0922粪便核酸提取试剂盒说明书

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磁珠法粪便核酸提取试剂盒(常规版)
Faeces DNA Extraction Kit (Regular Versio n)

【目录号】FDE-5005、FDE-5030
【运输条件】2~25
C;
【保存条件】磁珠分散液、裂解液②2~8 C,其它组分室温;
【试剂盒组成】
Kit Comp onent FDE-5005 FDE-5030
试剂盒组成 (50T) (300T)

FDE Buffer
裂解液
20mL 60mL

FDE Buffer
裂解液
20mL 60mL

FDEMag netic Beads 磁
珠悬浮液
5mL 15mL

Wash Buffer
清洗液
60mL 180mL

Elute Buffer
洗脱液
10mL 30mL

【注意事项】
1. 在使用本试剂盒钱,请用户自备80%乙醇;
2. 使用前请检查裂解液 、 是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将裂解液置
于378 C水浴重新溶解;
3. 本操作指南经本公司反复验证,使用前请仔细阅读,并且按照操作指南的建议操作。
【产品简介】
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统, 从各种固态或液态粪便
样品中分离纯化高质量基因组DNA。特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的 亲和
力,而当条件改变时,磁珠会释放吸附的核酸,从而达到快速分离纯化核酸的目的。 提取的基
因组DNA片段打,纯度高,质量稳定可靠,尤其适合高通量工作站的自动化提取, 特别是本公
司各型号的自动化核酸提取仪。
本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库 构
建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等实验。
【试剂盒说明】
1. 磁珠分散液严禁反复冻融和离心,磁珠使用前务必充分混匀,可涡旋振荡 10秒左右;
2. 实验中使用我先混合仪的目的是为使磁珠能够充分吸附核酸、 将磁珠表面的杂质充分去

除或核酸从磁珠表面充分洗脱;
3. 使用前检查裂解液 、 是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将裂解 、

于37 C水浴重新溶解。
【试剂盒说明】
样本类型 样本量
DNA提取范围

固态
200mg
5~40

yg

液态
200 Z
1~20

yg

【自备仪器、耗材和试剂】
仪器自动版
涡旋混合仪、高速离心机、水浴锅或金属浴、 96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇、
英芮诚ETP-300核酸提取仪。
手动版
涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅; EP管、EP管用磁力架、无水乙醇、异丙
醇。

【仪器自动版操作步骤】
以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例,可同步完成 32个样本的提取工作。
1. 上样准备
参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。
样品位

7
2、8 3、9 4、10 5、11 6、12

试剂
磁珠悬浮液 异丙醇 清洗液
80%乙醇 80%乙醇 洗脱液

75 yL 400 yL 600 yL 600 yL 6 00 yL 100
yL
3

注:1)每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀;2)为提高效率建议使用排枪
2. 上机样品的获得
A. 固体样品:称取200mg左右的粪便只EP管中,分别加入1mL的裂解液、20 ^L 蛋白酶
K,涡旋振荡1min (须将管底的粪便振荡起来)后,58 °C温浴30min (每隔5min 颠倒混匀一
次)。
B. 液态样品:吸取200 yL左右的粪便至EP管中,分别加入200 yL裂解液、20 ^L 蛋白
酶K,涡旋振荡1min (须将管底的粪便振荡起来)后,58 C温浴15min (每隔5min 颠倒混匀
一次)。
注:如需去除RNA,请额外加入 RNase A (100mg/mL ) 5
yL
1) 裂解完毕的样本,室温12000rpm,离心5min,转移400 yL上清至新的EP管内。
2) 向装有上清的EP管内加入250 yL裂解液,上下颠倒5次,混合均匀,12000rpm, 离心
5min,保留上清,待用。
3. 上机提取
1) 从第2步裂解完毕的样本中吸取450 y L上清至准备好的96孔板的第2/8列;
2) 将96孔版样品板放入ETP-300型核酸提取仪中,并插入磁棒套;
3) 打开仪器操作程序,调用“粪便核酸提取”程序,单击“运行”执行提取程序。
“粪便核酸提取”程序参数设置如下,如仪器程序参数与说明书不一致,请以说明书为准:

步骤编号 孔位 运行类型 振荡时间(秒) 分离时间(秒) 挥发时间(秒) 振荡幅度 振荡强度
一组温度 (C ) 二组温度 (C ) 三组温度 (C ) 四组温度
(C)
1 1 磁珠转移 1 10 0 2 弱 0 0 0 0
2 2 DNA结合 120 0 0 4 强 0 0 0 0
3 2 DNA结合 400 15 0 4 弱 0 0 0 0
4 3 清洗1 250 10 0 5 强 0 0 0 0
5 4 清洗2 280 10 0 5 强 0 0 0 0
6 5 清洗2 240 10 300 5 强 0 0 0 0
7 6 洗脱 500 20 0 2 强 60 60 60 60

8 3 弃磁珠 15 0 0 5 强 0 0 0 0

4. 核酸转移

程序运行完毕,取下96孔板,将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中,做好标记, 提
取过程完成,此时可以弃去96孔板。
3

手动版操作步骤】
1

准备

真空干燥箱稳定到45
C;
2

样本的裂解

参考仪器操作步骤 2 进行
3

结合

向装有上清的EP管内加入分别加入等体积的异丙醇和 75卩L磁珠悬浮液,颠倒混匀;
将 EP 管置于涡旋混合仪上高速振荡 10min ,使磁珠与溶液充分混匀,确保磁珠与核 酸完全
结合,之后静止 2min 。
4. 磁性分离
将EP管置于磁力架上,静止1min,待磁珠吸附完毕后,弃净澄清液,下同。 5. 清洗
将EP管从磁力架上取下,加入600 ^L清洗液1,置涡旋混合仪高速振荡1min,使磁珠
分散均匀,取下EP管并置于磁力架上静止30s,弃净澄清液。
使用700^180%乙醇,参照上述步骤操作2次。
6. 除醇

将除尽上清液后的EP管置于磁力架上,连同磁力架一起放入45 C真空干燥箱中,干燥
约8min至无明显乙醇味。
注:若无真空干燥箱,亦可在保持通风橱通风或电风扇的状态下静置约 10min ,具体时间根据气温 变
化可能需要适当调整,以磁珠干燥完全为原则。
7. 洗脱

取出EP管,加入100卩洗脱液(或去离子水),移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀,
将EP管于65 C加热洗脱5min,然后涡旋洗脱2min,确保磁珠与核酸洗脱完全。
注:洗脱液要求》50卩8 100~200讥 较好,吸入也较少时会影响回收率。
8. 核酸转移
将EP管置于磁力架上静置30s至磁珠吸附完全,用移液枪将洗脱液转移至另一干净 EP
管中,操作过程完成,此时可以弃去磁珠。

( 1702 修订版)
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V201702.221