高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。

若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。

加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。

产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。

菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。

通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。

北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。

所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。

产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。

2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。

高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）加入500 μL的平衡液BL, 12000rpm（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

（请使用当天处理过的柱子）2.取5-15ml 过夜培养的菌液加入离心管中，12000 rpm (~13400g ）离心1 min，尽量吸除上清。

注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。

3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μL溶液Pl （请先检查是否已加入RNaseA ) ，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

质粒4.向离心管中加入500μL溶液P2 ，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。

注意：温和地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。

此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。

如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

5.向离心管中加入700 μL溶液P3 ，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。

12000rpm ( ~13400g ）离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。

注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。

如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

6.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs （过滤柱放入收集管中）, 12000rpm（~13400g ）离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）, （如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5 吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。

7.12000rpm (~13400g）离心l min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。

质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。

（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。

12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。

大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。

2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。

2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。

2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。

2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。

2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。

3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。

2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。

3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。

学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。

3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。

3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。

4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。

同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。

在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。

质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备II.注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。

质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。

切勿直接取冻存的菌种进行培养。

DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL(PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100%乙醇加入DNA Wash Buffer。

Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。

在室温下（22-25o C）进行所有离心操作。

III.操作步骤1.接种新鲜的单个菌落到1-5 mL的LB培养基（含适量抗生素），37o C震荡培养14-16小时。

室温下10,000 xg离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。

注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。

注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，OD600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。

若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。

2.加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。

注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。

试剂盒组成Components GK2002-100GK2002-200Plasmid Recovery Column100个200个2-mL Collection Tube100个200个Buffer CBS25mL50mlSolution I30mL60mlSolution II30mL60mlSolution III42mL90mlW1solution60mL125mlWash Solution*24mL24ml+60mlElution Buffer20mL25mlRNase A(10mg/mL)240µl500µl注：1、Buffer CBS用于质粒提取前柱子的平衡处理，可以活化硅胶膜，有利于提高质粒的产量。

2、*Wash Solution在使用前应按要求加入乙醇：使用后及时盖紧瓶盖，防止乙醇挥发。

3、Wash solution分两瓶，大瓶用于配制工作液（已预装24ml母液），小瓶为母液，当大瓶工作液用完时，可从小瓶中取24ml用于配制工作液。

4、独立包装的RNase A收货后请于-20℃保存；初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入Solution I中，均匀混合后，4℃保存，表明日期，如长时间不用，请于-20度冻存。

5、Solution II：SolutionⅢ：室温保存。

6、试剂盒其余组分于室温（15℃~25℃）可以稳定存放1.5年而使用活性无明显衰减。

室温过高或需要更长期保存，请放置于2~8℃。

◆产品特点：●本试剂盒所提取的质粒DNA可用于多种常规实验，包括酶切、测序、转化等。

●本试剂盒采用常规碱裂解法分离质粒DNA，并结合膜吸附技术特异性吸附质粒DNA，具有高效、快速、方便的特点。

◆实验前准备：●第一次使用产品前，请仔细阅读该说明书。

●确认Solution I中已经加入RNase A，并做好标记。

●检查Washing Solution是否按照要求加入乙醇。

1.酵母质粒提取参考天根公司酵母小题试剂盒说明书步骤:1)柱平衡步骤:向吸附柱CPZ中(吸附柱放入收集管中)加入500ul的平衡液BL，12000rpm离心1min，弃掉收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中（使用当天处理的柱子）。

2)取1-5ml酵母培养物，12000rpm离心lmin，尽量吸除上清。

3)破除酵母细胞壁:向菌液中加入300ul山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase，充分混匀，并在摇床上220 rpm，30℃处理lh。

4000rpm离心10min，弃上清，收集沉淀。

加入250ul 溶液YP1(已加RNaseA)，重悬沉淀。

4)向管中加入250ul YP2溶液，温和地上下翻转6-8次，使菌体充分混匀，室温静置5-10min。

5)向管中加入350ul YP3 溶液，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，出现白色絮状沉淀。

12000rpm离心20min。

6)小心地将上清液加入吸附柱CP2中，12000rpm离心1min，弃废液。

7)向吸附柱CP2中加入500ul缓冲液PD，12000rpm离心1min，弃废液。

8)向吸附柱CP2中加入600ul漂洗液PW(己加无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液。

9)重复步骤8。

10)将吸附柱CP2放入收集管中，12000rpm离心2min，去除吸附柱中残余的漂洗液。

11)将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100ul洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12000rpm离心2min，收集质粒，-20℃保存。

提取的酵母质粒浓度低很难凝胶电泳监测，可将其转入感受态DH5a，若转化成功即可认为质粒抽提合格，送交测序。

2. 酵母质粒DNA的提取1. 挑取经过酵母选择/诱导培养基初步鉴定的酵母单菌落，接种于5.0-10.0ml SD/-Trp液体培养基，30℃恒温，250rpm振荡培养20hr。

2. 室温离心5000xg×1min，弃上清，收菌。

质粒中提实验步骤(E.Z.N.A.TM EndoFreePlasmid Midi Kit)实验前准备1. 使用前,将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。

2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer，并于室温保存。

D6915-01: 加入80ml无水乙醇D6915-03: 每瓶加入200ml无水乙醇D6915-04: 每瓶中加入200ml无水乙醇离心操作方案1. 将带有质粒的E.coli 接种于30-50ml LB/抗生素培养液中，37°C搖床培养12~16 h；2. 取30-50ml的菌液，室温下3,500-5,000xg离心10min收集细菌。

3. 倒弃培养基。

加入2.5ml Solution I/RNaseA混和液，漩涡振荡使细胞完全悬浮。

4. 往重悬混和液中加入2.5ml Solution Ii，轻轻颠倒混匀7-10 次后可将混合液室温放置2min以提高产量。

避免剧烈混和裂解液且裂解反应不要超过5 min。

5. 加入1.25ml 冰浴Buffer N3，并温和颠倒离心管数次至形成白色絮狀沉淀。

准备好过滤器。

6. 把HiBind中量柱套在收集管中，加入2ml Buffer GPS至柱子中，静置3-10min。

室温3000- 5000xg离心5分钟。

去滤液，把柱子重新放回收集管中。

7. 将裂解液倒进预先准备好的针筒过滤器中(针筒开口朝上，下面出口处接收集管)，静置2min。

8. 插入并轻推活塞使裂解液流进下面的收集管中。

9. 在过滤澄清的裂解液中加入1/10体积的ETR，颠倒7-10次后溶液变得浑浊，冰浴10-20min。

10. 42°C水浴5min后,25°℃,3,000-5,000xg离心5min，ETR溶液将在管底形成蓝色分层。

离心后,如果溶液中有大量的液滴悬浮，静置10分钟让液滴自然沉降。

11. 转移上清液移至离心管中，加入0.5倍体积无水乙醇(室温)，混匀后室温静置1-2min。

高纯度质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书高纯度质粒小提中量试剂盒目录号：PL1801适用范围：适用于5-15ml 中等规模质粒制备（mind preparations）试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次平衡液室温5mlRNase A（10mg/ml）－20℃250μl溶液P1 4℃25 ml溶液P2 室温25 ml溶液P3 室温35 ml去蛋白液PE 室温16ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温10ml吸附柱AC 室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。

如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。

有效防止了质粒被核酸酶降解。

3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。