放线菌的实训报告

实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。

2.学习区分细胞的死活状态。

二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。

放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。

放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。

2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。

酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。

酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。

3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。

三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。

b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。

c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。

d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。

e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。

f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。

g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。

四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。

放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。

微生实验报告姓名：王晶晖专业年级：2011级生物技术学号：040312011032实验六放线菌的形态观察一、实验目的（1）用玻璃纸琼脂透析培养法及斜插片培养法观察放线菌的自然生长形态；（2）用染色法观察放线菌菌丝体二、实验原理放线菌是一类主要呈丝状生长和以孢子形式进行繁殖的革兰式阳性细菌，放线菌大多数能形成菌丝体，紧贴培养基表面或渗入培养基生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还向空气中生长出气生菌丝，气生菌丝可进一步分化产生孢子丝和孢子。

孢子丝依种类的不同，有直形、波曲、螺旋形。

放线菌的孢子有球形、椭球形、杆状或柱状等。

放线菌自然生长的个体形态观察多用玻璃纸琼脂透析培养法。

玻璃纸具有半透膜特性，其透光性与载玻片基本相同，采用玻璃纸琼脂平板透析培养法，能使放线菌生长在玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取小片，贴放在载玻片上，用显微镜镜检可观察到自然生长的放线菌个体形态。

采用斜插片培养法也能观察放线菌的个体形态。

将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。

观察时，轻轻取出盖玻片，置于玻片上直接镜检，可以观察到放线菌自然生长状态下的形态特征。

三、实验器材1．菌种：培养5~7d的5406放线菌（细黄链霉菌）（Streptomyces microflavus）的斜面菌种与平板培养物，小单孢菌（Micromonos）斜面菌种。

2．培养基：高氏一号琼脂培养基。

3．试剂及器材：无菌平皿，玻璃纸，9mL无菌水若干只，酒精灯，火柴，接种铲，接种环，镊子，玻璃涂布棒，1mL无菌吸管，剪刀，载玻片，石炭酸复红染色液，双层瓶，显微镜。

四、实验方法（一）玻璃纸培养法1．将玻璃纸剪成培养皿大小，用旧报纸隔层叠好后灭菌。

2．将放线菌斜面菌种制成103/mL的孢子悬液。

3．将高氏一号琼脂培养基融化后在火焰旁倒入无菌培养皿内，每皿倒入15mL左右，待培养基凝固后，在无菌操作下用镊子将无菌玻璃纸覆盖在琼脂平板上即制成玻璃纸琼脂平板培养基。

一、实验背景猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的一种猪呼吸道疾病，具有高度的传染性和致死性。

该病在全世界范围内广泛流行，给养猪业造成了巨大的经济损失。

APP的主要致病因子包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白和溶血毒素（Apx）。

其中，溶血毒素Apx在APP的致病过程中起着重要作用。

本研究旨在提取纯化APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ，并研究其对小鼠的致病性和免疫原性，为研制有效的疫苗提供理论依据。

二、实验材料1. 实验动物：SPF级昆明小鼠，体重18-22g。

2. 菌株：猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）血清10型、血清7型、血清3型。

3. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA连接试剂盒、限制性内切酶、DNA聚合酶、Taq酶、琼脂糖、琼脂糖凝胶回收试剂盒、DNA marker、蛋白marker、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、Western blot试剂、抗体等。

4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、超净工作台、孵育箱、培养箱、显微镜等。

三、实验方法1. APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的提取与纯化（1）分别将APP血清10型、血清7型、血清3型接种于LB液体培养基，37℃培养过夜。

（2）收集菌液，12,000r/min离心10min，弃上清，收集菌体。

（3）将菌体用PBS缓冲液重悬，加入溶菌酶，37℃水浴处理1h。

（4）12,000r/min离心10min，收集上清液。

（5）对上清液进行Sephadex G-50凝胶柱层析，收集ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ峰。

（6）对ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ峰进行透析，去除盐分。

（7）对透析后的ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ进行SDS-PAGE电泳，鉴定纯度。

2. APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ对小鼠的致病性研究（1）将小鼠分为A、B、C三组，每组10只。

（2）A组：正常小鼠。

土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。

4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。

2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。

溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。