金钗石斛总生物碱抗秀丽隐杆线虫衰老作用及其机制研究
- 格式:doc
- 大小:12.59 KB
- 文档页数:2
菲对秀丽隐杆线虫、中杆属和拟丽突属线虫毒性效应研究张言诚;石金礼;曾四满;张振;李伟明;李辉信;胡锋;徐莉【摘要】A gnotobiotic microcosm experiment was conducted to study the toxic effects of phenanthrene (PHE) on three nematodes—Caenorhabditis elegans,Mesorhabditissp.and Acrobeloidessp., alsothe possibility of PHE depletion by the nematodes were examined. The results showed that the survival rates of these three nematodes decreased gradually with PHE concentration increased. Without PHE exposure,Caenorhabditis eleganscould reproduce within 48 hours and 5 mg/L PHE could inhibit the reproduction of Caenorhabditis elegans. While no reproductive patterns was observed with the Mesorhabditis sp. and Acrobeloidessp.due to their longer generation time. After comparing the relative mortality at 24h exposure, the tolerance order of those nematode was Mesorhabditis sp.≥Caenorhabditis elegans≥Acrobeloides sp., and the tolerance of Caenorhabditis elegans reduced gradually with the increased PHE concentration. After 48h exposure,Mesorhabditis sp. still had a higher tolerance than Acrobeloidessp., while after 72h exposure, both of them showed similar tolerance to PHE. All nematodes lost the head swing ability after PHE exposure, and the body length of Caenorhabditis elegans and Acrobeloidessp. reduced gradually with the increase of PHE concentration. All nematodes could help to facilitate the depletion of PHE, and no significant difference was found among three nematodes. In conclusion, PHE could restrain the survival, growth and activity of these nematodes,and inhibit the reproduction of the Caenorhabditis elegans.The survival rates of the nematodes were significantly influenced by nematode species, exposure time, PHE concentrations and their interactions.Mesorhabditis sp. showed the highest resistance to PHE pollution. All the three nematodes could contribute to the depletion of phenanthrene in solution.%采用悉生培养系统,研究不同浓度菲对秀丽隐杆线虫、拟丽突属与中杆属线虫的毒性效应,以及3种线虫对菲的去除作用.结果表明:①随着菲浓度的增加,3种线虫存活率逐渐降低.秀丽隐杆线虫在不添加菲的处理中,48 h内出现繁殖,而在添加菲的处理中,即使在最低浓度5 mg/L下,繁殖现象也会消失.中杆属与拟丽突属线虫由于世代时间较长,在本试验周期内均未出现繁殖现象.②暴露24 h时,比较不同浓度菲处理下线虫的相对死亡率,得到3种线虫的耐性依次为中杆属线虫≥秀丽隐杆线虫≥拟丽突属线虫,且随菲浓度的增加,秀丽隐杆线虫耐性水平逐渐降低;暴露48 h时中杆属线虫耐性依旧高于拟丽突属,而72 h时中杆属与拟丽突属线虫的耐性趋于一致.③3种线虫受菲胁迫后均失去头部正常摆动能力,且秀丽隐杆线虫与拟丽突属线虫体长随菲浓度的增加而逐渐降低.④不同种类线虫的添加均能促进菲的去除,不同线虫之间无显著差异.因此,菲会显著抑制3种线虫的存活率和生长发育,抑制秀丽隐杆线虫的繁殖.线虫的存活率受线虫种类、暴露时间、菲浓度及其交互作用的影响显著,其中中杆属线虫对菲的综合耐性最强,3种线虫均能促进溶液中菲的去除.【期刊名称】《土壤》【年(卷),期】2017(049)005【总页数】6页(P935-940)【关键词】菲;秀丽隐杆线虫;中杆属;拟丽突属;生物毒性【作者】张言诚;石金礼;曾四满;张振;李伟明;李辉信;胡锋;徐莉【作者单位】南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095;南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095;南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095;南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095;南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095;南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095;南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095;南京农业大学资源与环境科学学院,南京 210095【正文语种】中文【中图分类】X171.5多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons,简称PAHs),是指由两个或两个以上苯环以线状、角状或簇状排列的稠环化合物[1],是一类广泛存在于环境中具有致癌、致畸、致突变性的持久性有机污染物。
球参酶解物馏分对秀丽隐杆线虫抗衰老和抗氧化的作用陈可欣;石林凡;任中阳;翁武银【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2024(45)11【摘要】为探究球参酶解物馏分(Phyllophorus proteus hydrolysate fraction,PPHF)对秀丽隐杆线虫(线虫)的抗衰老和抗氧化作用,分别利用0.5、2.0 mg/mL和8.0 mg/mL PPHF喂食线虫,考察线虫生理生化指标的变化规律。
结果表明,制备的PPHF呈米黄色,其L*值和b*值分别81.28和15.88。
PPHF中分子质量为180~1 000 Da的寡肽占比达到63.76%,谷氨酸和甘氨酸的占比分别为19.50%和15.34%。
喂食0.5、2.0 mg/mL和8.0 mg/mL PPHF后,线虫的寿命在正常条件下分别延长22.43%、54.60%和78.89%,在热应激和氧化应激条件下也得到延长。
喂食0.5 mg/mL PPHF可以显著提高线虫的身体长度,而喂食2.0mg/mL PPHF才能显著提高线虫的吞咽频率。
喂食0.5 mg/mL和8.0 mg/mL PPHF的线虫身体弯曲频率在培养第2天时比空白组分别提高了7.75%和43.71%。
PPHF能够显著降低线虫体内活性氧含量并提高抗氧化酶活力、还原型谷胱甘肽含量和总抗氧化能力,且呈剂量依赖性。
综上,PPHF可以通过提高线虫体内抗氧化能力,进而改善生理功能并延长寿命。
【总页数】8页(P144-151)【作者】陈可欣;石林凡;任中阳;翁武银【作者单位】集美大学海洋食品与生物工程学院【正文语种】中文【中图分类】TS254.5;TS201.4【相关文献】1.豆渣DNA及其酶解物的体内抗氧化作用2.沙棘籽蛋白酶解物抗氧化作用初探3.圆鮀鲣暗色肉酶解物5 ku组分的抗氧化活性与抗疲劳作用4.制何首乌提取物及主要单体成分对细胞酪氨酸酶及抗氧化保护作用研究5.鲍鱼肌肉酶解产物对秀丽隐杆线虫的抗衰老作用研究因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
不同品质的5-氟-2'-脱氧尿苷(FUdR)对秀丽隐杆线虫寿命影响及烷化剂临床应用价值的评估摘要:5-氟-2'-脱氧尿苷(FUdR)作为一种重要的脱氧核苷类似物,已被广泛应用于线虫探究中。
本探究通过使用不同品质的FUdR,探究其对秀丽隐杆线虫寿命的影响,并评估其作为烷化剂的临床应用价值。
试验结果显示,FUdR的品质对线虫寿命有显著影响,高质量的FUdR能够显著提高线虫的寿命。
此外,FUdR作为一种潜在的烷化剂,在临床应用中也具有重要的价值。
本文详尽谈论了不同品质的FUdR对秀丽隐杆线虫寿命的影响以及其作为烷化剂的临床应用价值,并提出了进一步探究的方向。
1. 引言秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种常用的模式生物,在探究抗老化和寿命延长方面具有重要意义。
FUdR作为一种抑止线虫繁殖的物质,已被广泛用于线虫试验中。
然而,目前对FUdR不同品质对线虫寿命的影响还知之甚少。
此外,FUdR作为一种潜在的烷化剂,在癌症治疗中也具有重要的临床应用价值。
因此,探究不同品质的FUdR对线虫寿命的影响及作为烷化剂的临床应用价值具有重要意义。
2. 材料与方法在试验中,我们使用了不同品质的FUdR,包括高纯度和低纯度两种。
我们将线虫分为两组,一组使用高纯度的FUdR处理,另一组使用低纯度的FUdR处理,并使用无FUdR处理的线虫作为比较组。
每组试验重复三次,每次重复包括50只线虫。
观察线虫的寿命,并记录下来。
3. 结果试验结果显示,使用高纯度FUdR处理的线虫寿命明显延长,而使用低纯度FUdR处理的线虫寿命缩减。
与比较组相比,高纯度FUdR处理组的线虫寿命延长了30%,而低纯度FUdR处理组的线虫寿命缩短了25%。
4. 谈论试验结果表明,FUdR的品质对线虫寿命有显著影响。
高纯度的FUdR可能含有更高浓度的有效成分,能更好地抑止线虫的繁殖,从而延长其寿命。
相反,低纯度的FUdR可能含有更多的杂质,对线虫的健康产生负面影响,从而缩短其寿命。
金钗石斛提取物抗白内障的体外实验研究作者:龙艳魏小勇詹宇坚李熙灿徐传磊徐勤【摘要】【目的】探讨金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)总生物碱和粗多糖对白内障的抑制作用。
【方法】采用溶剂法分离提取金钗石斛总生物碱和粗多糖;体外培养大鼠晶状体,加入H2O2与总生物碱(或粗多糖)共培养24h;分别在培养后6、12、18、24h共4个时段于解剖显微镜下观察并记录晶状体混浊度的改变;检测晶状体水溶性蛋白、谷胱甘肽(GSH)的含量及总超氧化物歧化酶(T??SOD)和丙二醛(MDA)的活性。
【结果】金钗石斛总生物碱和粗多糖均能减轻晶状体混浊度,并能显著升高晶状体水溶性蛋白、GSH含量及T??SOD活性,降低MDA的活性(均P<0.05),其中石斛总生物碱高剂量组效果最佳。
【结论】金钗石斛总生物碱和粗多糖在体外均有一定的抗白内障作用,其机制与拮抗晶状体的氧化损伤有关,而总生物碱的效果优于粗多糖。
【关键词】金钗石斛/药理学金钗石斛/化学白内障/中药疗法晶状体 /病理学器官培养白内障(cataract)是一种常见的致盲眼病,它是多种因素共同作用的结果,氧化损伤是其发病机制之一[1]。
论文百事通当前许多中药研究都是从提高晶状体抗氧化能力入手,利用抗氧化剂或抗氧化酶激活剂来消除或中和晶状体中的氧化产物,阻止或逆转晶状体变浑浊,从而抑制或延缓白内障的发生发展[2]。
石斛是一种名贵中药材,抗白内障是其主治功效之一。
已有研究证实,石斛水煎剂可通过改变晶状体相关酶的活性而对D?舶肴樘切园啄谡掀鸬椒乐巫饔茫?3],石斛的乙酸乙酯提取物在体外还可抑制醛糖还原酶和过氧化脂质(LPO)的产生[4],这些研究在一定程度上揭示了石斛抗白内障的作用机理。
然而,石斛化学成分复杂,其抗白内障的具体有效成分是什么,至今仍未见报道。
本实验通过体外培养晶状体,对金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)的粗提物总生物碱(total alkaloids)和粗多糖(polysaccharides)抗白内障作用进行了探讨,现报道如下。
黄连素对高盐高糖诱发秀丽隐杆线虫形态及寿命改变的干预作用徐婋,卢涛,李珂,徐佳宁,刘小愉,杜鹏云,张成岗北京中医药大学生命科学学院,北京102488摘要:目的 探讨黄连素对高盐高糖诱发的秀丽隐杆线虫形态和寿命改变的干预作用。
方法 取秀丽线虫进行培养,随机分为正常对照组、高盐组、高糖组、高盐高糖组。
正常对照组加入线虫NGM 培养基;高盐组、高糖组、高盐高糖组下设模型对照组、10 mg /L 黄连素干预组、20 mg /L 黄连素干预组,先分别加入高盐培养基(含0.7%氯化钠的线虫NGM 培养基)、高糖培养基(含1%葡萄糖的线虫NGM 培养基)、高盐高糖培养基(含0.7%氯化钠和1%葡萄糖的线虫NGM 培养基),然后向黄连素干预组中加入相应浓度的黄连素溶液,培养6 d 。
于第1、3、6天测定各组线虫体长、体宽及寿命,培养第6天采用RT -qPCR 法检测线虫类似人胰岛素代谢相关基因daf -2、daf -16 mRNA 。
结果与正常对照组相比,高盐、高糖以及高盐高糖组线虫体宽增加、寿命缩短(P 均<0.05),体长无明显变化(P 均>0.05),daf -2 mRNA 表达升高、daf -16 mRNA 表达降低(P 均<0.05);与高盐、高糖以及高盐高糖组相比,添加黄连素组线虫的体宽降低、寿命延长(P 均<0.05),体长无明显变化(P 均>0.05),daf -2 mRNA 表达降低、daf -16 mRNA 表达升高(P 均<0.05)。
结论 黄连素可抑制高盐高糖诱发的秀丽线虫形态改变以及寿命缩短,其机制可能是通过下调daf -2 mRNA 表达、上调daf -16 mRNA 表达来发挥作用。
关键词:黄连素;秀丽隐杆线虫;高盐;高糖;线虫形态;线虫寿命;daf -2;daf -16doi :10.3969/j.issn.1002-266X.2023.26.008中图分类号:R151 文献标志码:A 文章编号:1002-266X (2023)26-0035-05Intervention effects of berberine on morphological and lifespan changes of Caenorhabditis elegans induced by high -salt and high -sugar dietXU Xiao , LU Tao , LI Ke , XU Jianing , LIU Xiaoyu , DU Pengyun , ZHANG Chenggang School of Life Sciences , Beijing University of Chinese Medicine , Beijing 102488, ChinaAbstract : Objective To explore the intervention effect of berberine on changes of morphology and lifespan of Cae‑norhabditis elegans (C. elegans ) induced by high -salt and high -sugar diet. Methods C. elegans were cultured and ran‑domly divided into the normal control group , high -salt group , high -sugar group and high -salt -high -sugar group. The nor‑mal control group was added with nematode NGM medium. In the high -salt group , high -sugar group , and high -salt -high -sugar group , we set up the model control group , 10 mg /L berberine intervention group , and 20 mg /L berberine interven‑tion group , which were first added with high -salt medium (nematode NGM medium containing 0.7% sodium chloride ), high -sugar medium (nematode NGM medium containing 1% glucose ), and high -salt -high -sugar medium (nematode NGM medium containing 0.7% sodium chloride and 1% glucose ), respectively , and then the berberine intervention group wasadded with corresponding concentrations of berberine solution , and cultured for 6 days. The body length , body width of C. elegans were measured on the 1st , 3rd and 6th days , the lifespan of C. elegans were measured and daf -2 and daf -16 mRNA levels were detected by RT -qPCR on the 6th day of culture. Results Compared with the normal control group , the high -salt , high -sugar and high -salt -high -sugar groups had significant increase in body width and significant reduction in lifespan (all P <0.05), while there was no significant change in body length (all P >0.05); the expression of daf -2 mRNA increased and daf -16 mRNA decreased (all P <0.05). Compared with the high -salt , high -sugar and high -salt -high -sugar groups , berberine supplementation significantly reduced body width and prolonged life span (all P <0.05), but did not af‑fect body length (all P >0.05); the expression of daf -2 mRNA significantly decreased and daf -16 mRNA significantly in‑基金项目:地方病与少数民族疾病教育部重点实验室(贵州医科大学)开放项目(FZSW -2021-002)。
苦瓜皂苷对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其机制研究白娟;张金富;张佩熙;何林钊;武蓓琪;祝莹;李洁;肖香【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2022(43)7【摘要】目的:研究苦瓜皂苷对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其与降脂作用的相关性。
方法:结合油红O染色与甘油三酯生化试剂盒分析苦瓜皂苷(50、100、200μg/mL)对线虫脂肪沉积的作用;通过测定线虫体长、体宽、运动能力以及寿命评估苦瓜皂苷对线虫基础生理指标的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测脂代谢相关基因的mRNA表达水平;利用脂代谢相关基因缺失的线虫突变株,通过系统寿命评估,考察苦瓜皂苷调控线虫寿命与脂代谢的相关性。
结果:100、200μg/mL苦瓜皂苷在不改变虫体大小、运动能力等基础生理指标条件下,能够显著降低线虫甘油三酯相对含量(P<0.05),并延长线虫自然寿命(P<0.0001)。
经100μg/mL苦瓜皂苷处理后,脂肪合成相关基因nhr-80、fat-5、fat-6和fat-7 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),而对脂肪酸氧化或脂肪分解相关的基因无明显作用。
经苦瓜皂苷处理后,fat-6、fat-7单突变体和fat-6/fat-7双突变体的寿命均无显著延长(P>0.05)。
结论:苦瓜皂苷延长线虫自然寿命的作用与其降低脂肪沉积的功效密切相关,其机制主要是抑制了脂肪酸合成途径中脱饱和酶fat-6和fat-7的基因表达。
【总页数】9页(P165-173)【关键词】秀丽隐杆线虫;苦瓜皂苷;脂肪沉积;寿命;衰老【作者】白娟;张金富;张佩熙;何林钊;武蓓琪;祝莹;李洁;肖香【作者单位】江苏大学食品与生物工程学院【正文语种】中文【中图分类】TS201.4【相关文献】1.苦瓜皂苷G对人肺癌A549细胞的增殖迁移与凋亡的影响及作用机制2.白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其初步机制研究3.白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其初步机制研究4.白术乙醇提取物对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其机制研究5.知母皂苷B-Ⅱ抑制秀丽隐杆线虫Aβ蛋白毒性作用及机制研究因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
金钗石斛生物碱抗糖性白内障作用及蛋白质组学效应的实验研究魏小勇;龙艳【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2008(020)004【摘要】为观察金钗石斛生物碱抗糖性自内障作用及其相关蛋白谱.将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、样品高、低剂量组和阳性对照组,每组10只,模型组腹腔注射D-半乳糖诱导大鼠白内障模型,样品高、低剂量组和阳性对照组在注射D-半乳糖26 d后形成Ⅱ级白内障后每天分别给予0.36、0.18 g/kg金钗石斛总生物碱灌胃进行实验性治疗,阳性对照组每天以0.22 g/kg石斛夜光丸灌胃,正常对照组每天仅灌胃生理盐水;用裂隙灯观察观察晶状体浑浊度;46 d后处死动物后检测晶状体水溶性蛋白、GSH的含量及T-SOD和MDA的活性;使用双向电泳技术提取分离大鼠晶状体总蛋白及糖基化蛋白,分析比较双向电泳图谱,寻找正常组与模型组、生物碱治疗组大鼠晶状体蛋白质组学差异.结果金钗石斛生物碱高剂量组能明显减轻晶状体混浊度,显著升高晶状体水溶性蛋白、GSH含量及T-SOD活性,降低MDA的活性;2-DE获得了较好的大鼠晶状体总蛋白质及糖基化蛋白质的双向电泳图谱,并观察到模型组有大量蛋白质点表达上调或下调或新蛋白,蛋白质糖基化水平升高,给予高剂量石斛生物碱后,大部分达上调或下调蛋白质恢复到正常的水平,糖基化蛋白降低.表明金钗石斛生物碱具有较好的抗糖性白内障作用,并伴随一系列晶状体蛋白质表达水平的改变,其差异蛋白可能参与了晶状体浑浊过程.【总页数】5页(P617-621)【作者】魏小勇;龙艳【作者单位】广州中医药大学基础医学院,广州510405;广州中医药大学基础医学院,广州510405【正文语种】中文【中图分类】R285.5;Q946【相关文献】1.金钗石斛提取物抗白内障的体外实验研究 [J], 魏小勇;龙艳;詹宇坚;李熙灿;徐勤;徐传磊2.金钗石斛提取物抗白内障的体外实验研究 [J], 白金丽;温淑湘3.金钗石斛提取物抗白内障的体外实验研究 [J], 龙艳;魏小勇;詹宇坚;李熙灿;徐传磊;徐勤4.金钗石斛生物碱对糖性白内障大鼠诱导型一氧化氮合酶基因的调控 [J], 魏小勇;龙艳5.金钗石斛总生物碱抗慢性应激诱导的大鼠焦虑作用及机制 [J], 熊庭旺;吴芹;刘波;徐云燕;王丽娜;张成宸;张玮;石京山因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
沙棘粕醇提取物对秀丽隐杆线虫的抗衰老功效及其机制张佳婵;王昌涛;刘瑶;石秀芹;赵丹;李萌;王成涛;孙宝国【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2017(038)023【摘要】以沙棘粕为研究对象,经乙醇提取、大孔吸附树脂纯化获得沙棘粕醇提取物(sea buckthorn seed extracts, SBSE).以秀丽隐杆线虫为模式生物,研究SBSE 的抗衰老作用及其可能机制.本研究考察了不同质量浓度范围内SBSE对秀丽隐杆线虫生命周期、生殖能力和应激抵御能力的影响,探索了SBSE对线虫抗氧化酶活力以及衰老相关基因表达水平的作用,从基因水平探索SBSE的抗衰老可能机制.结果:SBSE可以显著延长秀丽隐杆线虫的存活时间(P<0.05),减轻脂褐素水平的积累;0.05 mg/mL SBSE处理后秀丽隐杆线虫子代数量为(246.40±21.11)个,显著高于空白对照组的(205.80±20.42)个(P<0.05);对热应激和氧化应激有显著的防御效果(P<0.05);此外,SBSE提高了秀丽隐杆线虫体内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活力,降低了秀丽隐杆线虫促衰老基因age-1、daf-2的表达水平,提高了抗衰老基因sir-2.1的表达.该结果表明SBSE或许通过提高抗氧化酶活力以及改变衰老相关基因的表达水平来发挥抗衰老的功效.【总页数】8页(P141-148)【作者】张佳婵;王昌涛;刘瑶;石秀芹;赵丹;李萌;王成涛;孙宝国【作者单位】北京工商大学理学院,植物资源研究开发北京市重点实验室,北京100048;北京工商大学理学院,植物资源研究开发北京市重点实验室,北京 100048;北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,北京 100048;北京工商大学理学院,植物资源研究开发北京市重点实验室,北京 100048;北京工商大学理学院,植物资源研究开发北京市重点实验室,北京 100048;北京工商大学理学院,植物资源研究开发北京市重点实验室,北京 100048;北京工商大学理学院,植物资源研究开发北京市重点实验室,北京 100048;北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,北京 100048;北京工商大学食品学院,食品添加剂与配料工程研究中心,北京100048;北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,北京 100048;北京工商大学食品学院,食品添加剂与配料工程研究中心,北京 100048【正文语种】中文【中图分类】TS201.4【相关文献】1.细胞水平评价沙棘粕醇提物的抗衰老功效 [J], 张佳婵;史豆豆;王昌涛;李萌;赵丹;王成涛;孙宝国2.发酵法制备沙棘籽粕总黄酮的初步纯化及抗衰老活性评价 [J], 由士权; 王昌涛; 张佳婵; 李萌; 赵丹; 安全3.白术乙醇提取物对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其机制研究 [J], 赵建平;吴丽敏;鲁晓娜;王辉;王潘;张振强;徐江雁;谢治深4.鹿茸乙醇提取物对秀丽隐杆线虫抗衰老的作用 [J], 刘春红;汤燚聪;高瑜培;李云飞;陈晓光5.沙棘粕醇提取物对小鼠氧化应激损伤的保护作用及机制 [J], 张佳婵;程琳;化璟琳;王昌涛;赵丹;孙宝国因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
金钗石斛总生物碱抗秀丽隐杆线虫衰老作用及其机制研究
目的:探究金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobile Lindl alkaloids,DNLA)对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)衰老的作用及其机制研究。
方法:野生型秀丽隐杆线虫同期化培养至L4期,随机挑取线虫分为四组:对照组(Control组)、DNLA 0.035μg/m L、0.35μg/m L和3.5μg/m L组。
首先观察不同浓度DNLA对线虫寿命周期的影响;在20℃条件下线虫培养72 h,分别进行35℃热应激实验和百草枯氧化应激实验,观察最佳DNLA浓度是否能提高线虫在胁迫条件下的抗压力应激能力,延长线虫寿命;显微镜观察检测DNLA 对线虫生殖能力、移动能力、吞咽频率和脂褐素荧光强度等寿命相关生理指标的影响;实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)实验检测DNLA对衰老相关基因线虫FOXO同源物(Orthology of the FOXO in C.elegans,daf-16)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,sod-3)、过氧化氢酶(Catalase,ctl-1)、热休克蛋白(Heat shock protein,hsp16.2)以及哺乳动物nrf2同源物(A homologue of the mammalian nrf2,skn-1)的m RNA表达水平的影响;试剂盒检测SOD酶活力;采用daf-16与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)结合线虫株TJ356(daf-16::GFP)荧光显微镜下检测daf-16基因核定位情况;突变线虫株CF1038(daf-16缺失)和EUI(skn-1缺失)分别进行寿命实验观测daf-16和skn-1基因缺失后DNLA对线虫生命周期的影响。
结果:寿命实验中,DNLA给药后延长野生型线虫寿命,且0.35μg/m L DNLA给药浓度效果最佳。
对照组线虫平均寿命为24.62天,0.35μg/m L DNLA组线虫平均寿命为27.61天,寿命延长12.14%;35℃热应激和2 m M百草枯氧化应激条件下,DNLA能提高线
虫抗压力应激的能力,Paraquat+0.35μg/m L DNLA组与Paraquat组相比,生存曲线右移,生命周期延长,DNLA给药后线虫平均寿命由9.15天延长至10.10天,延长10.38%,而热应激实验中0.35μg/m L DNLA给药作用更为显著,线虫平均寿命从13.33天延长至18天,延长35.03%;与对照组相比,0.35μg/m L DNLA给药组线虫生殖能力和吞咽频率均无明显变化,但其移动能力显著增强,脂褐素沉积减少;0.35μg/m L DNLA给药3天后,daf-16、sod-3、hsp-16.2、ctl-1、skn-1转录水平均明显上调;TJ356线虫株检测daf16核定位显示,给予0.35μg/m L DNLA后,daf-16::GFP荧光定位于细胞质的线虫减少至19.64%,而中间状态分布的线虫则由31.24%提高至61.70%,定位于细胞核内的线虫比例也增加到18.37%,提示DNLA能促进daf-16转移进入细胞核提高daf-16活性从而延长线虫寿命;给药DNLA后SOD酶活力提高40.87%;突变线虫株CF1038和EUI给予DNLA后,与对照组相比寿命未发生明显变化。
结论:金钗石斛总生物碱对秀丽隐杆线虫有延缓衰老的作用,其作用机制可能与上调daf-16、skn-1基因,提高抗氧化应激能力有关。