蚕豆根尖细胞微核技术检测的应用
摘要：利用微核检测技术，用蚕豆跟尖作材料，以蒸馏水为对照，检测工业污水、生活污水、自来水、阳性因子（NaN3）的诱变能力。结果表明，阳性因子对蚕豆跟尖的诱变效果最明显，微核率为106.6‰。
关键词：微核；蚕豆跟尖；阳性因子；诱变
微核（micronuclei,MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变的另一种形式，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的〔1〕。蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleus test，MC—NT)技术，它灵敏度高、操作技术简单，且蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高。因此，微核检测方法可用于环境污染，辐射损伤，化学诱变剂等的监测[2-6]。
近年来，蚕豆微核试验被广泛应用于环境污染，辐射损伤，化学诱变剂等的监测。我国在1985年开始研究应用蚕豆根尖微核技术直接监测淡水湖泊的水质情况[7-8]。因而，诱变物污染状况的研究对环境整治有非常重要的现实意义。本文用蚕豆根尖细胞微核技术对阳性因子(NaN3)诱变能力进行检测。
1.材料与方法
1.1试验材料
本实验选用四川农业大学提供的优质蚕豆(Vicia faba)种子。
试剂：6mol/L盐酸 甲醇 冰乙酸 醋酸洋红、叠氮钠（NaN3）、EMS、工业污水、生活污水等。
器皿：显微镜 计数器 镊子 载玻片 盖玻片 烧杯 瓷盘 剪刀等。
1.2 实验方法
1.2.1 材料制备与处理
浸种催芽：按实验需要选取大小均匀、的蚕豆种子，直接放入盛有自来水的烧杯中，在23.6℃下浸种24h，此间换水2次，所换水预温25℃。种子吸胀后，将蚕豆种于有锯木榍的瓷盘中，用草纸覆盖并浇上自来水保持湿度，在23.6℃恒温箱中催芽48h。大部分初生根长至1-2cm时，根毛发育良好，便可以进行检测。
用待测液处理根尖：本组选取24粒初生根生长良好、根长一致的种子，放入盛有阳性因子的培养皿中，浸没根尖。另外用自来水作对照、各处理根尖12h。 根尖细胞恢复培养：用蒸馏水浸洗3次，每次3 -5 min；再剪去幼芽，洗净后在置于有锯木榍的瓷盘中，在23.6℃进行恢复培养24 h。
微核正式报告
正式报告
利用花露水对蚕豆(Vicia faba)根尖细胞微核的诱导及观察
（ 焦锦花 1020212128 生物技术1011班 ）
组员名单：葛笑、孙晓玮、周晓杰、徐中洋、李亚峰、程石、蒋沈琳、焦锦花 一、实验目的：
1、了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活中的应用范围及意义 2、学习蚕豆根尖的微核测试技术并掌握其操作方法 3、探究花露水对微核的诱导作用 4、进行小组合作，掌握设计实验基本能力 二、实验原理：
微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细
胞经辐射或化学药物的作用而产生。利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试， 可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可于污染程度的监测。
花露水包含少量劣质香精和75%左右的酒精，还有一种叫“伊默宁”的成分， 而花露水芬芳剂成分部分有毒。
本实验通过用实验室蒸馏水（对照组）、重铬酸钾（阳性对照）、和一定范围内不同浓度的花露水处理蚕豆根尖，通过观察计数后计算蚕豆根尖细胞微核千分率得出花露水的细胞毒性效应。
本实验即运用蚕豆根尖微核实验检测，研究花露水对蚕豆根尖微核诱导的作用，进而为花露水对人体以及环境的影响提供一定的理论参考 三、实验材料和主要试剂
蚕豆种子、花露水：用蒸馏水配制成25％、50％、75％梯度的溶液及原液、卡诺固定液（无水酒精：醋酸=3：1）、改良石炭酸品红、重铬酸钾溶液 四、实验过程
1、催芽：将实验用蚕豆种子按需要量放入盛有蒸馏水的烧杯中，在25℃下浸泡8小时。种子吸胀后 ，放入培养皿中，用棉花保持湿度，在25℃温箱中催芽三天浸种催芽
2．花露水处理：每一处理选取3粒初生根良好、根长较一致的种子。将蚕豆不定根置于不同浓度（25％、50％、75％ 溶液及原液）的花露水培养6~8小时，第二组用蒸馏水处理作对照，第三组用重铬酸钾作阳性对照。
２００６年第２１期 ＣＨＩＮＡ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ Ｎｏｖ．２００６
微核技术监测水体污染的研究 王兆慧 南通大学生命科学学院 ２２６００７
利用蚕豆根尖细胞微核技术对南通市郊区主 要河流水体的污染状况进行了检测，测定各 采样点水样的蚕豆根尖细胞微核千分率 （Ｍ Ｃ Ｎ％ｏ）及污染指数（Ｐ １），并进行了统 计分析。结果表明：各采样点ＭＣＮ‰有显著 性差异，７个采样点中有５个采样点的ＰＩ在 ２以上，和对照组相比差异极显著（Ｐ＜０． ０ １），表明南通市郊区的水质受到不同程度 污染。分析了水体污染程度与环境和人为因 素的密切关系，对被污染水体的治理提出了 有价值的建议。 多 懈 ｜ ＿ 蚕豆根尖细胞；微核率；水体污染指数 ｔ 耐 ｜ ｌ √ ｌ ｜ ＿ √ ｜ ＿ ／ Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｔｅｓｔ ｗｉｔｈ ｖｉｃｉａ ｆａｂａ ｒＯＯｔ ｔｉｐ ｃｅｌｌ ｛ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｉｎ ｒｉｖｅｒｓ ｉｎ ＳＵｂｕｒｂａｎ ｏｆ Ｎａｎｔｏｎｇ ｃｉｔｙ．Ｔｈｅ ＭＣＮ％ａｎｄ Ｐ１ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ＭＣＮ％ｏ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎ ＭＣＮ％０ ｏｆ ｅｖｅｒｙ ｓｉｔｅ．ＰＩ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ５ ｓｉｔｅｓ ａｍｏｎｇ ７ ｓａｍｐｌｅ ｓｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｏｖｅｒ ２．ａｎｄ ｌｔ’Ｓ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｏｎｅ（ｐ＜Ｏ． ０｛）．Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ａｌｌ ｔｈｅ ｒｉｖｅｒｓ ｉｎ Ｎａｎｔｏｎｇ ｓｕｂｕｒｂｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｐｏｌｌｕｔｅｄ ａｔ ｌｉｇｈｔ ｏｒ ｈｅａｖｙ ｌｅｖｅ１．Ａｎａｌｙｓｅｄ ｔｈｅ ｃｌｏｓｅ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｐｏｉ［ｕｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ ｈｕｍａｎ’ Ｓ ａｃｔｉｖｆ＇￣ｙ．ｔｈｅ ｖａｌｕａｂｌｅ ｓｕｇｇｅｓｔｉｏｎ ｗａｓ ａｄｖｉｓｅｄ ｏｎ ｈｏｗ ｔｏ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ ｔｈｅ ｐｏ］］ｕ１￣ｅｄ ｗａ＇￣ｅｒ． 鳓 黪鹫０００ ０ ｒｏｏ＇￣－＇ｄｐ ｏｆ Ｖｉｃｉａ ｆａｂａ；ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｒａｔｅ；ｗａｋｅｒ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ 微核（ｍｉＣｒｏｎｕｃ１ｅｕｓ，ＭＣＮ） 是指由于生物受到内外环境因素的影 响，染色体的结构发生异常变化，形 成无着丝粒片段或染色体在后期时移动 滞后。在细胞分裂后期，无着丝粒片 段或滞后染色体不能向细胞的两极移 动，而是残留在细胞中央的赤道板附 近，当１．代细胞形成时，游离下细胞 浆中形成微核…。 蚕豆根尖细胞微核试验 （Ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｔｅｓｔ，ＭＣ ＮＴ）技术 是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测 试终点的植物微核检测方法。它是一・ 种应用于监测环境致突变物对人体和其 他生物体的遗传物质产生危害的技术， 并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物 质的改变状况与环境污染程度的相互关 系，具有灵敏度高、操作简便等优 点。蚕豆是经典的遗传学材料，蚕豆 微核实验被广泛应用于环境污染，辐 射损伤，化学诱变剂等的检测。我国 从ｌ ９８５年开始研究应用蚕豆根尖微核 技术直接检测淡水湖泊的水质状况， 随着环境污染的日益严重，这一技术 正被越来越多的研究者采用ｌ２ 。 南通市位于长江之滨，具有十分 丰富的淡水资源。以市 濠河为中 心，由此延伸出若干支流，交织成一 个密集的水网，分布往南通市的四 ３８ 周。本文采用蚕豆根尖细胞微核技术 对南通市郊区主要河流水体的水质状况 进行了监测，并对结果进行了统计处 理与分析。 １材料与方法 １．１材料 通鲜一号蚕豆（Ｖｉｃｉａ ｆａｂａ），购干 南通市种子公司。 １．２方法 １．２．１采样点的确立和水样采集在 南通市郊区选择了具有代表性的采样点 ７个。南至南川河，北至通吕运河，东 至海港引河，西至通扬运河。本实验采 样点的布设原则：有大量废水排入河流 的居民区、工、ｌ 区的主要排污口；市郊 居民生活污水排放口；水资源集中的水 域和饮用水源区。因而本次水样基本上 能反映南通市郊区水质的状况。采样时 间为２００６年４月，采水时的气温为ｌ８～ ２２℃，水温为ｌ ７～２ ｌ℃，实际采水深 度按国家环境保护总局公布的水和废水 检测分析方法：当水深大干ｌｍ时，在 表层下ｌ／４深度处采水，当水深小于或 等于ｌｍ时在水深ｌ／２处采水ｉ 。每个 采样点采集水样５ ００ｍ１。 各采样点分别标记为：①居民区 排污口②通甲河③通吕运河３号桥 ④通扬运河⑤通吕运河人江口
黔南民族师范学院学报２０１２年第３
蚕豆根尖微核技术监测剑江都匀市区河段水质
马媛 龙俊 吴莉莉
（１．黔南民族师范学院，贵州都匀；２．都匀二中，贵州都匀 ５５８０００）
摘要：本文利用蚕豆根尖微核技术监测剑江都匀市区河段水质的污染状况，测定６个断面水样的蚕豆根尖细胞微 核千分率（ＭＣＮ‰）及污染指数（ＰＩ），并进行Ｆ检测，结果表明，各断面水样均能引起微核率升高，桃溪园、枣园、水厂、彩 虹桥、百子桥和文峰园断面的微核千分率分别为６．９２％ｏ、６．０ｏ‰、９．５３％ｏ、１１．３６％ｏ、６．６３％０、５．５７％ｏ，Ｐ１分别为２．０６、１．７９、 ２．８３、３．３８、１．９７、１．６６。按照污染指数划分标准，枣园、百子桥和文峰园断面的水质为轻度污染，桃溪园、水厂、彩虹桥断 面水质为中度污染。 关键词：蚕豆根尖；微核试验；水质污染；都匀河段 中图分类号：Ｘ８３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４—２３８９（２０１２）０３一Ｏ１１０一Ｏ５
Ｏｎ Ａｐｐｌｙｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｏｏｔ Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｂｒｏａｄ Ｂｅａｎｓ ｔｏ
Ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ Ｗａｔｅｒ Ｑｕａｌｉｔｙ ｉｎ Ｄｕｙｕｎ Ｒｉｖｅｒｓ ＭＡ Ｙｕａｎ‘Ｌ０ＮＧ Ｊｕｎ ＷＵ Ｌｉｌｉ
（１．Ｑｉａｎｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｄｕｙｕｎ ５５８０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｕｙｕｎ Ｎｏ．２ ｍｉｄｄｌｅ ｓｃｈｏｏ２，Ｄｕｙｕｎ ５５８ｏｏ０。 ｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎｕｅｌｅｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｂｒａｎｄ ｂｅａｎｓ ｉｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｉｎ Ｄｕｙｕｎ ｒｉｖｅｒｓ．Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ａ ｍｅｎｓｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＭＣＮ％ｏ ａｎｄ ＰＩ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｂｒａｎｄ ｂｅａｎｓ ｉｎ ｓｉｘ ｗａｔｅｒ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅ ｉｎ ｅａｃｈ ｗａｔｅｒ ｓｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｃａｕｓｅ ｔｈｅ ｒｉｓｅ ｏｆ ＭＣＮ％￣．Ｔｈｅ ＭＣＮ％ｏ ｏｆ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｓｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｔａｏｘｉｙｕａｎ，Ｚａｏｙｕａｎ， Ｗａｔｅｒ Ｆａｃｔｏｒｙ，Ｒａｉｎｂｏｗ Ｂｒｉｄｇｅ，Ｂａｉｚｉ Ｂｒｉｄｇｅ ａｎｄ Ｗｅｎｆｅｎｇｙｕａｎ ｓｅｃｔｉｏｎ ａｙｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：６．９２‰，６．Ｏ０‰，９．５３‰，１１．３６‰，６．６３‰，５．５７ ％ｏ；ＰＩ ａｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：２．０６，１．７９，２．８３，３．３８，１．９７，１．６６．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ｐ１ ｓｔａｎｄａｒｄｓ，ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｉｎ Ｚａｏｙｕａｎ。Ｂａｉｚｉ Ｂｒｉｄｇｅ ａｎｄ Ｗｅｎ－ ｆｅｎｇｙｕａｎ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｉｓ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｐｏｌｌｕｔｅｄ；ｔｈａｔ ｉｎ Ｔａｏｘｉｙｕａｎ，Ｗａｔｅｒ Ｆａｃｔｏｒｙ ａｎｄ Ｒａｉｎｂｏｗ Ｂｒｉｄｇｅ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｉｓ ｐｏｌｌｕｔｅｄ ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｂｒｏａｄ ｂｅａｎｓ；ＭｅＮ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；ｗａｔｅｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ；Ｄｕｙｕｎ ｒｉｖｅｒｓ
