血液制品中人细小病毒B19的灭活研究新进展

回肠代膀胱的手术给病人躯体带来臣大变化，改变＿『病人正常的排尿方式，造　成Ｔ日常生活中的不方便，对病人的心理产生许多负面影响。总有留下某种程度的　遗憾和有所损失的感觉。起码要用几个月甚至一年以上的时间来适应自己排尿方　式的改变，和学习尿路ｔ＿ｌ的卫生处理方式。在手术前应尽量学习一些有关膀胱肿瘤　的基本知识．了解膀胱肿瘤的主要治疗方法和手术后存在并需要解决的问题，在心　理ｈ做好必要的准备。积极配合医护人员的治疗，及时掌握术后遗留问题的处理方　法，接受正确的康复指导。通过术后心理护理、饮食护理、排尿的自我护理、以及并　发症的预防与处理等优质的术后自我护理．能减轻术后的诸多不便，减轻痛苦，减少　各种并发症，提高了自身的生活质量。这一系列的调整可以使自己最大限度地恢复　

２０１４年４月　第４期　鐾　褫《瓣　生理机能和自信心，从而有助于改善生活质量，促进身心健康，让自己更坦然的面对　生活，减少病痛对自己生活的影响。　参考文献　［１］　朱斌，项明峰，潘正跃．要治性膀胱全切术后尿流改道术式的选择分析ＥＪ］．中　国实用医药，２００９，４４（１）：２８．　［２３马潞，刘磊，肖春雷，等．腹腔镜下根治性膀胱切除ｓｔｕｄｅｒ回肠新膀胱术［Ｊ］．中　华泌尿外科杂志，２００９，３０（４）：２５１—２５３．　Ｅ３］郑玉红．膀胱全切加原位回肠新膀胱术８例的护理［Ｊ］．中国误诊学杂志，　２ｏｏ９，９（２）　４５７．　

血液制品中人细小病毒Ｂ１９的灭活研究新进展　张贤鹏　杨伯家　潘修银。　聂兴教　陈赛。　张莉　卢建明　（１．枝江市人民医院输血科，湖北　枝江４４３２００；　２．宜昌市中心血站；３．宜昌市中心医院输血科；　４．宜昌市中心血站兴山分站‘；５．三峡大学仁和医院输血科）　【摘要１　目的：献血员人细小病毒Ｂ１９感染率高，导致了血液制品中人细小病毒Ｂ１９污染率高。血液制品生产工艺中现有的病毒灭活方法（如如亚甲基蓝光化学法）　不能将人细小病毒Ｂ１９有效灭活。因此存在经血源传播人细小病毒Ｂ１９的风险，所以对血液制品中人细小病毒Ｂ１９有效去除、灭活刻不容缓。一种新的短波紫外灭活法　对细小病毒Ｂ１９灭活效果好，蛋白回收率高，具有很好的研究应用前景。　．　【关键词】：人细小病毒Ｂ１９；血液制品；感染率；紫外灭活　Ｎｅｗ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ　Ｂ１９　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ＹＡＮＧ　Ｂｏｊｉａ１，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａｎｐｅｎｇ１，ＰＡＮ　Ｘｉｕｙｉｎ２，ＮＩＥ　Ｘｉｎｇｊｉａｏ２，ＣＨＥＮ　Ｓａｉ，　ＺＨＡＮＧ　Ｌｉ，ＬＵ　Ｊｉａｎｍｉｎｇ．１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，Ｚｈｉｊｉａｎｇ　Ｐｅｏｐｌｅ　ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｙｉｃｈａｎｇ，Ｈｕｂｅｉ　４４３２００，Ｃｈｉｎａ；２．ＹｉｃｈａｎｇＢｌｏｏｄＣｅｎｔｅｒ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＴｒａｎｓｆｕ—　ｓｉｏｎ，Ｔｈｅ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｙｉｃｈａｎｇ；４．Ｘｉｎｇｓｈａｎ　Ｓｕｂｓｔａｔｉｏｎ，Ｙｉｃｈａｎｇ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅｎｔｅｒ；５．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，Ｒｅｎｈｅ　ＨｏｓｐｉｔａＩ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　ｔｏ　Ｃｈｉｎａ　Ｔｈｒｅｅ　Ｇｏｒｇｅｓ　Ｕ　ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ　Ｂ１９（ＨＰＶＢ１９）ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒｓ　ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＨＰＶＢ１９　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｔｈｅ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｎ　ｂｌｏｏｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ｓｕｃｈ　ａｓ　ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｂｌｕｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ）ｃｏｕｌｄ　ｎｏｔ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ　ＨＰＶＢ１９　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｒｉｓｋ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＨＰＶＢ１９，ｓｏ　ｉｔ　ｗａｓ　ｍｏｓｔ　ｕｒｇｅｎｔ　ｔｏ　ｅｌｉｍｉｎａｔｅ　ａｎｄ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ　ｔｈｅ　ＨＰＶＢ１９　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｈｏｒｔｗａｖｅ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＨＰＶＢ１　９　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　ｈｉｇｈ，ｓｏ　ｉｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｆｕｔｕｒｅ　ｏｆ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＶＢ１９；Ｂｌｏｏｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ；ＵＶ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　【中圈分类号１Ｒ３３１．１　【文献标识码ＩＡ　【文章编号１２０９５—６８５１（２０１　４】０４　０６２３—０１　

血液制品不可替代的疗效和安全性关系着人民的生命健康血液制品的病毒安　全性控制是血液制品（血浆蛋白衍生物）的安全与质量控制的关键，世界各国药品监　管机构都非常关注这一问题。可经血／血液制品传播的病毒有甲型肝炎病毒　（ＨＡＶ）、乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）、人类细小病毒（Ｂ１９），巨细　胞病毒（ＣＭＶ）以及人类朊病毒［　。现阶段，国内外普遍采用原料血浆病原体筛查、　原料血浆检疫期管理和血浆蛋白分离过程中增加病毒灭活／去除工艺等不同手段，　进行病毒安全性控制，以最大限度降低血液制品病原体污染的风险　另外各种病原　体核酸扩增检测技术从生产源头起作用，以灵敏度高和特异性强的特点成为迄今为　止最灵敏的病毒检测方法，已经广泛用于原料血浆的病原体早期筛查。该方法显著　降低了ＨＩＶ、ＨＣＶ和ＨＢＶ的血清学检测的窗口期，ＨＩＶ可以减少１０—１１天、ＨＣＶ　可以减少５７—５９天、ＨＢＶ可以减少３Ｏ天，从而显著降低经血液传播的病毒污染ｍ　液制品的风险Ｌ　。　１人细小病毒Ｂ１９　人细小病毒Ｂ１　９（ｈｕｍａｎ　ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ　Ｂ１　９，简称Ｂ１　９），最早由Ｃｏｓｓａｒｔ于１９７５年　在筛选献血员乙型肝炎抗原时发现，是已知唯一对人类致病的细小病毒［３］，病毒无　包膜、耐热，直径小（１８～２０　ｎｍ），基因组为线性单链ＤＮＡ分子，约５．５ｋｂ，分子量约　为５０～８０ＫＤ，对称二十面体Ｌ４］　１．１　人细小病毒的流行情况　普通人群中流行情况：人细小病毒Ｂ１　９感染非常普遍，全年均可发生，但主要发　生在晚冬和早春季节，该病毒可通过呼吸道传播，病毒血症时血液中Ｂ１９　ＤＮＡ可到　达１０１　２拷贝／ｍｌ＿＇Ｓ］。大约４Ｏ　～６０　的成年人都曾感染过Ｂ１９病毒，体内出现ＩｇＧ　抗体，目　ＩｇＧ抗体阳性率随年龄增长而增长，５岁以下儿童及２０岁以上成人其阳性　率分别为２　和４９　，在７０岁左右的人群中，８Ｏ　以上的血清标本中存在抗Ｂ１９　ＩｇＧ抗体　。在国内没有相关的流行数据报道。　献血员中流行情况：在无偿献血者中病毒血症的出现频率约１／２６０～１／４００００，　年龄段集中在３５～４５岁之间　其中阳性捐献者病毒血症时病毒载量为２．３Ｘ１０４　到６．９ｘ１０１１拷贝／ｍｌ（约合７．１×１０４到２．１×１０１２ＩＵ／ｍ１），在急性期过后的几个　月，少数甚至几年后仍有低水平的Ｂ１９　ＤＮＡ被ＰＣＲ检测到［　。女性抗体阳性率　高于男性［　。且献血员人细小病毒感染率和孕妇感染率比较差异不显著［　。　１．２　Ｂ１９病毒感染主要会对以下三类人群造成严重危害：孕妇，免疫力低下／　缺陷的人及儿童。在孕妇病原体感染因素方面，人细小病毒Ｂ１９是除巨细胞病毒、　单纯疱疹病毒、风疹病毒、弓形虫感染之外造成孕妇自然流产的重要病原体之一，反　复自然流产孕妇和正常孕妇的流产组织可检测到Ｂ１９　ＤＮＡ。Ｂ１９病毒感染还可以　引起儿童的第五病，成人的风湿性关节炎，溶血贫血患者的再生障碍危象和免疫抑　制患者的红细胞再生障碍等疾病［９－ｔｚ］。　１．３　Ｂ１９病毒对血液制品的威胁　尽管人们认为Ｂ１　９存活感染期短，高滴度的病毒血症只持续７到１Ｏ天，然而一　个感染者体内的低水平病毒量（常在１０，０００～１Ｏ０，０００拷贝／ｍ１）可持续数月直到　病毒被全清除。并且由于Ｂ１　９病毒直径小、耐热、对人群的易感性及目前灭活／去除　血液制品中病毒的Ｓ／Ｄ法、过滤法和热处理法均不能有效的灭活／去除该病　毒［”～ｌ６】，使得大多经过分离处理的血浆和终产品仍遭受污染，并常含有较高的病　毒载量，使Ｂ１　９病毒成为血液制品的主要污染病毒之一。Ｂ１９病毒ＤＮＡ污染凝血　因子Ⅷ、凝血酶原复合物、因子Ⅶ等血浆制品的比例分别达到８６．１８　、８８．１４　和　６６．１１　［”］。长期接受凝血因子类产品（产品中病毒含量大于１０８ｇｅｑ／ｍｌ时产生抗　体，小于１０　３　５ｇｅｑ／ｍｌ不产生抗体）治疗的患者体内抗Ｂ１９抗体显著升高　Ｍ］。大约　６Ｏ　的血浆池包含１０２到１０８ｇｅｎｏｍｅ　ｃｏｐｙ　ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｓ（１ｇｃｅ相当于１．０２＋０．１３　ＩＵ，　ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｕｎｉｔｓ）［１９］。经Ｓ／Ｄ处理的血浆仍有２３　含有Ｂ１９　ＤＮＡ且滴度高达　１Ｏ６—１０　ｇｅｑ／ｍｌ，而混合血浆中ＩｇＧ滴度约为４４　ＩＵ／ｍｌ　不足以中和抗原［１　７２。目　前美国食品药品监督管理局已规定对血浆库进行Ｂ１９病毒ＤＮＡ检测，对于Ｂ１　９病　毒ＤＮＡ浓度超过１０４拷贝／ｍｌ的血浆库将废弃不予使用，如果高病毒载量的捐赠　者血浆在混浆前没有被及时去除的话，将会有５　到１５　的血浆池不能使用，造成　严重损失［２　。　２　Ｂ１　９病毒不同基因型检测　目前把Ｂ１９病毒分为三种基因型，基因Ｉ型，Ａ６和Ｌａｌｉ（基因Ⅱ型）和最先在法　国分离出的Ｖ９（基因Ⅲ型），其中基因Ⅱ型１０．８　的编码蛋白序列与Ｉ型不同［２１　３　在Ⅷ因子产品中，８１　的感染型是基因Ｉ型，１４　的感染型是基因Ⅱ型，病毒载量分　别达到１０　７和１０５ｇｅｑ／ｍｌ。不同基因型感染后，症状与宿主先天或后天的体质有关，　与基因型无明显的相关性，但在检测方面略有不同，目前已有两种定性实时荧光　ＰＣＲ试剂盒在欧洲商业化用于血浆检测，Ｒｏｃｈｅ　ＬＣ虽然灵敏度高，但不能检测出第　Ⅱ基因型病毒，而ＡｒｔｕｓＢ１９　ＰＣＲ试剂盒可检测出第Ⅱ基因型和代表Ⅲ基因型的质　粒Ｄ９１．１，总体来说Ｂ１　９病毒变异并不多，需扩大８倍才能看出来，可被认为是一个　少量变异的家族［２　２ｌ。　３血制品中Ｂ１９病毒的去除／灭活　血液制品的病毒灭活方法主要有物理法和化学法。物理法中常用的热处理法　有湿热法（巴斯德法）、干热法（６０℃７２　ｈ，８０℃７２ｈ）、蒸汽加热法（将湿润的冻干产　品暴露于６Ｏ　ａＣ、１１１９ｍＰａ的热蒸汽中进行病毒灭活１０ｈ）、纳米膜过滤等方法。化学　法中较常用的有低ｐＨ法、有机溶剂／表面活性剂法（Ｓ／Ｄ法）等。　３．１传统病毒灭活工艺：在生产白蛋白的过程中，Ｂ１９病毒对液体加热敏感，　但在生产静注免疫球蛋白时，Ｂ１　９病毒在６０　蔗糖浓度下，液体灭活６Ｏ℃１小时，并　不敏感［２　３　；干热处理能有效灭活ＨＩＶ和肝炎病毒，但病毒灭活效果受制品水份残