兔骨髓来源内皮祖细胞分离培养及鉴定
张玉龙;方靖琴;张伟国;陈金华
【期刊名称】《重庆医学》
【年(卷),期】2011(40)10
【摘 要】Objective To investigate how to isolate,culture and identify the
endothelial progenitor cells from rabbit bone marrow in order to get ready
for subsequent experiments.Methods EPCs were obtained from in vitro
culture of MNCs which were isolated with density gradient centrifugation
from rabbit bone marrow.Process of cell growth was observed.Cultivated
cells were identified by immunofluorescence and cell chemical
fluorescence detection.Results After 10 days cultured, EPCs were double
positive for DilacLDL uptaking and FITC-UEA-1 binding and expressing
CD34 and CD31 related antigen.Conclusion The mononuclear cells
isoiated from rabbit bone marrow by gradient centrifugation can be
induced into endothelial progenitor cells in vitro.The svstem of cell culture
成人骨髓间充质干细胞的体外培养和表型鉴定
柳向东;柴冈;李东;崔磊;刘伟;曹谊林
【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2004(024)004
【摘 要】目的建立成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的分离培养方法,并对其表面标志进行检测,研究骨髓间质干细胞(MSC)基本生物学特性.方法采用Percoll(1.073
g/mL)梯度离心分离hMSCs,体外扩增,流式细胞仪检测hMSCs表面抗原表达.结果成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代及传代培养显示,hMSCs具有活跃增殖的能力,每10 mL骨髓可获得(1.25±0.56)×106个原代细胞,7代可获得(5.32±1.15)×1010个细胞(n=5),随着传代次数的增加,细胞的增殖能力下降.流式细胞仪检测生长良好的第3代hMSC显示CD29、CD44、CD106、CD105、CD166、HLA-A/B/C表达阳性,CD34、CD45、CD14、CD31、CD49d、CD54、HLA-DR/DP/DQ表达为阴性.细胞周期分析显示,hMSCs中,S+G2+M期的细胞约占(16.25±3.18)%,其中S期为(4.12±2.35)%;而处于G0+G1期的细胞总数占(76.35±5.28)%,说明大部分细胞仍然处于静止期.流式细胞仪检测表明分离的hMSCs具有间充质干细胞的特征.结论 hMSCs有很强的自我更新能力,在体外传代培养可维持良好的干细胞生物学特性,为进一步深入研究hMSCs作为组织工程种子细胞的应用提供参数.
【总页数】5页(P302-306)
【作 者】柳向东;柴冈;李东;崔磊;刘伟;曹谊林 【作者单位】上海第二医科大学第九人民医院整复外科,上海市组织工程研究与开发中心,上海,200235;上海第二医科大学第九人民医院整复外科,上海市组织工程研究与开发中心,上海,200235;上海第二医科大学第九人民医院整复外科,上海市组织工程研究与开发中心,上海,200235;上海第二医科大学第九人民医院整复外科,上海市组织工程研究与开发中心,上海,200235;上海第二医科大学第九人民医院整复外科,上海市组织工程研究与开发中心,上海,200235;上海第二医科大学第九人民医院整复外科,上海市组织工程研究与开发中心,上海,200235
小鼠骨髓源性内皮祖细胞的培养和表面标志物鉴定
杨栋，辛世杰，李凤贺，王磊，汪颖厚，李悦，李晰，马文锋，张健
（中国医科大学附属第一医院血管甲状腺外科，沈阳１１０００１）
摘要目的建立一种从小鼠骨髓中分离、培养内皮祖细胞（EPC）的方法，并对EPC多种表面标志物进行鉴定。方法密度梯
度离心法获取小鼠骨髓源性单个核细胞，应用专门培养基EGM-2培养。观察不同时期细胞增殖情况；在培养7d后行DIL-AC-
LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定及流式细胞检测；应用RT-PCR分析0，4，7d时CD31、CD34、CD45、CD117、CD133、FLK-1、
VE-Cad等表面标志物的表达情况。结果诱导培养的骨髓单个核细胞72h后基本完成贴壁，8～9d时贴壁70%～80%可进行
传代，2～3周后呈典型的鹅卵石样外观。细胞培养7d后DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞比例为（90.16±6.77）%，
流式细胞检测PE-Flk-1、APC-CD133、FITC-CD34均阳性概率为（1.73±0.27）%。RT-PCR结果显示随时间推移CD34、CD117、
CD133的表达量逐渐下降，而CD31、FLK-1、VE-Cad等内皮系标志物的表达逐渐增加。结论密度梯度离心法结合定向诱导培
养可获得较多数量的EPC，以流式细胞检测技术为主，结合细胞形态学和功能学对EPC进行鉴定是一种较为理想的方法。关键词内皮祖细胞；小鼠；骨髓；细胞培养中图分类号R254文献标志码A文章编号0258-4646（2011）12-1063-04doiCNKI:21-1227/R.20111226.1614.023网络出版地址/kcms/detail/21.1227.R.20111226.1614.023.html
CultureandSurfaceMarkersIdentificationofEndothelialProgenitorCellsfromMiceBoneMorrow
成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性
毕薇薇;郭巍;赵春明;郭立斌;李志刚
【期刊名称】《中国组织工程研究》
【年(卷),期】2007(011)028
【摘 要】目的:观察成人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法及其生物学特性,为骨髓间充质干细胞的临床应用奠定技术基础.方法:实验于2005-12在吉林省四平市中心医院中心实验室进行.实验材料:人骨髓间充质干细胞,Ficoll淋巴细胞分离液,胎牛血清,牛血清白蛋白,α-MEM培养基,胰蛋白酶,FITC标记的CD44和CD90.实验方法:①人骨髓间充质干细胞的分离与培养:采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,条件培养基培养和扩增,倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长情况.②人骨髓间充质干细胞生长曲线的测定:取生长良好的P1,P5,P10细胞,用胰酶消化,接种于24孔板培养,每天各取3孔消化计数细胞,取平均值,连续培养7 d,绘制生长曲线.③人骨髓间充质干细胞表面标志的测定:取生长良好P5细胞进行免疫荧光染色鉴定(CD44,CD90并设同型对照).④人骨髓间充质干细胞的冻存及复苏:收集生长良好细胞,计数细胞密度及冻前存活率.将细胞加入到细胞冻存液中液氮冷冻保存.30 d后复苏细胞,每日倒置光学显微镜下观察细胞生长状况.结果:①倒置显微镜下观察细胞形态:倒置显微镜下观察细胞呈纤维形,漩涡状生长.②人骨髓间充质干细胞的生长曲线分析:传代的细胞生长较原代要快,从第10代开始细胞生长开始出现缓慢征象.③细胞表面标记检测结果:免疫荧光染色后细胞膜着色明显,CD44,CD90阳性率均大于90%.④细胞冻存及复苏生长特性分析:椎虫蓝计数细胞存活率90%以上,增殖能力强,和未冻存过的传代细胞具有同样的生长特性.结论:应用密度梯度法分离法能获得较高纯度的骨髓间充质干细胞,能在体外长期培养,在传代培养5代内生长旺盛且生物学特性稳定.
【总页数】4页(P5519-5522)
