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几株水产用芽孢杆菌的功能分析

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几株水产用芽孢杆菌的功能分析
摘要：芽孢杆菌由于功能性强，作用明显，被广泛应用于水产养殖中。

为得到一株能有效净化养殖水环境的菌株，本试验从7株芽孢杆菌中筛选出具有高效降氨氮、亚硝态氮、产酶的菌种，其中C24的氨氮去除率达到75%；C22的亚硝态氮去除率可达64%；C12和C13产蛋白酶、淀粉酶能力突出。

研究认为可作为水产微生物制剂的候选菌种。

关键词：氨氮；亚硝酸盐；微生物制剂；水产养殖
中图分类号：S942.3 文献标识码：A DOI 编码：
10.3969/j.issn.1006-6500.2016.05.013
Analysis of Function of Several Strains of Bacillus in Aquaculture
YANG Yujia，CHEN Ying
（College of Life Sciences，Yantai University，Yantai，Shandong 264005，China）
Abstract：Bacillus is widely used in aquaculture，because of its functional，obvious effect. To obtain a strain which can effectively purify the water environment，in this study，the strains was screened from 7 Bacillus which have efficient ability of decomposition of ammonia，nitrite，enzyme production，
among which the ammonia removal rate of Bacillus C24 reached 75%，the nitrite nitrogen removal rate of Bacillus C22 was 64%，the protease，amylase ability of Bacillus C12 and C13 were highlight. It could be used as a candidate species for aquatic microbial agents.
Key words：ammonia；nitrite；microbial agents；aquaculture
近年来，我国水产养殖业不断发展，随着养殖规模逐渐扩大，养殖密集度、继续恶化程度的加深，养殖环境与水浴生态环境的矛盾也日益突出。

我国的水产养殖方式大多为静水养殖，养殖动物的活动、摄食、排泄都在同一池塘内进行，并且以单一品种高密度养殖为主，严重破坏了生态系统的平衡[1]。

在高密度养殖中，由于饲料的过量投喂，水产动物排泄物的积累以及渔药滥用，使得养殖水体不断恶化[2]。

水体污染物有来自于余料残饵中残留的蛋白质和淀粉，养殖动物粪便、残饵分解及肥料中的大量氨氮、亚硝酸氮和硫化物等，水质好坏直接关系着水产养殖的经济效益。

而如何调节和改善水体环境，降低和去除水体污染物（有机物、氨氮、亚硝酸盐）已经成为净化养殖水质的研究热点[3]。

就目前来看，用传统的物理及化学方法处理水体氨氮污染，虽然见效快，但投入较大，且容易引起二次污染，而利用微生物调节养殖水体水质被认为是目前最为经济、生态、环保的方法[4-6]。

芽孢杆菌因其具有生长速度快、易培养、抗逆性强等优点，已被越来越多的人所关注，芽孢杆菌具有高活性的消化酶系，能够分解养殖水体中的各种大分子有机物，谢航等研究表明，地衣芽孢杆菌在适宜的水体生态条件下对饲料残饵中的蛋白质与淀粉降解率为60%左右[7]。

有些芽孢杆菌还能降解水体中的氨氮和亚硝酸氮等有毒物质，净化水质，有研究表明，巨大芽孢杆菌在氨氮初始浓度为50 mg?L-1的环境下，24 h的氨氮降解率在95%以上[8]。

同时芽孢杆菌还能抑制某些病原微生物的生长[9]，提高免疫力，使养殖动物免受病害。

因此，芽孢杆菌作为水产微生物制剂的菌株具有广阔的应用前景[10]。

本试验探究几株市售产品中分离的芽孢杆菌的功能，研究它们的生长稳定性、有机物分解能力和氨氮、亚硝酸氮去除能力，为以后开发研制高效净水微生物制剂提供理论依据。

1 材料和方法
1.1 试验材料
菌种：从不同种市售芽孢杆菌产品中提取分离得到7株芽孢杆菌，分别是C10-2、C12、C13、C15、C22、C23和C24。

留种保存。

主要培养基如下。

（1）牛肉膏蛋白胨培养基（g?L-1）：牛肉浸膏3 g，蛋
白胨10 g，NaCl 5 g，固体培养基加1.5%的琼脂。

（2）生长速度测定培养基：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，K2HPO4 1 g，（NH4）2SO4 10 g，酵母膏0.5 g，MgSO4 0.4 g，水1 000 mL，pH 值7.0～7.2、115 ℃灭菌30 min。

（3）酪素水解培养基（g?L-1）：脱脂奶粉50 g，固体培养基加1.5%的琼脂。

（4）淀粉水解培养基（g?L-1）：牛肉浸膏 3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，可溶性淀粉2 g，固体培养基加1.5%的琼脂。

（5）卵磷脂酶测定培养基（g?L-1）：牛肉浸膏 3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，体积比1∶1的卵黄盐水溶液50 mL，固体培养基加1.5%的琼脂。

（6）耐盐性培养基：含3%NaCl的牛肉膏蛋白胨液体培养基。

（7）耐碱性培养基：pH值为10的牛肉膏蛋白胨液体培养基。

（8）氨氮降解筛选和测定培养基（g?L-1）：葡萄糖5.0 g，NH4Cl 2.0 g，NaCl 2.0 g，K2HPO4 1.0 g，MgSO4 0.5 g，FeSO4 0.2 g，pH 值7.0～7.5，固体培养基加1.5%的琼脂。

本试验对从不同种市售芽孢杆菌产品中提取分离得到的7株芽孢杆菌进行分类筛选，发现芽孢杆菌C24在基本培养基和高盐的培养基中均能旺盛生长，分泌胞外酶，对氨氮的降解率均达到75%以上，并且同时具有降低亚硝态氮的能力，说明其生长速度快，有一定的抗逆性，能有效去除水中氨氮，可
作为高效氨氮降解的水产试验菌种。

C22作为试验中唯一的
厌氧菌，生长速度缓慢，菌液浓度偏低，所表现出的酶活力、抑菌能力也较差，但在亚硝酸氮的降解试验中，对亚硝酸氮的降解率明显高于其他菌种，达到64.4%，可作为有效去除
亚硝态氮的水产试验菌种。

C12和C13生长迅速，产蛋白酶、淀粉酶能力较强，可作为水体有机质降解的水产试验菌株。

本次试验中得到的芽孢杆菌，虽然在去除氨氮，亚硝酸氮和有机物的降解等方面作用具有可行性，但其在应用实际生产中的降氨效果与有机物分解效率还需进一步研究。

参考文献：
[1] 易弋，容元平，程谦伟，等.养殖水体氨氮降解菌的分离和初步鉴定[J].贵州农业科学，2011（2）：154-157.
[2] 刘淑集，吴成业.水产饲用益生菌的作用机理及功效[J].天津农业科学，2010（5）：58-62.
[3] 张峰峰，谢凤行，周可，等. 一株高氨氮去除能力菌株的分离筛选及鉴定[J]. 华北农学报，2014（4）：221-225.
[4] 高宇，刘文斌，王莹，等. 可用于水体污染控制的氨氮转化菌筛选及部分降解特性的实验研究[J]. 环境工程学报，2010（4）：855-860.
[5] 王超，周爱国，邹记兴. 微生物制剂在净化养殖水体中的应用与展望[J]. 河北渔业，2012（10）：51-54.
[6] 茆健强，周国勤，陈兵，等. 复合微生物制剂改善池
塘水环境效果试验[J]. 水产养殖，2006（1）：25-27.
[7] 谢航，邱宏端，王秀彬，等. 地衣芽孢杆菌降解水产养殖中残余饵料的特性研究[J]. 福建水产，2008（3）：31-35.
[8] 侯颖，孙军德，徐建强，等. 养殖水体中高效氨氮降解菌的分离与鉴定[J]. 水产科学，2005（10）：22-24.
[9] AUSTIN B A，ROBERTSON P A W. The use of bacteris as probiotics in aquaculture[C]//Proceedings of international symposium on marine biotechnology，China. Qingdao：Ocean University of China，2000：218-221.
[10] 李永芹，许乐乐，陈克卫. 1株芽孢杆菌的筛选鉴定及其净水效果研究[J]. 水生态学杂志，2013（1）：96-100.
[11] 周冬仁，罗毅志，施伟达，等. 水产养殖用地衣芽孢杆菌的分离鉴定与其扩增培养基筛选[J]. 贵州农业科学，2014（7）：98-100.
[12] 彭虹旎. 短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus 4D-14）的分离与分子鉴定，抑菌性及微生态制剂应用研究[D].青岛：中国海洋大学，2013.。

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枯草芽孢杆菌在水产养殖中的使用方法

枯草芽孢杆菌在水产养殖中的使用方法

枯草芽孢杆菌在水产养殖中的使用方法
枯草芽孢杆菌在水产养殖中有两种使用方法，一种是净水用，另一种是内服，即添加到饲料中给水产动物食用。

枯草芽孢杆菌添加到饲料里给鱼喂养，可以改善鱼的肠胃功能，提高饲料的利润率，改善肉质，促进长生，防病效果很好。

鱼类可以增长10%左右,一般一个星期就能见效果，添加的比例不宜过多,300-500g/t左右就可以了,最高不宜超过0.1-0.2%。

将枯草芽孢杆菌与饲料均匀均匀搅拌即可投喂。

饲料厂可造粒。

枯草芽孢杆菌净化水质，高密度养殖情况下，每亩一米深水的塘，按200-400克来添加，根据水质的情况及水深多少使用，可多可少，最好在上午9-11点左右有点太阳时开始使用，水温在25度以上为宜，水温太低的话，效果不怎么好。

建议不低于15度水温使用。

枯草芽孢杆菌是耗氧菌，使用时需要增氧，开打氧机或洒增氧剂都可以，淡水养殖如果没有增氧设备，添加量要求减少，可在100g/亩左右。

使用前最好活化一下，具体是：枯草芽孢杆菌：红糖：水按1：0.5：20左右的比例浸泡2小时以上后使用，浸泡过程如能打氧效果更佳。

塘底淤泥较多的塘可以加量使用。

再次强调，使用时一定要增氧，否则可能会出现水产动物因为缺氧死掉，一般7-10左右可以使用一次。

高密度养殖的可以加量使用。

巨大芽孢杆菌功能简介

巨大芽孢杆菌功能简介

巨大芽孢杆菌
【适用范围】生物肥料、水产养殖的应用。

【产品特点】
1、强烈的溶磷作用，巨大芽孢杆菌代谢过程中产生的碱性或酸性磷酸酶、脱氢酶、植酸酶等物质使有机磷酸盐矿化，成为植物可以吸收利用的可溶性磷；另外巨大芽孢杆菌可在代谢过程中分泌乳酸、氨基酸、柠檬酸等有机酸，直接溶解土壤中难溶性磷酸盐，释放出磷及铁、铝、钙等中微量元素。

2、广谱的抑菌效果，巨大芽孢杆菌代谢过程中可产生伊枯草菌素、几丁质酶等抑菌物质，对不同植物的细菌和真菌病害具有防治作用，是植物病害生物防治的主要生防菌种。

3、显著的促生效果，巨大芽孢杆菌作为植物根际促生菌(PGPR)，代谢过程中可产生多种植物激素(吲哚乙酸、细胞分裂素等)、酸性物质、生物酶类及维生素等生理活性物质，刺激调节植物生长。

4、高效的降解作用，巨大芽孢杆菌能够产生亚硝酸盐还原酶，对水体中的亚硝酸盐具有较强的降解能力；繁殖速度快，产酶能力强，耐低温、微好氧，能够有效去除水体中的有机物、氮、磷，控制藻类生长，起到净化富营养化水体的作用。

【主要成分】巨大芽孢杆菌活芽孢、发酵代谢产物、固态发酵基质。

水产常用芽孢杆菌产酶、耗氧及耐盐性能评估

水产常用芽孢杆菌产酶、耗氧及耐盐性能评估

水产常用芽孢杆菌产酶、耗氧及耐盐性能评估大量研究表明，芽孢杆菌对养殖动物残饵、粪便的分解、转化及养殖水体的调节有明显作用，因其具有安全、环保、无抗性的特点，在水产养殖中被广泛应用。

而芽孢杆菌产酶并提高动物对饲料的利用率是其发挥作用的重要机制之一，但水产养殖环境多变，在不同溶氧、盐度等理化条件下，芽孢杆菌能否发挥作用一直备受养殖户质疑。

本文就水产养殖常用芽孢杆菌产酶、耗氧及耐盐性能进行评估，以期为产品开发和现场使用提供一定的参考价值。

1、材料与方法1.1 实验材料1.1.1 菌种菌种包括3株枯草芽孢杆菌（编号枯草1、枯草2、枯草3）、1株短小芽孢杆菌、1株解淀粉芽孢杆菌、1株地衣芽孢杆菌和1株侧孢芽孢杆菌为青岛根源生物集团水产常用菌株，其菌粉为根源生物集团生产车间生产。

1.1.2 培养基及试剂营养琼脂培养基：购自北京陆桥，121℃灭菌30min；LB培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，水1L，pH7.0，121℃灭菌30min；酪素培养基：干酪素10g，酵母膏1g，琼脂20 g，水1L，pH7.0，121℃灭菌30min；淀粉培养基：可溶性淀粉2g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，水1L，pH7.2，121℃灭菌30min；酸性汞试剂：HgCl2 15g，浓HCl 20mL，水100mL。

卢戈氏碘液：碘片1g，碘化钾2g，水300mL。

先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾中，待碘全溶后，加足水分即可。

1.2 实验方法1.2.1 产酶能力测定从-20℃冰箱取出保藏的菌种甘油管，用接种环挑取一环菌液在营养琼脂培养基上三区划线，于37℃培养24h分离出单菌落。

使用灭菌牙签挑取平板上的单菌落，分别点种在酪素培养基和淀粉培养基上，6菌/平板，其中试验菌株5个，参照菌株1个位于平板中间，于37 ℃培养箱中培养24 h。

在酪素培养基菌落周围滴加适量酸性汞试剂测定产蛋白酶能力，在淀粉培养基上滴加卢戈氏碘液测定产淀粉酶能力。

芽孢杆菌研究进展及其在水产养殖中的应用

芽孢杆菌研究进展及其在水产养殖中的应用

芽孢杆菌研究进展及其在水产养殖中的应用摘要该文主要介绍芽孢杆菌的常用种类、生物学功能及其在水产养殖中的应用，以为芽孢杆菌的利用提供参考。

关键词芽孢杆茵；生物学功能}应用；水产养殖随着社会经济的不断发展，人们对水产养殖产品的需求越来越大，水产养殖逐步向工业化、规模化养殖的方向发展。

高密度的养殖模式、抗生素的滥用、喹乙醇等禁用添加剂的非法使用也对水产养殖业健康发展造成了严重的危害。

残留毒素、污染生态环境、威胁人体健康等负面影响成为整个行业健康发展的瓶颈。

近年来，微生态制剂在畜牧兽医、人类健康等方面的推广应用，大量实验和生产实践证实微生态制剂的应用疗效，其在水产行业中的应用也越来越受人们的重视。

微生态制剂具有绿色、环保等优点，在养殖中微生态制剂可以用来解决水产养殖污染和病害的问题。

自然界广泛分布着芽孢杆菌，能产生多种酶，是动植物微生态系统优势种群之一，在水产养殖中发挥着重要的作用。

1芽孢杆菌使用种类生物制剂的研发和使用过程中最重要的问题是确保其使用的安全性。

美国食品药品管理局(FDA)在1989年发布的允许使用的菌株有43种，芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、缓慢芽孢杆菌(B.lentus)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和凝结芽孢杆菌(B.coagulans)。

2008年，我国农业部公布的《饲料添加剂品种目录》中，允许直接投喂动物的微生物添加剂有15种，其中芽孢杆菌有地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌2种。

随着国内外研究的深入，允许使用的芽孢杆菌种类越来越多，相继研发出了生物学特性更加优异的新菌种，如环状芽孢杆菌(B.circulans)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、芽孢乳杆菌(Lactobacillus sporogens)、纳豆芽孢杆菌(B.natto)、坚强芽孢杆菌(B.firmus)、巨大芽孢杆菌(B.megeterium)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和东洋芽孢杆菌(B.toyoi)等，这些新菌株的发现壮大了芽孢杆菌添加剂的数量，为养殖行业的健康稳定发展提供了技术支持。