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淫羊藿炮制前后UPLC_PDA_MS的指纹图谱研究

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2012年第70卷 化 学 学 报

Vol. 70, 2012

第5期, 635～642 ACTA CHIMICA SINICA No. 5, 635～642

* E-mail: xiaobinjia_nj@126.com

Received May 27, 2011; revised September 5, 2011; accepted November 22, 2011.

Project was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 20973944).

国家自然科学基金(No. 20973944)资助项目.

·研究论文·

淫羊藿炮制前后UPLC-PDA-MS的指纹图谱研究

朱粉霞a

赵永刚b

贾晓斌*,a

韦英杰a

张振海a

古丽娜尔⋅吾拉孜汗a

(a

江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室 南京 210028)

(b

江苏省环境监测中心 南京 210036)

摘要 建立了朝鲜淫羊藿和柔毛淫羊藿药材的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱分析方法, 实验结果表明, 两个品种的

指纹图谱差别较大, 朝鲜淫羊藿标出35个共有峰, 质谱鉴定了26个峰, 柔毛淫羊藿标出13个共有峰, 质谱鉴定了9

个峰; 研究了朝鲜淫羊藿和柔毛淫羊藿炮制前后UPLC指纹图谱的变化规律, 指纹图谱发生了五处变化. 该法快速、简

便, 重现性好, 从整体上显示淫羊藿药材和炮制品的特征, 为淫羊藿的生品和炮制品的质量控制提供了有效手段.

关键词 淫羊藿; UPLC-PDA-MS; 炮制; 指纹图谱

Study on Fingerprint of Crude and Processed Epimedium by

UPLC-PDA-MS

Zhu, Fenxiaa

Zhao, Yonggangb

Jia, Xiaobin*,a

Wei, Yingjiea

Zhang, Zhenhaia

Wulazihan, Gulinaera

(a

Key Laboratory of New Drug Delivery System of Chinese Meteria Medica, Jiangsu Provincial Academy of Chinese Medi-

cine, Nanjing 210028)

(b

Jiangsu Environmental Monitoring Center, Nanjing 210036)

Abstract The fingerprint chromatograms of E. koreanum Nakai and E. pubescens Maxim were established

by UPLC. The results showed that the fingerprints of two species were significantly different. There were 35

common peaks in crude drug of E. koreanum Nakai in which 26 peaks were identified, and 13 common

peaks in crude drug of E. pubescens Maxim in which 9 peaks were identified, by MS respectively. Addition-

ally, there were 5 differences in fingerprint between crude drug and processed product. This method with

desirable rapidness, simplity and repeatability can be used for the quality evaluation of crude and processed

Epimedium.

Keywords Epimedium; UPLC-PDA-MS; processed; fingerprint

淫羊藿具有补肾助阳、祛风除湿之功效, 为中医临

床常用的中药之一. 淫羊藿临床多以炮制入药, 目前对

其炮制的研究主要集中于总黄酮和淫羊藿苷的变化[1,2]

.

历届《中国药典》中关于淫羊藿的炮制规定是在加热条

件下进行, 本课题组在前期研究中以淫羊藿苷为主要考察指标, 考察了加热温度和时间对淫羊藿苷含量变化的

影响[3]

. 然而中药的药效不是来自单一活性化学成分,

而是来自多种活性成分之间的协同整体作用. 中药指纹

图谱能全面、综合地反映所含成分的相对关系, 较好地

体现中药成分的复杂性和相关性. 淫羊藿的主要化学成

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化 学 学 报 Vol. 70, 2012

分为黄酮类化合物, 其指纹图谱研究多以高效液相色谱

(HPLC)[4

～6]

为工具, 加热炮制前后黄酮类化合物整体指

纹图谱的变化规律目前尚无文献报道.

超高效液相色谱仪(Ultra Performance Liquid Chro-

matography, UPLC)具有超高压、超高灵敏度、超高分离

度等特点, 在中药等复杂体系的分离分析上有明显优

势. UPLC与MS联用可以进一步鉴定化合物的结构, 能

够全面快速地阐明中药的化学物质基础, 是目前分析中

药复杂系统的最有力工具之一. 淫羊藿是药用来源种类

最多的中药之一, 《中国药典》中收载了5种之多, 本

工作以目前药材市场上流通较多的朝鲜淫羊藿和柔毛

淫羊藿为对象, 以UPLC研究其加热炮制前后指纹图谱

的差异性, 并结合UPLC-MS技术, 对主要共有峰的结

构进行了鉴定, 揭示了炮制前后化学成分的种类和含量

的变化规律, 为进一步研究淫羊藿的炮制机理提供实验

数据, 对于揭示中药炮制的科学内涵和化学物质基础具

有重要的理论意义和应用价值.

1 实验部分

1.1 仪器与试药

Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪, 包括二

元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测

器(DAD)以及Waters Empower2软件(Waters公司).

UV-2802 型紫外分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公

司). MettlerToledo分析电子天平(Mettler Toledo 分析仪

器有限公司); Anke 离心机TGL216G (上海安亭科学仪

器厂). KQ5200DE型数控超声仪(昆山市超声仪器有限

公司). 电热恒温鼓风干燥箱DHG-9070A型(上海精宏

实验设备有限公司).

乙腈(美国, Merck公司)、乙酸(美国, Tedia Company

公司)和甲醇(美国, Tedia Company公司)均为色谱纯.

新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰碱、淫羊藿苷

和金丝桃苷购自中国药品生物制品检定所. 朝藿定A,

朝藿定B, 朝藿定C, 宝藿苷I对照品为江苏省中医药研

究院中药制剂室自制(纯度均高于98%). 10批朝鲜淫羊

藿药材和14批柔毛淫羊藿药材分别来自辽宁、吉林、

重庆等地.

1.2 测定方法

1.2.1 色谱条件

色谱条件1: 色谱柱为 Waters BEH C18 (2.1 mm

×50 mm, 1.7 μm); 流动相: 乙腈(A)和0.1%乙酸水溶液

(B), 梯度洗脱程序: 0～7 min, 15%～25% A; 7～11 min,

25% A; 11～17 min, 25%～35% A; 17～24 min, 35%～ 70% A; 24～26 min, 70%～100% A; 运行时间: 26 min;

检测波长: 270 mn; 流速: 0.2 mL/min; 柱温: 30 ; ℃进

样量: 2.5 μL.

色谱条件2: 色谱柱为 Waters BEH C18 (2.1 mm

×50 mm, 1.7 μm); 流动相: 甲醇(A)和0.1% 乙酸水溶

液(B), 梯度洗脱程序: 0～10 min, 5%～15% A; 10～11

min, 15%～30% A; 11～14 min, 30% A; 运行时间: 14

min; 流速: 0.4 mL/min; 检测波长: 310 nm; 柱温: 35 ; ℃

进样量: 2.5 μL.

1.2.2 质谱条件

Waters质谱仪, 电喷雾离子源, TQ检测器

(Manchester, UK), 扫描质量范围为50～1000 (质荷比).

从超高效液相流出来的样品直接进入质谱, 负离子模

式, 离子源温度和脱溶剂化温度分别是120和380 ℃,

毛细管电压为3.00 kV, 锥孔电压为－30 V, 脱溶剂化

气流和锥孔气流分别是650和50 L/h.

1.2.3 对照品溶液的制备

测定总黄酮对照品溶液的制备: 精密称取淫羊藿苷

2.00 mg置于10 mL容量瓶中, 加甲醇定容, 得200

μg/mL淫羊藿苷储备液. 取此储备液分别加甲醇稀释成

不同浓度的对照品溶液, 作为测定总黄酮的标准系列溶

液.

指纹图谱对照品溶液的配制: 分别称取金丝桃苷、

朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷-I

适量, 置于10 mL容量瓶中, 以50%的甲醇溶解并定容,

过0.22 μm微孔滤膜, 待用. 以色谱条件1进样.

1.2.4 供试品溶液的制备

将淫羊藿叶片混匀, 分成三份, 一份粉碎过50目

筛, 用于生品研究; 一份置恒温箱内加热炮制(炮制温

度为170 ℃, 时间7 min)后, 粉碎过50目筛, 作为叶片

炮制品; 第三份粉碎过50目筛后, 置恒温箱内加热炮制

(炮制温度为170 ℃, 时间7 min), 作为粉末炮制品. 称

取淫羊藿生品粉末、叶片炮制品粉末和粉末炮制品粉末

各0.1 g, 分别加入甲醇10 mL, 称重, 超声提取1 h, 放

至室温, 补足失重, 离心10 min (3000 r•min－1

).

精密吸取上述离心后上清液0.5 mL, 置50 mL容量

瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 作为测定总黄酮的供试品

溶液.

精密吸取上述离心后上清液2.00 mL, N

2吹干, 残

渣以50%的甲醇定容于5 mL的容量瓶中, 过0.22 μm微

孔滤膜, 待用, 分别以色谱条件1和色谱条件2进样测

定指纹图谱.

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淫羊藿属主要资源种类的HPLC指纹图谱特征和种类鉴定

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裴利宽;郭宝林;黄文华

【期刊名称】《中国中药杂志》

【年(卷),期】2008(33)14

【摘 要】目的:淫羊藿的物种鉴定一直是中药材研究和应用中比较困难的问题,本实验旨在尝试建立一种淫羊藿药材物种鉴定方法。方法:对淫羊藿Epimedium

brevicornu、箭叶淫羊藿E.sagittatum、柔毛淫羊藿E.pubescens、朝鲜淫羊藿E.koreanum、巫山淫羊藿E.wushanense、粗毛淫羊藿E.acuminatum、天平山淫羊藿E.myrianthum和黔岭淫羊藿E.leptorrhizum等8个淫羊藿药材主要来源物种,以及淫羊藿属的其他24个物种中黄酮类成分的HPLC指纹图谱进行了研究,提取可用于种类鉴定的特征。结果与结论:朝鲜淫羊藿具有的HPLC指纹特征,可以区别于其他物种,心叶淫羊藿、粗毛淫羊藿、天平山淫羊藿的大部分样品也具有可资鉴别的指纹特征,而柔毛淫羊藿和黔岭淫羊藿种内图谱模式相对稳定,但是难以与其他物种区别,箭叶淫羊藿和巫山淫羊藿则种内图谱变化十分复杂。本研究也展示出淫羊藿药材质量极其不稳定。

【总页数】7页(P1662-1668)

【关键词】淫羊藿药材;鉴定;HPLC指纹图谱;黄酮类成分

【作 者】裴利宽;郭宝林;黄文华

【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所

【正文语种】中 文 【中图分类】R284.1

【相关文献】

1.菟丝子属植物常见种类鉴定特征及防控方法 [J], 田立超;万涛;吴道军;何思瑶

2.HPLC指纹图谱在蜂蜜种类识别中的应用研究 [J], 曹炜;郑建斌

3.落羽杉属种类及其杂交子代'中山杉'系列品种的SSR指纹图谱构建及遗传关系分析 [J], 段豪;徐建华;王紫阳;郭金博;於朝广;杨颖

4.中药淫羊藿主要资源种类药材质量的系统研究 [J], 裴利宽;黄文华;何天谷;郭宝林

补肾强身片UPLC指纹图谱

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林秀莲;宋粉云;李华;黄寿辉

【期刊名称】《中成药》

【年(卷),期】2017(039)003

【摘 要】目的 建立补肾强身片(淫羊藿、菟丝子、金樱子等)UPLC指纹图谱.方法

该药物50％乙醇提取液的分析采用Agilent SB-C18色谱柱(100 mm ×4.6

mm,2.7 μm);以乙腈-0.1％磷酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;检测波长215 nm;柱温40℃.再通过聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析对指纹图谱进行评价.结果 12批样品的UPLC指纹图谱中有20个共有峰,并鉴定出9个(原儿茶酸、红景天苷、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷、朝藿定C、淫羊藿苷、山柰素、宝霍苷Ⅰ),相似度0.843～0.970.12批样品可分成3类,并找到4个差异标志物,包括特女贞苷和绿原酸.结论 该方法简便可靠,可用于补肾强身片的质量控制.

【总页数】5页(P551-555)

【作 者】林秀莲;宋粉云;李华;黄寿辉

【作者单位】广东药科大学中药学院,广东广州510006;广东药科大学药学院,广东广州510006;广东省药品检验所,广东广州510180;广东省药品检验所,广东广州510180

【正文语种】中 文

【中图分类】R284.1 【相关文献】

1.一步制粒法在补肾强身片生产中的应用 [J], 庞凤华;郑捷;罗佩霞

2.补肾强身片微生物限度检查方法研究及质量分析 [J], 解慧;郭福庆

3.近红外光谱法快速鉴别不同厂家的补肾强身片 [J], 曲佳;陈卓;刘小瑞;王杰

4.补肾强身片质量标准提高研究 [J], YANG Qiqi; ZHU Xujiang; WANG Lanxia

5.补肾强身片的鉴别 [J], 张留芳;邱德宏

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基于黄酮成分吸收代谢的炙淫羊藿炮制机制研究

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淫羊藿为传统补益类中药，经羊脂油炙后可增强温肾助阳的作用。以往文献对淫羊藿的炮制研究主要集中在化学成分变化和药理药效变化2个方面，本课题组创新性从黄酮成分吸收代谢角度，并基于活性成分转化-肠吸收屏障网络耦联作用研究炙淫羊藿的炮制机制。炙淫羊藿炮制作用分为炮制过程“热”和炮制辅料“羊脂油”的作用2个关键环节，课题组通过连续承担3项国家自然科学基金项目，从ADME角度着重阐明了炙淫羊藿炮制过程中“热”的作用与科学内涵，并首次提出基于“自组装胶束”体内形成机制阐述炮制辅料“羊脂油”的作用与增效机制。该文就课题组多年来对炙淫羊藿炮制机制的研究思路和成果进行总结，并对后续的研究方向和内容进行展望，以期为现代中药炮制机制研究提供新思路与新方法。

标签： 制淫羊藿；炮制机制；黄酮；吸收代谢；热；羊脂油

淫羊藿为我国传统的补益中药，具有补肝肾、强筋骨、祛风湿的功效，临床常用于阳痿遗精、筋骨痿软、风湿痹痛等。淫羊藿有生品和炮制品之分，其炮制方法主要有清炒、酒炙、盐炙和油炙等，其中羊脂油炙最为普遍，且被药典收载。传统炮制理论认为，淫羊藿经羊脂油炙后，可增强温肾助阳的作用[2]。炙淫羊藿炮制作用可分为炮制过程“热”和炮制辅料“羊脂油”的作用2个关键环节。课题组针对炙淫羊藿的炮制机制，已相继承担了3项国家自然科学基金项目“ADME/Tox阐述淫羊藿炮制机理研究”、“ADME/Tox阐述淫羊藿炮制机理研究（续）”以及“基于体内自组装胶束形成机理的羊脂油炙淫羊藿增效机理研究”。前2项首次从ADME角度着重阐明了炙淫羊藿炮制过程中“热”的作用与科学内涵，后一项创新性从药剂学角度重点阐述炮制辅料“羊脂油”的作用与增效机制。研究成果荣获2009年中华中医药学会科技进步一等奖、2010年江苏省科技进步二等奖、南京市科学技术进步二等奖。本文就课题组多年来对炙淫羊藿炮制机制的研究思路和成果进行总结，并对后续的研究方向和内容进行展望，以期为现代中药炮制机制研究提供参考和借鉴。

淫羊藿提取物的质量研究

淫羊藿提取物的质量研究

淫羊藿提取物的质量研究

彭玉德;黄文华;郭宝林

【期刊名称】《中国中药杂志》

【年(卷),期】2007(32)18

【摘 要】目的:考察目前市场上淫羊藿提取物的质量。方法:采用HPLC测定市售的淫羊藿提取物中朝藿定C、淫羊藿苷、箭藿苷B的含量和指纹图谱,紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果:大部分提取物中淫羊藿苷含量与公司提供的标示量一致,全部测定样品的指纹图谱分为3类,分别对应于不同的来源药材,淫羊藿苷标示含量相同的样品中朝藿定C、箭藿苷B以及总黄酮的含量存在差异。结论:将提取物指纹图谱与药材指纹图谱进行比对,可以初步确定其来源的药材,药材的不同是造成提取物质量差异的主要因素,建议淫羊藿提取物应该标示药材来源,并进行多项的含量检测,以便实现提取物质量的稳定。

【总页数】4页(P1858-1861)

【关键词】淫羊藿;提取物;淫羊藿苷;朝藿定C;箭藿苷B;总黄酮;HPLC指纹图谱;质量

【作 者】彭玉德;黄文华;郭宝林

【作者单位】中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所

【正文语种】中 文

【中图分类】R284.1

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