成年期Ⅰa型糖原累积症致继发性骨质疏松症家系研究

中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志２０１４年３月第７卷第１期　ＣＨＩＮ　Ｊ　ＯＳＴＥＯＰＯＲＯＳ　ＢＯＮＥ　ＭＩＮＥＲ　ＲＥＳ　Ｖｏ１．７　Ｎｏ．１　Ｍａｒｃｈ　２０，２０１４　・２５・　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—２５９１．２０１４．０１．００５　・临床研究・　成年期Ｉ　ａ型糖原累积症致继发性骨质疏松症家系研究　祝捷　，邢燕　，郑茂。，王东　，邢学农　，叶山东。　［摘要］　目的研究Ｉ　ａ型糖原累积症致继发性骨质疏松症家系及其分子遗传学背景。方法使用双能Ｘ射　线骨密度仪检测先证者及其弟左前臂、左髋关节、腰椎的骨密度。抽取先证者及其父母全血，提取基因组　ＤＮＡ，通过多聚酶链反应扩增葡萄糖＿６．磷酸酶５个外显子及与内含子交界区，采用ＤＮＡ直接测序法确定突变　部位。结果先证者及其弟腰椎及左髋部骨密度均低于同龄人，其弟左前臂骨密度低于同龄人。先证者Ｇ６ＰＣ　基因第５号外显子存在Ｃ．６ｄ８Ｇ＞Ｔ纯合突变，其父母均存在ｃ．６４８Ｇ＞Ｔ杂合突变。结论　Ｉ　ａ型糖原累积症　是导致成人继发性骨质疏松症的罕见病因。成人发生原因不明的骨质疏松，合并肝脏肿大、高脂血症、高尿　酸血症和血乳酸水平明显增高时，应考虑糖原累积症。其导致骨质疏松的机制以及表型和基因型的关系有待　进一步研究。　［关键词］　糖原累积症；骨质疏松症；家系研究　中图分类号：Ｒ７２５．８　文献标志码：Ａ　Ｇｌｙｃｏｇｅｎ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　Ｉａ　ｄｉａｇｎｏｓｅｄ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ　ｃａｕｓｅｓ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ：ａ　ｐｅｄｉｇｒｅｅ　ｓｔｕｄｙ　ＺＨＵ　ｆｉｅ。，ＸＩＮＧ　Ｙａｎ　，ＺＨＥＮＧ　Ｍａｏ　，ＷＡＮＧ　Ｄｏｎｇ　，ＸＩＮＧ　Ｘｕｅ—ｎｏｎｇ　，ＹＥ　Ｓｈａｎ．ｄｏｎｇ　ｌ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　ｔｏ　Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｍｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ　２３０００１，Ｃｈｉｎａ　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ　ｏｆ　ａ　ｐｅｄｉｇｒｅｅ　ｗｉｔｈ　ｇｌｙｃｏｇｅｎ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｄｉｓ—　ｅａｓｅ　Ｉ　ａ（ＧＳＤ　Ｉ　ａ）ａｎｄ　ｆｏｃｕｓ　ｏｎ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｐｒｏｂａｎｄ　ａｎｄ　ｈｅｒ　ｙｏｕｎｇｅｒ　ｂｒｏｔｈｅｒ　ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ　ｂｏｎｅ　ｍｉｎｅｒａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ＢＭＤ）ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｂｙ　ｄｕａｌ—ｅｎｅｒｇｙ　Ｘ・ｒａｙ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｍｅｔｒｙ（ＤＥＸＡ）ｆｏｒ　ｓｐｉｎｅ，　ｌｅｆｔ　ｆｏｒｅａｒｍ　ａｎｄ　ｈｉｐ．ＤＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｂａｎｄ　ａｎｄ　ｈｅｒ　ｆａｔｈｅｒ　ａｎｄ　ｍｏｔｈｅｒ．Ａｌｌ　ｔｈｅ　ｆｉｖｅ　ｅｘｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｌａｎｋｉｎｇ　ｉｎｔｒｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｌｕｃｏｓｅ－６一ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｗｅｒｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ａｃｔｕａｌ　ｍｕ—　ｔａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｂｙ　ｄｉｒｅｃｔ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｓｐｉｎｅ　ＢＭＤ　ａｎｄ　ｌｅｆｔ　ｈｉｐ　ＢＭＤ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｂｅｌｏｗ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｃ—　ｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ｆｏｒ　ａｇｅ．Ｌｅｆｔ　ｆｏｒｅａｒｍ　ＢＭＤ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｂａｎｄ’Ｓ　ｙｏｕｎｇｅｒ　ｂｒｏｔｈｅｒ　ｗａｓ　ｂｅｌｏｗ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｃｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ｆｏｒ　ａｇｅ．Ｔｈｅ　ＤＮＡ—　ｂａｓｅｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｂａｎｄ　ｗａｓ　ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｃ．６４８Ｇ＞Ｔ　ｍｕｔａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｂａｎｄ’Ｓ　ｆａｔｈｅｒ．ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｈｅｒ　ｍｏｔｈｅｒ　ｗａｓ　ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｃ．６４８Ｇ＞Ｔ　ｍｕｔａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　ＧＳＤ　Ｉ　ａ　ｉｓ　ａｎ　ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ　ｒａｒｅ　ｃａｕｓｅ　ｏｆ　ｓｅｃｏｎｄａ—　ｒｙ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ．Ａｄｕｌｔ　ｗｈｏ　ｈａｓ　ｕｎｅｘｐｌａｉｎｅｄ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ，ｈｅｐａｔｏｍｅｇａｌｙ，ｈｙｐｅｒｌｉｐｅｍｉａ，ｈｙｐｅｍｒｉｃｅｍｉａ　ａｎｄ　ａ　ｍａｒｋｅｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｆｏｒ　ＧＳＤ．Ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ—ｐｈｅｎｏ—　ｔｙｐｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｒｅｑｕｉｒｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　ｇｌｙｃｏｇｅｎ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｄｉｓｅａｓｅ；ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ；ｐｅｄｉｇｒｅｅ　ｓｔｕｄｙ　微粒体葡萄糖－ｌ５－磷酸酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａ—　ｔａｓｅ　ｃａｔａｌｙｔｉｃ，Ｇ６ＰＣ，ＧｅｎＢａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ：　ＵＯ１１２０）是涉及糖异生和糖原分解终末步骤的关　键酶，主要在肝、肾和肠黏膜表达，对维持人体血　基金项目：安徽省临床重点发展学科基金（ＺＦＯ０１０）　作者单位：１．２３０００１合肥，安徽医科大学附属省立医院内分泌科；２．内分泌实验室　通信作者：叶山东，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｓｄ１９６４０６＠１６３．ＣＯｒｎ

　中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志２０１４年３月第７卷第ｌ期　ＣＨＩＮ　Ｊ　ＯＳＴＥＯＰＯＲＯＳ　ＢＯＮＥ　ＭＩＮＥＲ　ＲＥＳ　Ｖｏ１．７　Ｎｏ．１　Ｍａｒｃｈ　２０．２０１４　糖水平稳定起重要作用。Ｇ６ＰＣ的先天性缺陷导致　糖原累积症Ｉ　ａ型（ｇｌｙｃｏｇｅｎ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　Ｉ　ａ．　ＧＳＤ　Ｉ　ａ，ＭＩＭ　ＩＤ：２３２２００）。ＧＳＤ　Ｉ型是糖原累积　症最常见的类型，其中Ｉ　ａ型约占ＧＳＤ　Ｉ型的　８０％…。本病患者多在婴幼儿期诊断，但少数患　者由于多种原因直至成年后才明确诊断，极少数患　者是由于成年时发生骨质疏松而就诊，本病为成人　继发性骨质疏松症的罕见病因。本文对在安徽医科　大学附属省立医院内分泌科近期诊治的ＧＳＤ　Ｉ　ａ型　糖原累积症家系之一进行探讨。　对象与方法　先证者，女性，２７岁，身高１４９．２　ｃｍ，体重　４５．０　ｋｇ，月经初潮年龄１８岁。因全身骨痛８年　就诊，外院腰椎ｘ线摄片提示骨质疏松，未见明　显骨折，拟诊骨痛原因待查收住人院。家属否认　患者幼年时有反复低血糖发作及昏迷史。既往无　骨折发生，２００１年曾因急性阑尾炎在外院行阑尾　切除术。无特殊饮食及生活习惯，未婚育，无　业，日常生活可自理。体格检查发现营养状况不　良，双肺呼吸音清，未闻及干湿性哕音，心率　９Ｏ次／ｒａｉｎ，律齐，未闻及病理性杂音，腹软，肝　脏肋下一指，脾肋下未及，右下腹可见长约５　ｃｍ　的陈旧性手术瘢痕，双下肢无浮肿。实验室检　查：空腹血糖２．４７　ｍｍｏｌ／Ｌ（参考值３．９～　６．１ｍｍｏｌ／Ｌ），餐后６０　ｍｉｎ血糖：７．４１　ｍｍｏｌ／Ｌ，　餐后１２０　ｍｉｎ血糖：６．８３　ｍｍｏｌ／Ｌ；空腹胰岛素　７．２０　ｐｍｏｌ／Ｌ（参考值２８．２７～１２１．２５　ｐｍｏｌ／Ｌ），餐后　６０　ｍｉｎ胰岛素３５９．４０　ｐｍｏｌ／Ｌ，餐后１２０　ｍｉｎ胰岛　素４５０．３０　ｐｍｏｌ／Ｌ；空腹血乳酸７．９　ｍｍｏｌ／Ｌ（参考　值０．７０～２．１０　ｍｍｏｌ／Ｌ）；血气分析ｐＨ　７．２９９（参　考值７．３５０～７．４５０）；总胆固醇６．８９　ｍｍｏｌ／Ｌ（参考　值３．３５—５．７０　ｍｍｏｌ／Ｌ）；三酰甘油８．３６　ｍｍｏｌ／Ｌ（参　考值０．３０～１．８０　ｍｍｏｌ／Ｌ）；血尿酸５９４．０　ｔｕｎｏｌ／Ｌ（参　考值２０８～４２８　ｐｍｏｌ／Ｌ）；碱　磷酸酶１０７　Ｕ／Ｌ（参考　值４０～１５０　Ｕ／Ｌ）；血钙２．４５　ｍｍｏｌ／Ｌ（参考值２．００～　２．６０　ｍｍｏｌ／Ｌ）；血磷１．３１　ｍｍｏｌ／Ｌ（参考值０．８１～　１．４５　ｍｍｏｌ／Ｌ）；２４　ｈ尿钙５．０　ｍｍｏｌ／ｄ（参考值２．５～　７．５　ｒｅｔｏｏｌ／ｄ）；尿蛋白阴性；肝及。肾功能未见异常。　肝脏Ｂ超肝脏肿大，右叶肋下２５　ｍｍ，肝右叶有一　７　ｍｍ×７　ｍｍ无回声区，提示右叶小囊肿。肾脏Ｂ　超示双肾增大，弥漫性病变，未见明显结石。肝穿　刺活检加糖原染色病理报告：肝细胞浑浊肿胀，胞　浆内有大量糖原染色阳性物质及大小不等脂肪滴，　送检肝组织未见异质细胞。　先证者弟，男性，２５岁，身高１５１．５　ｃｍ，体　重４９．６　ｋｇ。全身骨痛５年余，一直未正规诊治，　既往无骨折发生。体格检查发现营养状况不良，肝　脏肋下一指。实验室检查：空腹血糖４．３６　ｍｍｏｌ／Ｌ，　空腹血乳酸３．２　ｍｍｏＬ／Ｌ，总胆固醇５．８３　ｍｍｏｌ／Ｌ，　三酰甘油４．３１　ｍｍｏｌ／Ｌ，血尿酸８７１．０　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ，碱　性磷酸酶１７５　Ｕ／Ｌ，肝及肾功能未见异常。　先证者姐，与先证者及弟有类似症状，曾发生　过“骨折”，已死亡，时年约２０岁，具体死亡原　因不详。　先证者父亲及母亲为表兄妹婚配，均体健。家　系情况如图１。　使用双能ｘ射线骨密度仪（ＤＥＸＡ，美国ＧＥ公　司）检测先证者及其弟的骨密度（ｂｏｎｅ　ｍｉｎｅｒａｌ　ｄｅｎ．　ｓｉｔｙ，ＢＭＤ，ｇ／ｅｒａ　）。测量部位：左前臂：桡骨　３３％；左髋关节：股骨颈，全髋；腰椎１－４（Ｌ　）。　ｚ．值为所测ＢＭＤ值与相同种族、年龄、性别骨量　平均值之差除以峰值骨量标准差所得数值。ｚ．值≤　一２．０，表示骨密度低于同龄人；Ｚ．值＞一２．０表示　骨密度在同龄人范围内　ｊ。ＤＥＸＡ精确度变异系数　为１％，每天开机后使用质控体模自检，并由专人　负责测量。　获得先证者及其父母知情同意后，对先证者及　其父母Ｇ６ＰＣ基因的全部５个外显子及与内含子交　界区进行测序。抽取每位受试者外周静脉血２　ｍＬ　置于ＥＤＴＡ抗凝试管中，使用ＱＩＡａｍｐ　ＤＮＡ　Ｂｌｏｏｄ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＱＩＡｇｅｎ公司）行ＤＮＡ抽提，ＰＣＲ引物　及反应条件参照文献［３—４］，采用Ｂｉｇ　Ｄｙｅ　Ｔｅｒｍｉ－　ｎａｔｏｒ　ｖ３．１　Ｃｙｃｌｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）　测序试剂盒，使用ＡＢＩ　３７３０ｘｌ测序仪（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉ－　ｏｓｙｓｔｅｍｓ公司）对ＰＣＲ产物双向测序。采用ＡＢＩ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓ—　ｔｅｍｓ，Ｖｅｒｓｉｏｎ　５．２）对测序结果进行分析。先证者　弟未做相关基因检测。