原花青素的测定
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原花青素的分光光度测定法
本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡萄子鱼松树皮提取物）中原花青素含量的测定。
1.方法提要
原花青素（也称缩合单宁）是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体，属多酚类化合物。
与其他酚类化合物不同，黄烷醇（缩合单宁、单体、双体）在酸性介质中可与香草醛反应，生成在500nm处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含量。
2.仪器
分光光度计。
3.试剂
所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。
（2）提纯的原花青素或儿茶素。
（3）4%香草醛甲醇液。
（4）标准使用液：将提纯的原花青素溶于蒸馏水，制成1mg/ml储备液，将储备液稀释至终浓度为1.0×10-2mg/ml至1mg/ml的标准使用液。
标准使用液应于测定当天配制。
如无提取纯的原花青素，可用儿茶素代替，配制方法同上。
4.测定步骤
（1）样品中原花青素液的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水（7+3，体积比）或者经60%甲醇提取，40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相再经乙醚洗涤后定容。
冰冻干燥的固体原花青素制剂，直接溶于水中（先加少量甲醇助溶），制成原花青素液。
原花青素液于5℃下暗环境中保存备用。
（2）样品的测定：用锡箔将试管（14m m×120mm）包裹严，仅留管口用于加样。
向管内加入试样0.5ml，再加3.0ml4%香草醛甲醇液混合，然后加入1.5ml浓盐酸，彻底混匀，室温下显色15min，也可在暗环境下进行以上操作。
最后在500nm处比色。
可按以上操作步骤制得标准曲线（0.1mg原花青素在500nm处的吸收值为0.55）。
5.结果计算
计算原花青素量的公式：
原花青素（1×10-3mg）=A500nm÷0.55×100×V
式中 V——试样稀释体积（倍数）。
6.注释
（1）本方法的检测范围为（5～500）×10-3mg/0.5ml样液。
精密度与准确度大于1×10-3mg。
（2）反应试管应用清洁剂浸泡24小时，彻底洗涤干净。
（3）进行比色时，用水作空白对照。
（4）500nm处的OD值应控制在3以下。
（5）试样中花青素含量较高时，应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。
（6）显色液应避光放置。
