孕激素受体与子宫内膜异位症的关系

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孕激素受体与子宫内膜异位症的关系　

吕艳文，张淑兰，王丹波　・论著・　

【摘要】　目的探讨孕激素受体（ＰＲ）与子宫ｃａ膜异住症（ｃａ异症）的关系。方法　采集ｃａ异症患者（ｃａ异　

症组）和宫颈上皮内瘤变患者（对照组）的子宫内膜为在位内膜，并种植于裸鼠腹腔为内异症组和对照组的异位内　膜。采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交方法检测ＰＲＡ与ＰＲＢ蛋白表达情况并进行比较分析。结果　内异症组和对照组的在位和异　

住内膜ＰＲＡ蛋白均呈ＦＥｌ，陛表达；内异症组的在位和异位内膜ＰＲＢ蛋白呈阴性表达，而对照组在位和异位内膜ＰＲＢ蛋　

白呈ＦＥｌ，陛表达。对照组与内异症组的在位和异位内膜的ＰＲＡ蛋白相对表达量问差异无统计学意义（Ｐ＞０　０５），ＰＲＢ　

蛋白相对表达量问差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。结论　内异症患者在位内膜和异位内膜ＰＲＢ的阴性表达可能与内　

异症有关。　【关键词】　子宫内膜异位症；孕激素受体　

【中图分类号】Ｒ　７ｌ１．７１　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１００７—９５７２（２００８）０８Ａ一１３４２—０３　

Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｄ　Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ＬＶ　Ｙａｈ—ｗｅｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈｕ—ｌａｎ，ＷＡＮＧ　Ｄａｎ—ｂｏ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ　ａｎｄ　

Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ＰＬＡ　４６３　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１　１００４２，Ｃｈｉｎａ　

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＲ）ａｎｄ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　

Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｕｔｏｐｉｃ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　

ｗｉｔｈ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｎｅｏｐｌａｓｉａ（ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ）　Ｓｏｍｅ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｃａｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｕｄｅ　ｍｉｃｅ　

ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｔ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｃｔｏｐｉｃ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＰＲＡ　ａｎｄ　ＰＲＢ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＰＲＡ　ＷａＳ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ＂ａｌｌ　ｅｕｔｏｐｉｃ　ｅｎｄｏｍ・　

ｅｔｒｉａ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　

ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）；ＰＲＢ　ｗａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ　ｅｕｔｏｐｉｃ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ　ｂｕｔ　

ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐ＜０．０１）．　

Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ＰＲＢ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　ｅｕｔｏｐｉｃ　ａｎｄ　ｅｃｔｏｐｉｃ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ｍａｙ　ｂｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　

ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ．　

【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄ】　Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ；Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　

子宫内膜异位症（内异症）是由生长在子宫腔以外的身　体其他部位的子宫内膜所引起的一种病变，它是一种雌激素依　赖性疾病，目前其发病机制尚不完全清楚。传统的经血逆流学　

说不能解释为什么９０％的妇女有经血逆流，而仅有１０％一　１５％妇女发病，后者的易感性在于遗传因素的差别，可能与在　

位内膜异常、腹腔内环境改变、免疫监视削弱和血管生成能力　增强等有关　。孕激素有对抗雌激素刺激子宫内膜生长的作　

用，临床上一直用于治疗内异症，但研究发现许多内异症患者　对孕激素治疗并不敏感，即“孕酮抵抗”　。孕激素是通过　孕激素受体（ＰＲ，包括ＰＲＡ和ＰＲＢ）起作用的，孕激素抵抗　可能与雌激素代谢异常引起内异症有关，故本研究观察ＰＲ在　

内异症患者在位内膜和异位内膜的表达情况，探讨ＰＲ与内异　症的关系。　

作者单位：ｌ１００４２辽宁省沈阳市，中国人民解放军４６３医院妇产　科（吕艳文）；中国医科大学附属盛京医院妇产科（张淑兰，王丹　波）　１资料与方法　１　１一般资料选取２００５年６月—２００６年１０月中国医科大　

学盛京医院和中国人民解放军４６３医院妇科的４３例住院患者　为研究对象。其中２８例内异症患者为内异症组，年龄２７—４５　

岁，平均（３８．１±２．８）岁；１５例宫颈上皮内瘤变患者为对照　

组，年龄３１～４８岁，平均（３９．３±３．２）岁。两组患者月经　周期均正常，内异症和宫颈上皮内瘤变的诊断均经手术及组织　

学证实；均无严重内科并发症及激素治疗史等。　１．２标本采集方法患者子宫切除后立即留取分泌晚期的子　

宫内膜，分两部分处理：（１）ＰＢＳ冲洗后立即置于一７０℃冰　

箱内冻存待测；（２）ＰＢＳ冲洗后尽快移植到裸鼠腹腔。　１．３　动物模型制作方法　动物模型的制作方法参考文献　

［４］。选择雌性裸鼠３４只，周龄４～６周，体质量约２０　ｇ。采　用３％戊巴比妥钠４０　ｍｓ／ｋｇ对裸鼠行腹腔麻醉，麻醉后固定，　行下腹正中切口０．５　ｃｍ；将获取的子宫内膜无菌操作剪成２～　

３　１１１１２１　的碎块，移植到裸鼠腹腔。移植后肌肉注射青霉素、链　

霉素以预防感染。自移植当日起给予雌激素支持，苯甲酸雌二　醇３０　Ｉｘｓ／ｋｇ，１次／３

　ｄ，肌肉注射。于移植后第７天脱颈处死　维普资讯 http://www.cqvip.com 裸鼠，剖腹，取出异位灶，立即置于一７Ｏ　冰箱内冻存待测。　１．４　ＰＲＡ、ＰＲＢ蛋白检测方法　采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交方法　

检测ＰＲＡ和ＰＲＢ蛋白的表达。（１）样品蛋白的提取：取０．１　

ｇ组织块，剪碎，加入１　ｍｌ裂解缓冲液，匀浆，１２　０００　ｇ，４　下离心２　ｈ，吸出上清为蛋白组分。采用酚试剂法测定样品　

中的蛋白浓度。取样品及标准蛋白液２Ｏ　ｌ，加入２．５　ｍｌ碱性　

铜液，充分混匀后静置２０　ｍｉｎ，加入０．２５　ｍｌ酚试剂混匀放置　

３０　ｒａｉｎ，６５０　ｎｍ下使用紫外分光光度计进行测量，与标准管对　照计算后得到样品的蛋白浓度。将样品置于一２Ｏ　冰箱内保　

存备用。（２）免疫沉淀：取４００　Ｉ，Ｌｇ（２Ｏ　１）总蛋白加５　ｌ　ＰＲ　

抗体，充分混匀，４　ｏＣ过夜。Ｔ４７Ｄ乳腺导管癌细胞蛋白提取　物作阳性对照，内异症患者正常腹膜作阴性对照，同法进行免　

疫沉淀。向上述样品中加入２Ｏ　ｌ标记琼脂糖凝胶，４　ｏＣ下缓　

慢摇动３　ｈ。２５００　ｒ／ｒａｉｎ离心５　ｍｉｎ，小心吸出上清，用裂解液　洗沉淀３次。向每个样品管中加入３Ｏ　ｌ样品缓冲液，ＳＤＳ一　聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳，转硝酸纤维素膜，杂交，碱性磷　

酸酶显色，凝胶成像仪成像并保存结果。ＰＲ抗体、０一ｄｉａｎｉ—　

ｄｉｎｅ、１３一ｎａｐｈｔｈｙｌ均购自Ｓａｎｔａ公司，碱性磷酸酶标记羊抗兔　ＩｇＧ购自北京中杉公司，引物和ＤＮＡ标准分子量Ｍａｒｋｅｒ　ＤＬ　

２０００购自大连宝生物公司，硝酸纤维素膜购自Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司。　

１．５统计学方法采用ＳＰＳＳ　１１．０统计软件进行统计学处理。　

计量资料以（　±ｓ）表示，采用两独立样本ｔ检验，以Ｐ＜　０．０５为差异有统计学意义。　

２结果　２．１　内异症组与对照组在位内膜ＰＲＡ与ＰＲＢ蛋白表达情况　内异症组和对照组的在位内膜ＰＲＡ蛋白均呈阳性表达；内　

异症组在位内膜ＰＲＢ蛋白呈阴性表达，而对照组在位内膜　

ＰＲＢ蛋白呈阳性表达（见图１）。对照组与内异症组的在位内　膜ＰＲＡ蛋白相对表达量间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），　

ＰＲＢ蛋白相对表达量间差异有统计学意义（Ｐ＜０．Ｏ１，见表　１）。　

２．２内异症组与对照组的裸鼠异位内膜ＰＲＡ与ＰＲＢ蛋白表　

达情况３４只裸鼠子宫内膜移植后死亡４只，共存活３Ｏ只，　

其中内异症组２Ｏ只，对照组１Ｏ只。内异症组和对照组的异位　内膜ＰＲＡ蛋白均呈阳性表达；内异症组的异位内膜ＰＲＢ蛋白　

呈阴性表达，而对照组异位内膜ＰＲＢ蛋白呈阳性表达（见图　

２）。对照组与内异症组的异位内膜ＰＲＡ蛋白相对表达量间差　异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），ＰＲＢ蛋白相对表达量间差异有　

统计学意义（Ｐ＜０．Ｏ１，见表２）。　

表１　内异症组和对照组在位内膜ＰＲＡ与ＰＲＢ蛋白相对表达量比较　（平均灰度值）　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＲＡ　ａｎｄ　ＰＲＢ　ｉｎ　ｅｕｔｏｐｉｃ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ　ｏｆ　ｅｎｄｏ—　

ｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ　・１３４３・　

１１４　ｋ１３ａ≈—　鞠　一　●豢，Ｉｒａ●●ＰＲＡ　

图１　内异症组与对照组在位内膜ＰＲＡ与ＰＲＢ蛋白表达情况（１—４　

为对照组在位内膜，５—８为内异症组在位内膜）　Ｆｉｇｕｒｅ　１　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＲＡ　ａｎｄ　ＰＲＢ　ｉｎ　ｅｕｔｏｐｉｃ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ　ｏｆ　ｅｎｄｏ—　

ｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ　

表２　内异症组和对照组的裸鼠异位内膜ＰＲＡ与ＰＲＢ蛋白相对表达量　比较（平均灰度值）　Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＲＡ　ａｎｄ　ＰＲＢ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ　ｏｆ　

ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　

１１４　ｋｌ３￣ｔ　

９４　ｋｌ３￣ｔ　１　２　３　４　５　６　７　８　

ＰＲＢ　

ＰＲＡ　

图２　内异症组与对照组裸鼠异位内膜ＰＲＡ与ＰＲＢ蛋白表达情况（１　

—４为对照组异位内膜，５—８为内异症组异位内膜）　Ｆｉｇｕｒｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＲＡ　ａｎｄ　ＰＲＢ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ　ｏｆ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　ｒｎｉｃｅ　

３讨论　ＰＲ是核受体家族的成员之一，有两种同源受体：ＰＲＡ和　

ＰＲＢ，两者都是ＰＲ基因产物。ＰＲＢ较ＰＲＡ在氨基末端多出　

１６４个氨基酸，这可能是ＰＲＢ的主要功能调节区，通过抑制