乳酸测定方法
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乳酸的测定:
对观基联苯比色法(参照高庆，2005)
1. 材料、试剂与仪器
无水乳酸锂、对疑基联苯、鸽酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水匍萄糖均为分析纯试剂。 主要溶液：
① 钩酸溶液：L硫酸及10%(W/V)鸽酸钠(NaoWO. - 2H：0)溶液等体积混合，当天使用前配制；
② 20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuS04 - 5H20) 20g,加蒸馅水70ml,加热使之溶解，再加入蒸憾 水定容至100ml；
③ 对疑基联苯溶液：称取对疑基联苯溶于lOOrnl的L氢氧化钠溶液中(配制时加热助溶，溶解后为澄 淸液体)，贮存于棕色瓶中，保存于4C冰箱，可使用一个月；
④ 乳酸标准储存液(lmg/inl):精确称取无水乳酸锂，溶于50ml蒸饰水中，加L硫酸20ml,后加蒸憎 水泄容至100ml,混匀后保存于4°C冰箱。
⑤ 4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液lOmL加蒸憾水稀释至50mLo
⑥ 乳酸标准应用液(200gg/mL):使用时取储存液10mL用蒸懈水稀释至50mLo在冰箱中可保存数天。 主要仪器：
UNICUV-2100紫外可见分光光度计、TGL-16B离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法
青贮浸提液样品预处理
取适虽青贮浸提液样品5000r/min离心10min,取上淸液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入 鸽酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中岀现明显絮状物(约30〜45min), 10000r/m离心10min,取 上淸液置于5ml洁净具塞试管中，60C水浴保温30min左右，冷却待用。
标准曲线的制作
①用200Lg/mL乳酸应用标准液
同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释)，按下表数量在预先编好号的试管中加入标 准乳酸滤液和蒸馅水。
表1 乳酸标准液配制
试管号 1 2 3 4 5 6 7
滤液(mL) 0. (X) 0. 1() 0. 2() 0.3() 0. 4() 0. 50 0. 6()
蒸谣水(mL) 2. (X) 1.9() 1.8() 1.70 1.6() L50 1.4()
②各管中分别加入氢氧化钙粉末lOOmg,混匀,8000r/min离心5min,取上淸液,加入预先加有20mg氢氧 化钙粉末的小试管中，混匀，加20$硫酸铜溶液，称重，迅速混匀，沸水浴3min,水浴冷却，补足重 量,3000r/min离心5min,各吸上淸液加入比色管中。③在各笛加入25PL的4%硫酸铜溶液，混匀后置冰 水浴内冷却。④将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中，每管各加，边加边摇,混匀后置沸水浴中准确加热5min, 取出后迅速置冰水浴中冷却3min左右。⑤在各管中加$对轻基联苯溶液，充分振摇后，放置，其间每 10min混摇一次。⑥各管置于沸水浴中准确加热90s,立即放入冰水浴中冷却。在波长565nm处用1cm 比色皿，1管作为参比，分别测定吸光度(A)。所得数据以乳酸含量为横坐标，以565nm处的光吸收为纵坐 标,作标准曲线。
青贮样品浸提液中乳酸含戢的测左 取青贮样品浸提液滤液按标准曲线的测左方法，以蒸懈水为空白测定其在560nm处的光吸收，所得 数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量，即为青贮样品浸提液中的乳酸含量。
样品中乳酸含疑二计算值X稀释倍数
2.2 乳酸标准曲线根据乳酸标准液测定的数据作图如下。
由图可得回归方程为；
A= 0. 119C - 0.0102 ( K2= 0. 9943)
式中 C ------ 酒液中乳酸的浓度;Pg/inLo
A —一测定光吸收值。
A-0.0102*1
最后确定的样品中乳酸含1=CX稀释倍数* ---------- 稀释倍数心
(K113
需要试剂：
无水乳酸锂、对疑基联苯、鸽酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水匍萄糖均为分析纯试剂。 需要器材：
分光光度计、离心机、离心管、恒温水浴锅、
具塞试管5ml及具塞比色管20mlo
