连翘等中草药对肺炎克雷伯菌抑菌作用的实验研究及临床应用

而部仲医　２ＤＪ５年第２８卷第９期　方药・矮量分女　

连翘等由草药对肺炎克雷伯菌　

抑菌作用的实验研穷及临床应用　

穆廷杰’，杨芬兰　，金海红　，李维嫒’，王晓燕　

１临夏州人民医院，甘肃临夏７　３１１　００；２临夏州中医医院　

［摘要］目的：从丰富的中草药资源中选择部分具有抗菌活性的中草药，在实验室研究抗菌中草药的最　小抑菌浓度，用来治疗对抗生素和化学抗菌药耐药的细菌感染性疾病。方法：采用试管法，测定连翘、黄连、大黄、　黄芩、板蓝根、草河车、鱼腥草、金银花、蒲公英、白芍等中草药对临床分离的８６株肺炎克雷伯菌的最小抑茵浓　度（ＭＩＣ），判断出具有抑制肺炎克雷伯菌的中草药。结果：１　０种单味中草药对，临床分离的肺炎克雷伯茵均有一定　

的抗菌活性，尤其是连翘、黄连、大黄、黄芩、板蓝根、草河车、鱼腥草、金银花等中草药的体外抗菌效果更明显。　结论：用中草药治疗细菌感染性疾病即可防止细菌过快产生耐药性，保护抗菌素不致过快产生耐药性，而且还能　

减少过度使用抗菌素对人体造成的副作用。　［关键词］中草药；肺炎克雷伯菌；最小抑菌浓度　［中图分类号］Ｒ２８１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１　００４－６８５２（２０１５）０９—００１９－０３　

Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＬｉａｎＱｉａｏ　ａｎｄ　Ｏｔｈｅｒｓ　ｏｎ　ＫｌｅｂｓｉｅＵａ　Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　

Ｍｕ　Ｔｉｎ￣ｉｅ１，ＹＡＮＧ　Ｆｅｎｌａｎ２，ＪＩＮ　Ｈａｉｈｏｎｇ１，ＬＩ　Ｗｅｉｙｕａｎ１，ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏｙａｎ　Ｊ　Ｌｉｎｘｉａ　Ｈｕｉ　Ａ　ｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　ｃｔｕｒｅ　Ｐｅｏｐｌｅ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｌｉｎｘｉａ　７３１　１００，Ｃｈｉｎａ；　２　Ｌｉｎｘｉａ　Ｈｕｉ　Ａ　ｕｔｏｎｏｍｏｕｓ件ｌｅ厂ｅｃｔｕｒｅ　ＴＣＭ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　

￣ｓｔｒａｃｔ　０ｂｊｅｃｆｉｖｅ：Ｔｏ　ｃｈｏｏｓｅ　ｐａｎｓ　０ｆ　ＴＣＭ　ｓｈｏｗｉｎｇ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｆｒｅｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ＴＣＭ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ．　ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂｓ　ｉｎ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ＭＩＣ）ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｉｎｆｅｃ—　ｔｉｏｎｓ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａ１　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＭＩＣ　ｏｆＬｉａｎＱｉａｏ（Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ　ｓｕｓｐｅｎｓａ　Ｖａｈ１）．ＨｕａｎｇＬｉａｎ　（Ｃｏｐｔｉｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ），ＤａＨｕａｎｇ（ｒｈｅｕｍ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ），ＨｕａｎｇＱｉｎ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ　ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ），ＢａｎＬａｎＧｅｎ（ｒａｄｉｘ　ｉｓａｔｉｄｉｓ），Ｚ／一　ＨｅＣｈｅ（ｐｌａｃｅｎｔａ　ｈｏｍｉｎｉｓ），ＹｕＸｉｎｇＣａｏ（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ　ｃｏｒｄａｔａ），ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ，ＰｕＧｏｎｇＹｉｎｇ（Ｈｅｒｂａ　Ｔａｒａｘａｃｉ），ＢａｉＳｈａｏ　ｆｒａｄｉｃｅｓ　ｐａｅｏｎｉａｅ　ａｌｂａ】ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｈｅｒｂｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　８６　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｅｓｔ　ｔｕｂｅ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｏ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ａｎｄ　ｉｕｄｇｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｅｎ　ｓｉｎｇｌｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｃｅｒｔａｉｎ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｔｏ　Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ丘ｏｍ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃ．ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ＬｉａｎＱｉａｏ，ＨｕａｎｇＬｉａｎ，ＤａＨｕａｎｇ，ＨｕａｎｇＯｉｎ，ＢａｎＬａｎＧｅｎ，ｚ　Ｃ　ｅ，ＹｕＸｉｎｇＣａｏ，ＪｉｎＹｉｎＨｕａ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｒｅａｔｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ｂｙ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂｓ　ｃｏｕｌｄ　ｎｏｔ　ｏｎｌｙ　ｐｒｅ—　ｖｅｎｔ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｆｒｏｍ　ｂｕｉｌｄｉｎｇ　ｕｐ　ｒａｐｉｄ　ｄｒｕｇ．ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．ｂｕｔ　ａｌｓｏ　ｒｅｄｕｃｅ　ａｄｖｅｒｓｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　

ｏｖｅｒｕｓｅ．　ｂ￣＇ｄｓ　ＴＣＭ：Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　

肺炎克雷伯菌常寄居于人体皮肤鼻咽以及肠　

道等处，其中肠道是该属细菌定植的常见部位，是　

造成患者感染的重要来源¨］，为临床感染常见病　

原菌之一，可引起肺炎、尿路感染、败血症、伤口感　

染、脑膜炎等多种疾病。近年来由于抗菌素滥用至多　

重耐药菌株日渐增多，治疗该菌引起的感染变得越来　

越困难。亚胺培南等碳青霉烯类抗生素对革兰阴性　

菌产生的超广谱Ｂ内酰胺酶及ＡｍｐＣ酶稳定，因此，　昂贵的亚胺培南成为治疗革兰阴性菌感染的有效　

药物。近年来，由于亚胺培南的广泛使用，国内外　

均发现对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯　

菌，给治疗带来诸多困难。已成为当前该领域最为　

关注的焦点　］。本研究对近年来在临床上分离的　

肺炎克雷伯菌进行中草药抑菌实验研究，筛选出　

对本菌有抑制作用的中草药，用来治疗肺炎克雷伯　

菌，特别是产ＥＳＢＬＳ、ＡＭＰＣ的超耐药菌＿３］，“临夏地　

１　９／／

Ｉ　方药・聂鼍分ｌ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｗｉｎｅ

，２０１５　Ｖｏ１．２８　Ｎｏ．９　

区感染性疾病的病原分布及耐药性分析”报道本　

地区产特殊耐药酶ＥＳＢＬｓ的肺炎克雷伯菌比率为　

４９．８％。用中草治疗细菌感染性疾病即可防止细菌　

过快产生耐药性，保护抗菌素不致过快产生耐药性，　

而且还能减少过度使用抗菌素对人体造成的副作　

用。国内中草药对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌抗　

菌作用研究有过报道，但是连翘、黄连、草河车、黄　

芩、板蓝根、鱼腥草、金银花、蒲公英、白芍等中草　

药对肺炎克雷伯菌的抑菌实验研究未见报道。本　

地区中草药资源丰富，如用中草药治疗或预防感　

染性疾病将大大降低本地区人民群众治病成本，　

而且有利于目前国家严格控制抗菌素使用的政策　

推广。　

Ｉ　资料与方法　

１．１　中草药选择道地中药材：连翘、黄连、大　

黄、黄芩、板蓝根、草河车、鱼腥草、金银花、蒲公　

英、白芍各３０　ｇ。　

１．２实验菌株实验菌株来自临夏州医院、临夏　

州中医医院患者分离的菌株。其中６５株为普通肺　

炎克雷伯菌株，２１株为产ＥＳＢＬＳ酶菌株。菌株分　

离鉴定按《全国临床检验操作规程》进行，药敏试　

验及产耐药酶的判定用ＣＬＳＩ推荐方法采用Ｋ—Ｂ　

法按ＣＬＳＩ２０１３年版标准判断，同时和Ｍｉ—　

ｃｒｏＳｃａｎＷａｌｋＡｗａｙ一９６ＳＩ全自动微生物鉴定／　

药敏分析仪药敏结果比对。质控菌用质控菌　

为金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３、大肠埃希菌　

ＡＴＣＣ２５９２２、粪肠球菌ＡＴＣＣ２９２１２、ＡＴＣＣ２７８５３铜绿　

假单胞菌、ＡＴＣＣ７００６０３肺炎克雷伯菌。　

１．３培养基血平板、ＭＨ平板、空白药敏试纸　

片、普通培养基等材料来自Ｏｘｏｉｄ公司及杭州微　

生物试剂公司，营养肉汤按常规方法配制。　

１．４仪器ＭｉｃｒｏＳｃａｎＷａｌｋＡｗａｙ一９６ＳＩ全自动微　

生物鉴定／药敏分析仪；ＰＲＥＶＩ￣Ｃｏｌｏｒ　Ｇｒａｍ全自　

动革兰染色仪、实验菌株均用上述仪器进行药敏　

测试。　

１．５单昧药液的制备将中草药连翘、黄连、大　

黄、黄芩、板蓝根、草河车、鱼腥草、金银花、蒲公英、　

白芍分别称取３０　ｇ，加水３００～５００　ｍＬ，浸泡３Ｏ分　

钟后煎煮，煮沸后文火煎３０分钟，用４层纱布过　

滤后取药液，药渣再加水１５０～３００　ｍＬ，按上述方法　

进行再次操作后过滤药液。合并两次药液，用文　火浓缩至３０　ｍＬ，即认为药液中生药的含量　

为１　０００　ｍｇ／ｍＬ。高压灭菌后备用。　

１．６菌悬液的制备取保存的供试菌株，接种于　

普通培养基上，３７℃条件下培养１８小时后，用灭菌　

生理盐水将菌苔洗下，即为肺炎克雷伯菌的菌悬液，　

调整其浓度为１０ｍｃｆｕ／ｍＬ，４℃冰箱内保存备用。　

１．７试验设计采用稀释试管法，以自制肉汤培　

养基将中草药原液稀释１倍（即药液浓度为　

５００　ｍｇ／ｍＬ），再按倍比稀释法稀释至２～８共８个　

稀释度，然后将上述盛有药液与培养基混合物的　

试管在１２１℃下高压灭菌３０分钟后，分别接种　

２０　的菌悬液，同时设置不加中草药液的阳性　

对照和加药液不加菌悬液的阴性对照，摇匀后置　

于３７￣Ｃ恒温箱中培养２４小时后观察结果。判定　

标准采用稀释试管法ＭＩＣ：首先在阳性对照管长　

菌呈浑浊状，而阴性对照管不长菌呈透明状的前　

提下，再观察其他试管的浑浊情况，以判断不同浓　

度药液的抑菌作用，如试管内呈浑浊，证明有细菌　

生长，用“＋”表示；试管内澄清透明，证明无菌生　

长，用“一”表示。以眼观不浑浊试管的最低药物浓　

度作为该药的ＭＩＣ；药液色素太深观察不清，从中　

取一环接种于普通培养基上，培养后再进行观察。　

上述各管中挑取培养液ｌ环，分别接种于普通琼　

脂培养基，置３７℃恒温箱内培养２４小时后观察　

结果。凡在相应培养皿上无肺炎克雷伯菌生长者，　

表明细菌被药物杀死，以无菌生长的最高药物稀　

释度为该药对供试菌株的ＭＩＣ。　

己　结果　

１０种中草药中８种中草药对供试菌株均有　

一定的抑制作用，其中，连翘、黄连、黄芩、大黄对　

临床供试菌株的抑菌效果最明显，其抑菌效价达到　

１：１６，即ＭＩＣ为６２．５　ｍｇ／ｍＬ；其次是黄草河车，其　

抑菌效价均为１：８，即ＭＩＣ为１２５　ｍｇ／ｍＬ；板蓝根、　

鱼腥草的抑菌效价为ｌ：４，即ＭＩＣ为２５０　ｍｇ／ｍＬ；其　

余２种中草药蒲公英、白芍的抑菌效果不明显，抑　

菌效价在１：２，即ＭＩＣ在５００　ｍｇ／ｍＬ时未抑制细　

菌生长。由表１、２还可看出：ｌ０种中草药对产超　

广谱ｐ一内酰胺酶的肺炎克雷伯菌和不产超广谱　

Ｂ一内酰胺酶的肺炎克雷伯菌的抑菌效果无差异，　

见表卜２。　

＿、＼２０／厂