Fenofibrate

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广东医学2015年8月第36卷第16期 GuangdongMedical JournaI : ! !!: ! !: 

Fenofibrate与 

机制 Apocinin在脑缺血中神经保护作用的 

张元元 ,李正金 ,赵立仙 ,李云 ,王光明 

大理学院附属医院 内科, 病理科(云南大理671000) 

【摘要】 目的探讨Fenofibrate(Feno)和Apocinin(Apo)联合应用在脑缺血中的神经保护作用。方法在脑 

缺血动物模型中给予Feno(Feno组)、Apo(Apo组)及Feno+Apo(Feno+Apo组)干预,以羧甲基纤维素钠(CMC) 

为对照(CMC组)。应用实时荧光定量PCR分析SOD1、2、3和NADPH的亚基NOX2 mRNA表达,检测SODs和 

NADPH oxisase酶活性改变以及ROS含量分析。结果与CMC组比较,Feno组、Apo组及Feno+Apo组脑坏死面 

积均明显减小(P:0.000),Feno组和Feno+Apo组SOD1、2.3的mRNA及其SODs酶活性升高(P=0.000);Feno 

组、Apo组及Feno+Apo组NOX2 mRNA表达以及NADPH oxisase酶活性降低,ROS的含量减少(P=0.000)。 

结论Fen0通过促进SODs mRNA的表达和活性以及抑制NADPH oxidase mRNA的表达和酶的活性,而Apo仅通 

过抑制NADPH oxidase mRNA的表达和酶的活性以保护脑组织的缺血损伤,而两者联合应用不能够起到加强作用。 

【关键词】 脑缺血;Fenofibrate;Apocinin;还原型辅酶11;超氧化物歧化酶 

脑中风是一种突发的脑血液循环障碍性疾病,分 

为缺血性和出血性两种。缺血性脑中风约占脑中风的 

85%,在中国其所占比例逐年增加 。溶栓是缺血性 

脑中风的主要治疗手段,但受严格的治疗时间窗的限 

制。溶栓后还将发生“再灌流损伤”。因此减小“再灌 

流损伤”可能是脑中风患者另外一种合理的治疗手段。 

诸如氧自由基(reactive oxygen species,ROS)等活性物 

质在“再灌流损伤”中起到重要的作用 。在体内,氧 

自由基主要来源于还原型辅酶1I(NADPH oxidase)的 

作用,而氧自由基的清除主要依赖于超氧化物歧化酶 

(SODs)活性物质的量以及活性 。过氧化物酶体增 

生物激活受体(peroxisome proliferator—activated recep- 

tor理,PPARot)的激动剂:Fenofibrate(Feno)、Clofibrate 

和Gemfibrozil在缺血性脑中风中通过上调SODs的表 

达及其活性以及改善脑血流以发挥神经保护作 

用 -6],NADPH oxidase的抑制剂Apocinin(Apo)也显 

示了较好的神经保护作用 。因此两者联合应用,一 

方面从ROS的源头,抑制NADPH oxidase的合成以减 

少ROS的产生,另外一方面从ROS的降解,加强SODs 

的合成以及活性以促进体内缺血过程中出现的与再灌 

流损伤密切相关的ROS的降解,从而起到更好的神经 

保护作用。2013年9月至2014年5月,本研究利用经 

Feno和(或)Apo预处理的小鼠构建脑缺血动物模型, 

以研究Feno和Apo在脑缺血动物模型中的神经保护 

作用,并对相关机制进行探讨。 

1材料与方法 

1.1 实验动物及主要试剂 44只6~8周龄的雄性 

国家自然科学基金资助项目(编号:81360206),大理学院博士科 

研基金资助项目(编号:KYBS201207) 

△通信作者 ・2491・ 

C57BL/6J小鼠购自昆明医科大学动物中心,动物实验 

过程符合美国NIH发布的动物实验指南,动物的使用 

得到大理学院医学伦理委员会的批准。小鼠在大理学 

院动物中心饲养,给予标准食物颗粒和自来水喂养,室 

内温度在20~25℃。2,3,5一三苯基氯化四氮唑(2, 

3,5一triphenyltetrazolium chloride,TTC),羧甲基纤维素 

钠(carboxymethyl cellulose,CMC),Fenofibrate和Apoci— 

nin购自Sigma公司(St.Louis,MO),引物合成,RNA提 

取试剂盒和eDNA合成试剂盒由Invitrogen公司(carls. 

bad,CA)提供,实时荧光定量PCR试剂盒购自Bio— 

Rad公司(Richmond,CA),SODs酶活性检测试剂盒购 

自美国Wako化学公司(Richmond,VA),其余试剂未作 

特殊说明均来自Sigma公司。 

1.2动物分组及药物处理小鼠随机分为4组:CMC 

组12只,Feno组12只,Apo组10只,Feno+Apo组10 

只,分别给予10 mL/kg 0.5%CMC混悬液、30 ms/kg 

Feno 、10 ms/kg Apo 及30 ms/kg Feno+10 ms/kg 

Apo灌胃给药,Feno和Apo均溶解于CMC中制成混悬 

液,给药前混匀。CMC组和Feno组给药1次/d,均为 

相同时间,连续7 d;Apo组1次/d,连续3 d;最后一次 

给药后1 h内进行手术。 

1.3 小鼠中动脉缺血(MCAO)模型制备 采用 

1.5%异氟烷气体麻醉,应用加热垫使直肠温度维持在 

(37±1)oC,分离结扎右侧颈总动脉和颈外动脉,将带 

有硅胶的8.0尼龙线从颈总动脉插入颈内动脉,长度 

为9 mm,阻断大脑中动脉血流,同时脑血流下降到原 

始值的20%以内开始计时。60 rain后撤出尼龙线,进 

行再灌流。手术期间在右耳耳缘后缺血区颅骨表面全 

程监测脑血流。再灌流24 h后处死动物,取脑进行后 

续实验 广东医学2015年8月第36卷第16期 Guangdong Medical Journal Aug.2015, ̄o1.36,No.16 

分另0为(99.07±6.53)、(52.88±5.94)、(61.02± 

12.28)及(5o.80±6.23)mm ,差异有统计学意义(P= 

0.000)。Feno组、Apo组、Feno+Apo组与CMC组比 

较,差异有统计学意义(P=0.000),但是Feno+Apo ・2493・ 

组与Feno组及Apo组比较,差异无统计学意义(P> 

0.05)。Feno+Apo组与Feno组及Apo组比较,各组灌 

流前后体温、脑血流的改变差异无统计学意义(P> 

0.05)。见表2。 

表2各组局部脑血流和体温比较 ±s 

2.2各组SOD1、2、3 mRNA表达和SODs酶活性的比 

较Feno组和Feno+Apo组与CMC组比较,其SOD1、 

2、3 mRNA的表达水平明显升高(P=0.000),而Apo 

组变化不明显(P=1.000,P=1.000,P=0.984)。Fe. 

nO组与Feno+Apo组相比,差异无统计学意义(P= 0.881,P=0.940,P=0.997)。Feno组和Feno十Apo 

组与CMC组比较,其SODs酶活性明显升高(P= 

0.000 ̄),而Apo组变化不明显(P=1.000)。Feno组与 

Feno+Apo组相比,差异无统计学意义(P=0.978)。 

见表3。 

表3各组SOD1、2,3 mRNA表达及SODs酶活性的比较 ±s 

与CMC组比较P<0.O1 

2.3 各组NOX2 mRNA表达和NADPH oxidase酶活性 

的比较Feno组、Apo组和Feno+Apo组与CMC组比 

较,其NOX2 mRNA的表达水平明显降低(P=0.002, 

P=0.002,P=0.001),而Feno组、Apo组和Feno+Apo 

组组间比较,NOX2 mRNA变化差异无统计学意义 

(P>0.05)。Feno组、Apo组和Feno+Apo组与CMC 

组相比,其NADPH oxidase酶活性水平明显降低(P= 

0.000),而Feno组、Apo组和Feno+Apo组组间比较, 

NADPH oxidase酶活性变化差异无统计学意义(P> 

0.05)。见表4。 

2.4各组ROS含量的比较Feno组、ipo组和Feno+ 

Apo组与CMC组比较,ROS含量明显降低(P= 

0.000),而Feno组、Apo组和Feno+Apo组组间比较, 

ROS含量变化差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。 

表4 各组NOX2 mRNA、NADPH oxidase酶活性及 

ROS含量的比较 i±s 

与CMC组比较|P<0.01 3讨论 

诸如ROS等活性物质在“再灌流损伤”中起到重 

要的作用 。SOD1、2、3参与了ROS的降解,而NAD. 

PH oxidase是ROS形成的关键酶,因此同时抑制NAD. 

PH oxidase和促进SODs的合成,可以有效减少体内的 

ROS含量,从而减轻ROS参与的再灌流损伤。 

有研究显示,脑缺血一再灌流过程中,SODs的表 

达及其活性降低,而NADPH oxidase的表达及其活性 

升高 ’ 。Feno处理的小鼠,其体内的SOD1、2、3 

mRNA的表达和SODs酶活性升高 J,从而使再灌流损 

伤的过程中产生的ROS降解,以减轻ROS所带来的损 

伤;而NADPH oxidase的抑制剂Apo可抑制NADPH OX— 

idase的合成从而使再灌流过程中产生ROS减少,以减 

轻再灌流损伤 J,因此两者联合运用可能加强再灌 

流损伤的神经保护作用。 

本研究结果显示:经过Feno处理(30 mg/kg)或 

Feno与Apo共同处理的小鼠,最后1次给药1 h内手 

术,其SODs表达升高,NADPH oxidase表达降低,而 

Apo处理(10 mg/kg)或Feno与Apo共同处理的小鼠, 

手术后,其SODs表达未发生改变,但是NADPH oxidase 

表达降低,其结果均导致缺血脑组织内ROS含量下 

降,脑坏死体积减小,对脑缺血再灌流损伤具有保护作 

用。但是Feno与Apo联合运用的小鼠,SODs活性与