附在女性阴道的任何部位。

若是妇女的阴道内环境发生改变、身体抵抗力严重下降等情况的发生，都会导致引导念珠菌会过度繁殖，从而诱发相应的妇科炎症[4]。

因而，运用微生物检验发现病原菌传染源，对于治疗和控制妇科炎症起到积极作用，同时避免发病菌的传播，避免不良事件的发生。

以肠道致病菌检测为基础的微生物学综合性实验探索[摘要] 目的:开展微生物学实验教学改革，探讨微生物学实验教学中开设综合性实验的必要性、实施过程及效果评价。

方法：选择生物技术专业2010级本科生作为研究对象，设计肠道致病菌检测的综合性实验，参考中国疾病预防控制中心（cdc）应对突发公共卫生事件微生物检验程序，实施教学改革，由学生自主设计、动手操作、分组讨论并提交实验报告。

结果：通过开设综合性实验，学生巩固了课堂理论知识，掌握了实验操作的基本技能，增强了生物安全意识，并熟悉了肠道致病菌检测的方法和流程。

结论：综合性实验的开设有助于提高学生分析问题、解决问题的能力，对于学生素质的全面提高起到了促进作用。

[关键词] 微生物学实验教学肠道致病菌综合性实验前言实验教学在医学教育中占有重要地位，对培养医学生理论联系实际、动手能力、分析解决问题能力、科学思维方法以及严谨的科学精神均具有重要意义，对实现素质教育和创新人才培养目标也有着不可替代的作用[1]。

综合性实验是实验教学创新的一个重要改革, 它是一种需要学生自拟实验方案、查阅参考资料以及提出设计思路和实验步骤, 并在获得的现象或数据的基础上自己概括出实验结论的类科研实验[2]。

微生物学是生物技术专业的一门重要基础课程，实验教学是微生物学教学中的重要组成部分。

改革实验教学、增加综合性实验、培养学生的科研思维和创新能力是微生物学教学改革的重要课题。

本文以“肠道致病菌检测”这一综合性实验为例，探讨了在生物技术专业微生物学实验教学中开设综合性实验的尝试及效果。

1.微生物学综合性实验开设的必要性医学是实践性很强的学科，人们对于生命现象和疾病发生机制的研究都是通过实验研究来证明，直至今日，实验仍然是医学研究的基本方法。

因此，在医学教育中，实验教学占有重要的比重，部分学科实验教学比重达到了一半以上。

实验教学效果的高低直接影响到学生对课堂理论知识的理解程度。

在通常经典的教学模式中，实验教学大多数是验证性试验，各个实验项目之间相互独立，缺乏必要的逻辑联系，虽然在一定程度上可以增强学生对课本理论知识的理解，但是实验过程自主性差，不利于学生创新思维的培养和对学科的整体把握。

PCR技术在食品药品检测中的应用胡孔兴;董菁;陈佳峰;刘丽【摘要】食品和药品的检验工作对提高食品药品安全性具有重要意义.聚合酶链式反应(PCR)技术因具有快捷、灵敏、操作简便等优势被广泛应用在食品和药品检测中.在归纳分析PCR技术在食品和药品检测中的具体运用案例的基础上,总结了PCR技术的应用前景和价值.【期刊名称】《常州工学院学报》【年(卷),期】2018(031)004【总页数】6页(P52-57)【关键词】PCR技术;食品;药品【作者】胡孔兴;董菁;陈佳峰;刘丽【作者单位】芜湖市食品药品检验中心,安徽芜湖241000;芜湖市食品药品检验中心,安徽芜湖241000;芜湖市食品药品稽查支队,安徽芜湖241000;芜湖市食品药品检验中心,安徽芜湖241000【正文语种】中文【中图分类】TS207.4;TQ460.7PCR技术(即聚合酶链式反应技术)的原理是首先让双链DNA 变性成单链，接着将其与特定引物结合，使单链DNA在聚合酶的促使下向3′末端延伸合成，进而产生新的双链，新产生的双链将作为模板，循环重复以上反应，不断扩增出所需DNA双链，最终使目的片段实现指数倍的增加[1]。

由于PCR技术灵敏性高、特异性强，且操作简单，因此在应用范围上得到不断延伸。

随着PCR技术的迅猛发展，近些年来，基于常规PCR技术不停地衍生发展出很多新的技术，如：多重PCR、实时荧光定量PCR、PCR Array技术等。

本文就近些年来PCR检测技术在食品和药品检测领域中的应用进行综述，以期促进PCR技术的进一步普及推广，并为食品和药品的快速鉴定、检测提供参考。

1 PCR技术在食品检测中的应用近些年来，国内的食品安全问题日益凸显，食物中毒事故时有发生，食品安全形势愈发严峻，给国人的身心健康与饮食安全带来严重威胁。

除此之外，食品安全问题还影响和制约了食品工业的发展，因此食品质量的检测环节就显得尤为重要。

由于PCR技术具有快捷、准确等优点，被广泛应用于食源性致病菌、非致病菌、食品成分等检测当中。

2种艰难梭菌感染检测方法的比较与分析孔建新;蔡心安【摘要】目的比较酶联免疫荧光分析(ELFA)与实时荧光定量PCR(PCR)2种艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)检测方法的检验性能,从中选择灵敏度高、特异性好且操作简便的CDI检验方法开展临床检验.方法对来自重症监护病房(ICU)、消化内科及感染科等临床科室的126份粪便标本进行艰难梭菌毒素或基因检测.以产毒培养试验(toxigenic culture,TGC)结果作为参考标准,评价ELFA与PCR方法的性能,同时分析我院及各科室的CDI流行情况.结果 TGC检测126份腹泻患者的粪便标本,阳性率为19.0％ (24/126),其中ICU、消化内科感染率较高.ELFA和PCR方法的检测敏感性分别为66.7％和91.7％,差异有统计学意义(x2=4.55,P＜0.05);特异性、阳性预测值、阴性预测值与准确度差异无统计学意义.结论我院CDI形势较为严峻,以ICU和消化内科最为突出.PCR与ELFA均能够提供更为准确、可靠的检测结果,但前者敏感性较好.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2014(032)008【总页数】2页(P632-633)【关键词】艰难梭菌;毒素;聚合酶链反应;酶联免疫荧光分析;伪膜性肠炎;抗生素相关性腹泻【作者】孔建新;蔡心安【作者单位】解放军第105医院检验科,合肥230031;解放军第105医院检验科,合肥230031【正文语种】中文【中图分类】R516.1艰难梭菌(Clostridium difficile，CD)是抗生素相关性腹泻、院内感染性腹泻及伪膜性肠炎的主要病原菌。

感染患者临床表现不典型，轻者表现为自限性腹泻，重者可出现伪膜性肠炎及中毒性巨结肠，临床诊疗存在较大困难。

因此本研究以金标准产毒培养试验(toxigenic culture，TGC)作为参考[1]，比较分析了酶联免疫荧光分析(ELFA)和实时荧光定量PCR(PCR)两种方法的性能，寻找快捷、经济、优异的艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection，CDI)检验方法以辅助临床诊断。

内分泌科住院患者多重耐药菌感染及抗生素使用情况摘要：目的:对内分泌科住院患者多重耐药以及抗生素使用情况进行分析，对临床中抗感染控制办法进行指导。

针对我院在2020-2022年期间内分泌科患者的临床资料进行分析整理，采用全自动细菌分析系统鉴定病原菌种类。

并且采用本系统对病菌得耐药性开展实验，采用PCR扩增检测主要多重耐药菌的耐药基因，最终得出多重耐药菌感染患者共分离出多重耐药菌85株，革兰阴性菌60株，其中大肠埃希菌34株，肺炎克雷伯菌17株，鲍曼不动杆菌9株，革兰阳性菌25株，其中金黄色葡萄球菌16株，溶血葡萄球菌9株。

2015年未检出多重耐药菌。

2016-2018年分别分离出1830株和37株，从尿液、痰液、血液和伤口分泌物中分别分离出402413株和8株多重耐药菌。

大肠埃希菌的检出率分别为47.06%、28.24%、15.29%和9.41%，金黄色葡萄球菌的IntI1基因、I类整合子遗传标记基因、､acra基因和､acrb基因的阳性检出率分别为23.53%、73.53%、50.00%、55.88%和47.06%。

acA+ermC､icaA､icaD基因的阳性检出率分别为50.00%、62.50%、43.75%、12.50%、37.50%、43.75%和31.25%。

2015-2018年多重耐药菌总感染率为5.88%，各年多重耐药菌感染率为0.00% 6.19% 5.60。

关键词：内分泌科；多重耐药菌感染；抗生素使用情况引言内分泌疾病多为患者机体内激素分泌过剩或者不足,从而引起患者内分泌功能失调而导致。

在治疗上以药物治疗为主,为了稳定病情患者需要长期服药甚至终身服药。

由于患者多存在基础疾病,同时自身抗力差,因而患者易发感染。

一旦发生院内感染,不但会延长患者治疗周期,还会增加重症和死亡风险。

有研究认为感染是糖尿病的第二大死因,因而对感染的防范和治疗有着重要意义。

由于抗感染治疗过程中使用各类抗生素进行治疗,而内分泌患者自身免疫力差不易恢复,因而常有多重耐药菌检出。

曲霉菌属、新型隐球菌及耶氏肺孢子菌核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）说明书【产品名称】通用名称：曲霉菌属、新型隐球菌及耶氏肺孢子菌核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）【包装规格】24人份/盒，48人份/盒【预期用途】本试剂盒用于体外定性检测人痰液样本中曲霉菌属、新型隐球菌和耶氏肺孢子菌的核酸DNA。

本试剂用于肺部曲霉菌属、新型隐球菌和耶氏肺孢子菌真菌感染的辅助诊断，不能单独作为确诊的依据。

适用人群主要为免疫低下、免疫缺陷人群，其他人群应有肺部真菌感染相关指征。

真菌感染常见于免疫低下或缺陷人群，具有较高的发病率和死亡率，其临床症状表现不具有特异性，易被细菌、病毒等感染掩盖，临床上致病菌包括曲霉菌属、隐球菌、耶氏肺孢子菌等，检测多重真菌可用于辅助临床诊断。

本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

该产品检测阳性不能确定标本中有活病原菌，检测结果应结合其他临床诊断综合判断。

本产品对于曲霉菌属的检测不能确认具体菌种，如有必要临床应考虑对于曲霉菌属阳性结果进一步确认感染的菌种。

【检验原理】本试剂盒分别选取曲霉菌属18s rRNA基因、新型隐球菌ITS基因和耶氏肺孢子菌mtLSUrRNA基因中保守的区域设计特异性引物和探针，在样本DNA核酸纯化之后采用荧光PCR对DNA进行检测。

本试剂盒采用实时荧光定量PCR技术，PCR扩增过程中，探针与模板结合，其5’端报告基团被Taq酶5’→3’外切核酸酶活性切断，使报告基团远离淬灭基团，产生荧光信号。

荧光定量PCR仪器根据检测到的荧光信号自动绘制出实时扩增曲线，并计算出样本Ct值（每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数）。

曲霉菌属、新型隐球菌、耶氏肺孢子菌荧光标记分别为FAM、VIC、CY5。

本试剂盒反应体系含有dUTP-UDG防污染措施，避免操作产生的假阳性结果；采用内源性内标质控体系，通过内标对待测样本的采集、运输和提取过程进行监控，避免检测结果的假阴性，内标基因选择人源管家基因RP，荧光标记为ROX。