小鼠免疫组织及免疫细胞的观察

⼩⿏脾脏细胞原代培养及观察计数实验报告-⼭东⼤学⼩⿏脾脏细胞原代培养及观察计数【实验⽬的】1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体⽅法，并对⼩⿏脾细胞进⾏原代培养；2.掌握⽆菌操作的具体过程及⽆菌操作台的使⽤；3.学习掌握染⾊法鉴别细胞的⽣死状态的原理及⽅法；4.学习使⽤⾎球计数板对细胞总数及活细胞数进⾏计数；【实验原理】1.细胞培养细胞培养指的是在⽆菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体的⽣理环境，使离体的细胞在体外⽣长和繁殖，并且维持其结构和功能的⼀种培养技术。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

从供体获得组织细胞，在⽆菌条件下，⽤胰蛋⽩酶消化或机械分散等⽅法，将动物组织分散成单个细胞开始⾸次培养长出单层细胞的⽅法称为细胞的原代培养。

当培养的动物细胞⽣长增殖达到⼀定密度，形成致密的单层细胞时，⽤胰蛋⽩酶将细胞消化分散成单细胞，从⼀个容器中以1：2或其他⽐例转移到另⼀个容器中扩⼤培养的⽅法，称为细胞的传代培养。

传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。

⾼等⽣物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某⼀群细胞在体的功能活动是⼗分困难的。

但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进⾏观察和研究，则要⽅便和简单得多。

被培养的动物细胞是⾮常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进⾏研究可以帮助⼈类揭开⽣、⽼、病、死的规律，探索优⽣、抗衰⽼和防治各种疾病的途径和机制，也可以⼈为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于⼈类健康长寿的⽅向发展。

因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分⼦机制⾮常重要的实验⼿段，被⼴泛应⽤于医学、⽣物技术、基因⼯程等研究领域。

细胞培养的意义:具有其他⽣物技术⽆可⽐拟的优点；培养条件易改变和控制，便于单因⼦分析；便于⼈们直接对细胞结构、细胞⽣长及发育等过程的观察；在⽣物学的各个领域（如分⼦⽣物学、细胞⽣物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被⼴泛应⽤。

细胞培养的局限性：在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有⼀定距离；观察到的结果有时难以正确反映机体的状况；细胞培养得到的产物少。

免疫组化实验报告免疫组化实验报告免疫组化实验是一种常用于生物医学研究领域的技术，它通过利用抗体与特定抗原的结合来检测和定位细胞或组织中的特定蛋白质。

本次实验旨在探究免疫组化实验的原理、步骤以及在疾病诊断和治疗中的应用。

一、实验原理免疫组化实验基于免疫学的原理，即利用机体免疫系统产生的抗体与特定抗原结合的特异性。

在实验中，首先需要制备特定抗原的抗体，通常通过免疫动物（如小鼠）注射抗原，使其产生特异性抗体。

然后，将这些抗体与待检测的细胞或组织样本进行反应，通过标记抗体的方法来检测和定位特定蛋白质。

二、实验步骤1. 细胞或组织的固定和切片：首先，将待检测的细胞或组织样本固定在载玻片上，常用的固定剂有甲醛、乙醛等。

然后，将固定的样本进行切片处理，通常使用微型切片机或手工切片刀进行切片。

2. 抗体的制备和标记：制备特定抗原的抗体是实验的关键步骤之一。

通常，将抗原注射到小鼠等免疫动物体内，使其产生特异性抗体。

然后，从免疫动物的血清中提取抗体。

为了方便检测和定位，可以将这些抗体标记上荧光染料或酶等物质。

3. 抗体与样本的反应：将标记好的抗体与待检测的细胞或组织样本进行反应，使抗体与特定蛋白质结合。

这一步通常需要在适当的温度和时间条件下进行，以确保反应的充分和特异性。

4. 反应产物的可视化：根据抗体标记的方式不同，可采用不同的方法来可视化反应产物。

如果是标记了荧光染料的抗体，可以使用荧光显微镜观察样本；如果是标记了酶的抗体，可以使用底物与酶的反应产生颜色变化，再通过显微镜观察。

三、实验应用免疫组化实验在疾病诊断和治疗中具有广泛的应用价值。

例如，在肿瘤学中，通过检测肿瘤标志物的表达情况，可以帮助医生确定肿瘤的类型、分级和预后。

此外，免疫组化实验还可用于研究疾病的发生机制、筛选新的治疗靶点以及评估药物疗效。

在临床诊断中，免疫组化实验也发挥着重要的作用。

例如，通过检测心肌标志物的表达情况，可以帮助医生判断心肌梗死的程度和范围。

一、实验背景针灸作为一种传统的中医疗法，在治疗多种疾病方面具有显著疗效。

近年来，随着科学研究的深入，针灸在实验动物模型中的应用逐渐受到关注。

本实验旨在探讨针灸对实验小鼠的免疫调节作用，以期为临床应用提供理论依据。

二、实验材料与方法1. 实验动物：选取健康昆明种小鼠32只，体重（20±2）g，随机分为空白对照组、模型组、针灸组。

2. 实验仪器：电针治疗仪、电子显微镜、酶标仪等。

3. 实验方法：（1）建立模型：采用环磷酰胺（CTX）诱导小鼠免疫抑制模型。

（2）针灸治疗：对针灸组小鼠进行电针治疗，选取“足三里”、“肾俞”、“肺俞”等穴位，每次治疗30分钟，每日1次，连续治疗7天。

（3）免疫指标检测：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平。

（4）细胞因子检测：采用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值。

（5）组织学观察：采用苏木精-伊红（HE）染色法观察小鼠脾脏组织形态学变化。

三、实验结果1. 免疫指标：与空白对照组相比，模型组小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平显著降低（P<0.05）；与模型组相比，针灸组小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平显著升高（P<0.05）。

2. 细胞因子：与空白对照组相比，模型组小鼠脾脏中CD4+、CD8+细胞比例及CD4+/CD8+比值显著降低（P<0.05）；与模型组相比，针灸组小鼠脾脏中CD4+、CD8+细胞比例及CD4+/CD8+比值显著升高（P<0.05）。

3. 组织学观察：与空白对照组相比，模型组小鼠脾脏组织出现淋巴细胞减少、组织结构紊乱等病理变化；与模型组相比，针灸组小鼠脾脏组织病理变化明显减轻。

四、讨论本实验结果表明，针灸可以显著提高实验小鼠的免疫功能，其作用机制可能与以下方面有关：1. 调节细胞因子水平：针灸可上调小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平，这些细胞因子在免疫调节中发挥重要作用，可增强机体免疫功能。

小鼠t细胞表面标志概述说明以及解释1. 引言1.1 概述T细胞是免疫系统中非常重要的一种淋巴细胞，能够对抗感染和诱发免疫反应。

T细胞在机体免疫应答的调节和控制中起到了关键作用。

小鼠作为实验动物模型，在研究免疫系统功能和相关疾病机制方面具有广泛应用价值。

在T细胞表面，有很多特定的蛋白质或分子被称为表面标志，它们可以在免疫系统中识别和区分不同类型的T细胞，并参与调控T细胞的活化、增殖、分化等过程。

因此，了解小鼠T细胞表面标志的表达及其功能对于深入理解小鼠免疫系统和相关疾病具有重要意义。

1.2 文章结构本文将从以下几个方面来介绍小鼠T细胞表面标志：首先，介绍T细胞的基本概念，包括其分类、结构以及功能；其次，阐述小鼠T细胞表面标志的重要性和作用机制；然后，列举一些常见的小鼠T细胞表面标志及其功能进行详细讨论；接着，介绍了表达小鼠T细胞表面标志的方法和技术，包括流式细胞术（流式细胞仪）、免疫组化染色法以及免疫荧光染色法；最后，总结了小鼠T细胞表面标志与免疫系统相关疾病的关联性研究进展，并提出了未来的研究展望。

1.3 目的本文旨在全面介绍小鼠T细胞表面标志及其功能，并探讨这些标志与免疫系统相关疾病之间的关系。

通过对小鼠T细胞表面标志的深入了解，有助于加深我们对小鼠免疫系统的理解，并为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。

2. 小鼠T细胞表面标志2.1 T细胞基本概念T细胞是一类免疫系统中的重要细胞，主要负责调节和协调机体的免疫反应。

作为一种特殊类型的白血球，T细胞可以通过其表面上不同的标志物来实现对宿主免疫系统的调控。

小鼠作为实验动物之一，其T细胞表面标志在免疫学领域中受到广泛关注。

2.2 T细胞表面标志的重要性小鼠T细胞表面标志具有重要的生物学功能和临床意义。

这些标志物能够帮助我们认识和分辨不同类型和亚群的T细胞，并对其功能进行描述和区分。

通过研究T细胞表面标志，我们可以深入了解小鼠免疫系统中T细胞的分布、数量、活性状态以及与其他免疫组分之间的相互作用，从而推动疾病机制和治疗方法等方面的研究进展。

视频3.2 研磨法分离小鼠脾脏单个核细胞同学们好！组织由细胞和细胞间质组成，利用研磨或酶解组织的方法可使其中细胞游离。

研磨法主要用于结构相对疏松的脾脏、肝脏、垂体、胎盘等动物组织。

研磨工具有注射器内芯、载玻片、盖玻片等，以注射器内芯最为常用。

实验原理：单个核细胞是指外周血和免疫器官中具有单个核的细胞，主要包括单核细胞和淋巴细胞等密度相近的几种免疫细胞。

脾脏是重要的外周免疫器官，富含单个核细胞，同时含有大量红细胞。

研磨脾脏可使其中细胞游离，裂解法除去红细胞后即可获得单个核细胞为主的细胞悬液。

实验材料及用品：6~8周龄健康小白鼠；超净工作台及配套用品（酒精灯、酒精棉球缸、试管架、火柴、记号笔、废物缸、废液缸等）；灭菌的2mL玻璃注射器内芯、200目细胞滤网、10mL聚丙烯离心管、眼科剪、尖头镊子、5mL一次性注射器、一次性6cm平皿、一次性9cm平皿、1mL微量加样器、枪头、一次性吸管、EP管、D-Hanks液、0.83%的氯化铵溶液；10mL低速离心机；托盘天平；40mL小烧杯；水浴锅；不锈钢棉球缸；75%酒精；0.4%台盼蓝生理盐水染液。

实验操作环节主要有：小鼠处死——小鼠消毒——剖取脾脏——研磨游离脾脏细胞——离心收集脾脏细胞——裂解红细胞——收集单个核细胞——台盼蓝染色——镜检细胞活率具体操作步骤如下：1、小鼠处死：用脱颈法处死小鼠。

2、小鼠消毒：将小鼠放入不锈钢棉球缸中，向其中加入75%酒精至覆盖小鼠，消毒3~5min。

3、剖取脾脏：将装有小鼠的不锈钢棉球缸用酒精棉球擦拭消毒后转入超净工作台；吸取5mL D-Hanks液，注入6cm平皿中；再吸取5mL D-Hanks液，放置备用；取出已消毒的眼科剪和镊子，将小鼠转入9cm平皿中，使其腹部朝上；沿腹中线剪开小鼠腹部皮肤和腹膜；用手将腹部皮肤和腹膜向左右两侧拉开，使腹部内脏暴露；将小鼠腹部左侧肠道向右上方向翻开，暴露暗红色长条状脾脏；剪开与脾脏连接的组织，将脾脏放入D-Hanks液。

单次大剂量㊁多次小剂量环磷酰胺腹腔注射构建小鼠免疫抑制模型对比观察李燕华ꎬ梁月琴ꎬ夏洪颖ꎬ王崇静ꎬ李仲昆昆明市延安医院ꎬ昆明６５００５１㊀㊀摘要:目的㊀对比观察单次大剂量㊁多次小剂量环磷酰胺(ＣＹ)腹腔注射构建小鼠免疫抑制模型的效果ꎮ方法㊀３０只ＩＣＲ健康雄性小鼠随机分为单次组㊁多次组㊁对照组各１０只ꎬ单次组在实验第７天腹腔注射１００ｍｇ/ｋｇ的ＣＹꎬ多次组在实验第１㊁３㊁５㊁７ｄ腹腔注射５０ｍｇ/(ｋｇ ｄ)的ＣＹꎬ对照组在实验第１㊁３㊁５㊁７ｄ腹腔注射等量生理盐水ꎮ比较各组小鼠体质量㊁脾脏指数㊁胸腺指数㊁ＰＰｓ计数㊁ＣＤ３＋细胞比例㊁ＣＤ１９＋细胞比例㊁肠道黏膜ＳＩｇＡ含量ꎮ结果㊀与空白组比较ꎬ单词组实验第８ｄ及多次组实验第３㊁５㊁７㊁８ｄ体质量降低(Ｐ均<０.０５)ꎻ与多次组比较ꎬ单次组实验第３㊁５㊁７㊁８ｄ体质量升高(Ｐ均<０.０５)ꎮ与空白组比较ꎬ单词组和多次组脾脏指数㊁胸腺指数降低(Ｐ均<０.０５)ꎻ与多次组比较ꎬ单次组脾脏指数㊁胸腺指数降低(Ｐ均<０.０５)ꎮ与空白组比较ꎬＰＰｓ计数㊁ＣＤ１９＋细胞比例㊁肠道黏膜ＳＩｇＡ含量降低ꎬＣＤ３＋细胞比例升高(Ｐ均<０.０５)ꎻ与多次组比较ꎬ单词组ＰＰｓ计数㊁ＣＤ１９＋细胞比例㊁肠道黏膜ＳＩｇＡ含量降低ꎬＣＤ３＋细胞比例升高(Ｐ均<０.０５)ꎮ结论㊀单次大剂量和多次小剂量的ＣＹ均可建立免疫抑制动物模型ꎬ前者对小鼠体质量影响更小ꎬ且造模效果佳ꎮ㊀㊀关键词:环磷酰胺ꎻ动物模型ꎻ免疫抑制模型㊀㊀ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００２￣２６６Ｘ.２０２０.０３.０１１㊀㊀中图分类号:Ｒ９６５㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀文章编号:１００２￣２６６Ｘ(２０２０)０３￣００４２￣０５ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｎｇｌｅｈｉｇｈｄｏｓｅａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｌｏｗｄｏｓｅｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅａｂｄｏｍｉｎａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎｉｎｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｍｏｕｓｅｍｏｏｌｅｌｓＬＩＹａｎｈｕａꎬＬＩＡＮＧＹｕｅｑｉｎｇꎬＸＩＡＨｏｎｇｙｉｎｇꎬＷＡＮＧＣｏｎｇｊｉｎｇꎬＬＩＺｈｏｎｇｋｕｎＹａｎᶄａｎＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＫｕｎｍｉｎｇＣｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５００５１ꎬＣｈｉｎａ基金项目:昆明市卫生科技人才培养项目(２０１６ＳＷＲＣ)ꎮ通信作者:李仲昆(Ｅ￣ｍａｉｌ:ｙａｙｙｌｚｋ＠１６３.ｃｏｍ)[１１]ＶｉｔｏｒａｔｏｕＤＩꎬＴｏｌｉａＭꎬＬｉａｋｏｓＰꎬｅｔａｌ.Ｃｌｉｎｉｃａｌｖａｌｕｅｏｆｓｉｇｎｉｆｉ￣ｃａｎｃｅｏｆｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅＦａｃｔｏｒ￣１αꎬｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ￣１ａｎｄｃａｒｂｏｎｉｃａｎｈｙｄｒａｓｅＩＸｉｎｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒａｆｔｅｒｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅｃｈｅｍｏｒａ￣ｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＪＢｕｏｎꎬ２０１９ꎬ２４(２):４５６￣４６３.[１２]熊艳峰ꎬ赖晓红ꎬ梁桦ꎬ等.七氟醚对单肺通气大鼠肺癌ＨＩＦ１α/ＥＭＴ通路活性及侵袭力的影响[Ｊ].实用医学杂志ꎬ２０１８ꎬ３４(１２):１９７０￣１９７２.[１３]ＬｉＹＸꎬＤｉｎｇＳＪꎬＸｉａｏＬꎬｅｔａｌ.Ｄｅｓｆｅｒｏｘａｍｉｎｅｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｒａｔｓｂｙｉｎｄｕｃｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ１ａｌｐｈａａｎｄｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ[Ｊ].ＮｅｕｒｏｓｃｉＢｕｌｌꎬ２００８ꎬ２４(２):８９￣９５.[１４]ＣｈｅｎＹꎬＦａｎＺꎬＬｉａｏＬꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｅｃｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｙｐｅｒｂａｒｉｃｏｘｙｇｅｎｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅｏｎｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｓｃｈｅ￣ｍｉａ￣ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].ＪＣｏｌｌＰｈｙｓｉｃｉａｎｓＳｕｒｇＰａｋꎬ２０１９ꎬ２９(１０):１０１６￣１０１７.[１５]蒋智永ꎬ胡子健ꎬ孟承颖ꎬ等.ＨＩＦ￣１α对大鼠内皮细胞通透性的影响及作用机制[Ｊ].安徽医科大学学报ꎬ２０１９ꎬ５４(７):１６０１￣１０６５.[１６]ＺｈｏｕＹꎬＦａｔｈａｌｉＮꎬＬｅｋｉｃＴꎬｅｔａｌ.Ｒｅｍｏｔｅｌｉｍｂｉｓｃｈｅｍｉｃｐｏｓｔｃｏｎ￣ｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｎｅｏｎａｔａｌｈｙｐｏｘｉｃ￣ｉｓｃｈｅｍｉｃｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｐｕｐｓｂｙｔｈｅｏｐｉｏｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒ/Ａｋｔｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].Ｓｔｒｏｋｅꎬ２０１１ꎬ４２(２):４３９￣４４４.[１７]孙志超.胃癌中ＨＩＦ￣１α㊁ＶＥＧＦ和ＥＧＦＲ的表达及临床病理意义[Ｊ].齐齐哈尔医学院学报ꎬ２０１８ꎬ３９(２４):２８５６￣２８５９. [１８]ＫｉｔａｕｒａＪꎬＭｕｋａｉＳꎬＭｏｒｉｍｏｔｏＨꎬｅｔａｌ.Ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌｈｅｍａｔｏｍａａｆ￣ｔｅｒｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｉｎａｐａ￣ｔｉｅｎｔｗｉｔｈａｈｉｓｔｏｒｙｏｆｔｏｔａｌａｏｒｔｉｃａｒｃｈｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ[Ｊ].ＫｙｏｂｕＧｅ￣ｋａꎬ２０１９ꎬ７２(９):６７３￣６７６.[１９]ＬｉｕＢＮꎬＨａｎＢＸꎬＬｉｕＦ.ＮｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｐＡｋｔａｎｄＨＩＦ￣１αｏｎｉｓｃｈｅｍｉａｒａｔｓ[Ｊ].ＡｓｉａｎＰａｃＪＴｒｏｐＭｅｄꎬ２０１４ꎬ７(３):２２１￣２２５.[２０]ＣｈｅｎｇＺꎬＬｉＬꎬＭｏＸꎬｅｔａｌ.Ｎｏｎ￣ｉｎｖａｓｉｖｅｒｅｍｏｔｅｌｉｍｂｉｓｃｈｅｍｉｃｐｏｓｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｒｏｔｅｃｔｓｒａｔｓａｇａｉｎｓｔｆｏｃａｌｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｂｙｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＳＴＡＴ３ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＭｅｄꎬ２０１４ꎬ３４(４):９５７￣９６６.(收稿日期:２０１９￣１０￣１４)２４㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｎｇｌｅｈｉｇｈｄｏｓｅａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｌｏｗｄｏｓｅｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ(ＣＹ)ａｂ￣ｄｏｍｉｎａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎｉｎｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｉｒｔｙｈｅａｌｔｈｙｍａｌｅＩＣＲｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐꎬａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＴｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈＣＹ１００ｍｇ/ｋｇｏｎｔｈｅ７ｔｈｄａｙꎬｔｈｅｍｉｃｅｉｎｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈＣＹ５０ｍｇ/(ｋｇ ｄ)ｏｎｔｈｅ１ｓｔꎬ３ｒｄꎬ５ｔｈａｎｄ７ｔｈｄａｙｓꎬｗｈｉｌｅｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅｏｎｔｈｅｔｈｅ１ｓｔꎬ３ｒｄꎬ５ｔｈａｎｄ７ｔｈｄａｙｓ.ＴｈｅｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔꎬｖｉｓｃｅｒａｌｉｎｄｅｘꎬｔｈｙｍｕｓｉｎｄｅｘꎬＰＰｓｃｏｕｎｔꎬｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＣＤ３＋ꎬｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＣＤ１９＋ａｎｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａＳＩｇＡｃｏｎｔｅｎｔｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｌａｎｋｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｏｆｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐｏｎｔｈｅ８ｔｈｄａｙａｎｄｉｎｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐｏｎｔｈｅ３ｒｄꎬ５ｔｈꎬ７ｔｈａｎｄ８ｔｈｄａｙｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ(ａｌｌＰ<０.０５).Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｌａｎｋｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｖｉｓｃｅｒａｉｎｄｅｘａｎｄｔｈｙｍｕｓｉｎｄｅｘｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｔｈｅｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐ(ｂｏｔｈＰ<０.０５)ꎻｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｖｉｓｃｅｒａｉｎｄｅｘａｎｄｔｈｙｍｕｓｉｎｄｅｘｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｔｈｅｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐ(ｂｏｔｈＰ<０.０５).ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｌａｎｋｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａＰＰｓꎬｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＣＤ１９＋ａｎｄｉｎｔｅｓｔｉ￣ｎａｌｍｕｃｏｓａＳＩｇＡｉｎｔｈｅｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙꎬａｎｄｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＣＤ３＋ｉｎ￣ｃｒｅａｓｅｄ(ａｌｌＰ<０.０５).ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａＰＰｓꎬｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＣＤ１９＋ａｎｄｉｎ￣ｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａＳＩｇＡｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙꎬａｎｄｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＣＤ３＋ｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｔｈｅｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐ(ａｌｌＰ<０.０５).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＢｏｔｈｔｈｅｓｉｎｇｌｅｈｉｇｈｄｏｓｅａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｌｏｗｄｏｓｅｓｏｆＣＹｃａｎｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｉｍｍｕｎｏｓｕｐ￣ｐｒｅｓｓｉｏｎꎬａｎｄｔｈｅｆｏｒｍｅｒｈａｓｌｅｓｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔａｎｄｂｅｔｔｅｒｍｏｄｅｌｉｎｇｅｆｆｅｃｔ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅꎻａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓꎻｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｍｏｄｅｌｓ㊀㊀免疫器官㊁免疫细胞和免疫分子共同组成了免疫系统ꎬ是对抗感染和肿瘤至关重要的因素[１]ꎮ近年来ꎬ由环境污染㊁生态失衡等所引发的免疫抑制性疾病的发病率逐年上升ꎬ而建立适合的免疫抑制模型对进一步研究该类疾病尤为重要[２]ꎮ环磷酰胺(ＣＹ)是一种抗肿瘤药物ꎬ其也具有显著的免疫抑制作用[３]ꎬ是治疗免疫疾病的常用药物ꎬ特别在作为联合应用的免疫调节剂和抗肿瘤药物方面已广泛应用[４ꎬ５]ꎮＣＹ在抑制癌细胞增殖的同时ꎬ也抑制免疫细胞的增殖ꎬ可造成机体免疫应答(包括体液免疫和细胞免疫)的全面抑制ꎮ因此ꎬ许多国家和国际机构均推荐ＣＹ作为免疫毒性的阳性物[６~８]ꎮ采用ＣＹ建立免疫抑制模型的方法常采用单次大剂量(１００㊁１５０ｍｇ/ｋｇ)和多次小剂量[２０㊁４０㊁８０ｍｇ/ (ｋｇ ｄ)]两种给药方法ꎬ但是较大剂量[８０ｍｇ/ (ｋｇ ｄ)]腹腔连续注射３ｄ后可造成实验后期动物的死亡[９]ꎮ为减少实验动物的病死率ꎬ提高造模的成功率ꎬ为免疫抑制实验模型的建立提供参考ꎬ本研究采用单次大剂量注射和小剂量多次注射的给药方法制备小鼠免疫抑制模型ꎬ并对小鼠的体质量及末次注射ＣＹ后２４ｈ的脏器指数㊁肠道黏膜派氏结(ＰＰｓ)计数㊁肠道黏膜ＰＰｓ淋巴细胞表型㊁肠道黏膜ＳＩｇＡ含量等免疫指标进行比较ꎬ旨在为选择ＣＹ制备免疫抑制模型时的合适剂量提供参考ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀实验动物㊀ＳＰＦ级ＩＣＲ雄性小鼠３０只ꎬ６~８周龄ꎬ体质量(２０ʃ２)ｇꎬ购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司ꎬ动物许可证号ＳＣＸＫ(湘)２０１１￣０００３ꎮ１.２㊀药物㊁试剂及仪器㊀０.９％氯化钠注射液(四川科伦药业股份有限公司ꎬ生产批号ａｄ１６０２０１ｂ２)ꎻ注射用ＣＹ(江苏盛迪医药有限公司生ꎬ批号１７１０２５２５)ꎻＤＡＢ试剂盒(北京中杉金桥生物科技有限公司)ꎮ抗小鼠ＣＤ３ｅ￣ＦＩＴＣ㊁抗小鼠ＣＤ１９￣ＰＥ㊁ＣＤ６９￣ＰＥ￣ＣＹＴＭ７(美国ＢＤ￣Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司ꎬ批号分别为５５３０６２㊁５５７３９９㊁５５２８７９)ꎻＡｎｔｉ￣ＴＬＲ４ａｎｔｉｂｏｄｙ试剂盒(Ａｂｃａｍ公司ꎬ批号ＧＲ３２５０３４￣５)ꎻ胎牛血清(ＦＢＳ)(法国Ｂｉｏｗｅｓｔ公司ꎬ批号０２０４１３￣ＵＹ)ꎻ改良型ＲＰＭＩ１６４０培养基[赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司ꎬ批号ＮＡＣ１３６１]ꎮＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ流式细胞仪(ＦＣ￣５００)(美国Ｂｅｃｋｍａｎ公司)ꎻ全自动酶标仪Ｍｏｄｅｌ５５０(美国ＢＩＯ￣ＲＡＤ公司)ꎻＬＥＧＥＮＤＭＩＣＲＯ１７台式微量离心机(美国Ｔｈｅｒｍｏ公司)ꎻ倒置相差显微镜(ＢＤＳ２００)(重庆奥特光学仪器有限责任公司)ꎻＴＤ５Ｍ低速多管架自动平衡离心机(长沙万佳森仪器设备有限责任公司)ꎻ光学显微镜(Ｎｉｋｏｎ５０ｉ):日本Ｎｉｋｏｎ公司ꎻＦＡ２００４电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)ꎻ血球计数板(上海市求精生化试剂仪器有限公司)ꎻＣｅｌｌＳｔｒａｉｎｅｒ(１００μｍꎬ７０μｍ)(美国Ｆａｌ￣ｃｏｎ公司)ꎻ眼科剪㊁眼科镊ꎮ１.３㊀实验动物分组及免疫抑制模型制备㊀将ＩＣＲ健康雄性小鼠适应性暂养１周后ꎬ称重㊁标记ꎬ后随机分为单次组㊁多次组㊁对照组各１０只ꎮ单次组在实验第７天腹腔注射１００ｍｇ/ｋｇ的ＣＹꎬ多次组在实验第１㊁３㊁５㊁７ｄ腹腔注射５０ｍｇ/(ｋｇ ｄ)的ＣＹꎬ以免疫抑制模型ꎻ对照组在实验第１㊁３㊁５㊁７ｄ腹腔注射等量生理盐水ꎮ各注射后自由取食饮水ꎮ３４１.４㊀小鼠体质量测定㊀采用电子秤测定实验第１㊁３㊁５㊁７㊁８ｄ每只小鼠的体质量ꎬ并记录ꎮ１.５㊀小鼠处死及相关指标测定㊀实验第８ｄꎬ以颈椎脱臼法处死小鼠３０只ꎬ按下列步骤测定小鼠脏器指数㊁肠黏膜ＰＰｓ计数㊁肠黏膜ＣＤ３＋㊁ＣＤ１９＋细胞比例测算㊁小鼠肠道黏膜ＳＩｇＡꎮ１.５.１㊀小鼠脏器指数测定㊀沿胸部和腹部中线切开小鼠ꎬ按解剖位置摘取脾脏和胸腺ꎬ小心剔除其周围的筋膜及组织ꎬ滤纸吸干残余的血液后进行称重(ｇ)ꎬ将称得的重量(ｇ)除以小鼠体质量(ｇ)ꎬ计算胸腺指数和脾脏指数ꎬ脾脏指数(％)＝脾脏重量(ｇ)/小鼠体质量ˑ１００ꎬ胸腺指数(％)＝胸腺重量(ｇ)/小鼠体质量ˑ１００ꎮ１.５.２㊀小鼠肠黏膜ＰＰｓ计数㊀打开小鼠腹腔ꎬ取出全段小肠ꎬ迅速放入含有５％胎牛血清(５％ＦＢＳ)的ＲＰＭＩ１６４０液的培养皿中ꎬ剔除肠系膜及肠黏膜表面的脂肪组织ꎬ在外肠壁上可看见麦粒样的圆形突起ꎬ即为ＰＰｓ[１０]ꎬ肉眼计数并记录ＰＰｓ数目ꎮ１.５.３㊀小鼠肠黏膜ＣＤ３＋细胞比例㊁ＣＤ１９＋细胞比例测算㊀ＰＰｓ淋巴细胞获取及表型测定肉眼计数并记录ＰＰｓ数目完成后ꎬ将小鼠肠腔冲洗干净ꎬ迅速放入含５％ＦＢＳ的ＲＰＭＩ１６４０液的培养皿中ꎻ用眼科镊和眼科剪小心分离出ＰＰｓꎻ将其浸入含５％ＦＢＳ的ＲＰ￣ＭＩ１６４０液的培养皿中ꎬ先用５％ＦＢＳ的ＲＰＭＩ１６４０液浸润１２０目细胞筛ꎬ并将ＰＰｓ小心移入细胞筛中ꎬ用研磨棒以适当的力度轻轻研磨ꎬ再用５％ＦＢＳ的ＲＰ￣ＭＩ１６４０液冲洗细胞筛过滤ꎻ以上滤液用２００目细胞筛过滤ꎻ收集滤液ꎬ加至５ｍＬꎬ以２０００ｒ/ｍｉｎ速度离心１０ｍｉｎꎬ弃上清液ꎬ加入５％ＦＢＳ的ＲＰＭＩ１６４０液约３ｍＬꎬ重悬细胞即得ＰＰｓ细胞悬液ꎮ将收集到的ＰＰｓ细胞计数并调节细胞浓度至１ˑ１０７/ｍＬꎬ分别取１００μＬ细胞加入流式检查专用试管中进行荧光标记ꎬ每管依次加入抗小鼠ＣＤ３ｅ￣ＦＩＴＣ㊁ＣＤ１９￣ＰＥ单克隆抗体各０.５μｇꎬ混匀后４ħ避光孵育３０ｍｉｎꎬ用ＰＢＳ洗涤细胞两次(１５００ｒ/ｍｉｎꎬ５ｍｉｎ)ꎬ弃上清ꎬ用ＰＢＳ３００μＬ重悬后进行流式细胞仪检测[１０]ꎮ１.５.４㊀小鼠肠道黏膜ＳＩｇＡ测定㊀取出全段小肠ꎬ用带有灌胃针的１０ｍＬ注射器向肠腔内注入ＮＳ约３ｍＬꎬ并在小肠内保留３ｍｉｎꎬ轻轻晃动使肠腔内的内容物充分溶解ꎬ将肠腔内灌洗液收集于ＥＰ管中ꎬ以３０００ｒ/ｍｉｎ的速度离心１０ｍｉｎꎬ收集上清液于冻存管ꎬ－８０ħ储存ꎬ编号备用ꎮ待样本收齐后ꎬ严格按酶联免疫技术(ＥＬＩＳＡ)鼠ＳＩｇＡ试剂盒说明书操作[１０]ꎬ即取１００μＬ不同浓度梯度的标准品㊁样品㊁阳性对照品和空白分别加入酶标板ꎬ３７ħ孵育２ｈꎻ用拍板纸拍干板子ꎬ不洗板ꎻ提前２０ｍｉｎ配制Ｄｅｔｅｃ￣ｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔＡ工作液ꎻ加入１００μＬＤｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔＡ工作液到酶标板ꎬ轻轻震荡混匀ꎬ３７ħ孵育６０ｍｉｎꎻ洗板３次ꎻ每个孔加３００μＬ１ˑ洗液工作液放置２ｍｉｎ后用拍板纸拍干板子ꎻ提前２０ｍｉｎ配制ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔＢ工作液ꎻ加入１００μＬＤｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔＢ工作液到酶标板ꎬ轻轻震荡混匀ꎬ３７ħ避光孵育３０ｍｉｎꎻ洗板５次ꎻ加入９０ｌ显色底物(ＴＭＢ)到酶标板ꎬ轻轻震荡混匀ꎬ３７ħ避光孵育１５ｍｉｎꎻ加入５０μＬ终止液到酶标板ꎬ轻轻震荡混匀ꎬ用酶标仪在４５０ｎｍ处检测标准品和样本ＯＤ值ꎻ以ＯＤ值为纵坐标ꎬ以标准品浓度为横坐标ꎬ绘制标准曲线ꎬ根据ＯＤ值在标准曲线上查出浓度ꎮ１.６㊀统计学方法㊀采用ＳＰＳＳ２３.０统计软件ꎮ计量资料以 ｘʃｓ表示ꎬ组间比较采用单因素方差分析ꎮＰ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀不同时点各组小鼠体质量比较㊀不同时点小鼠体质量比较见表１ꎮ表１㊀不同时点各组小鼠体质量比较(ｇꎬ ｘʃｓ)细胞体质量实验第１ｄ实验第３ｄ实验第５ｄ实验第７ｄ实验第８ｄ单次组２１.４２ʃ０.２８２２.８３ʃ０.２８ｂ２４.０９ʃ０.３２ｂ２５.４４ʃ０.３７ｂ２５.１３ʃ０.３８ａｂ多次组２１.３３ʃ０.３０２２.３６ʃ０.２７ａ２３.４０ʃ０.３４ａ２４.４２ʃ０.２４ａ２４.８２ʃ０.２３ａ空白组２１.４６ʃ０.３３２２.９２ʃ０.３２２４.０７ʃ０.６４２５.２３ʃ０.４９２５.７５ʃ０.１９㊀㊀注:与空白组比较ꎬａＰ<０.０５ꎻ与多次组比较ꎬｂＰ<０.０５ꎮ２.２㊀各组脾脏指数㊁胸腺指数比较㊀脾脏指数㊁胸腺指数比较见表２ꎮ２.３㊀各组肠黏膜ＰＰｓ计数㊁ＣＤ３＋细胞比例㊁ＣＤ１９＋细胞比例㊁肠道黏膜ＳＩｇＡ含量比较㊀肠黏膜ＰＰｓ计数㊁ＣＤ３＋细胞比例㊁ＣＤ１９＋细胞比例㊁肠道黏膜ＳＩｇＡ含量比较见表３ꎮ表２㊀各组脾脏指数㊁胸腺指数比较(％ꎬ ｘʃｓ)组别脾脏指数胸腺指数单次组０.２７ʃ０.０２ａｂ０.０７ʃ０.０１ａｂ多次组０.３６ʃ０.０２ａ０.１１ʃ０.０４ａ空白组０.４６ʃ０.０３０.１７ʃ０.０５㊀㊀注:与空白组比较ꎬａＰ<０.０５ꎻ与多次组比较ꎬｂＰ<０.０５ꎮ４４表３㊀各组肠黏膜ＰＰｓ计数㊁ＣＤ３＋细胞比例㊁ＣＤ１９＋细胞比例㊁肠道黏膜ＳＩｇＡ含量比较( ｘʃｓ)组别ＰＰｓ计数(个)ＣＤ３＋细胞比例(％)ＣＤ１９＋细胞比例(％)肠道黏膜ＳＩｇＡ含量(μｇ/ｍＬ)单次组４.７０ʃ０.４８ａｂ５５.３７ʃ４.９５ａｂ４５.１１ʃ５.３６ａｂ２２.７３ʃ３.２７ａｂ多次组５.９０ʃ０.７４ａ４８.８５ʃ２.６８ａ５１.１６ʃ４.８１ａ３２.４７ʃ３.２９ａ空白组７.３０ʃ０.８２３８.６９ʃ４.１７６１.４０ʃ５.１５４０.８６ʃ２.９４㊀㊀注:与空白组比较ꎬａＰ<０.０５ꎻ与多次组比较ꎬｂＰ<０.０５ꎮ３㊀讨论㊀㊀免疫系统的各种细胞㊁组织和器官的组成成分和功能的正常是机体免疫功能的基本保证ꎬ任何一方面的缺陷都将导致免疫功能障碍ꎮ机体自发㊁病原或药物㊁营养因素㊁环境因素均可引起免疫系统的功能异常ꎬ进而导致功能障碍㊁免疫应答和保护功能的降低或消失ꎬ最后引发机体丧失抵抗感染能力或形成免疫性疾病ꎬ容易受到细菌㊁病毒㊁真菌等感染ꎬ甚至容易长肿瘤[１１~１３]ꎮ目前ꎬ对免疫抑制性疾病的治疗主要以调整机体的自身免疫功能为主ꎬ免疫增强剂在医学上的应用已经引起了人们的广泛关注[１４]ꎮ中药免疫增强剂是目前使用较多的免疫增强剂ꎬ它可激活免疫活性细胞ꎬ增强机体的免疫功能ꎻ还可作为辅助药物与一些疫苗合用ꎬ增强免疫应答ꎬ提高免疫效应ꎻ主要用于一些免疫功能缺陷及难治性感染ꎮ但其仅在动物饲料添加中使用较为广泛ꎻ在临床使用方面ꎬ受到一定的限制ꎬ需要进入深入的研究开发[１５]ꎮ为此ꎬ建造安全有效的免疫抑制动物模型显得尤为重要ꎮ在生命科学研究中ꎬ免疫抑制动物模型建造的主要方法包括去胸腺动物模型㊁基因敲除动物模型㊁辐射损伤模型和免疫抑制剂模型等[１６~１８]ꎬ其中使用免疫抑制剂进行建模的方法由于总体成本较低㊁操作简便并且重复性好ꎬ因此在目前的研究中广泛应用ꎮ用于建立免疫抑制动物模型的免疫抑制剂包括微生物酵解产物类㊁激素类㊁抗代谢物类㊁抗体类㊁烷化剂类等ꎬ其中烷化剂类免疫抑制剂是建立的免疫抑制模型研究中最常用的方法ꎮ烷化剂按化学结构可分为氮芥类㊁磺酸酯及多元醇类㊁亚硝基脲类㊁三氮烯咪唑类和胼类㊁乙撑亚胺类ꎮ㊀㊀ＣＹ是一种抗肿瘤药物ꎬ对白血病和实体瘤都有效ꎬ是第一个所谓 潜伏化 广谱抗肿瘤药ꎮＣＹ是一种无活性的前药ꎬ在氮芥部分上连有一个吸电子的环状磷酰基ꎬ降低了烷基化的能力ꎬ体外几乎无活性ꎬ当其进入人体后ꎬ被肝脏或肿瘤内存在的过量的磷酰胺酶或磷酸酶水解ꎬ变为活化作用型的磷酰胺氮芥而起作用的氮芥类衍生物ꎮ磷酰胺氮芥作为烷化剂的一种在体内能和细胞的蛋白质和核酸相结合ꎬ使蛋白质和核酸失去正常的生理活性ꎬ发挥其抑制肿瘤细胞生长的作用ꎬ同时由于其非特异性ꎬ也会产生针对骨髓㊁胃肠道上皮和生殖系统等生长旺盛的细胞毒性ꎻ此外ꎬ还对免疫器官和敏感的淋巴细胞产生影响ꎬ进而对免疫功能产生明显抑制ꎮ可用于乳腺癌㊁恶性淋巴瘤ꎬ多发性骨髓瘤㊁白血病㊁卵巢癌㊁宫颈癌㊁前列腺癌㊁结肠癌㊁支气管癌㊁肺癌等肿瘤的化疗ꎻ还可作为免疫抑制剂用于各种自身免疫性疾病ꎬ如天疱疮以及溃疡性结肠炎㊁严重类风湿性关节炎㊁全身性红斑狼疮㊁多发性肉芽肿㊁特发性血小板减少性紫癜㊁儿童肾病综合征等ꎬ以及用于器官移植时抗排斥反应[１９~２３]ꎮＣＹ因其效果稳定㊁较易获得同时成本不高ꎬ常用于建立免疫抑制模型并有较多的文献报道ꎬ因而被广泛接受并应用于药物药效学评价和安全性评价ꎮ㊀㊀文献[６]报道ꎬ实验动物腹腔注射ＣＹ后ꎬ可导致动物体质量不同程度的降低ꎬ这与使用ＣＹ的剂量和时间有关ꎬ尤其是在注射后的第１周ꎬ但大剂量单次注射体质量明显高于小剂量连续注射组ꎮ与空白组比较ꎬ单词组实验第８天及多次组实验第３㊁５㊁７㊁８天体质量降低ꎻ与多次组比较ꎬ单次组实验第３㊁５㊁７㊁８天体质量升高ꎮ脾脏是机体最大的外周免疫器官ꎬ当抗原刺激机体后ꎬ免疫细胞(Ｔ细胞㊁Ｂ细胞和巨噬细胞)过度增生ꎬ导致其体积增大ꎻ胸腺是机体的中枢免疫器官ꎬ是Ｔ细胞分化成熟的场所ꎻ而机体免疫抑制时ꎬ使得淋巴组织萎缩ꎬ免疫器官的体积缩小ꎮ故免疫器官的脏器指数体现了其发育情况ꎬ可间接的反映机体的免疫状态ꎮ本研究显示ꎬ单次组和多次组均出现了脾脏指数和胸腺指数的降低ꎬ且单次组较多次组明显ꎬ间接说明两组实验动物均存在免疫抑制ꎬ且单次组较多次组明显ꎮＰＰｓ是沿着小肠纵向分布位于膜系膜固有层和黏膜下层的微小淋巴样组织ꎬ含有胸腺源性Ｔ细胞和Ｂ细胞ꎬ其中心区域富含Ｂ细胞ꎬ是诱导肠道黏膜进行免疫应答的重要部位ꎬＰＰｓ淋巴细胞数量和活性状态等可以反映肠道黏膜局部的免疫功能状态ꎮＣＤ３＋Ｔ淋巴细胞代表总的Ｔ淋巴细胞ꎬ而ＣＤ１９＋是Ｂ淋巴细胞表面抗原ꎬ除了浆细胞外的Ｂ细胞谱系所有发育阶段都有ＣＤ１９分布ꎬＣＤ１９也是ＣＤ１９/ＣＤ２１/ＣＤ８１信号复合物的重要组成部分ꎬ故ＣＤ１９＋代表了ＰＰｓ内除了浆细胞外的Ｂ细胞谱系不同发育阶段Ｂ细胞的总和ꎮ在既往的研究中ꎬ不同的ＣＹ造模实验５４均可导致Ｔ淋巴细胞㊁Ｔｈ细胞㊁Ｔｓ细胞比例升高ꎬＢ淋巴细胞比例下降[６]ꎮ本文发现ꎬ单次组和多次组均出现了ＣＤ３＋细胞比例升高ꎬＣＤ１９＋细胞比例降低ꎬ且单次组较多次组更为明显ꎬ进一步说明两组实验动物均存在免疫抑制ꎬ造模成功且单次组效果更佳ꎮ有研究[９ꎬ２４]表明ꎬ大剂量ＣＹ(１００ｍｇ/ｋｇ)制造免疫抑制模型效果更佳ꎻ在连续腹腔注射ＣＹ的动物模型中ꎬ４０ｍｇ/(ｋｇ ｄ)和６０ｍｇ/(ｋｇ ｄ)的用量均可完成免疫抑制模型的成功造模[２５]ꎬ但后者的效果优于前者ꎮ康慧琳等[２６]发现ꎬ高剂量ＣＹ通过抑制ＤＮＡ的复制㊁促进细胞凋亡ꎬ降低免疫细胞功能ꎬ使机体处于免疫抑制状态ꎮ免疫效应分子ＳＩｇＡ由肠道黏膜固有层浆细胞分泌ꎬ是机体内分泌量最大的免疫球蛋白ꎬ也是肠黏膜表面主要的免疫球蛋白ꎬ对消化道黏膜起着重要防御作用ꎬ当ＣＹ免疫引起抑制时ꎬ可引起肠道粘膜ＳＩｇＡ水平下降[２７]ꎮ本研究中ꎬ肠道粘膜ＳＩｇＡ的含量也出现了相同的变化趋势ꎬ且以单次组更为明显ꎮ㊀㊀总之ꎬ单次大剂量和多次小剂量的ＣＹ均可建立免疫抑制动物模型ꎬ前者对体质量影响更小㊁造模效果更佳ꎮ参考文献:[１]ＬｉｎｄｓａｙＢ.Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ[Ｊ].ＥｓｓａｙｓＢｉｏｃｈｅｍꎬ２０１６ꎬ６０(３):２７５￣３０１.[２]钟金凤ꎬ方热军.环磷酰胺免疫抑制机制及在动物模型上的应用[Ｊ].中国免疫学杂志ꎬ２０１６ꎬ３２(１０):１５４１￣１５４５. [３]Ｓ.Ｃ.斯威曼.马丁代尔药物大典[Ｍ].北京:化学工业出版社ꎬ２０１４:６７０.[４]ＷａｎｇＨꎬＷａｎｇＭꎬＣｈｅｎＪꎬｅｔａｌ.Ａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｓｔｒｏｎｇｙ￣ｌｏｃｅｎｔｒｏｔｕｓｎｕｄｕｓｅｇｇｓｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｍ￣ｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ￣ｔｒｅａｔｅｄｍｉｃｅ[Ｊ].ＩｎｔＩｍｍｕ￣ｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１１ꎬ１１:１９４６￣１９５３.[５]ＷａｎｇＨꎬＹａｎｇＳꎬＷａｎｇＹＨꎬｅｔａｌ.Ｉｍｍｕｎｏｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｆｒｏｍａｐｏｓｔｉｃｈｏｐｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ:ｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｃｙ￣ｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｍｉｃｅｓｔｕｄｉｅｓ[Ｊ].ＭａｒＤｒｕｇｓꎬ２０１７ꎬ１５(１１):３４７￣３５１.[６]宋雁ꎬ贾旭东ꎬ崔文明ꎬ等.不同途径和剂量环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型的对比研究[Ｊ].中国食品卫生杂志ꎬ２０１３ꎬ２５(３):２１８￣２２５.[７]ＧｅｒｍｏｌｅｃＤꎬＬｕｅｂｋｅＲꎬＲｏｏｎｅｙＡꎬｅｔａｌ.Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ:ａｂｒｉｅｆｈｉｓｔｏｒｙꎬｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓａｎｄｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｆｕｔｕｒｅｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ[Ｊ].ＣｕｒｒＯｐｉｎＴｏｘｉｃｏｌꎬ２０１７ꎬ５:５５￣５９. [８]ＨｕｙａｎＸＨꎬＬｉｎＹＰꎬＧａｏＴꎬｅｔａｌ.Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅｏｎｗｈｉｔｅｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓａｎｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｐｏｐｕｌａ￣ｔｉｏｎｓｆｒｏｍｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｏｆＢａｌｂ/ｃｍｉｃｅ[Ｊ].ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐ￣ｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１１ꎬ１１(９):１２９３￣１２９７.[９]张俊ꎬＹｏｎｇ￣ＳｅｏｎｇＳｈｉｎꎬ胡安君ꎬ等.环磷酰胺致大鼠免疫抑制和免疫亢进模型的建立与评价[Ｊ].中国实验动物学报ꎬ２０１５ꎬ２３(４):３９５￣４００.[１０]李燕华ꎬ梁月琴ꎬ王崇静ꎬ等.粗根荨麻多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠肠道派氏结细胞表型及ＴＬＲ４的影响[Ｊ].中成药ꎬ２０１７ꎬ３６(６):１２７２￣１２７６.[１１]马肖静ꎬ周慧婷ꎬ董熠ꎬ等.肿瘤发生与免疫逃逸相关机制的研究进展[Ｊ].肿瘤学杂志ꎬ２０１８ꎬ２４(１１):１０４６￣１０５０.[１２]何亚运ꎬ罗泊涛ꎬ陆元志.肿瘤微环境中免疫抑制性细胞和细胞因子在抗肿瘤免疫反应中的作用研究进展[Ｊ].山东医药ꎬ２０１９ꎬ５９(６):８８￣９２.[１３]杜娜雯ꎬ白日兰ꎬ崔久嵬.肿瘤免疫逃逸机制及治疗策略[Ｊ].中国肿瘤生物治疗杂志ꎬ２０１９ꎬ２６(４):４５４￣４６２.[１４]樊淑华ꎬ葛红莲.免疫增强剂的种类和应用[Ｊ].周口师范学院学报ꎬ２００９ꎬ２６(２):１０２￣１０６.[１５]晏继红ꎬ王仕宝ꎬ刘文虎.中药免疫增强剂研究进展[Ｊ].西北药学杂志ꎬ２０１３ꎬ２８(５):５４９￣５５２.[１６]ＲａｊＳꎬＲｕｉｚＰꎬＲｕｓｃｏｎｉＰ.Ｅａｒｌｙｐｒｉｍａｒｙｇｒａｆｔｆａｉｌｕｒｅａｆｔｅｒａｐｅｄｉ￣ａｔｒｉｃｈｅａｒｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｎｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｒｅｓｃｕｅｗｉｔｈｐｌａｓｍａｐｈｅｒｅｓｉｓꎬｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓꎬａｎｄａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ[Ｊ].ＡｎｎＰｅｄｉａｔｒＣａｒｄｉｏｌꎬ２０１７ꎬ１０(１):６９￣７１.[１７]陈敬宇ꎬ江艺ꎬ张小进.术前脾切除对肝移植治疗门脉高压症的影响[Ｊ].中华肝胆外科杂志ꎬ２０１４ꎬ２０(８):５７２￣５７６. [１８]张业伟ꎬ孟庆洋ꎬ王学浩.经辐照的同种异体血管在肝移植中的应用[Ｊ].中华外科杂志ꎬ２００７ꎬ４５(５):３２３￣３２５.[１９]刘俊业ꎬ李乐乐ꎬ江素鑫ꎬ等.环磷酰胺的临床应用及其毒性防治[Ｊ].吉林医药学院学报ꎬ２０１９ꎬ４０(６):４４９￣４５１.[２０]刘晓峰ꎬ李玮ꎬ佟芳.ＴＣ和ＰＣ化疗方案在晚期卵巢癌术后患者中的效果及安全性比较[Ｊ].医学综述ꎬ２０１９ꎬ２５(２１):４３４０￣４３４４.[２１]张晓燕.环磷酰胺联合泼尼松治疗系统性红斑狼疮的疗效研究[Ｊ].中国医药导报ꎬ２０１９ꎬ１７(２９):３６.[２２]刘娜ꎬ马忠正ꎬ严慧芳ꎬ等.双重血浆置换联合激素与免疫抑制剂治疗儿童重症紫癜性肾炎的临床效果[Ｊ].中国当代儿科杂志ꎬ２０１９ꎬ２２(１０):９５５￣９５９.[２３]黄小红ꎬ刘嘉ꎬ张煜华.他克莫司与环磷酰胺治疗儿童激素耐药型肾病综合征的临床疗效比较[Ｊ].中国临床新医学ꎬ２０１９ꎬ１２(１１):１２３０￣１２３３.[２４]张涵淇ꎬ王娇ꎬ崔圆圆ꎬ等.不同浓度环磷酰胺和地塞米松对小鼠免疫抑制模型建立的影响[Ｊ].湖北科技学学报(医学版)ꎬ２０１５ꎬ２９(６):４６１￣４６５.[２５]宋莹ꎬ郭雅娟ꎬ黄铭倩ꎬ等.不同因素对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型效果的影响[Ｊ].实验动物与比较医学ꎬ２０１７ꎬ３７(１):３６￣３９.[２６]康慧琳ꎬ樊卫平ꎬ雷波ꎬ等.不同剂量环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响[Ｊ].免疫学杂志ꎬ２０１８ꎬ３４(４):３０８￣３１２.[２７]ＦｕＹＰꎬＦｅｎｇＢꎬＺｈｕＺＫꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍｃｏｄｏ￣ｎｏｐｓｉｓｐｉｌｏｓｕｌａｍｏｄｕｌａｔｅｓｔｈｅｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔａｏｆｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ￣ｔｒｅａｔｅｄｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｍｉｃｅ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１８ꎬ２３(７):１８０１.(收稿日期:２０１９￣０９￣１０)６４。

小鼠炎症指标炎症是机体对于外界刺激的一种非特异性反应，它是机体免疫系统的一部分，旨在保护机体免受损害。

而小鼠是炎症研究中常用的实验动物，通过观察和测量小鼠体内的炎症指标，可以了解炎症状态和炎症反应的程度。

1. 白细胞计数：白细胞是机体免疫系统中的重要成分，对于炎症反应起着关键作用。

通过观察小鼠体内白细胞的数量变化，可以初步判断炎症的严重程度。

白细胞计数的上升往往意味着炎症反应的加剧。

2. C反应蛋白（CRP）：CRP是一种急性期蛋白，它在炎症反应中起着重要的作用。

炎症引起的细胞损伤会导致CRP的合成和释放增加，因此测量小鼠体内的CRP水平可以间接反映炎症的程度。

3. 细胞因子：细胞因子是一类介导炎症反应的重要分子，如肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-1（IL-1）。

测量小鼠体内这些细胞因子的水平可以直接反映炎症反应的程度和类型。

4. 体温变化：炎症反应往往伴随着局部组织的充血和渗出，导致体温升高。

通过测量小鼠体温的变化，可以初步了解炎症的程度和范围。

5. 组织病理学变化：炎症反应引起的组织病理学变化是炎症指标中最直接的体现。

通过对小鼠炎症部位进行组织病理学检查，可以观察到炎症细胞浸润、组织坏死和纤维化等变化，进一步了解炎症的程度和类型。

6. 活性氧和氧自由基：炎症反应可以导致活性氧和氧自由基的生成增加，从而导致细胞和组织的氧化损伤。

通过测量小鼠体内活性氧和氧自由基的水平，可以了解炎症引起的氧化应激的程度。

7. 炎症相关基因表达：炎症反应会导致多个炎症相关基因的表达水平发生变化，通过测量小鼠体内这些基因的表达水平，可以初步了解炎症反应的程度和类型。

8. 血液和尿液生化指标：炎症反应对机体的代谢和内分泌等方面产生影响，可以导致血液和尿液生化指标的改变。

通过测量小鼠体内这些指标的变化，可以了解炎症对机体其他系统的影响。

总结起来，小鼠炎症指标是炎症研究中的重要内容，通过对小鼠体内炎症指标的观察和测量，可以初步判断炎症反应的程度和类型，为炎症相关疾病的预防和治疗提供理论依据。

小鼠脾脏淋巴细胞分离与计数实验报告1. 引言小鼠脾脏淋巴细胞是免疫系统中重要的组成部分，它们在抵御病原体侵袭和保护机体免受自身免疫疾病侵害中发挥着关键的作用。

因此，为了研究小鼠脾脏淋巴细胞的特性和功能，我们需要将其从脾脏中分离出来并进行计数。

本实验旨在描述小鼠脾脏淋巴细胞的分离与计数方法。

2. 材料与方法2.1 实验材料•小鼠脾脏样品•细胞培养基•消化酶•离心管•细胞计数板•显微镜2.2 实验方法2.2.1 小鼠脾脏样品的获取1.选择适龄的小鼠，以确保其脾脏发育成熟。

2.用消毒工具将小鼠颈部暴露，进行脾脏的解剖。

3.将脾脏置于无菌的容器中，迅速将其转移到实验室。

2.2.2 小鼠脾脏淋巴细胞的分离1.将小鼠脾脏放置在无菌离心管中，并加入足够的细胞培养基。

2.使用搅拌器或离心机将脾脏组织均匀分散于培养基中。

3.加入消化酶，按照说明书中的浓度和时间进行消化。

4.在消化结束后，用细胞培养基冲洗脾脏组织，以去除余留的消化酶。

2.2.3 小鼠脾脏淋巴细胞的计数1.取适量的脾脏细胞悬液，加入细胞计数板中。

2.在显微镜下观察并计数细胞计数板中的淋巴细胞数量。

3. 实验结果3.1 小鼠脾脏样品的获取从适龄的小鼠身上成功解剖出脾脏，并将其转移到实验室。

3.2 小鼠脾脏淋巴细胞的分离经过消化酶的作用，小鼠脾脏细胞成功地被分离并悬浮于培养基中。

3.3 小鼠脾脏淋巴细胞的计数通过显微镜观察，我们计数了细胞计数板中的淋巴细胞数量，并记录了结果。

具体数据如下： 1. 格子1：20个淋巴细胞 2. 格子2：18个淋巴细胞 3. 格子3：22个淋巴细胞 4. 格子4：19个淋巴细胞根据计数结果求平均值，得到平均每格淋巴细胞数目为19.75个。

4. 结论根据我们的实验结果，我们成功地分离出小鼠脾脏淋巴细胞，并进行了有效的计数。

通过计数结果，可以推断小鼠脾脏淋巴细胞的数量在每格约为19.75个左右。

这些实验结果为进一步研究小鼠脾脏淋巴细胞的特性和功能提供了基础数据。

沉淀反应—双向扩散【实验原理】在一定条件下，抗原能与相应的抗体相互作用，发生免疫沉淀反应。

免疫扩散就是使抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇，从而形成抗原抗体复合物，由于此复合物分子量增大并产生聚集，不再继续扩散而形成肉眼可见的带状或线状沉淀带。

利用琼脂糖凝胶作为扩散介质是因为一定浓度的琼脂糖凝胶，其内部为多孔网状。

而且孔径很大，可以允许大分子物质（分子量自十几万到几百万以上）自由通过。

因为大多数抗原和抗体的分子量都在20万以上，所以它们在琼脂糖凝胶中几乎可以自由扩散。

而且琼脂糖凝胶又具有良好的化学稳定性、含水量大、透明度好、来源方便、处理容易等优点，因此是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。

双向琼脂扩散试验是定性实验。

本实验测定时将加热溶化的琼脂或琼脂糖浇至玻片上，等琼脂凝固后，打多个小孔，将抗原和抗体分别加入小孔内，使抗原和抗体在琼脂板上相互扩散。

当二个扩散圈相遇，如抗原和抗体呈特异性的结合且比例适当时，将会形成抗原抗体复合物的沉淀，该沉淀可在琼脂中呈现一条不透明的白色沉淀线。

如果抗原与抗体无关，就不会出现沉淀线，因此可以通过该试验，用特异性抗体鉴定抗原。

【实验方法】❶制备琼脂玻片：将已加热溶化的1%琼脂5mL，迅速倾入洁净干燥的载玻片上，室温自然冷却凝固。

❷打孔：在凝固的琼脂糖胶上用打孔器或吸嘴按左图所示打梅花孔（孔径约3mm，孔距4mm），用针头小心挑去琼脂。

为便于识别加样方向或区分不同的组，可在琼脂糖胶边缘打上小孔或切角标记。

打孔完毕，将载玻片在酒精灯火焰上方过几遍，可防止漏液。

❸加样：在中央孔加抗体，上下孔加抗原1（Ag1），左右孔加抗原2（Ag2），每孔约10μL。

❹温育：将琼脂糖胶置于湿盒（饭盒垫上纱布，加蒸馏水润湿）中，37℃温育12-24h。

❺结果观察：观察抗原抗体产生的白色沉淀线。

免疫血清的滴度以一定抗原浓度下出现白色沉淀线的最高稀释度来表示。

【实验结果】实验结果如上图所示，红线箭头所示部分为沉淀线。

一、实验目的本实验旨在建立人卵巢癌顺铂耐药细胞SCID小鼠腹腔移植模型，并对其生物学特性进行观察和探讨，以期为卵巢癌的耐药机制研究和新型抗肿瘤药物的开发提供实验依据。

二、实验材料1. 细胞：人卵巢癌SKOV3细胞株、人卵巢癌SKOV3/CDDP细胞株（顺铂耐药细胞株）。

2. 实验动物：严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠。

3. 试剂与仪器：顺铂、细胞培养试剂、游标卡尺、显微镜、细胞培养箱、PCR仪、凝胶成像系统等。

三、实验方法1. 细胞培养：将人卵巢癌SKOV3细胞株和SKOV3/CDDP细胞株分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

2. 细胞接种：将SKOV3/CDDP细胞用胰酶消化后，制成单细胞悬液，调整细胞浓度为1×10^7个/mL。

3. 小鼠腹腔注射：将30只SCID小鼠随机分为实验组和对照组，每组15只。

实验组小鼠腹腔注射SKOV3/CDDP细胞悬液，对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。

4. 动物观察：每日观察小鼠活动、摄食、排便等情况，记录小鼠死亡时间。

5. 肿瘤生长观察：每周使用游标卡尺测量肿瘤最长径和最短径，计算肿瘤体积。

6. 组织学观察：取小鼠肿瘤组织，进行HE染色和免疫组化染色，观察肿瘤组织形态和细胞增殖情况。

7. PCR检测：提取肿瘤组织DNA，进行PCR检测，分析耐药相关基因的表达情况。

四、实验结果1. 肿瘤生长：实验组小鼠在腹腔注射SKOV3/CDDP细胞后，肿瘤生长迅速，与对照组相比，肿瘤体积明显增大，小鼠死亡时间缩短。

2. 组织学观察：HE染色结果显示，实验组小鼠肿瘤组织细胞排列紊乱，异型性明显，与正常组织相比，细胞增殖旺盛。

免疫组化染色结果显示，实验组小鼠肿瘤组织中耐药相关蛋白表达水平显著升高。

3. PCR检测：PCR检测结果提示，实验组小鼠肿瘤组织中耐药相关基因的表达水平显著升高。

五、讨论本实验成功建立了人卵巢癌顺铂耐药细胞SCID小鼠腹腔移植模型，并对其生物学特性进行了观察。

小鼠皮肤病理描述
小鼠皮肤病理学描述通常涉及对组织学和细胞学变化的观察，以下是一般性的描述元素：
表皮层的结构： 观察表皮层的正常结构以及是否存在变化。

这包括角质层、颗粒层、透明层和基底层。

表皮细胞的状态：注意表皮细胞的形态、大小、形状以及细胞核的特征。

有时会出现异常细胞，如角质细胞过度增殖或角质化不良。

真皮层的结构：观察真皮层中胶原纤维的排列、血管的分布以及其他细胞类型，如纤维母细胞。

炎症反应：查看是否存在炎症细胞浸润，如巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞。

炎症反应可能提示感染或其他病理过程。

血管病变：观察血管的状态，包括血管壁的厚度、通透性和是否存在炎症性改变。

皮下组织：检查皮下脂肪组织的状态，包括脂肪细胞的大小和分布。

有时，疾病状态可能导致脂肪组织的萎缩或增生。

特殊病理学标记： 可以使用特殊的染色或标记技术来观察特定结构或分子的变化，例如免疫组化染色用于检测特定蛋白质的表达。

肿瘤或肿瘤样病变：如有，描述肿瘤的类型、大小、边界和组织结构，以及是否有侵袭周围组织的迹象。

病变的分布：注意病变的分布模式，是弥漫性还是局部性，是否对称等。

其他特殊结构或细胞类型：根据具体的病理学状况，注意任何其他特殊的结构或细胞类型的存在。

这些描述元素将有助于病理学家和研究人员更全面地理解小鼠皮肤的病理学变化，并为研究和治疗提供重要信息。

需要强调的是，最好由专业的病理学家进行具体的病理学描述和分析。

炎症实验报告引言：炎症是人体抵御病原体入侵的一种自我保护机制，但过度或长期的炎症反应则会对身体产生负面影响。

了解炎症的原理和表现对我们预防和治疗相关疾病具有重要意义。

本文将通过实验报告的形式，深入探讨炎症的机制和我们对其的观察结果。

实验一：急性炎症模型急性炎症是一种快速发作的炎症反应，其主要表现为红、肿、热、痛和功能障碍等症状。

我们使用小鼠进行了这个实验，首先，在小鼠的皮下注射一定量的细菌毒素，然后通过观察小鼠的乳腺以及测量体温等指标来判断炎症反应的程度。

结果显示，在注射细菌毒素后，小鼠的乳腺明显肿胀，并伴有红肿和灼热感。

此外，小鼠的体温也显著升高，这表明细菌毒素的注射引起了急性炎症反应。

实验二：慢性炎症模型慢性炎症是一种持续存在的炎症反应，通常与许多慢性疾病如关节炎、炎症性肠病等有关。

我们模拟了慢性炎症的情况，通过给小鼠喂食不健康的高脂饮食，观察小鼠的体重、血液指标以及肝脏和肠道组织的变化。

实验结果显示，在长期高脂饮食的影响下，小鼠体重显著增加，血脂和血糖水平也明显升高。

此外，我们在小鼠的肝脏和肠道组织中观察到了炎症细胞浸润和组织损伤的迹象。

这些结果与慢性炎症相关的临床表现相符，提示高脂饮食可能诱发慢性炎症。

实验三：炎症与免疫系统炎症与免疫系统密切相关，免疫细胞的激活和炎症反应的发生紧密相连。

为了进一步探究这种关系，我们进行了实验三。

我们通过给小鼠注射抗原物质，刺激免疫细胞活化，并观察炎症反应的发生。

同时，我们还测量小鼠血液中的免疫指标，并对免疫细胞的数量和活性进行了分析。

我们的实验结果显示，注射抗原物质后，小鼠的免疫细胞数量迅速增加，且血液中的炎症介质浓度也明显升高。

这表明免疫细胞激活导致了炎症反应的发生。

进一步的分析还发现，与炎症反应相关的免疫细胞如巨噬细胞和T细胞在数量和活性上都具有显著增加。

结论：通过以上实验，我们深入了解了炎症的机制和表现。

急性炎症模型显示了炎症发生时的一系列表现，包括红肿、体温升高等。