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AGL1 电击 电转感受态细胞使用说明

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AGL1 电击/电转感受态细胞

AGL1 Electroporation Competent Cell

编号 名称 规格

北京华越洋WG 07237 AGL1电击/电转感受态细胞 10×50ul

AGL1电击/电转感受态细胞基因型：

C58 RecA (rifr/carbr) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine

AGL1电击/电转感受态细胞说明：

AGL1菌株为C58, RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青

霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒

pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，

pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA

顺利转移）。AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。唯地生物开发的

AGL1电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒 (size:11633bp)检测

转化效率>105 cfu/μg DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒 (size:40kd)检测转化效率可达

5×103 cfu/μg DNA。

AGL1电击/电转感受态细胞操作方法：

1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正

置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面

0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5 μg质粒DNA（质

粒体积不大于6ul，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰

中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推

荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电

击完成快速插入冰中，加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培

养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生

素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50 μg/ml

kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h）。

AGL1电击/电转感受态细胞注意事项：

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化

效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大

的菌落，应减少质粒用量。

4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速

度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平

板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。

5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒

筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以

一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

AGL1电击/电转感受态细胞保存条件： -80℃

华越洋AGL1电击/电转感受态细胞相关：

Rosetta-gami B(DE3)pLacI感受态细胞 DMT感受态细胞

Rosetta-gami 2(DE3)pLacI感受态细胞 TKB1感受态细胞

Rosetta-gami感受态细胞 Origami感受态细胞

Rosetta感受态细胞 HMS174, HMS174(DE3), HMS174(DE3)pLysS

Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞 平板涂布专用玻璃珠

Stbl3超级感受态细胞 Stbl3感受态细胞

RosettaBlue感受态细胞 NMY51酵母感受态细胞

RosettaBlue(DE3)感受态细胞 TG1感受态细胞，TG1感受态细胞

TOP10F′ 超级感受态细胞 EHA105感受态细胞

RosettaBlue(DE3)pLysS感受态细胞 Stbl2感受态细胞

RosettaBlue(DE3)pLacI感受态细胞 DH10B感受态细胞

Tuner(DE3)pLacI感受态细胞 T1感受态细胞

Rosetta2(DE3)感受态细胞 M15感受态细胞

Rosetta2(DE3)pLacI感受态细胞 HB101感受态细胞

Tuner(DE3)pLysS感受态细胞 JM109感受态细胞

Rosetta(DE3)感受态细胞 Y1HGold酵母感受态细胞

Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞 Rosseta(DE3)感受态细胞

Rosetta(DE3)pLacI感受态细胞 AH109酵母感受态细胞

Rosetta 2感受态细胞 TB1感受态细胞，TB1

Rosetta 2(DE3)pLySs感受态细胞 EGY48酵母菌感受态细胞 Origami B感受态细胞 XL1-Blue感受态细胞

Origami 2(DE3)pLysS感受态细胞 DH10Bac感受态细胞

Tuner(DE3)感受态细胞 BJ5183感受态细胞 ，BJ5183

Origami 2(DE3)pLacI感受态细胞 DB3.1感受态细胞

Tuner感受态细胞 JM110感受态细胞

OmniMAX2-T1感受态细胞 GV3101感受态细胞

NovaF-感受态细胞 SURE感受态细胞，SURE感受态细胞

NovaBlue感受态细胞 BL21(DE3)感受态细胞

XL1-Blue化学感受态细胞 stbl3感受态细胞，stbl3感受态细胞

DH5α超级感受态细胞 BL21 Star(DE3)感受态细胞

DH5α- T1感受态细胞 BL21 Star(DE3)pLySs感受态细胞

BLR(DE3)感受态细胞 AD494(DE3)感受态细胞

BLR(DE3)pLysS感受态细胞 KM71H,KM71H酵母感受态细胞

BLR(DE3)pLysS感受态细胞 EHA101,EHA101农杆菌感受态细胞

BL21-SI感受态细胞 ER2566感受态细胞

BL21-Gold(DE3)感受态细胞 Tuner(DE3)，Tuner(DE3)感受态细胞

BL21-AI感受态细胞 TOP10F` 感受态细胞

BL21(DE3)pLacI感受态细胞 EHA101农杆菌感受态细胞

BL21 trxB(DE3)感受态细胞 TG1感受态细胞

BL21 trxB(DE3)pLysS感受态细胞 XL10-Gold 感受态细胞

Mach1-T1 Phage Resistant 感受态细胞 农杆菌感受态细胞

DH10bac(BmNPV) 感受态细胞 Stable感受态细胞

BJ5183-AD-1感受态细胞 F-DH5α感受态细胞

F-TOP10感受态细胞 stable电击感受态细胞

DH10B电击感受态细胞 EPI400电击感受态细胞

TG1电击感受态细胞

BL21(DE3)pLysS感受态细胞 CodonPlus感受态细胞

BL21感受态细胞

GV3101电击感受态细胞

EHA105电击感受态细胞 AGL1电击/电转感受态细胞

LBA4404电击感受态细胞

C41(DE3), C41(DE3)PlysS感受态细胞 C43, C43(DE3)感受态细胞

OrigamiB,OrigamiB(DE3),OrigamiB(DE3)pLysS,OrigamiB(DE3)pLacI

DH10bac (BmNPV)克隆感受态细胞

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EPI400电击感受态细胞使用手册

EPI400电击感受态细胞使用手册

EPI400电击感受态细胞

EPI400 Electroporation Competent Cell

编号 名称 规格

北京华越洋WG 07229 EPI400电击感受态细胞 10×100ul

EPI400电击感受态细胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139

Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

EPI400电击感受态细胞说明：

EPI400电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。该菌株来源于EC100菌株，

将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基

因，即是EPI400菌株。EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA

或毒性基因的克隆，在加入诱导剂CopyCutter Induction Solution后又可以提高质粒产量

到正常状态。[mcrA, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲

基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质

粒DNA的提取。lacZΔM15标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，tonA赋予其抗噬菌

体T1和T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。EPI400电击感受态细胞适用于不稳定DNA

或毒性基因的克隆，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1010 cfu/μg DNA。

EPI400电击感受态细胞操作方法：

1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置

5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm

以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。 2. 取-80℃保存的EPI400电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质

TOP10感受态细胞的使用方法及注意事项

TOP10感受态细胞的使用方法及注意事项

TOP10感受态细胞的使用方法及注意事项

TOP10感受态细胞的使用说明及注意事项

货号：C1200

规格：10×100ul/20×100ul

保存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。

产品简介：

TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存六个月转化效率不发生改变。

基因型：F_mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)φ80lacZΔM15△lacⅩ74 recA1deoR araD139Δ(ara-leu)7697galUgalK rpsL(StrR)endA1nupG

特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补，可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）

1，将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。

3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置

2-3分钟，注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA 总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

电转化注意事项

电转化注意事项

电转化注意事项

作者: 发布: 2020-10-20

一、 制备感受态的菌液搜集时刻：

1、准确测定OD值：OD在1.2～1.5之间。

1） 为了准确测定OD值，建议将菌液稀释不同浓度测定（1、2、4、8、16倍稀释，看其OD值是否呈线性关系）。每个倍数做3－5个重复，应该可以大致推断OD值是否准确！菌液看上去浑浊，但OD值不高，很可能OD稀释倍数不够！

2） OD值是否测准也可以这样估算：OD600为40左右时，菌体湿重（6000rpm离心5min）约0.95g/10ml。高密度发酵时菌体湿重将相应下降。

2、75ml的菌，经18h左右的培养，最后sorbital洗涤完毕后，50ml离心管里所剩菌体特别浓，需要1ml sorbitol才可溶解为糊状。正常培养的OD在1.2～1.5之间的500ml菌液，收集的感受态也用1ml稀释的，没那么粘稠。可以看看降低培养温度（27摄氏度）或缩短培养时间（12h）。

3、甚至不用转接,直接挑单克隆在50－100mlYPD中摇过夜，效果也很好

二、制备感受态的菌液量

如果只转一个样品，50ml就够了，一般50ml的培养液如果OD值正常的话够做10管感受态的，其他的按比例缩小。用大试管摇5ml菌液，然后取1ml毫升在1.5mlEP管中制感受态，每一步的离心时间30秒就行。整个流程时间短，制备好的感受态用来做转化的效率很高。

山梨醇离心，洗涤的过程之后的重悬的时候注意浓度，不要过于粘稠和稀释。

三、感受态的保存

感受态细胞做好后由于电转化杯还没有处理好等原因，在冰上放几个小时再做可能有一定的影响，尽量马上制备马上转化。如果感受态细胞要保存，不需要加甘油，一般80ul EP管分装，-70 或 -80 摄氏度保存。

另附：酵母GS115点种分离纯化

接种GS115于5ml YPD液体培养基，30℃，200rpm振荡留宿，涂布 YPD平板，30℃培育48

小时，用 YNB大体培育基和含His的补充培育基作点种分离纯化，挑选在补充培育基生上生长而在大体培育基上不生长的单菌落划YPD平板，4℃保留。

TG1感受态细胞说明书

TG1感受态细胞说明书

TG1感受态细胞说明书

一、简介

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA（Plasmid、Phage DNA），

处于这种状态的细胞称作感受态细胞（Competent Cells）。在进行基

因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作基因

文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十

分低的情况时，使用高效的感受态细胞十分重要。而TG1菌株常常

用于噬菌体的制备。

本公司生产的感受态细胞是采用氯化钙处理得到的感受态细胞，使用

pUC19质粒检测，转化效率可达107-108，在-70℃下保存几个月转化

效率不发生改变。

二、使用方法

（1）取出感受态细胞，置于冰上5min，解冻。

（2）然后将连接体系（5~10ul）加入感受态中（～100ul），轻弹感受

态离心管底部，混匀，冰浴30分钟。

（3）将离心管放入42℃水浴90秒后，迅速放于冰上。

（4）每管中加500μl LB(SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡培养1

小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

（5）室温4,500rpm离心5分钟，弃去900μl上清后，用剩余100μl

培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板或含X-gal、IPTG、

Amp的LB琼脂平板表面。

（6）将平板置于室温直至液体被吸收。

（7）倒置平皿，于37℃培养，12~16小时后可出现菌落。

三、注意事项

１. 用此感受态进行转化需要热激，不能电转化，请勿分装。

2 . 感受态细胞应保存在 -70 ℃，不可多次冻融和放置时间过长，以

避免降低感受态细胞的转化效率。

3 . 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，

将损失降到最低。

4 ．所有操作均需注意无菌操作。