Fenofibrate
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广东医学2015年8月第36卷第16期 GuangdongMedical JournaI : ! !!: ! !:
Fenofibrate与
机制 Apocinin在脑缺血中神经保护作用的
张元元 ,李正金 ,赵立仙 ,李云 ,王光明
大理学院附属医院 内科, 病理科(云南大理671000)
【摘要】 目的探讨Fenofibrate(Feno)和Apocinin(Apo)联合应用在脑缺血中的神经保护作用。方法在脑
缺血动物模型中给予Feno(Feno组)、Apo(Apo组)及Feno+Apo(Feno+Apo组)干预,以羧甲基纤维素钠(CMC)
为对照(CMC组)。应用实时荧光定量PCR分析SOD1、2、3和NADPH的亚基NOX2 mRNA表达,检测SODs和
NADPH oxisase酶活性改变以及ROS含量分析。结果与CMC组比较,Feno组、Apo组及Feno+Apo组脑坏死面
积均明显减小(P:0.000),Feno组和Feno+Apo组SOD1、2.3的mRNA及其SODs酶活性升高(P=0.000);Feno
组、Apo组及Feno+Apo组NOX2 mRNA表达以及NADPH oxisase酶活性降低,ROS的含量减少(P=0.000)。
结论Fen0通过促进SODs mRNA的表达和活性以及抑制NADPH oxidase mRNA的表达和酶的活性,而Apo仅通
过抑制NADPH oxidase mRNA的表达和酶的活性以保护脑组织的缺血损伤,而两者联合应用不能够起到加强作用。
【关键词】 脑缺血;Fenofibrate;Apocinin;还原型辅酶11;超氧化物歧化酶
脑中风是一种突发的脑血液循环障碍性疾病,分
为缺血性和出血性两种。缺血性脑中风约占脑中风的
85%,在中国其所占比例逐年增加 。溶栓是缺血性
脑中风的主要治疗手段,但受严格的治疗时间窗的限
制。溶栓后还将发生“再灌流损伤”。因此减小“再灌
流损伤”可能是脑中风患者另外一种合理的治疗手段。
诸如氧自由基(reactive oxygen species,ROS)等活性物
质在“再灌流损伤”中起到重要的作用 。在体内,氧
自由基主要来源于还原型辅酶1I(NADPH oxidase)的
作用,而氧自由基的清除主要依赖于超氧化物歧化酶
(SODs)活性物质的量以及活性 。过氧化物酶体增
生物激活受体(peroxisome proliferator—activated recep-
tor理,PPARot)的激动剂:Fenofibrate(Feno)、Clofibrate
和Gemfibrozil在缺血性脑中风中通过上调SODs的表
达及其活性以及改善脑血流以发挥神经保护作
用 -6],NADPH oxidase的抑制剂Apocinin(Apo)也显
示了较好的神经保护作用 。因此两者联合应用,一
方面从ROS的源头,抑制NADPH oxidase的合成以减
少ROS的产生,另外一方面从ROS的降解,加强SODs
的合成以及活性以促进体内缺血过程中出现的与再灌
流损伤密切相关的ROS的降解,从而起到更好的神经
保护作用。2013年9月至2014年5月,本研究利用经
Feno和(或)Apo预处理的小鼠构建脑缺血动物模型,
以研究Feno和Apo在脑缺血动物模型中的神经保护
作用,并对相关机制进行探讨。
1材料与方法
1.1 实验动物及主要试剂 44只6~8周龄的雄性
国家自然科学基金资助项目(编号:81360206),大理学院博士科
研基金资助项目(编号:KYBS201207)
△通信作者 ・2491・
C57BL/6J小鼠购自昆明医科大学动物中心,动物实验
过程符合美国NIH发布的动物实验指南,动物的使用
得到大理学院医学伦理委员会的批准。小鼠在大理学
院动物中心饲养,给予标准食物颗粒和自来水喂养,室
内温度在20~25℃。2,3,5一三苯基氯化四氮唑(2,
3,5一triphenyltetrazolium chloride,TTC),羧甲基纤维素
钠(carboxymethyl cellulose,CMC),Fenofibrate和Apoci—
nin购自Sigma公司(St.Louis,MO),引物合成,RNA提
取试剂盒和eDNA合成试剂盒由Invitrogen公司(carls.
bad,CA)提供,实时荧光定量PCR试剂盒购自Bio—
Rad公司(Richmond,CA),SODs酶活性检测试剂盒购
自美国Wako化学公司(Richmond,VA),其余试剂未作
特殊说明均来自Sigma公司。
1.2动物分组及药物处理小鼠随机分为4组:CMC
组12只,Feno组12只,Apo组10只,Feno+Apo组10
只,分别给予10 mL/kg 0.5%CMC混悬液、30 ms/kg
Feno 、10 ms/kg Apo 及30 ms/kg Feno+10 ms/kg
Apo灌胃给药,Feno和Apo均溶解于CMC中制成混悬
液,给药前混匀。CMC组和Feno组给药1次/d,均为
相同时间,连续7 d;Apo组1次/d,连续3 d;最后一次
给药后1 h内进行手术。
1.3 小鼠中动脉缺血(MCAO)模型制备 采用
1.5%异氟烷气体麻醉,应用加热垫使直肠温度维持在
(37±1)oC,分离结扎右侧颈总动脉和颈外动脉,将带
有硅胶的8.0尼龙线从颈总动脉插入颈内动脉,长度
为9 mm,阻断大脑中动脉血流,同时脑血流下降到原
始值的20%以内开始计时。60 rain后撤出尼龙线,进
行再灌流。手术期间在右耳耳缘后缺血区颅骨表面全
程监测脑血流。再灌流24 h后处死动物,取脑进行后
续实验 广东医学2015年8月第36卷第16期 Guangdong Medical Journal Aug.2015, ̄o1.36,No.16
分另0为(99.07±6.53)、(52.88±5.94)、(61.02±
12.28)及(5o.80±6.23)mm ,差异有统计学意义(P=
0.000)。Feno组、Apo组、Feno+Apo组与CMC组比
较,差异有统计学意义(P=0.000),但是Feno+Apo ・2493・
组与Feno组及Apo组比较,差异无统计学意义(P>
0.05)。Feno+Apo组与Feno组及Apo组比较,各组灌
流前后体温、脑血流的改变差异无统计学意义(P>
0.05)。见表2。
表2各组局部脑血流和体温比较 ±s
2.2各组SOD1、2、3 mRNA表达和SODs酶活性的比
较Feno组和Feno+Apo组与CMC组比较,其SOD1、
2、3 mRNA的表达水平明显升高(P=0.000),而Apo
组变化不明显(P=1.000,P=1.000,P=0.984)。Fe.
nO组与Feno+Apo组相比,差异无统计学意义(P= 0.881,P=0.940,P=0.997)。Feno组和Feno十Apo
组与CMC组比较,其SODs酶活性明显升高(P=
0.000 ̄),而Apo组变化不明显(P=1.000)。Feno组与
Feno+Apo组相比,差异无统计学意义(P=0.978)。
见表3。
表3各组SOD1、2,3 mRNA表达及SODs酶活性的比较 ±s
与CMC组比较P<0.O1
2.3 各组NOX2 mRNA表达和NADPH oxidase酶活性
的比较Feno组、Apo组和Feno+Apo组与CMC组比
较,其NOX2 mRNA的表达水平明显降低(P=0.002,
P=0.002,P=0.001),而Feno组、Apo组和Feno+Apo
组组间比较,NOX2 mRNA变化差异无统计学意义
(P>0.05)。Feno组、Apo组和Feno+Apo组与CMC
组相比,其NADPH oxidase酶活性水平明显降低(P=
0.000),而Feno组、Apo组和Feno+Apo组组间比较,
NADPH oxidase酶活性变化差异无统计学意义(P>
0.05)。见表4。
2.4各组ROS含量的比较Feno组、ipo组和Feno+
Apo组与CMC组比较,ROS含量明显降低(P=
0.000),而Feno组、Apo组和Feno+Apo组组间比较,
ROS含量变化差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。
表4 各组NOX2 mRNA、NADPH oxidase酶活性及
ROS含量的比较 i±s
与CMC组比较|P<0.01 3讨论
诸如ROS等活性物质在“再灌流损伤”中起到重
要的作用 。SOD1、2、3参与了ROS的降解,而NAD.
PH oxidase是ROS形成的关键酶,因此同时抑制NAD.
PH oxidase和促进SODs的合成,可以有效减少体内的
ROS含量,从而减轻ROS参与的再灌流损伤。
有研究显示,脑缺血一再灌流过程中,SODs的表
达及其活性降低,而NADPH oxidase的表达及其活性
升高 ’ 。Feno处理的小鼠,其体内的SOD1、2、3
mRNA的表达和SODs酶活性升高 J,从而使再灌流损
伤的过程中产生的ROS降解,以减轻ROS所带来的损
伤;而NADPH oxidase的抑制剂Apo可抑制NADPH OX—
idase的合成从而使再灌流过程中产生ROS减少,以减
轻再灌流损伤 J,因此两者联合运用可能加强再灌
流损伤的神经保护作用。
本研究结果显示:经过Feno处理(30 mg/kg)或
Feno与Apo共同处理的小鼠,最后1次给药1 h内手
术,其SODs表达升高,NADPH oxidase表达降低,而
Apo处理(10 mg/kg)或Feno与Apo共同处理的小鼠,
手术后,其SODs表达未发生改变,但是NADPH oxidase
表达降低,其结果均导致缺血脑组织内ROS含量下
降,脑坏死体积减小,对脑缺血再灌流损伤具有保护作
用。但是Feno与Apo联合运用的小鼠,SODs活性与