小蓟农药生物活性初探

第２７卷第２期　２００８年６月　延安大学学报（自然科学版）　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｙａｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　Ｖｏ１．２７　Ｎｏ．２　Ｊｕｎｅ．２００８　

小蓟农药生物活性初探　

杨　华　，李海琴　，宋延卫　，田　锐　

（１．延安大学化工学院；２．延安市环境保护监测站，陕西延安７１６０００）　

摘要：对小蓟石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物的杀虫、抑茵生物活性测定表明：在浓　

度为５００　ｍｇ／Ｌ时，三种提取物对五种供试菌种均没有明显的抑茵活性；在浓度为５％时，石油醚提　取物对三龄粘虫具有一定的胃毒活性；在活性追踪的指导下，分离得到一具有拒食活性的纯化合物　

（Ｃ　４）　一谷甾醇，为一已知化合物。　关键词：小蓟；杀虫活性；　一谷甾醇　

中图分类号：０１７４文献标识码：Ａ　文章编号：１００４－６０２Ｘ（２００８）０２－００４９４２３　

小蓟（Ｃｉｒｓｉｕｍ　ｓｅｇｅｔｕｍ）…又名猫蓟、刺儿菜、野　

红花、大小蓟、小刺盖、青青菜等，为菊科蓟属刺儿菜　的干燥地上部分。全国各地均产，主产于安徽、山　

东、江苏、甘肃、陕西等省　ｊ。其主要含有黄酮　类Ｌ３ｊ、有机酸类和醇类等化学成分。　

小蓟为历代中医临床的常用药之一，具有凉血　

止血、去瘀消肿的功能，也用于治疗吐血、尿血、便　血、外伤出血、痈肿疮毒等，该植物在医学方面，已有　

相当深入的研究，。但其在农药生物活性方面，研究　报道的很少。为了探讨该植物作为一种植物源农药　

利用的可能性，笔者就其植物的茎通过不同溶剂进　

行提取，对其进行杀虫、抑菌生物活性的筛选；并以　

活性追踪为指导，对小蓟活性成分进行了分离提纯。　

１材料与方法　

１．１供试材料　供试植物为小蓟（Ｃｉｒｓｉｕｍ　ｓｅｇｅｔｕｍ）采于陕西榆　

林田地里。取其茎于阴凉处干燥，粉碎后。　供试昆虫为粘虫（Ｍｙｔｈｉｍｎａ　ｓｅｐａｒａｔａ　Ｗａｌｋｅｒ）３　

龄幼虫，室内人工饲养，由西北农林科技大学农药究　

所提供，饲养条件为室温２５±１℃；蚜虫（Ａｐｈｉｄ）采　于陕西延安苹果树上。　

供试病菌：小麦赤霉病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｇｒａｍｉｎｅａ—　ｒｕｍ）、苹果炭疽病菌（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ　ｃｉｎｇｕｌａｔａ）、西瓜枯　

萎病菌（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍ　ｓｐ　ｎｉｖｅｕｍ）、番茄早疫病菌　

（Ａｈｅｒｎａｒｉａ　ｓｏｌａｎｉ）、马铃薯干腐病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓ．　ｐｏｒｉｕｍ），由西北农林科技大学农药研究所微生物实　

验室提供。　试剂：甲醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等溶　

剂，均为分析纯，西安化学试剂厂生产。　１．２方法　

１．２．１粘虫杀虫活性测定　粘虫胃毒活性测定：采用载毒叶片法Ｌ４　ｊ。挑　

选刚蜕皮的粘虫３龄幼虫，置于直径６　ａｍ的培养皿　中，每皿ｌ虫，饥饿２４　ｈ。将供试样品以丙酮配成　

５％（Ｗ／Ｖ）的溶液，用１　Ｌ微量点滴器点１　Ｌ于　０．５　ａｍ　ｘ０．５　ａｍ的小麦叶片上，即成载毒叶片。每　

处理３０头试虫，每虫饲喂一片载毒叶片，于养虫室　

中饲养。同时设丙酮点滴叶片对照。２４　ｈ后检查　死亡情况，并利用式（１）计算死亡率。　粘虫触杀活性测定：采用点滴法Ｌ４　ｊ。挑选个　

体大小基本一致的粘虫３龄幼虫，置于直径６　ａｍ的　

收稿日期：２００８—０３—１４　基金项目：延安大学校级项目（ＹＤ２００５—０４２）　作者简介：杨华（１９７９一），女，陕西延安人，延安大学助教，硕士。

　维普资讯 http://www.cqvip.com 第２期　杨华，宋延卫，等：小蓟农药生物活性初探　４９　

培养皿中，每皿１虫。将供试样品以丙酮配成５％　（Ｗ／Ｖ）的溶液，用１　Ｌ微量点滴器点１　Ｌ于３龄粘　

虫幼虫的前胸背板，每处理３０头试虫，同样设点滴　丙酮溶剂的处理，不定时的观察试虫的反应，２４ｈ后　

检查死亡情况，并利用式（１）计算死亡率。　蚜虫触杀活性测定　Ｊ：用毛笔挑起大小一致　

的蚜虫，将其背部粘在载玻片的双面胶上，每行粘　

１０头，粘２—３行，将石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取　

物，用丙酮配成５％（Ｗ／Ｖ）的溶液，用微量进样器　（１　Ｌ）点０．５　Ｌ于蚜虫的前胸背板，每处理３Ｏ个重　复，设丙酮处理对照。不定时的观察蚜虫的反应，　

２４　ｈ后检查死亡情况，并利用（１）计算死亡率。　

死亡率（％）＝　ｘ　ｌ００　（１）　

１．２．２抑菌活性测定：采用抑制菌丝生长速率　

法　。将供试样品用１　ｍＬ丙酮溶解，然后在无菌　

条件下用ＰＤＡ培养基稀释至一定浓度，倒入直径为　９　ｅｍ×９　ｅｍ的无菌玻璃培养皿中，培养基凝固后，　

在每个培养基平面放入１个供试菌的菌饼（直径为　

４ｒａｍ），使菌饼带菌丝的一面贴在培养基表面，每个　

处理重复３次，以丙酮为对照。放置于２５℃培养　箱中培养，７２　ｈ后用十字交叉法测定供试菌菌落生　

长直径，并利用式（２）计算菌丝生长抑制率。　菌丝生长抑制率（％）＝　

鸳　×１０ｏ　（２）　对照菌落直径　…～　

１．２．３粗提物的制备　

制备小蓟的石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取物：取　小蓟粗粉５００　ｇ置于一１０００　ｍＬ三角瓶中，以５００　

ｍＬ石油醚、乙酸乙酯、甲醇顺序超声波提取，超声提　

取各３次，每次２　ｈ，过滤，滤液合并，减压回收溶剂　

后，置通风橱挥干，得石油醚浸膏（８　ｇ）、乙酸乙酯浸　

膏（１０　ｇ）和甲醇浸膏（１２　ｇ）。　１．２．４活性成分的分离　

采用活性追踪法，应用常压柱层析对小蓟石油　

醚浸膏中活性成分进行初步分离。每次均选取活性　

较高且样品量较大的馏分进行下一次分离，结合重　结晶、ＴＬＣ等技术，分离具有一定活性的化合物。　

２结果与分析　

２．１小蓟的生物活性　

２．１．１杀虫生物活性　

小蓟石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取物对蚜虫、三　龄粘虫的生物活性测定结果见表１。　

表１　小蓟提取物对蚜虫、三龄粘虫的杀虫生物活性　

注：供试样品的浓度为５％（Ｗ／Ｖ）　由表１可知，小蓟的３种提取物浓度为５％时，　

对蚜虫、三龄粘虫均没有明显的触杀活性，但石油醚　

提取物对三龄粘虫具有一定的胃毒活性，其死亡率　达到３０％。　

２．１．２抑菌活性测定　

采用抑制菌丝生长法测定小蓟３种供试样品抑　制菌丝生长，结果见表２。　表２小蓟３种供试样品对５种病菌菌丝生长的抑制作用　

供试病菌　抑制率（％）　

石油醚提取物乙酸乙酯提取物甲醇提取物　

注：表中各供试样品的浓度为５００　ｍｇ・Ｌ　（ｗ／ｖ）　表２结果表明，小蓟的石油醚提取物、乙酸乙酯　

提取物、甲醇提取物浓度为５００　ｍｇ・Ｌ　时，对西瓜　枯萎病菌、马铃薯干腐病菌、苹果炭疽病菌、小麦赤　霉病菌及番茄早疫病菌均没有明显的抑菌活性，其　

抑制率均低于２０％。　

２．２杀虫活性成分分离　２．２．１一级柱层析分离　采用常压柱层析分离。样品８　ｇ用石油醚溶　

解，拌入５　ｇ硅胶（１００—２００目），通风橱中吹干。　层析硅胶２００—３００目，湿法装柱，柱长度为２０　ｃｍ，　

柱径４　ｅｍ，干法上样，上样高度２　ｅｍ。以Ｖ石油醚：　

Ｖ丙酮（１００：０、９０：１０、８０：１０、６０：１０、

５０：１０、３０：１０）为　维普资讯 http://www.cqvip.com 延安大学学报（自然科学版）　第２７卷　

洗脱剂，甲醇清柱，每个体系洗１０００　ｍＬ，等体积１００　

ｍＬ收集馏分，共得馏分１４４份，ＴＬＣ检测合并，记为　

Ｌ。、Ｌ２、　…Ｌ　。采用载毒叶片法测定了各馏分对三　

龄粘虫的生物活性，结果见表３。　表３一次柱层析部分馏分对三龄粘虫的胃毒作用　

注：表中各馏分的浓度均为５％（ｗ／ｖ）　由表３表明，Ｌ。、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ，均没有明显的胃毒活　

性，而Ｌ４对三龄粘虫具有一定的胃毒活性，其死亡　

率达到４０％。　

２．２．２二级柱层析分离　对Ｌ４采用常压柱层析分离，柱长度２０　ｅｍ，柱　

径２　ｅｍ，共上样品０．２１８　ｇ，Ｖ石油醚：Ｖ丙酮（８０：１０、６ｏ：　

１０、５０：１０、３０：１０）梯度洗脱，甲醇清柱。每个体系洗　１００　ｍＬ，等体积２０　ｍＬ收集馏分，共收集馏分３５份，　

ＴＬＣ检验合并为６份，记为Ｙ。一Ｙ　，Ｙ　馏分有大量　

白色结晶出现，经三次重结晶得纯化合物Ｃ。　（１４　

ｍｇ）。测定了各馏分对三龄粘虫的生物活性，结果　见表４。　

表４二次柱层析部分馏分对三龄粘虫的胃毒作用　

馏分　ＹＩ　Ｙ２　Ｙ３　Ｙ４　Ｙ５　Ｙ６　对照　

胃毒死亡率（％）１Ｏ　１２．５　１８．２　２８．５　９．４　１１．５　６．２　

注：表中各馏分的浓度均为５％（ｗ／ｖ）　由表４表明，Ｙ。、Ｙ　、Ｙ３、Ｙ　、Ｙ　对三龄粘虫均没　

有明显的胃毒活性，Ｙ　对三龄粘虫有一定的胃毒活　

性，其死亡率为２８．５％。　

２．２．３　Ｃ。　化合物生物活性测定结果　采用载毒叶片法测定Ｃ。　的生物活性，结果发现　

其具有较强的拒食活性，在２０００和３０００　ｇ・ｍＬ　

浓度下，供试昆虫仅在饲叶边缘有咬动的小痕迹，且　试虫品尝载毒叶片后，不再取食。在２２５、３５０、６００　

ｇ・ｍＬ　浓度下，供试昆虫开始取食，但与对照组　相比，试虫间歇取食，且取食量明显减少，说明其具　

有一定的拒食活性。　

２．３化合物结构鉴定　化合Ｃ　白色针状结晶（丙酮），ｍ．Ｐ．１３５．２℃　

一１３７．７℃（文献值为１３６℃一１３８℃）。在ＴＬＣ硅胶　

板上无紫外吸收，碘缸显色。薄层层析Ｒ　值与１３一　谷甾醇标准品一致，质谱（ＦＡＢ—ＭＢ）与文献相符，　确定为１３一谷甾醇。　

Ｈ　Ｃ，　

３讨论　

在医药上，小蓟常被作为一种抑菌的中药材使　

用。但本次实验生测结果表明其并无明显的抑菌活　

性，可能是小蓟对常见的农用菌种无任何抑制作用，　也可能是实验所选的菌种太少并没有对具有抑菌活　

性的那一菌种进行实验，或者是没有提取到具有抑　

菌活性的化学成分。　

一次柱层析Ｌ４（活性最高馏分）馏分对三龄粘　

虫的胃毒死亡率为４０％，而二次柱层析Ｙ　（活性最　

高馏分）馏分对三龄粘虫的胃毒死亡率为２８．５％，　

明显表明其胃毒活性随分离过程在逐渐降低，这有　可能是在分离过程中活性成分分解、流失造成，也可　

能是植物中所含有的杀虫活性物质之间的协同作　

用，值得进一步的研究。　

由于该植物中的化学成分复杂，化合物数量众　

多，因此对该类化合物的分离具有一定的难度。如　何更有效的对其化学成分进行分离，寻找更为捷径　

的分离方法，从而得到种类和数量更多的化合物，值　得进一步的探讨。　

参考文献：　

［１］潘珂，尹用芹，孔令义．小蓟化学成分的研究［Ｊ］．中药科　技，２００６，８（４）：７—９．　［２］张来新．小蓟中提取分离黄酮类化合物的实验研究［Ｊ］．　中成药，２００４，２６（６）：５０３—５０４．　［３］陈毓，丁安伟，杨星吴，等．小蓟化学成分药理作用及临　床应用研究述要［Ｊ］．中医药学刊，２００５，２３（４）：６１４—　６１５．　［４］慕立义，吴文君，王开运．植物化学保护研究方法［Ｍ］．　北京：中国农业出版社，１９９１：３７—４５．　［５］吴文君．植物化学保护实验技术导论［Ｍ］．陕西：陕西　科学技术出版社，１９８８：４３～１７３．　［责任编辑贺小林Ｊ　

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