沙果和桃子中酵母菌的分离鉴定及其生物学特性研究

酵母菌的分离与纯化酵母菌的分离与纯化⼩组组员: ⼀、实验⽬的1.学习分离纯化酵母菌的技术与⽅法2.了解培养基的配置与灭菌技术3.增强⽆菌操作技术的意识⼆、基本原理从混杂的微⽣物群体获得只含某⼀种某⼀株微⽣物的过程叫做微⽣物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份⽐较⾼的环境中，如果园⼟、菜园⼟及果⽪等的表⾯。

多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌⽣长迅速，容易分离培养。

马丁⽒培养基是⼀种⽤来分离真菌的选择性培养基。

此培养基是由葡萄糖、蛋⽩胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。

其中葡萄糖主要作为碳源，蛋⽩胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为⽆机盐，为微⽣物提供钾、磷和镁离⼦。

⽽孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌⽆抑制作⽤，因⽽真菌在这种培养基上可以得到优势⽣长，从⽽达到分离真菌的⽬的。

三、实验材料及⽤具1.⽤品：苹果、葡萄糖、琼脂、⽔、1%孟加拉红⽔溶液、马铃薯2.设备与器材：1ml的⽆菌吸管、⽆菌培养⽫等.四、实验步骤1、马铃薯培养基的配置培养基成分:马铃薯 40克、蔗糖（葡萄糖） 4克、琼脂 4克、⽔ 200毫升、 pH ⾃然。

配置⽅法:（1）配制20%马铃薯浸汁：取去⽪马钓薯40g，切成⼩块，加⽔200ml.加热煮游30 min ，⽤纱布过滤，然后补⾜失⽔互所需体积。

121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备⽤。

（2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加⼊2g蔗糖，加热煮沸后加⼊4克琼脂，继续加热融化并补⾜失⽔。

（3）分装、加塞，包扎。

（4）⾼压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min（5）将灭菌培养基放⼊37C°的温室中培养24-48⼩时，观察是否有菌落⽣成，以检查灭菌是否彻底。

2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却⾄55--50C°时，倒平板，倒三⽫3、制备苹果悬液（1）⾸先将1g苹果在研钵中磨细，放⼊装有10ml⽣理盐⽔和玻璃珠的100ml三⾓瓶中去。

酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。

二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。

多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。

在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。

因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。

三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。

2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。

分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。

4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。

四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。

2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。

3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。

4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。

5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。

土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤：
1.实验前准备：准备好所需的培养基、试剂和实验器材。

2.取一定量的土壤样品，加入无菌水中制备土壤悬浮液。

3.对土壤悬浮液进行预处理：将悬浮液通过过滤器过滤，以去除大颗粒杂质。

4.制备培养基：根据酵母菌的生长要求，配制适宜的培养基。

5.接种培养基：将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面，避免接种过多的菌落。

6.培养条件：将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。

7.观察培养结果：在培养一定时间后，观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。

8.分离纯化：选择单个菌落，用无菌技术将其移至新的培养基上，重复培养步骤，直到获得纯种的酵母菌培养物。

实验结果：
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态，颜色为白色或乳白色。

观察下显微镜下，酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。

酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面，并具有边缘清晰的特点。

实验结论：
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验，成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。

这些酵母菌菌落形态规整、单一，符合酵母菌的特征。

该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。

三株桃小食心虫病原真菌的分离及形态鉴定朱永敏;李捷;熊琦;谢映平;薛皎亮【摘要】Three strains of entomopathogenic fungi designated No. TSLO1, No. TSLO2 and No. TSLO3 were isolated from the natural infected insect,Carposina sasakii (Matsmura) at the apple orchard inXiangfen,Shanxi,China. These strains were identified as pathogens of C. sasakii by reinoculation test,moreover, the cultural and morphological characteristics were observed. The results showed that the mycelium of three strains was white. Both of the two strains,TSLO1 and TSLO3,had big colonies and could secrete snuffcolored or orchid pigment. Two kinds of conidiophores can be produced from them. The macrocomdia was crescent or falciform with separators, while the microconidia was oblong,or kidney-shaped and grows as cephalosporium,and their hyphae also possessed separators. The colony of the strain TSL02 was relatively small and the pigment was unconspicuous. Its conidiophores, columniform or spindly, arranged in a chain,and the peduncle of the conidiophores presented in a "Y" shape. These characteristics indicated that the strain TSLOI and TSLO3 were belong to the genus Fusarium oxysporum ,and the strain TSL02 was belong to the genus Paecilomyces farinosus. This is the first record on these kinds of the entomopathogenic fungi from C. sasakii.%从山西襄汾苹果园越冬的桃小食心虫(Carposina sasakii Matsmura)采集获得自然染病的虫体,经分离纯化得到三株病原真菌,编号分别为TSL01、TSL02,TSL03,通过回接试验证明这3株菌株为桃小食心虫的病原菌.根据培养性状和显微形态观察发现:3株菌株在PDA培养基上均为白色,菌株TSL01和TSL03菌落大,可产生黄褐色或淡紫色色素.它们都产生两种类型的分生孢子,大型分生孢子,月牙形或镰刀形,有隔;小型分生孢子,椭圆形,肾形或卵圆形,假头状着生,菌丝透明有隔,轮状生长;菌株TSL02菌落较小,后期产生黄色色素,分生孢子圆柱形至梭形,串生,分生孢子梗呈"Y"形.初步鉴定菌株TSL01与菌株TSL03为镰孢菌属(Fusarium)尖孢镰孢菌(F.oxysporum),菌株TSL02为拟青霉属(Paecilomyces)粉质拟青霉(P.,farinosus).这是在桃小食心虫上首次记录该两类病原菌.【期刊名称】《山西大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(034)001【总页数】6页(P131-136)【关键词】桃小食心虫;病原真菌;形态鉴定【作者】朱永敏;李捷;熊琦;谢映平;薛皎亮【作者单位】山西大学,生命科学学院,山西,太原,030006;山西省农业科学院植物保护研究所,山西,太原,030031;山西大学,生命科学学院,山西,太原,030006;山西大学,生命科学学院,山西,太原,030006;山西大学,生命科学学院,山西,太原,030006【正文语种】中文【中图分类】S763.42;Q969.42+9.5桃小食心虫(Carposina sasakii M atsm ura),简称桃小,隶属鳞翅目Lepidop tera、蛀果蛾科Carposinldae,是我国北方果树生产中发生面积最普遍、危害最大的食心虫类害虫,可危害苹果、枣、梨、桃、杏等十多种果树的果实[1].目前桃小食心虫的防治仍以化学杀虫剂为主,化学杀虫剂虽具有见效快、成本低的优点,但常年用药防治次数过多,不仅使害虫产生抗药性,还会污染环境、杀死天敌、农药残留,对果品安全构成极大威胁,大力推行和普及生物防治技术成为当前全球果树栽培发展的总趋势.利用昆虫病原真菌防治害虫是生物防治的重要手段,虫生真菌种类多,具有显著的流行趋势,容易大量生产,且安全有效,在害虫生物防治中占有越来越重要的地位.目前关于病原真菌防治桃小食心虫的报道较少,陶训等[2-3]利用白僵菌防治桃小食心虫,研究了白僵菌寄生桃小食心虫的生物学特性以及白僵菌与化学杀虫剂对硫磷微胶囊混用防治桃小食心虫的室内和田间试验,证明了对桃小食心虫有很好的防治效果;樊美珍等[4]调查研究了金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)分生孢子和干菌丝在土壤中的延续情况及对桃小食心虫的侵染力,证实绿僵菌控制桃小食心虫有很好的潜力.本研究从桃小食心虫越冬茧的自然染病虫尸上分离纯化得到3株侵染桃小食心虫的病原真菌,经室内培养和显微形态特征的鉴定,其中两菌株为镰孢属(Fusarium)尖孢镰孢菌(F.oxysporum),另外一种为拟青霉属(Paecilomyces)粉质拟青霉(P.farinosus),希望能为利用昆虫病原菌防治桃小食心虫提供菌种资源和应用依据.1.1.1 桃小食心虫自然染病虫尸2009年3月自山西省襄汾县景毛乡苹果园受虫害严重果树下表土层里采集到自然染病的桃小食心虫越冬茧,从茧中将染病的幼虫剥出,用来培养和分离菌种.1.1.2 培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)[成分及配比:马铃薯200 g、琼脂20 g、葡萄糖18 g、蒸馏水1 000 m L]1.1.3 回接试验的虫源用健康的桃小食心虫幼虫作为回接试验昆虫,2009年9月采集被桃小食心虫钻蛀的枣和苹果,放置于室内,让桃小食心虫幼虫自然脱果,收集健康虫体,用于试验.1.1.4 仪器和药品主要仪器:OL YMPUS BX51显微镜及配套的OL YMPUS数码相机C-5050 Zoom;DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥箱(上海益恒实验仪器有限公司);ZDX-35BI座式自动电热压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂);CJ-C系列洁净工作台(上海上净实业有限公司).主要试剂:琼脂(北京奥博星生物技术责任有限公司);葡萄糖(天津市博迪化工有限公司);Tween-80(天津市化学试剂三厂).1.2.1 病原真菌的分离和纯化在无菌条件下将受真菌感染的桃小食心虫虫尸,每头剪成3小块,用70%的酒精浸5 s,再用0.1%汞水消毒3 m in,然后用无菌水冲洗3次,再将虫尸小块放入PDA平板培养基中,每一个培养皿内放3块,呈等腰三角形摆放.把装有虫尸的培养皿置于培养室,在25℃下培养3 d,再将培养出的菌株划线分离.1.2.2 菌株培养与形态观察将3株纯化菌株分别点接于PDA平板培养基上,25℃恒温培养室培养4 d或5 d,观察记录菌落特征,测量菌落直径.用载片观察法[5]观察菌株形态特征,记录分生孢子大小、形状、着生方式及菌丝形态特点.将圆形滤纸铺于培养皿的底部,再放一“U”形玻棒,棒上放一洁净载玻片,盖上皿盖,灭菌后烘干备用.用无菌玻棒直接蘸取已融化的培养基滴于培养皿的载玻片中央.待培养基凝固后用接种环取少量孢子接种于载玻片上培养基小块的四周,加上盖玻片.为防止培养过程中培养基干燥,在培养皿的滤纸圆片上滴加无菌的饱和氯化钠溶液3～4 m L,盖好皿盖,置25℃的培养箱中培养,定期取出,观察显微结构并拍照.1.2.3 菌种鉴定根据形态学观察,参照《山西虫生真菌》[6]以及蒲蛰龙《昆虫真菌学》[7]来鉴定分离的病原真菌.1.2.4 孢子悬浮液的制备将3株病原真菌接种于PDA平板,在70%湿度、25℃恒温箱中培养10 d,然后用0.5%Tween-80溶液洗脱分生孢子,在显微镜下以血球计数板计数,检测分生孢子浓度,并将其配置成孢子浓度为5×107 m L的悬浮液,为回接试验使用.1.2.5 回接试验将上述制备成的3株病原真菌孢子悬浮液(孢子浓度5×107个/mL),用移液枪将孢子悬液喷洒到桃小食心虫幼虫体表,每头幼虫喷洒10μL,将接菌后的幼虫放在玻璃养虫缸内,置于25℃、湿度70%的培养室内培养,逐天观察染菌后的幼虫的行为、死亡后的症状、虫体表面菌丝和孢子的形态特征,以确定该菌是否为侵染桃小食心虫的致病菌.2009年3月在山西省襄汾县景毛乡苹果里采集的桃小食心虫越冬茧剥开后发现有几头桃小虫尸上有虫生真菌寄生现象,虫体表面均有白色菌丝(图1),虫体僵硬,其中一头僵虫虫体发黄,有黑色斑点(图1A),一头虫尸为石灰色(图1B),另外一头僵虫虫体发黄(图1C).经划线分离纯化得到桃小食心虫的3株病原真菌,分别编号为 TSL 01、TSL 02、TSL03.为了验证分离得到的3株菌株就是致死桃小食心虫的病原菌,用上述菌株的孢子悬液(浓度:5×107孢子/m L)分别感染健康的桃小食心虫.结果发现,被菌株 TSL 01感染的桃小食心虫3 d后开始相继死亡,保湿培养后从虫体内长出白色菌丝,虫体的体色发黄,逐渐萎缩干瘪(图2A);被菌株 TSL02感染的桃小食心虫4 d后开始相继死亡,死亡时虫体全身颜色变暗,最后黑紫(图2B),保湿培养虫体长出白色菌丝;被菌株TSL 03感染的桃小食心虫5 d后开始相继死亡,保湿培养后从虫体内长出白色菌丝(图2C).在显微镜下观察对比菌丝和孢子的形态特征,其与开始从桃小食心虫僵尸上分离纯化的3株菌株相同.由此证明,从桃小食心虫上分离得到的3株菌株是桃小食心虫的致病菌.2.4.1 菌株 TSL01培养性状:菌株在PDA培养基上25℃培养4 d,菌落较大,直径40～42 mm,不透明,白色,呈圆形或扁圆形,中央隆起呈帽状结构,边缘丝状,较稀疏,向四周呈辐射状分散(图3A),气生菌丝白色,丝绒状、羊毛状至毡状.菌落背面呈淡黄褐色,中央为深黄褐色(图3B).形态特征(图3C):分生孢子既有大型分生孢子又有小型分生孢子,大型者数量较多,月牙形,较匀称,3-5分隔,多数3分隔,大小为(18.0～34.0)μm×(3.3～4.7)μm;小型者椭圆形、肾形、卵圆形,假头状着生,大小为(5.3～12.0)μm×(2.0～3.3)μm;产孢细胞单瓶梗.菌丝透明有隔,轮状生长.经鉴定,菌株 TSL 01为镰孢属尖孢镰孢.2.4.2 菌株 TSL 02培养性状:菌株在PDA培养基上25℃培养4 d,菌落直径18～20 mm,菌落小,白色,不透明,呈圆形或扁圆形,菌落隆起,成帽状,表面菌丝致密;菌落边缘整齐(图4A).菌落背面初期为白色(图4B),后期发黄.形态特征:分生孢子梗产自气生菌丝,光滑透明有分隔;分生孢子梗常为轮生状小梗,具有几乎圆柱状基部和1-3个圆锥状顶部,多呈“Y”字形状.分生孢子从圆柱形至梭形,单孢,光滑,大小为(2.0～2.9)μm×(1.5～2.2)μm;分生孢子常连接成近于直立的长链,其很少缠结(图4C).分生孢子萌发前膨胀,并伸长,产生1芽管.经鉴定,菌株 TSL 02为拟青霉属粉质拟青霉.2.4.3 菌株 TSL03培养性状:菌株在PDA培养基上25℃培养5 d,菌落直径42～47 mm,菌落较大,不透明,呈圆形或扁圆形,中央为脐状凸起状,菌落边缘为丝状,较稀疏,呈辐射状,边缘较扁平(图5A).菌落背面淡紫色,边缘白色(图5B).气生菌丝白色,生长后期偶有些菌丝为淡紫色,菌丝呈丝绒状、羊毛状至毡状.形态特征:分生孢子既有大型分生孢子,又有小型分生孢子,小型孢子量多,大型孢子量很少.小型分生孢子椭圆形、肾形、卵圆形,单生,串生或假头生,0-1个分隔,孢子中央凹陷,呈血细胞状,大小为(4.8～17.6)μm×(2.4～4)μm;大型分生孢子纺锤形,或稍弯呈镰刀形,也凹陷,3-5分隔,一般3个分隔,大小为(30～36)μm×(3.6～4.4)μm;菌丝有隔,每个隔之间一个孢子梗,孢子梗轮生.经鉴定,菌株 TSL 03为镰孢属尖孢镰孢.本研究从自然染病的桃小食心虫虫尸上分离纯化出3株虫生真菌,鉴定结果显示菌株 TSL01和菌株TSL 03属于镰孢属尖孢镰孢菌,菌株 TSL02属于拟青霉属粉质拟青霉.回接试验证明它们对桃小食心虫具有寄生致死作用,是桃小食心虫病原菌.虫生镰刀菌属于(镰孢属)一类重要昆虫病原真菌,对其研究始于Webber在1897年对寄生在介壳虫上镰刀菌的描述.在南美、北美和南亚国家记录的有F.coccophilum、F.merismoides、rvarum、F.episphaeria、F.stilboides等[8].美国佛罗里达州利用 F.coccophilum防治桃树和柑桔的蚧虫取得了显著效果[9].国内曾报道过嗜蚧镰刀菌(F.coccophilum)等10种镰刀菌可寄生蚧虫,并对控制蚧虫种群数量具有重要作用[10].Sundar等从雌性Culexquinquefasciatus分离出F.pallidoroseum,并发现这株镰刀菌对寄主蚊子在7 d的致死率达100%,具有很好的杀虫效果[11].串珠镰刀菌(F.moniliforme)和燕麦镰刀菌(F.avenaceum)可寄生鳞翅目、同翅目、双翅目中的许多害虫,对幼虫的寄生致死率50%～100%[12]. 拟青霉在自然界中分布广泛,也是国内外主要研究和利用的虫生真菌类群.迄今为止,我国有记载的拟青霉属虫生真菌共有16个种或变种[13],研究报道最多的是淡紫拟青霉(P.lilacinus)、粉质拟青霉(P.farinosus)和玫烟色拟青霉(P.fumosoroseus).国内外利用淡紫拟青霉主要用于防治线虫,有近70个国家用它来防治根结线虫(Meloidogyne spp.)、胞囊线虫(Heterodera sp.)等植物寄生线虫,并取得了较好的效果[14].武觐文利用粉质拟青霉菌剂防治越冬油松毛虫致死率约为70%[15].玫烟色拟青霉防治害虫的报道主要有用其防治蚜虫、烟粉虱、朱砂叶螨和菜青虫等害虫[16-19],也有报道利用拟青霉防治小菜娥[20-21].以上报道可以看出,国内外利用镰刀菌属和拟青霉属防治害虫均有很好的效果.根据现有记载,鲜见有从桃小食心虫上分离出镰孢属病原菌的报道.日本在1994年从桃小食心虫上曾分离出玫烟色拟青霉[22],但我国还没有从桃小食心虫上分离出拟青霉的报道.因此,本研究分离的3个菌株为开展桃小食心虫生物防治提供了新的菌种资源,但为了更好地利用这些菌种,应对这些菌株进行超微结构观察和遗传分子鉴定是必要的.同时,还应该研究它们的生物学特性和对寄主昆虫的毒力,为菌株进一步开发提供科学依据.【相关文献】[1] 刘玉升,程家安,牟吉元.桃小食心虫的研究概况[J].山东农业大学学报,1997,28(2):207-214.[2] 陶训.白僵菌与对硫磷微胶蠹剂混用防治桃小食心虫的研究[J].山东农业科学,1990(1):20-22.[3] 陶训,冯建国,庄乾营,等.白僵菌防治桃小食心虫的研究[J].山东农业科学,1994(5):39-42.[4] 樊美珍,李增智.绿僵菌在土壤中的延续及控制桃小食心虫的潜力[J].应用生物态学报,1996,7(1):49-55.[5] 沈萍,范秀荣,李广武.微生物学实验[M].北京:高等教育出版社,1996:44-45.[6] 贺运春,张仙红.山西虫生真菌[M].北京:中国农业科学技术出版社,2006.[7] 蒲哲龙,李增志.昆虫真菌学[M].合肥:安徽科学技术出版社,1996.[8] Shah P A,Pell J K.Entomopathogenic Fungi as Biological Control Agents[J].Appl Microbilo Biotechnol,2003,61:413-423.[9] 王拱辰,叶琪铭.镰刀菌在生物防治中的作用[J].生物防治通报,1990,6(2):80-84.[10] 叶琪铭.昆虫天敌-虫生镰刀菌[J].昆虫天敌,1989,11(1):5-9.[11] Mohanty S S,Kamaraju Raghavendra,Usha Rai K,Aditya Prasad Dash A P.Efficacy of Female Culex quinquef asciatus with Entomopathogenic Fungus Fusarium pallidoroseum[J].Parasitol Res,2008,103:171-174.[12] 林清洪,黄志宏.镰刀菌研究概述[J].亚热带植物通讯,1996,25(1):51-56.[13] 唐美君.拟青霉属虫生真菌的研究应用概况与展望[J].中国茶叶,2001(3):32-33.[14] 赵培静,任文彬,缪承杜,等.淡紫拟青霉研究进展与展望[J].安徽农业科学,2007,35(30):9672-9674,9793.[15] 武觐文.应用粉拟青霉等真菌防治油松毛虫[J].林业科学,1988,24(1):34-40.[16] Riba bination ap rès Heteroceryose Chezle Champignon Entomopathogene Paecilom yces fumosoroseus[J].Entomophaga,1978,23:417-421.[17] 张仙红,嵇能焕.玫烟色拟青霉菌株的毒力测定[J].山西农业大学学报,2006(1):24-26.[18] 方祺霞,杨淑芳,胡亚梅,等.玫烟色拟青霉北京变种防治温室白粉虱的研究[J].生物防治通报,1986,2(3):129-131.[19] Wraight S P,Carruthers R I,Bradley C A,et al.Patheogenicity of the Entomopathogenic Fungi Paecilomyces spp.and Beauveria bassiana Against the Silver Leaf White fly,Bemisia argentifolii[J].Journal of Invertebrate Pathology,1998,71:217-226.[20] Altre J A,Uandenberg J D.Facto rs Influencing the Infectivity of Isolates of Paecilomyces fumosoroseus Against Dia-mondback Mo th,Plutella xylostella[J].Journal of Invertebrate Pathology,2001,78:31-36.[21] 王宏民,张奂,郝赤,等.玫烟色拟青霉对小菜蛾幼虫的侵染过程及接菌方法对其致病力的影响[J].中国生态农业学报,2009,17(4):704-708.[22] 景云飞,张仙红.昆虫病原真菌玫烟色拟青霉的研究进展[J].山西农业科学,2007,35(9):19-22.。