一株产紫杉醇内生真菌的分离及鉴定
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Ｗａ ｒ 司生产） ｔｓ ｅ公 ． １２ 实 验 方 法 ．
１２１ 茼株 分 离方 法 ．．
取三龄 树 的 中国南 方 红豆 杉 的根 、 、 片 ， 用 自来 水洗 净 ； 茎 的 树皮 剥 下后 切 成 １ 茎 叶 先 将 ．ｃ ０ ｍｘ
收 稿 日期 ：０ ９ ０ －１ ２０— ６ ５ 作者 简介 ： 渠盛年 （ ９ ３ ， 广 东肇 庆人 。 庆 学 院生命科 学学院 实验 师 １ ７ 一）男， 肇
１０ ０ ｍＬ， １ １ 的温 度 下 灭 菌 ２ ｍｉ ． 在 ２℃ ０ ｎ
３萃取液 ： ） 乙酸 乙酯一 丙酮 （ 体积 比１１ ． ：） ４紫 杉 醇 标 准 样 ： 自Ｓｇ 公 司 ． ） 购 ｉｍａ ５ｒ Ｃ色 谱 仪 ： ａ ｒ ０ 高 效 液 相 色 谱 仪 ， ａ ｒ２ ８ 检 测 器 ， ｌｎｕ 色 谱 管 理 系 统 （ 国 ）ｍＬ Ｗ ｔ ｓ ６０ ｅＴ Ｍ Ｗ ｔｓ４７ ｅ Ｍｉｅｉｍ￣ ｌ 美
摘 要 ： 中 国 南 方 红 豆 杉 三 龄 树 树 皮 中 分 离得 到 内 生 真 茵 Ｚ ７， 液 体 发 酵 ， 高 效 液 相 色谱 技 术 对 该 从 Ｕ０ 经 用
真 菌 的 发 酵 液 提 取 物 进 行 了分 析 ， 果袁 明 菌 株 Ｚ ７ 合 成 抗 癌 药 物 紫 杉 醇 ， 紫 杉 醇 含 量 约 为 ２４４ ｇ Ｌ 结 Ｕ０ 能 其 １ ．５ｐ ／ ． ，
关 键 词 ： 国 南 方 红 豆 杉 ；紫 杉 醇 ： 内 生 真 茼； 高 效 液 相 色谱 法 中 中 圈 分 类 号 ：４ ９ Ｓ ５ 文 献标 志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ９ ８ ４ （０ １ ０ — ０ １ ０ １０ —４ ５ ２ １ ）２ ０ ６ — ３
紫 杉 醇 （ ａｌａｅ， 品 名 为 Ｔ ｘ １是 迄 今 为 止 发 现 的 最 有 效 的 抗 癌 药 物 之 一 ． 床 试 验 结 果 表 明 ， Ｐｃｔ ｌ商 ｉｘ ａｏ） 临
第 ３ 卷 第 ２期 ２
２１ ０ １年 ３月
肇 庆 学 院 学 报 Ｊ ｇＮｎ Ｈ ＯＵ Ｌ ＯＦ Ｚ ＡＯＱＩ ＮＧ ＵＮＩ Ｅ ＳＴ Ｖ Ｒ Ｉ Ｙ
Ｖｏ１ ２． Ｎ ｏ． ． ３ ２
Ｍ ａ ．２ １ ｒ ０１
一
株产 紫 杉醇 内生真 菌 的分 离及 鉴定
梁盛 年
（ 肇庆学院 生命科学学院 ，广东 肇庆 ５６６ ） ２ ｏ １
紫 杉 醇 对 治疗 妇科 肿 瘤 （ 括 卵 巢 上 皮 癌 和 乳 腺 癌 ） 果 较 好 ， 其 他 肿 瘤 （ 肺 癌 、 列 腺 癌 、 道 癌 包 效 对 如 前 食
等 ） 显 示 出 良好 的 治 疗 前 景 【 然 而 紫 杉 醇 药 源 不 足 极 大 地 限 制 了 其 在 临床 中 的 应 用 ， 辟 新 的 紫 杉 也 ｌ １ ． 开 醇 来 源 一 直是 国 内 外 的研 究 热 点 ．ｔ ｂｌＧｔ首 次 从 短 叶 红 豆 杉 （ａｕ ｂｅ 玩 ） Ｓｒ ｅ 。 ｏ 】 Ｔｘｓ ｒｖ 中分 离 得 到 可 产 生 紫 杉 醇 的 内生 真 菌 ， 一 发 现 开辟 了生 产 紫 杉 醇 的新 途 径 ． 后 ， 断 确 文 献 报 道 从 不 同 种 的红 豆 杉 树 上 这 其 不 分 离 出能 产 紫 杉 醇 的 内生 真 菌 【８ 但 那 些 红 豆 杉 树 的树 龄 均 在 几 十 年 甚 至 百 年 以上 ， 且 因生 态 环境 ３１ －， 并 不 同 ， 离所 得 的 内 生 真 菌 产 出紫 杉 醇 的 能 力 亦 不 同 ， 生 菌 株 产 出紫 杉 醇 普 遍 在 ２０Ｉ ／ 以下 ［产 率 分 野 ０ ｇ Ｌ ｘ ９ １ ． 最 高 的 是 周 东 坡 等 ［组 建 的一 株 工 业 菌 株 ， 率 为 ４８５ ｇ Ｌ， 未 达 到 工 业 化 生 产 的 要 求 （ 业 化 生 ６ １ 产 ４ ．２ｉ ／ 均 ｘ 工 产要求紫杉醇 的产量要达 到 １ ／ Ｌ以上 ）本 文 中 ， 者 以 生 长 在 肇 庆 北 岭 山 （ 处 北 回归 线 带 上 ， 近 ｍｇ ． 笔 地 靠 广 东 著 名 的 鼎 湖 山） 中 国 南 方 红 豆 杉 （ ａｕ ｉ ｉ三 龄 树 为 材 料 ， 行 了产 紫 杉 醇 的 内 生 真 菌 分 离 的 Ｔｘｓ ｍａ ｅ） ｒ 进 研究 ， 旨在 从 中分 离 出高 产 率 的 产 紫 杉 醇 的 内 生 真 菌 ， 以期 为 我 国 在 世 界 上 争 取 和 利 用 微 生 物 资 源 创
造有利条件．
１ 实 验 材 料 和 实 验 方 法
１１ 实 验 材 料 与 设 备 ．
１红 豆 杉 ： 自生 长 于 肇 庆 北 岭 山的 三 龄 中 国南 方 红 豆 杉 （ ａｕ ｈｎｎｉ ｖｒ ） 采 Ｔｘｓ ｃｉｅｓ ａ．ｍａｅ） ｓ ｉ ｉ． ｒ ２培 养 基 ： 据 需 要 采 用 固 体 和 液 体 ２ 培 养 基 ． ） 根 种 分离时选用Ｐ ＤＡ固体 培 养 基 ： 马铃 薯 ２０ｇ 葡 萄 糖 ２ ， ／ ２ ， 馏 水 １ ０ ｐ ０ ， ０ｇ 琼 Ｉ ０ 蒸 ￣ ｇ ０ｍＬ，Ｈ值 为６８配 制 ０ ．． 方 法 是 将 马 铃 薯 去 皮 切 碎 ， 煮 ３ ｎ； ２ ３ 纱 布 过 滤 ， 入 葡 萄糖 及 琼 脂 后 加 水 定 容 ． １１ 的 温 水 ０ｍｉ 用 ￣ 层 溶 在 ２℃ 度 下 灭 菌２ ｍｉ 冷 却 至 ６ ￣ ０℃ 时 加 入 １０ｍｇ Ｌ ０ ｎ， ０７ ０ ／ 氯霉 素 ． 面 培 养 时 培 养 基 中不 加 入 氯 霉 素 ． 斜 发酵时选用Ｐ ＤＡ液 体 培 养 基 ： 制 方 法 同 上 ， 加 入 琼 脂 和 氯 霉 素 ， 装 至 ５０ｍＬ 角 瓶 中 。 瓶 配 不 分 ０ ＝ 每
１２１ 茼株 分 离方 法 ．．
取三龄 树 的 中国南 方 红豆 杉 的根 、 、 片 ， 用 自来 水洗 净 ； 茎 的 树皮 剥 下后 切 成 １ 茎 叶 先 将 ．ｃ ０ ｍｘ
收 稿 日期 ：０ ９ ０ －１ ２０— ６ ５ 作者 简介 ： 渠盛年 （ ９ ３ ， 广 东肇 庆人 。 庆 学 院生命科 学学院 实验 师 １ ７ 一）男， 肇
１０ ０ ｍＬ， １ １ 的温 度 下 灭 菌 ２ ｍｉ ． 在 ２℃ ０ ｎ
３萃取液 ： ） 乙酸 乙酯一 丙酮 （ 体积 比１１ ． ：） ４紫 杉 醇 标 准 样 ： 自Ｓｇ 公 司 ． ） 购 ｉｍａ ５ｒ Ｃ色 谱 仪 ： ａ ｒ ０ 高 效 液 相 色 谱 仪 ， ａ ｒ２ ８ 检 测 器 ， ｌｎｕ 色 谱 管 理 系 统 （ 国 ）ｍＬ Ｗ ｔ ｓ ６０ ｅＴ Ｍ Ｗ ｔｓ４７ ｅ Ｍｉｅｉｍ￣ ｌ 美
摘 要 ： 中 国 南 方 红 豆 杉 三 龄 树 树 皮 中 分 离得 到 内 生 真 茵 Ｚ ７， 液 体 发 酵 ， 高 效 液 相 色谱 技 术 对 该 从 Ｕ０ 经 用
真 菌 的 发 酵 液 提 取 物 进 行 了分 析 ， 果袁 明 菌 株 Ｚ ７ 合 成 抗 癌 药 物 紫 杉 醇 ， 紫 杉 醇 含 量 约 为 ２４４ ｇ Ｌ 结 Ｕ０ 能 其 １ ．５ｐ ／ ． ，
关 键 词 ： 国 南 方 红 豆 杉 ；紫 杉 醇 ： 内 生 真 茼； 高 效 液 相 色谱 法 中 中 圈 分 类 号 ：４ ９ Ｓ ５ 文 献标 志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ９ ８ ４ （０ １ ０ — ０ １ ０ １０ —４ ５ ２ １ ）２ ０ ６ — ３
紫 杉 醇 （ ａｌａｅ， 品 名 为 Ｔ ｘ １是 迄 今 为 止 发 现 的 最 有 效 的 抗 癌 药 物 之 一 ． 床 试 验 结 果 表 明 ， Ｐｃｔ ｌ商 ｉｘ ａｏ） 临
第 ３ 卷 第 ２期 ２
２１ ０ １年 ３月
肇 庆 学 院 学 报 Ｊ ｇＮｎ Ｈ ＯＵ Ｌ ＯＦ Ｚ ＡＯＱＩ ＮＧ ＵＮＩ Ｅ ＳＴ Ｖ Ｒ Ｉ Ｙ
Ｖｏ１ ２． Ｎ ｏ． ． ３ ２
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一
株产 紫 杉醇 内生真 菌 的分 离及 鉴定
梁盛 年
（ 肇庆学院 生命科学学院 ，广东 肇庆 ５６６ ） ２ ｏ １
紫 杉 醇 对 治疗 妇科 肿 瘤 （ 括 卵 巢 上 皮 癌 和 乳 腺 癌 ） 果 较 好 ， 其 他 肿 瘤 （ 肺 癌 、 列 腺 癌 、 道 癌 包 效 对 如 前 食
等 ） 显 示 出 良好 的 治 疗 前 景 【 然 而 紫 杉 醇 药 源 不 足 极 大 地 限 制 了 其 在 临床 中 的 应 用 ， 辟 新 的 紫 杉 也 ｌ １ ． 开 醇 来 源 一 直是 国 内 外 的研 究 热 点 ．ｔ ｂｌＧｔ首 次 从 短 叶 红 豆 杉 （ａｕ ｂｅ 玩 ） Ｓｒ ｅ 。 ｏ 】 Ｔｘｓ ｒｖ 中分 离 得 到 可 产 生 紫 杉 醇 的 内生 真 菌 ， 一 发 现 开辟 了生 产 紫 杉 醇 的新 途 径 ． 后 ， 断 确 文 献 报 道 从 不 同 种 的红 豆 杉 树 上 这 其 不 分 离 出能 产 紫 杉 醇 的 内生 真 菌 【８ 但 那 些 红 豆 杉 树 的树 龄 均 在 几 十 年 甚 至 百 年 以上 ， 且 因生 态 环境 ３１ －， 并 不 同 ， 离所 得 的 内 生 真 菌 产 出紫 杉 醇 的 能 力 亦 不 同 ， 生 菌 株 产 出紫 杉 醇 普 遍 在 ２０Ｉ ／ 以下 ［产 率 分 野 ０ ｇ Ｌ ｘ ９ １ ． 最 高 的 是 周 东 坡 等 ［组 建 的一 株 工 业 菌 株 ， 率 为 ４８５ ｇ Ｌ， 未 达 到 工 业 化 生 产 的 要 求 （ 业 化 生 ６ １ 产 ４ ．２ｉ ／ 均 ｘ 工 产要求紫杉醇 的产量要达 到 １ ／ Ｌ以上 ）本 文 中 ， 者 以 生 长 在 肇 庆 北 岭 山 （ 处 北 回归 线 带 上 ， 近 ｍｇ ． 笔 地 靠 广 东 著 名 的 鼎 湖 山） 中 国 南 方 红 豆 杉 （ ａｕ ｉ ｉ三 龄 树 为 材 料 ， 行 了产 紫 杉 醇 的 内 生 真 菌 分 离 的 Ｔｘｓ ｍａ ｅ） ｒ 进 研究 ， 旨在 从 中分 离 出高 产 率 的 产 紫 杉 醇 的 内 生 真 菌 ， 以期 为 我 国 在 世 界 上 争 取 和 利 用 微 生 物 资 源 创
造有利条件．
１ 实 验 材 料 和 实 验 方 法
１１ 实 验 材 料 与 设 备 ．
１红 豆 杉 ： 自生 长 于 肇 庆 北 岭 山的 三 龄 中 国南 方 红 豆 杉 （ ａｕ ｈｎｎｉ ｖｒ ） 采 Ｔｘｓ ｃｉｅｓ ａ．ｍａｅ） ｓ ｉ ｉ． ｒ ２培 养 基 ： 据 需 要 采 用 固 体 和 液 体 ２ 培 养 基 ． ） 根 种 分离时选用Ｐ ＤＡ固体 培 养 基 ： 马铃 薯 ２０ｇ 葡 萄 糖 ２ ， ／ ２ ， 馏 水 １ ０ ｐ ０ ， ０ｇ 琼 Ｉ ０ 蒸 ￣ ｇ ０ｍＬ，Ｈ值 为６８配 制 ０ ．． 方 法 是 将 马 铃 薯 去 皮 切 碎 ， 煮 ３ ｎ； ２ ３ 纱 布 过 滤 ， 入 葡 萄糖 及 琼 脂 后 加 水 定 容 ． １１ 的 温 水 ０ｍｉ 用 ￣ 层 溶 在 ２℃ 度 下 灭 菌２ ｍｉ 冷 却 至 ６ ￣ ０℃ 时 加 入 １０ｍｇ Ｌ ０ ｎ， ０７ ０ ／ 氯霉 素 ． 面 培 养 时 培 养 基 中不 加 入 氯 霉 素 ． 斜 发酵时选用Ｐ ＤＡ液 体 培 养 基 ： 制 方 法 同 上 ， 加 入 琼 脂 和 氯 霉 素 ， 装 至 ５０ｍＬ 角 瓶 中 。 瓶 配 不 分 ０ ＝ 每
