蚕豆根尖微核检测
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环境污染物的蚕豆根尖微核试验实验内容随着工农业生产的迅速发展,新的化学物质和工业“三废”不断地进入人们的生活环境,它们中有许多可能对遗传物质产生损害并造成致癌、致畸、致突变等遗传毒理效应的环境致突变物,可对人类健康和生存构成严重危害。
微核试验(Themicro nucleu stest, MN T)是以动植物为材料,采用细胞生物学手段,观测其出现的微核率来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。
微核是无着丝点的染色体断片,在有丝分裂后期不能向两极移动,所以游离于细胞质中,在间期细胞核形成时,即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构,直径大约是细胞直径的 1 /20 - 1 / 5 ,这就是微核(micronucleus )。
微核是常用的遗传毒理学指标之一,指示染色体或纺锤体的损伤。
由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧,而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比,因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体大,数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞,非常适合显微观察,而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感,便于遗传毒性检测实验,因此,早在1959年,放射生物学家已经用蚕豆的根尖细胞来进行X射线的遗传损伤研究。
到了上世纪70年代,蚕豆根尖染色体畸变技术已发展得相当成熟,作为一种检测化学品遗传学毒性的方法为人们所知并被广泛采用。
蚕豆根尖微核试验在1986 年已被中国环保局列为一种环境生物测试的规范方法,它作为一种环境变异的检测手段,在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。
蚕豆根尖微核试验在对水体污染物、空气污染物、农药、重金属、化妆品、工业化学品等的致突变性检测方面,都得到了较广泛的应用,在此仅以农药污染的蚕豆微核实验为例介绍其相应的实验方法与步骤,学生在具体开展相关环境污染物的蚕豆根尖微核试验时可参考使用。
实验方案(蚕豆根尖微核技术)
一、实验题目
蚕豆根尖微核技术检测流仓河污水污染情况
二、实验目的
1、利用植物压片技术和微核实验原理,设计实验方案,研究环境中存在的毒害物;
2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤
3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法
4、培养初步的科研能力
三、材料仪器与方法
1.1材料仪器
选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗,采集于流仓河污水,烧杯,剪刀,培养皿,量筒100ml,,胶头滴管,显微镜,卡诺固定液,5 mol/L盐酸,石炭酸品红溶液,天平(带砝码)
1.2方法
1.2.1污水处理
将采集到的污水稀释100倍、10倍、不稀释,用自来水做对照
1.2.2蚕豆根尖的培养处理
将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀,然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。
每12小时换水一次。
待蚕豆初生根长至2cm左右,选取长度一致的蚕豆,分别用蒸馏水,1倍稀释液,10倍,50倍,100倍,分别处理6h,其中蒸馏水作为阴性对照处理。
然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。
卡诺固定液固定24 h;固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次,用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min,至幼根被软化即可;然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖,用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。
1.2.3制片
用常规压片法制作临时装片。
1.2.4镜检计数
每剂量组选取5个根尖,每个根尖随机镜检1000个细胞,计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。
利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性09生物技术宁伟王晓刚太红桥刘经源摘要微核(micronucleus,MCN)是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变,在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3~1/20,染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即微核。
[1]蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。
它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染,也可以检测淡水环境的质量。
[2]关键词蚕豆根尖微核洗发水千分率蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。
它的染色体为六对相当大的染色体,而且根尖含有较多的分裂相细胞,非常适合显微观察。
目前,蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。
它的可靠性和灵敏性较高,且本底较低,这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。
此外,它的检测物谱较广。
目前多数学者认为,在镜检细胞微核时,应按下列标准计数微核:(1)凡主核大小1/3以下,与主核分离的小核;(2)小核的着色与主核相当或稍浅;(3)小核形态可为圆形,不规则等。
[3]1. 实验目的掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价,同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感,蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。
2. 材料与方法2.1实验材料蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3等。
蚕豆根尖诱变物质的微核测试一、实验目的了解微核测定的方法和意义二、实验原理微核(micronucleus, 简称MCN),也叫卫星核,是真核类生物细胞中的一种异常结构,是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核往往是各种理化因子,如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。
在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3以下。
微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样,也具合成DNA的能力。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
有实验证明,整条染色体或几条染色体也能形成微核。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即形成了微核。
已经证实,微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关,这一点与染色体畸变的情况一样。
致变因素——化学因素:药物(环磷酰胺、氮芥、白硝安、甲氨喋呤、阿糖胞苷等抗癌药物;农药(有机磷农药);工业毒物(苯、甲苯、铝、砷、二硫化碳、氯丁二稀、氯乙烯单体等);食品添加剂(食品的防腐剂、色素等)物理因素:电离辐射,微小剂量的射线能不断积累生物因素:生物体产生的生物类毒素;某些生物体(如杂色曲霉等)母体因素:因年龄等三、实验材料1.蚕豆——根尖细胞的染色体大,DNA含量高,因而对诱变因子反应敏感。
2. 器具和药品显微镜、手动计数器、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯。
6mol/L盐酸、甲醇、冰醋酸、醋酸洋红、K2Cr2O7。
四、实验内容实验选取蚕豆50粒,平均10粒分5组进行实验,ABCDE,100mg/L K2Cr2O7 100ml稀释到600ml,除E组外平均每组150ml浸泡,时间梯度增加,观察时间单位上相同因素对细胞的影响。
A组浸泡24hB组浸泡24+4hC组浸泡24+4+4hD组用浸泡24+4+4+4hE组蒸馏水浸泡24h五、实验步骤(1)浸种催芽:将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中,在25℃下浸泡24小时,此间至少换水两次,所换水应25℃预温。
一、实验目的1.了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义2.学习蚕豆根尖的微核测试技术二、实验原理微核(micronucleus, 简称MCN),也叫卫星核,是真核类生物细胞中的一种异常结构,是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核往往是各种理化因子,如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。
在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3以下。
微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样,也具合成DNA的能力。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
有实验证明,整条染色体或几条染色体也能形成微核。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即形成了微核。
已经证实,微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关,这一点与染色体畸变的情况一样。
蚕豆根尖微(micronucleus,MCN)技术是一种检测化学品对生物毒害的遗传毒理学方法。
不仅具有简便、快速、重复性好和灵敏度高的优势,而且其检测结果与动物试验结果具有很高的一致性。
亚硝酸盐广泛存在于自然环境(水体、土壤、植物)中,许多腌制食品中亦含有亚硝酸盐。
在胃酸等环境下亚硝酸盐与食物中的仲胺、叔胺和酰胺或蛋白质分解产物等反应生成强致癌物N_亚硝胺。
亚硝胺还能够透过胎盘进入胎儿体内,对胎儿有致畸作用。
硝酸盐和亚硝酸盐作为化学物质的毒害性多有研究,但把蚕豆根尖细胞微核技术用于食品添加剂的安全评价和检测其对生物体诱变效应的遗传毒理性试验却未见报道。
NaNO2对蚕豆根尖的微核效应,由此证明蚕豆可以作为快速、灵敏检测食品中亚硝酸盐遗传毒性的供试材料。
三、实验材料蚕豆种子、显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、滤纸、蒸馏水NaNO2卡纳氏固定液(3甲醇:1冰醋酸)改良苯酚品红溶液四、实验过程1、被测试剂的配制与分组配制成0.01、0.02、0.04、0.08 mmol/L 4种不同的浓度;用蒸馏水将NaN02另设蒸馏水做对照(CK)组。
实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理微核(micronucleus,MCN)是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变,在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3~1/10,染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即微核。
三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol/L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。
四、方法与步骤⑴浸种催芽:择饱满、均匀的种子,洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24~30h,此期至少换水2次;待种子充分吸胀后,移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。
⑵用被检测液处理根尖:当初生根长到1~2cm时,选初生根生长良好的蚕豆6~8粒,分别放入蒸馏水(CK)、0.4mmol/L、0.8mmol/L、1.2mmol/L的NaN3中染毒8~12h。
⑶根尖细胞恢复培养:处理后的种子用蒸馏水(自来水)浸洗3次,每次2~3 min;将处理液洗净后,置于湿棉花上恢复22~24h;同时均设蒸馏水处理为空白对照组。
以上温度均为25℃。
⑷根尖细胞固定:将恢复后的种子,从根尖顶端切下1~1.5cm长的幼根,用Carnoys 固定液固定20~24h。
固定后的根如不及时制片,可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
⑸酸解:用1mol/L盐酸在60±5℃下酸解8min,幼根软化即可。
⑹染色:吸去盐酸,用蒸馏水浸没幼根3次,每次1~2分钟。
最后浸于水中。
制片前取出置载玻片上,截下1~2mm左右长的根尖,滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10~15min 后,加上盖玻片,覆以吸水纸常规压片。
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响一、实验目的1、学习蚕豆根尖的微核测试技术。
2、探究咖啡对蚕豆根尖生长的影响。
3、探究茶叶对蚕豆微核的影响。
二、实验原理微核(micronuclei)试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。
无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体,在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。
若采用核型稳定的细胞,确立统一的操作协议,进行实验室间的合作建立数据库,应用探针技术的微核试验很可能被纳入遗传毒理学试验。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体大,数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞,非常适合显微观察,而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感,便于遗传毒性检测实验。
咖啡问世以来受到世界各地人们的追捧,不论是老人还是年轻人。
众所周知咖啡有提神的功效,有助于防止放射线伤害,而且咖啡会起到预防肝癌的作用但是咖啡还有一些副作用,如:经常喝咖啡会使人上瘾,饮用过多的咖啡人麻痹瘫痪等。
茶叶在中国有着悠久的历史,如今也受到世界各地人们的青睐。
喝茶对人体有很大的益处,如:茶叶中的茶多酚可与重金属结合产生沉淀,使身体中的一些有害物质迅速排出体外,达到解毒的效果。
三、实验仪器、试剂、材料3.1主要实验仪器盖玻片、恒温水浴锅、恒温培养室(25℃)、冰箱、培养皿、棉花、纱布、计数器、光学显微镜、烧杯等。
3.2主要实验试剂卡纳氏固定液:三份纯酒精与一份冰醋酸混合制成、70%乙醇、0.1mol/L盐酸、改良苯酚品红染液。
3.3实验材料褐皮蚕豆种子、速冲咖啡、茶叶。
实验四蚕豆根尖微核监测技术(VMT)一、实验目的学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理在细胞分裂早期,若受到有害理化因子的攻击,使染色体发生断裂,产生染色体片段。
在这些片段中,有些可能重新愈合恢复正常,随细胞分裂进入子细胞,有些则由于缺乏着丝点,不能移向细胞的极部而变成圆球体,像卫星一样分布在主核的周围,这便是微核,由于染色体片段的大小和数量不一,所以微核的大小和数量也不相同。
而蚕豆根尖细胞的染色体大,DNA含量多,因而对诱发物的反应敏感,通过显微镜下的观察和计数,便可监测环境污染。
三、器材与试剂(一)显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。
(二)试剂1.5N HCl、45%醋酸、卡诺氏液(无水乙醇3份加冰醋酸1份配成,固定根尖时随用随备)、Schiff试剂、SO洗涤液。
2四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽(1)浸种:将当年或前一年的松滋青皮豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中,臵25℃温箱内,浸泡20~30小时,此期间至少换水2次,换用的水最好事先臵于25℃温箱中预温。
(2)催芽:待种子吸胀后,用纱布松松包裹臵解剖盘内,保持温度,在25℃的温箱中催芽12~24小时。
待种子初生根露出2~3mm时,再选取发芽良好的种子,放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内,仍臵入25℃的温箱中继续催芽,注意保护湿度。
再经24~36h,种子大部分初生根长至2~3cm,根毛发育良好,这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。
2、被监测液处理根尖(1)每一处理选取6~8粒初生根尖生长良好,根长一致的种子,放入盛有被测液的培养皿中,被测液浸泡住根尖即可,用自来水处理作对照,方法相同。
(2)处理时间4~6h。
3、根尖细胞恢复培养:(1)将处理的种子,用自来水浸洗8次,每次2~3min。
(2)洗净后的种子再放入新铺好湿脱脂棉的解剖盘内,按前述培养条件使根尖细胞恢复22~24h。
蚕豆根尖微核检测技术实验名称: 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级: 2010级级生物科学成员: 尹忠围安树珺谢林芝刘伟指导教师:实验时间: 2013年4 月一、摘要用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。
设置了阴性对照:自来水处理组,实验组:康师傅、统一、老坛,麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖,阳性对照:用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。
发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显,醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。
关键字:蚕豆根尖,方便面面饼,微核千分率,污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展,越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中,如种类繁多的食品添加剂。
而其中有些物质具有较强的危害,如致畸,致癌,致突变等。
为了检测已存在或潜在的危害,各种检测技术应运而生。
微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。
无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体,在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。
我们采用蚕豆作为实验材料,采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。
方便面是日常生活中经常接触到的食品,其市场占据快餐食品的大壁江山,在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。
另一方面,在各媒体的报道中,经常出现有关方便面的食用危害,而且很有争议,所以这也是我们进行本实验的一个原因。
三、实验原理微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构,大小在主核的1/3以下,是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。
20世纪70年代初,Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物,并称之为微核。
蚕豆根尖细胞微核实验蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名:马丽同组者:李哲指导教师:郝雪峰(太原师范学院生物系112班)摘要微核(micronucleus,MCN)是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变,在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3~1/20,染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即微核。
[1] Abstract Micronucleus (MCN, micronucleus) is eukaryotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 ~ 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or slightly shallow. Generally considered microkernel byacentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely the microkernel.[1]关键词蚕豆根尖微核洗衣粉染色体畸变千分率Keyword Broad bean root tipMicronucleus Washingpowder Chromosomalaberration Permillage引言掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
蚕豆根尖微核试验的问题分析及改进策略
有关蚕豆根尖微核试验的问题分析及改进策略
摘要:蚕豆根尖微核技术是1种新兴的`快速生物测试方法.该方法已被列入国家"生物监测技术规范(水环境部分)",而且在监测重金属、有机污染物等环境致突变性物质方面也得到了充分应用.综述了蚕豆根尖细胞微核技术从产生到最终确立的进程,并重点就实际操作过程中存在的一些问题进行了讨论,提出了相应的改进策略,以期为蚕豆根尖微核试验技术的完善和广泛使用提供依据. 作者:肖健王璐XIAO Jian WANG LU 作者单位:南京农业大学资源与环境学院,江苏,南京,210095 期刊:河北农业科学 Journal: JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL SCIENCES 年,卷(期):2010, 14(7) 分类号:X502 关键词:蚕豆根尖微核试验生物测试方法问题改进。
蚕豆根尖微核检测指导老师:吴麟组长:路青瑜小组成员:何悦李婷陈鸿谭小娥刘清唐珍冯沁李双吴海林符方亮摘要:本实验运用蚕豆根尖微核检测技术,分别用0.25mg/mL染发剂、0.5mg/mL 洗洁精对蚕豆根尖做处理,同时以0.25 mol/L叠氮化钠处理蚕豆根尖做阳性对照,自来水作阴性对照。
镜检后测得其微核率分别为17.55%,19.82%,23.18%,11.16%;染发剂、洗洁精处理的污染指数分别为1.7、1.8,结果表明均属于轻度污染。
关键词:蚕豆微核检测微核率Abstract:This experiment using vicia faba micronucleus test technology, respectively for 0.25 mg/mL colourants, 0.5 mg/mL of vicia faba detergent, at the same time to do processing mol 0.25 / sodium azide processing vicia faba do positive, negative control for water. After the microscopic micronucleus rate 17.55% respectively, 19.82%, 23.18%, 11.16%, Hair, detergent pollution index respectively with 1.7, 1.8, results show that belong to light pollution.Key word:Horsebean micronucleus test;micronucleus rate引言:染发剂和洗洁精都是我们生活中的日用品,特别是洗洁精。
化学去污剂主要分为阳离子型、阴离子型和非离子型3类(其中阴离子型表面活性剂使用频率最高)。
国内学者采用该技术开展了水体污染物、环境污染物和合成洗涤剂方面的研究。
生活洗涤剂侵人人体后与其它的化学物质结合后,毒性会增加数倍,尤其具有很强的诱发癌特性。
据有关报导,人工实验培养胃癌细胞、注入化学洗涤剂基本物质LAS会加速癌细胞的恶化。
LAS的血溶性也很强,容易引起血红蛋白的变化,造成贫血症。
染发剂主要成分为:氨水、对苯二胺。
市场上绝大部分染发剂都含有致癌物“对苯二胺”,长期使用将导致白血病、皮肤癌、乳腺癌等疾病。
对苯二胺是国际公认的一个致癌物质。
由于染发剂接触皮肤,而且在染发的过程中还要加热,苯类有机物质通过接触和加热后,通过头皮进入毛细血管,然后随血液循环到达骨髓,如果长期反复作用于造血干细胞,会导致白血病的发生。
经常染发的人群乳腺癌、皮肤癌、膀胱癌的发病率都会增加。
微核(micronucleus, 简称MCN),也叫卫星核,是真核类生物细胞中的一种异常结构,是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核往往是各种理化因子,如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。
在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3以下。
微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样,也具合成DNA的能力。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
有实验证明,整条染色体或几条染色体也能形成微核。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即形成了微核。
已经证实,微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关,这一点与染色体畸变的情况一样。
所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。
由于大量新的化合物的合成,原子能的应用,各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性,欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害,需要有一套高度灵敏,技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。
只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害,在这方面,微核测试是一种比较理想的方法。
目前,国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价,以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
微核检测技术灵敏度高,可靠性强;技术简单,易于操作,而且有显而易见的实用性;实验周期短,且蚕豆根尖细胞周期中大部分时间处于对诱变剂敏感的间期,便于遗传毒性检测试验,精确度也比较高。
本实验为染发剂和洗洁精的毒性提供了理论依据,同时引起人们的高度重视,也希望有关部门对日用品中的有害物质含量进行严格控制和检测。
2实验部分2.1材料与试剂蚕豆(vicia faba)(为当年生无虫饱满,大小均一蚕豆(Vcia faba)种子,四川农业大学农学院遗传学实验室提供)6mol/L盐酸,甲醇,醋酸洋红,CrO3,NaN3处理液,甲基磺酸乙酯(EMS),蒸馏水,冰醋酸,卡诺氏固定液,乙酸乙酯显微镜,计数器,镊子,载玻片,盖玻片,烧杯,磁盘,培养箱,分析天平,水浴锅,酒精灯,剪刀,解剖针,滤纸,铅笔,标签纸,胶水等。
2.2实验预处理实验流程图:2.3实验步骤2.3.1 浸种催芽选择粒大饱满、大小均匀的蚕豆种子按需要量放入盛有自来水的烧杯中 ,在 25 ℃下浸泡 24 h, 期间至少换水 2 次。
种子吸胀后 , 用纱布松散后裹置瓷盘中 , 保持湿度 ,在25 ℃恒温培养箱中催芽12 ~ 24 h , 待初生根长2~ 3mm,取发芽良好的种子,放入铺满滤纸的瓷盘中25 ℃继续催芽,经约36 ~ 48 h, 大部分初生根长至 1 ~ 2cm,根毛发育良好,这时即可用于检测了。
2.3.2 诱变剂处理(1) 取染发剂用蒸馏水配置成不同浓度的溶液,浓度为0.25mg.mL-1;称取氧化型染发剂样约0.25 g(精确至少数点后四位)于5 mL离心管中,加乙酸乙酯(或者分析纯二甲基亚砜(DMSO))定容,混匀,放置离心机(2000 r/min)中离心20 min,取上层清液稀释到250mL。
此溶液含洗发剂0.25mg/mL,取适量体积置于培养皿中用于处理蚕豆根尖。
(2) 将雕牌洗洁精分别配成0.5 mg/mL的溶液100mL,并用稀盐酸调节酸碱度,使pH为7-8。
取和染发剂等体积的溶液处理蚕豆根尖。
同时用自来水作阴性对照,用0.25mg/L叠氮化钠作阳性对照。
当初生根长到2~3cm时,各选初生根生长良好的蚕豆6~8粒,分别放入四个培养皿中中,染色24~27h。
2.3.3 恢复培养处理后的种子用自来水和蒸馏水共浸洗 3 ~ 5 次 , 每次2 ~3 min,洗净后,再置入铺有湿润滤纸的瓷盘中中,25 ℃恢复培养 22 ~ 24h 。
2.3.4取材、固定将恢复培养后的种子,从根尖顶端,切下1cm长的幼根。
用卡诺氏液固定24h。
2.3.5解离、制片观察用蒸馏水浸洗两次,每次5min,吸干,加入6mol/L 盐酸将幼根浸没,室温下酸解10min,幼根软化即可。
吸取盐酸,用蒸馏水浸洗三次,每次1~2min,最后浸于水中;取根置于载玻片上,截下1~2mm长的根尖,滴一滴醋酸洋红染液,染色5~8min,加盖玻片压片观察。
2.3.6 微核计数微核是游离于蚕豆根尖细胞浆中圆形或椭圆形小体.其太小不超过主核1/3,染色性与主核相一致。
每组随机取3个根尖,高倍镜观察l000个间期细胞,统计徽核数及徽核率,然后用方差分析做统计学处理。
3.结论3.1、实验结果与分析通过镜检后得到的实验数据如下表所示:根据上表中的数据可进一步计算污染指数[污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组(自来水)微核千分率平均值],染发剂和洗洁精的污染指数分别为1.7、1.8,均在1.5~2区间,属于轻度污染。
另外,本实验中叠氮化钠对蚕豆根尖微核的诱导作用最强,洗洁精、染发剂次之,自来水的诱导作用最弱,而且其微核率偏高。
这主要因为现在自来水中加了消毒剂,消毒剂是化学物质,对蚕豆根尖有一定程度的诱导作用使其形成微核。
4、综述综上可见,洗洁精毒性不大,只要控制其用量可供日常生活使用;单次使用一定剂量的染发剂染发也不会有很强的毒性,但如果使用频繁,对人体细胞的诱导作用加强,很可能会致癌。
本实验通过染发剂、洗洁精对染色体的危害进行了研究,进而推断出其对人体的危害,以引起人们的高度重视,同时也为染发剂的进一步研究提供了依据。
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